酸性α-乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE)使用说明
SOP文件酯酶染色中性非特异性脂酶αNAE染色
SOP文件酯酶染色中性非特异性脂酶αNAE染色1. 引言本SOP文件旨在描述酯酶染色中使用的中性非特异性脂酶αNAE染色方法。
中性非特异性脂酶αNAE是一种酯酶，广泛存在于许多生物体中。
该酶在许多生理和病理过程中起着重要作用，因此其检测和定量对于研究和临床应用具有重要意义。
2. 实验材料•甲醇（CH3OH）•乙醇（C2H5OH）•碘酒（I2）•活化碳（C）•磷酸氢钾（KH2PO4）•污染物样品3. 实验步骤步骤1：制备甲醇和乙醇溶液1.取适量的甲醇和乙醇，分别加入两个容器中。
2.分别将甲醇和乙醇容器标记为“甲醇溶液”和“乙醇溶液”。
步骤2：制备碘酒溶液1.取适量的碘酒，加入一个容器中。
2.将该容器标记为“碘酒溶液”。
步骤3：制备活化碳溶液1.取适量的活化碳，加入一个容器中。
2.将该容器标记为“活化碳溶液”。
步骤4：制备磷酸氢钾缓冲液1.取适量的磷酸氢钾，加入蒸馏水中，搅拌至完全溶解。
2.将溶液调节至pH 7.0，并标记为“磷酸氢钾缓冲液”。
步骤5：制备实验样品1.取适量的污染物样品，加入离心管中。
2.加入适量的磷酸氢钾缓冲液，使样品浓度适宜。
步骤6：进行染色实验1.取一块载玻片，将其置于实验台上。
2.取一滴甲醇溶液，滴在载玻片上。
3.将样品与甲醇溶液混合，使其均匀分布于载玻片上。
4.将载玻片置于离心机中，进行离心，以去除残留液体。
5.取一滴乙醇溶液，滴在载玻片上。
6.将载玻片置于离心机中，进行离心，以去除残留液体。
7.取一滴碘酒溶液，滴在载玻片上。
8.将载玻片置于离心机中，进行离心，以去除残留液体。
9.取一滴活化碳溶液，滴在载玻片上。
10.将载玻片置于离心机中，进行离心，以去除残留液体。
步骤7：观察和分析结果1.取一滴适宜的显微镜油，滴在载玻片上。
2.取显微镜封片，将其覆盖在载玻片上。
3.使用显微镜观察载玻片下的染色结果。
4.记录观察结果，并进行结果分析。
4. 结论本实验SOP文件描述了酯酶染色中性非特异性脂酶αNAE染色的方法。
α-醋酸萘酚酯酶染色
α-醋酸萘酚酯酶染色
α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）属于酯酶染色的一种。
（1）原理：血细胞内的α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE）将基质液中的α-醋酸萘酚水解，产生α-萘酚，萘酚再与坚牢蓝B偶联，形成不溶性灰黑色或棕黑色沉淀，定位于胞质内。
属于非特异性醋酸染色。
（2）结果判断：染色阳性结果为胞质中出现棕黑色颗粒沉淀。
（3）正常血细胞的染色反应
1）单核细胞系统原始单核细胞为阴性反应或弱阳性反应；幼单核细胞和单核细胞为阳性反应，这种反应可被氟化钠抑制。
2）粒细胞系统各期粒细胞为阴性反应，有时少数粒细胞可呈弱阳性反应，此反应不被氟化钠抑制。
3）巨核细胞和血小板为阳性反应。
4）其他血细胞幼红细胞和淋巴细胞一般为阴性反应，有时少数细胞也可是弱阳性反应，此反应不被氟化钠抑制；浆细胞为阴性反应。
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（4）临床意义
1）帮助鉴别急性白血病的类型：单核细胞白血病时，白血病原始单核细胞可呈阳性反应，幼单核细胞和单核细胞大多呈阳性反应，此反应能被氟化钠抑制，抑制率在50%以上；急性粒细胞白血病时，白血病原始粒细胞为阴性反应，有时个别白血病原始粒细胞可呈阳性反应，但此反应不被氟化钠抑制；急性淋巴细胞白血病时，白血病原始淋巴细胞为阴性反应，有时原始淋巴细胞可出现阳性反应，主要见于T细胞型急淋；急性粒-单核细胞白血病时，部分原始白血病细胞呈阳性反应，并能被氟化钠抑制，这些白血病细胞可能是单核细胞系细胞，部分白血病细胞呈阴性反应，可能是粒细胞系细胞。
