杀菌剂生物测定技术创新-课件
实验七杀菌剂生物活性测定方法――抑菌圈法
实验七杀菌剂生物活性测定方法――抑菌圈法一、实验目的掌握抑菌圈法测定杀菌剂的生物活性的方法及步骤。
二、实验原理本实验主要采用抑菌圈法来测定杀菌剂的生物活性。
抑菌圈法是利用杀菌剂在琼脂平板上产生的抑菌效果来对其生物活性进行测定的一种方法。
通常，将杀菌剂溶液滴加到琼脂平板上，使其均匀地分布在琼脂上。
然后，将含有细菌培养物的琼脂平板放入恒温箱中进行培养。
在培养一段时间后，观察平板上是否出现了抑菌圈，并测量抑菌圈的直径来评估杀菌剂的生物活性。
三、实验仪器和材料1.显微镜2.恒温箱3.滴定管或移液管4.琼脂平板5.细菌培养物6.杀菌剂溶液四、实验步骤1.准备琼脂平板。
将琼脂平板置于恒温箱中，加热至溶化状态后取出，待其稍微冷却后均匀地倒入培养皿中。
2.滴加杀菌剂溶液。
将杀菌剂溶液滴加到琼脂平板上，并用移液管在平板上转动，使杀菌剂均匀地分布在琼脂上。
3.检验杀菌剂效果。
取一定量的细菌培养物，将其在琼脂平板上均匀涂布。
4.培养细菌。
将含有细菌培养物的琼脂平板放入预先恒温箱中，设置合适的温度和培养时间。
5.观察抑菌圈。
在培养一段时间后，取出琼脂平板，用显微镜观察平板上是否出现了抑菌圈。
6.测量抑菌圈直径。
使用直尺或量角器等工具测量抑菌圈的直径，并记录结果。
五、实验注意事项1.操作时要注意无菌技术，以避免细菌污染。
2.滴加杀菌剂溶液时要均匀并轻柔，以保证杀菌剂能充分分散在琼脂平板上。
3.培养细菌时要控制好温度和培养时间，以确保细菌能够充分生长。
4.观察抑菌圈时要注意使用合适的放大倍数，以免错过细小的抑菌圈。
5.测量抑菌圈直径时要使用准确的测量工具，以获得准确的结果。
六、实验结果处理根据实验所得的抑菌圈直径数据，可以通过计算其平均值、标准差等统计指标来评估杀菌剂的生物活性。
较大的抑菌圈直径通常表示杀菌剂具有较强的抑菌效果，反之则表示其抑菌效果较弱。
可以将实验结果与已有的标准值进行比较，以判断杀菌剂的生物活性。
七、实验结果分析根据测得的抑菌圈直径结果，可以对杀菌剂的生物活性进行分析。
杀菌剂PPT教学课件
第二节 杀菌剂的作用方式和机制
一、杀菌剂的作用方式 1、杀菌作用：含铜、汞重金属无机杀菌
剂 2、抑菌作用：内吸性的有机杀菌剂 3、增强植物的抗病力：新型杀菌剂
有那些方法可以引起遗传物质 改变呢？
染色体变异 基因的重组 基因突变
袁隆平,1930年9月7日生，中国 工程院院士，现任国家杂交水 稻工作技术中心暨湖南杂交水 稻研究中心主任、湖南省政协 副主席。中国研究杂交水稻的 创始人，世界上成功利用水稻 杂交优势的第一人。他于1964 年开始从事杂交水稻研究，用 九年时间于1973年实现了三系 配套，并选育了第一个在生产 上大面积应用的强优高产杂交 水稻组合----南优2号。亩产达 到623公斤，单产一般比常规 稻增产20%左右。被国际上誉 为“杂交水稻之父”。
第一节 植物病害化学防治
二、植物病害化学防治原理 1、化学保护：预防为主 2、化学治疗：渗透内吸、选择性农药 （1）局部化学治疗：外科治疗 （2）表面化学治疗：白粉病 （3）内部化学治疗：内吸作用
第一节 植物病害化学防治
二、植物病害化学防治原理
3、化学免疫 一种生物固有的周体抗病能力，这种抗
1、随机抽样，样品要有足够数量，不少于 ３０粒
2、测量果实的长轴长短，以毫米记，四舍 五入
3、选择适当的测量工具和测量方法
4、用坐标纸绘制曲线图，水平轴为果实的 长度，纵轴为样品的个数，依据两数的相 交点，连成曲线（测量结果也可以用直方 图表示）
第一种花生的数据
8
7
6
5
09第二章 第三节 杀菌剂的生物测定方法
水溶性药剂、乳油稀释液或稳定的悬浮液（胶悬剂的稀释液）可用此
法，而WP由于是悬浮性差，不宜采用。 优点：操作简单迅速，无需特殊设备
缺点：药剂和孢子始终充分接触，与病害防治的实际相差很大，测得
的毒力往往偏高。
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
二、杀菌剂温室植株测定方法
针刺法测定农药对番茄灰霉病防治效果的活体试验
二、杀菌剂温室植株测定方法
对照（3d）
40%多菌灵WP1500×（3d）
一种植物精油1000×
针刺法测定农药对番茄灰霉病防治效果的活体试验
二、杀菌剂温室植株测定方法
盆栽法测定农药对小麦白粉病的防治效果
二、杀菌剂温室植株测定方法
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法
3、孢子悬浮液的准备
菌种
无菌水，搅匀
菌种悬浮液
二层纱布过滤 除去菌丝体及破碎培养基
离心 无菌水洗
洗净的孢子
调至浓度5000个/mL（10×10倍，35个孢子）
Байду номын сангаас
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法
3、孢子悬浮液的准备
菌种应是标准菌种，供试菌种应符合以下条件： ①菌种纯粹，在一般培养基上易大量产生孢子； ②多代繁殖不易产生变异； ③孢子个体较大，易于在显微镜下观察萌发情况；
④在分类上有一定的代表性，而且是重要的植物病害病原菌。
2、生长速率法
杀菌剂-课件资料
果高浓度易产生
现代选择性杀菌剂
特点：1、大都有选择性 2、大多具有内吸传导或至少能局部移动，有治疗作用（也有只有保护作用） 3、内吸剂特点：作用位点单一，选择性高，能进入植物体内（包括种子）治疗内部感染，还能输导到新生长的植物 表面，使之得到保护
二甲酰亚胺类
治疗和保护
EC
中毒
稻瘟病（主），玉米大小斑病，水稻小 H5C2O
注意：不能与碱性农 粒菌核病、纹枯病、颖枯病也有效，可 药混用，不能与敌稗 兼治稻飞虱、叶蝉
P S CH2
混用或前后 10 天内连
H5C2O O
用
治疗和保护 中毒
EC
主防稻瘟病、纹枯病，抗倒伏，兼治飞 C 3 H 7O
O
注意：不能与碱性农 虱、叶蝉（阻碍几丁质合成）
氟硅唑
治疗，保护 低毒 抑制病菌菌丝生长和 孢子形成，作用迅速， 耐雨水冲刷
EC 梨和苹果上黑星病、锈病，苹果斑点落 叶病、轮纹病、炭疽病，番茄叶霉、灰 霉等：发病初期用 EC。
烯唑醇
抑霉唑 咪唑霉 十三吗啉 甲霜灵
保护、治疗、铲除 中毒
WP、拌种剂
子囊菌和担子菌引起的多种作物白粉
病、黑粉病、锈病、黑星病等有特效。
Cl
CH O CH2 CH CH2 CH2 N
N
保护剂、铲除剂和治 疗剂 低毒
EC
麦类和热带作物白粉病、锈病，蕉叶斑 病、茶疱疫病
H3C
O
H3C
N C13H27
苯基酰胺类
保护和治疗 双向传导，持效期长， 低毒
WP，GR，拌种剂 多种作物霜霉病、瓜果蔬菜疫霉病、谷 子白发病有效 瓜类、叶菜类霜霉病：WP 喷雾。 谷子白发病：拌种剂拌种。 烟草黑胫病：WP 土壤处理。 马铃薯晚疫病：WP 喷雾。
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法work Information Technology Company.2020YEAR实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法一、实验目的学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。
二、实验原理抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。
在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。
其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出结果。
但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。
根据药剂施加在琼脂培养基表面方式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。
三、实验材料供试药剂：速克灵或扑海因。
供试病原菌：番茄灰霉病菌。
实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。
四、实验方法采用管碟法。
将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般为外径8 mm，内径6 mm，高10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。
1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7个浓度。
灭菌蒸馏水为对照。
2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。
在培养好的菌种上倒入10 mL灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动5 min，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。
用低倍（15×20倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野80-100个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。
杀菌剂生物测定
管碟法
E26细菌素粗提物抑菌活性测定 E26细菌素粗提物抑菌活性测定
2.滤纸片法