2）红血病和红白血病：异常幼红细胞可呈阳性反应。
3）巨幼细胞贫血：巨幼细胞也可呈阳性反应。
酸性α-醋酸萘酚酯酶染色液
酸性α-醋酸萘酚酯酶染色液（ANAE）预期用途：供骨髓细胞图片及血液细胞图片染色检查检验原理：盐酸副品红与亚硝酸钠反应生成六偶氮副品红（重氮盐），底物α-醋酸萘酚在酯酶的作用下水解α-萘酚，α-萘酚再与重氮盐偶联，生成棕红色沉淀，定位于细胞浆中，本染色液对酯酶染色无特异性，故又称作非特异性酯酶染色主要组成成分：储存条件及有效期：有效期：一年储存条件：本试剂盒应储存于2℃-8℃低温环境。
样本要求：新鲜骨髓细胞涂片及血液细胞涂片（切勿使用抗凝血）检验方法：一、工作液配制（一）、浸染工作液配制（一份浸染工作量是33ml,至少可同时放置8-10张涂片）1、重氮盐溶液的准备：B液1ml与C液1ml彻底混匀，静置2分钟；2、染缸（自备染液缸）内加入D液40ml；3、将重氮盐溶液倒入染缸内，混匀4、再加E液1ml入染缸内，轻轻混匀（二）滴染工作液配制（一份滴染工作液是1.65ml）使用器材：一次性塑料试管、微量移液器，一次性吸嘴，滴管。
操作：于试管内加B液50μL，C液50μL混匀，静置1分钟，再加D液1.5ml，E液50μl,混匀，静置2分钟备用（NaF抑制试验加NaF液1滴）。
二、染色步骤1、干燥涂片，直接滴加工作液做第二步或滴加A液（用前恢复室温，并充分摇匀）固定约30-60秒，蒸馏水冲洗，待干或滤纸吸干（涂片不固定直接做ANAE染色，阳性反应强于固定者）；2、滴加或浸入工作液布满涂片（37℃）孵育分钟，蒸馏水冲洗，待干或滤纸吸干3、F液复染1-2分钟，蒸馏水冲洗，干后镜检参考范围：1.单核细胞系统：呈阳性反应，其反应可被氟化钠抑制。
2.粒细胞系统：各期粒细胞多呈阴性反应，有时少数粒细胞可呈弱阳性反应，其反应不被氟化钠抑制。
3.巨核细胞及血小板为阳性。
4.淋巴细胞多呈点状阳性，部分淋巴细胞及浆细胞为阴性反应。
5.单核细胞源性的组织细胞、巨噬细胞呈强阳性反应，高雪氏细胞、海蓝组织细胞为阳性。
6.幼红细胞呈阴性反应。
血液酸性α-醋酸萘酯酶染色方法改进
血液酸性α-醋酸萘酯酶染色方法改进
朱辛为;李质馨;窦肇华;蒙一纯;鲁质傅;文天秀
【期刊名称】《吉林医药学院学报》
【年(卷),期】1995(000)003
【摘要】1 方法用酸性α-醋酸萘酯酶法(简称ANAE法)检测血液中的T淋巴细胞及其亚群,以观察机体的细胞免疫功能,已广泛用于组织学中的细胞化学及相关的动物实验中.由于α-醋酸萘酯酶易受时间、温度及pH值等多种因素的影响,故作者在常规染色的基础上,对几个主要步骤进行了改进,效果较好.其方法是:(1)取末梢血制成涂片,室温干燥;(2)于4℃甲醛-丙酮固定液(pH6.0)固定45s;
【总页数】1页(P203-203)
【作者】朱辛为;李质馨;窦肇华;蒙一纯;鲁质傅;文天秀
【作者单位】空军医学高等专科学校!吉林市132011
【正文语种】中文
【中图分类】R446.113
【相关文献】
1.血清酸性α-醋酸萘酯酶的比色测定及初步临床应用 [J], 冯春来;黄兴富;范华
2.肝硬化患者血清和腹水中酸性α-醋酸萘酯酶的含量 [J], 王燕;周力;张永宏;张维;陈玉梅
3.酸性α-醋酸萘酯酶染色法的改良 [J], 卢曦;刘艳芬;刘铀
4.酸性α-醋酸萘酯酶染色法在鳜细胞免疫水平检测中的应用研究 [J], 张国军;王高
学;潘厚军;石存斌;吴淑勤
5.用酸性α—醋酸萘酯酶染色法测定儿童外周血T淋巴细胞 [J], 陈毓玲;葛桂秀因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
酸性α-醋酸萘酯酶染色法在鳜细胞免疫水平检测中的应用研究
ｎｔ ｅ ｅ ｎ ｉ ｉ ｌｖ ｌｉ ｍｍｕ ｉｅ ｉ ｉｅｃ ｈ ｕ ｔ ｗａ ｅ ｔｄ ｉ ｈ ｓｐ ｐ ｒ Ｆ ｃ ｌ —Ｕｒ ｇ ｆ ｒ ｄ ｅ ｔｓ ｌ ｔ ｎ ｗｉ ｉ ｅ ｅ ｔｄ ｎ ｉ ｙ ｎｚ ｄ Ｓ ｎｐ ｒａ ｃ ａ ｓｉ ｓｔｓｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｅ ． ｉｏｌ ａ ａ ｎ ｇａ ｉｎ ｏ ｕｉ ｔ ｄ ｆ ｒ ｎ ｅ ｓｔ ｉ ｏ ｈ ｆ ｙ