操作步骤是：与管碟法不同处在于将药液定 操作步骤是：与管碟法不同处在于将药液定 量地滴加在小滤纸片上(直径1 量地滴加在小滤纸片上(直径1一8mm) 。晾 干，放于带菌的培养基上,,测定抑菌圈直径。 干，放于带菌的培养基上,,测定抑菌圈直径。 特 点：精确度较高,用药量少,操作较简便, 点：精确度较高,用药量少,操作较简便, 应用面广
二、毒力测定方法（离体实验）
菌体生长率测定方法及步骤（续） 菌体生长率测定方法及步骤（续）
②打菌饼：用直径0.4-0.5厘米打孔器在培养好 打菌饼：用直径0.4-0.5厘米打孔器在培养好 的菌落外缘切下菌饼。 ③移植菌饼：用消毒接种针或镊子将切好的菌饼 反转移植到含药的培基上, 反转移植到含药的培基上,置于菌的适宜生长条 件下培养 ④测量 测量菌饼扩展的直径,与不混药对照菌盘 测量菌饼扩展的直径, 扩展的直径相比, 扩展的直径相比,求出药剂的抑制生长率。结果 表示方法有：一是一定时间内菌落直径的大小； 二是菌落达到一定直径所需时间。常用前者表示。
• 优点：易于控制、操作简便迅速、精确度
较高。 • 缺点：测定结果与生产实际距离较大，而 有些化合物必须在寄主植物体内活化后才 起杀菌作用
二、毒力测定方法（离体实验）
•孢子萌发法(spore germination methods) 孢子萌发法(spore
通过药剂与病菌孢子接触后, 通过药剂与病菌孢子接触后,根所抑制病菌 孢子萌发率来判定药剂效力。此法可用於筛 选杀菌剂、药剂毒力及作用方式的测定。
生 长 速 率 测 定 法
生 长 7
生 长 3
HX HX HX HX 2
杀菌剂生物测定技术共92页文档
36、如果我们国家的法律中只有某种 神灵， 而不是 殚精竭 虑将神 灵揉进 宪法， 总体上 来说， 法律就 会更好 。—— 马克·吐 温 37、纲纪废弃之日，便是暴政兴起之 时。— —威·皮 物特
38、若是没有公众舆论的支持，法律 是丝毫 没有力 量的。 ——菲 力普斯 39、一个判例造出另一个判例，它们 迅速累 聚，进 而变成 法律。 ——朱 尼厄斯
40、人类法律，事物有规律，这是的，就再没有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫扎特
4.3-杀菌剂毒力测定
第一单元：农药生物测定与田间药效试验1.杀菌剂生物测定（Bioassay of fungicides）利用病原菌或感菌生物体对杀菌剂的反应，来确定杀菌剂效力（毒力，药效）的农药生物测定。
2.杀菌剂的毒力测定方法（1）基于离体平板培养的毒力测定方法（2）活体测定法（3）组织筛选测定法（1）基于离体平板培养的毒力测定方法①孢子萌发测定法原理：在载玻片或平板上，通过滴加、喷施等方法将药液施于其上，然后滴加一定浓度的孢子悬浮液，经过一定时间培育后在显微镜下观察孢子的萌发率。
一般在低倍镜下，每处理随机检查200个孢子。
毒力越大的药剂，孢子萌发抑制率也越大。
%100⨯=检查孢子数萌发孢子数孢子萌发率%100-⨯=对照萌发率处理萌发率对照萌发率孢子萌发抑制率（1）基于离体平板培养的毒力测定方法②抑菌圈法此法先将病原菌孢子或菌丝的悬浮液与培养基混匀，待混合物冷却后，在培养基表面利用各种方法（管碟法、滤纸片法、孔碟法）使药液和培养基接触，培养一定时间后，由于药剂的渗透扩散作用，施药部位周围的病原菌被杀死或生长受到抑制，从而产生抑菌圈。
毒力越大的药剂，抑菌圈也越大。
该方法所用药剂需有较好的水溶性。
（1）基于离体平板培养的毒力测定方法③生长速率测定法此法的原理是趁热在培养基中加入药液，混合均匀后冷却，然后在无菌条件下将病原菌接入装有培养基的培养皿中央，经过一定时间培育后观察病原菌菌丝的生长情况。
毒力越大的药剂，菌丝的生长越缓慢。
此法多用于不产孢子或产孢子量少而菌丝较密的真菌。
病原菌生长速率的表示方法有2种：①菌落达到一定大小所需的时间；②单位时间内菌落的直径大小。
该方法的优点是操作简便，适用范围广，重复性好。
但对病原菌要求严格，病菌易于培养，生长较快且边缘整齐，产孢子缓慢；供试药剂遇热不易分解。
（1）基于离体平板培养的毒力测定方法④对峙培养法将天然提取物及病原菌同时放在同一个有培养基的培养皿的两边，经过一定时间培育后观察菌丝生长的情况。
农药生物测定
▪ 优点：快速、试验当天即可得结果
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法 ▪ 1、萌发表面的处理 ▪ 萌发表面是孢子萌发的场所，必须符合以下条件： ▪ A.对孢子的萌发即无抑制作用又无促进作用； ▪ B.能使承受的液滴展布面积一致。
菌，以病菌的生长进度快慢来判定药剂毒力的大小。
▪ 病菌生长速度表示方法
▪ （1）药剂达到一定大小所需时间；
▪ （2）一定时间药剂直径的大小。
▪ 优点：操作比较简单；重现性好；病菌易于培养。
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定
（二）含毒介质培养法
▪ 2、生长速率法
▪ 步骤：
▪ 1、配制药液
▪ 2、制备带毒培养基
▪ 3、打制菌饼
▪ 4、移菌饼
▪ 5、培养（定时间或定半径）
▪ 6、结果检查
对照的菌落直径－处理的菌落直径
生长抑制率（%）＝
对照菌落直径
×100
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
一、杀菌剂皿内生物测定
（一）孢子萌发法 ▪ 4、高温、保湿培养
▪ 温度、湿度、pH、氧气
▪ 5、结果检查及表示
▪ 一定时间后检查孢子萌发率，一般在低倍镜下，随机检查200个孢子 ▪ 标准：孢子芽管大于孢子的短半径时，即算萌发，否则不算萌芽
杀菌剂生物测定
第一节 体壁的构造与功能
4.搅乱寄主和病菌间的生长关系，增强植物抗病性
提高寄主的抗病性
烯丙苯噻唑（probenazole）防治稻瘟病，又叫噻瘟唑
离体下对稻瘟病菌几乎无毒性，但是在水稻植株体内能够
启动防卫机制，诱导寄主细胞形成木质素化壁等物理屏障，阻 止病原菌进一步向邻近细胞蔓延；诱导寄主植物产生和积累
孢子萌发表面
普通的载玻片
普通的 载玻片 洗 液 10min 自来水冲 洗干净 蒸馏水 冲洗 防尘条件 下干燥
缺点：
供试菌的孢子悬浮液（或与药剂混合液）滴在
第一节 体壁的构造与功能
一、杀菌剂的毒杀作用方式
同一种药剂，由于使用浓度、处理时间的不同可能表
现出不同的毒杀作用方式。
生产上，为了保证对植物的安全和节约用药，一般多 利用杀菌剂的抑菌作用，因为这样（抑制病菌孢子萌 发或病菌生长）就能达到防病的目的。
但为了研究杀菌剂的作用机制，就必须区分清楚毒杀
本节重点
杀菌剂对病菌的毒杀作用方式 杀菌剂生物测定技术的基本类型
第二节 杀菌剂毒力、药效测定的基础操作及原理 一、试验器材的清洁及灭菌
常用的洗涤剂
试验器材的灭菌
二、植物病原菌的培养
培养基
菌种的培养与保存
一、试验器材的清洁及灭菌
（一）常用的洗涤剂
洗液
K2Cr2O7重铬酸钾（60g）+ 浓H2SO4（460mL）+水（300mL）
的作用。
杀菌剂毒力、药效测定方法尽管多种多样，但它的基本原 理离不开杀菌剂的毒力作用方式和使用方式。
一、杀菌剂的毒作用方式 二、杀菌剂的使用方式
三、杀菌剂生物测定技术的基本类型
消毒灭菌效果监测方法ppt课件
染危险的器材
•
如手术器械；穿刺针；腹腔镜；活检钳；牙
科手机及其配套器械；心导管；植入物等
• 消毒水平：达到灭菌
• 消毒效果：应无菌生长
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46
• 中度危险性医疗器械：
•
直接、间接接触粘膜的器材
•
如胃肠道内镜；气管镜；喉镜；体温表（口
腔测温表，肛门测温表）；呼吸机管道；麻醉剂
管道；压舌板；肛门直肠压力测量导管等
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14
操作方法
• 将平皿（直径9cm）放置在采样点处 • 采样高度距离地面80-150cm • 采样时将平皿盖打开、扣放于平板旁
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正确操作
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错误操作
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• 放置时间
• 未采用洁净技术净化空气的房间 • Ⅱ类环境暴露15min • Ⅲ类环境暴露5min
1、平板暴露法
2、空气采样器法
参照GB50333-2013（医院洁净手术部
建筑技术规范）
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手术区：手术台及其周围的区域
• Ⅰ级手术室 (手术区百级，周围千级）：手术台两侧边至少各 外推0.9m，两端至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域
• Ⅱ级手术室 (手术区千级，周围万级）： 手术台两侧边至少各 外推0.6m，两端至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域
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3
医院感染的定义
• 是指住院病人在医院内获得的感染，包 括在住院期间发生的感染和在医院内获 得出院后发生的感染，但不包括入院前 已开始或者入院时已处于潜伏期的感染。 医院工作人员在医院内获得的感染也属 医院感染。
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