张国 ， 学 ， 军 ， 存 吴 军 王高 潘厚 石 斌 ， 淑勤
（．西北农林科技 大学 ，陕西杨凌 ７ ２０ ； １ １１０ ２ ．中国水产科学研 究院珠江水产研究所 ，广州 ５０ ８ ） １３ ０
摘 要 ：研究 了酸性 一醋酸萘 酯酶染 色法在鳜 细胞 免疫水 平检测 中应 用 的可行性 。用不 同 比重 的淋 巴细胞 分
ｔ ｅ ｂ ｓ ｒ ｓ ｌ ｉ ｓ ｌ ｔ ｎ ＡＮ ｓｕ ｅ ｏ ｓ ｉ ｈ ｓ ｌｔ ｄ ｌｍｐ ｏ ｙｅ ｎ ｔｉｄ ｃ ｔｄ ｔ ａ ｅ ｏ ｔ ｌ ｔ ｉ ｉ ｇｃ ｎ ｈ ｅ ｔ ｅ ｕ ｔ ｎ ｉｏａ ｉ ． ｏ ＡＥ ｗａ ｓ ｄ ｔ ｔ ｎ ｔ ｅ ｉ ａｅ ａ ｏ ｙ ｈ ｃ ｔｓａ ｄ ｉ ｎ ｉａｅ ｈ ｔｔ ｐ ｉ ｈ ｍａ ｓａ ｎｎ ｏ —
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第３ ６卷 第 ３期
Ｖ０＿ ６ ｌ３
Ｎｏ ３ ．
淡
水
酶类染色液
酶类染色液北京华越洋生物------------------------------------------------------碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法) 3×50ml 酶类染色40% 4℃,避光,3个月碱性磷酸酶染色，适用于石蜡切片属于金属沉淀法,碱性磷酸酶活性出呈棕黑色,可能出现假阳性,采用阴性对照。
二甲苯应采用AR以上级别。
碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法) 3×100ml 酶类染色40% 4℃,避光,3个月碱性磷酸酶染色，适用于石蜡切片属于金属沉淀法,碱性磷酸酶活性出呈棕黑色,可能出现假阳性,采用阴性对照。
二甲苯应采用AR以上级别。
碱性磷酸酶-PAS联合染色液6×50ml 酶类染色40% 4℃,避光,3个月碱性磷酸酶染色与过碘酸雪夫试剂合用,同时显色碱性磷酸酶和PAS阳性物质。
适用于冰冻切片、石蜡切片,碱性磷酸酶活性部位呈黑色,PAS阳性物质呈紫红色。
染色过程中注意控制过碘酸处理的时间,否则容易褪色。
中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP) 4×2ml 酶类染色40% 4℃,避光,6个月专门用于血液或骨髓细胞涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶染色,又称同时偶联法。
碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨中。
油镜下计数100个中性粒细胞,求出百分比和积分。
非特异性反应少，结果可靠。
中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP) 4×10ml 酶类染色40% 4℃,避光,6个月专门用于血液或骨髓细胞涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶染色,又称同时偶联法。
碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨中。
油镜下计数101个中性粒细胞,求出百分比和积分。
非特异性反应少，结果可靠。
碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法) 4×2ml 酶类染色40% —20℃,避光,6个月用于石蜡切片、冰冻切片、骨髓细胞涂片、血液涂片等的碱性磷酸酶染色,又称同时偶联法碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨中。
酸性α醋酸萘酯酶染色法
酸性α 醋酸萘酯酶染色法一、原理淋巴细胞内含有许多种酶，如α 醋酸萘酯酶(ANAE)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、β 葡萄糖苷酸酶等。
不同的淋巴细胞细胞亚群所含酶类及其含量各异，如淋巴母细胞富含ACP，而成熟的T淋巴细胞则显示ANAE活性，因此可利用化学反应作检测。
T淋巴细胞浆内含有的酸性α 醋酸萘酯酶(acid α naphthyl acetate esterase，ANAE) ，在弱酸性条件下，能使底物酸性α 醋酸萘酯水解成醋酸和α 萘酚，后者与六偶氮副品红偶联，生成不溶性的红色沉淀物，沉积在T淋巴细胞胞浆内酯酶所在的部位，经甲基绿复染，反应呈现单一或散在的颗粒或斑块，显棕红色。
B淋巴细胞则无此种反应。
因此ANAE染色法可作为鉴别T淋巴细胞的一种非特异性方法。
此外，单核细胞、中性粒细胞、酸性粒细胞及血小板等也可呈现酯酶染色阳性反应，应当注意区分。
二、材料和方法(一) 材料1 2 5%戊二醛溶液(固定液)在0 1mol/L pH值7 4磷酸盐缓冲液9ml中加入25%戊二醛溶液1ml，混和，置4℃冰箱保存备用。
2 副品红液将副品红4g加入2mol/L盐酸100ml中，37℃溶解过滤，4℃冰箱保存备用。
3 4%亚硝酸钠溶液取亚硝酸钠400mg，溶于蒸馏水10ml中，临用前配制。
4 六偶氮副品红溶液取新配制的亚硝酸钠溶液3ml，慢慢滴入副品红溶液3ml中，边滴边搅拌，此时有刺激性气体产生。
充分混合，1min后备用。
5 α 醋酸萘酯溶液：α 醋酸萘酯2g乙二醇单甲醚100ml也可用丙酮100ml代替乙二醇单甲醚。
6 0 067(1/15)mol/L pH值7 6磷酸盐缓冲液：甲液KH 2PO 4 9 08g加蒸馏水至1，000ml乙液Na 2HPO 4 9 74g加蒸馏水至1，000ml。
(如为Na 2HPO 4·12H 2O则称取2322g)取甲液13ml，加入乙液87ml，即为0 067mol/L pH值7 6磷酸盐缓冲液。
酸性α—醋酸萘酯酶
实验五：酸性α—醋酸萘酯酶一、实验目的和要求：1、掌握酸性α—醋酸萘酯酶实验的原理及在免疫学方面的应用；2、学会应用该实验方法鉴别不同免疫细胞在不同疾病中的作用。
二、实验内容：鉴别人和鼠中T、B淋巴细胞。
三、实验步骤：1、配制试剂。
A液：PH7.6的磷酸盐缓冲液：甲液：将9.08克的磷酸二氢钾溶于1L蒸馏水中；乙液：将23.88克十二水合磷酸氢二钾溶于1L蒸馏水中；取甲液12mL加乙液88mL即成磷酸盐缓冲液。
B液：4%副品红溶液：将4克副品红溶于100mL2M盐酸内，溶解过滤，4℃保存。
C液：4%亚硝酸钠溶液：取0.4克亚硝酸钠溶于10mL蒸馏水中，现用现配。
D液：2%醋酸ɑ萘酯液：取2克醋酸ɑ萘酯，溶于100mL无水丙酮中，溶解后装棕色瓶，4℃保存。
孵育液：将2.4mLC缓慢滴入到2.4mLB中，震荡混匀，静置5min，之后将此溶液加进80mLA液中，混匀，滴入2mLD，调PH5.8-6.0。
1%孔雀石绿染液：将1克孔雀石绿溶于100mL蒸馏水中，用氯仿处理后4℃保存。
2、血液涂片取一只小鼠，断尾采血，涂抹于洁净玻片，编号为D，血液层越薄越好，另外手指尖取血涂片，编号D1。
3、孵育和染色待血液自然干燥后置于孵育液内，37℃孵育90min，水冲洗5min，孔雀石绿复染1min，流水冲洗，干燥后，制片显微镜观察（用油镜）。
4、结果判定淋巴细胞胞浆内出现大小不等、数量不一的深红色颗粒者为ANAE阳性细胞（T细胞），胞浆内无颗粒者为ANAE阴性细胞（B细胞）。
四、实验结果2、分析和讨论人的TB淋巴细胞相对于小鼠的都比较大，但是形态相似，胞浆内呈现大小不一的红色颗粒为T细胞，B细胞，胞核比较搭，几乎占据整个细胞。
五、作业酸性α—醋酸萘酯酶在兽医临床上有何应用？在免疫学方面的应用，检测TB淋巴细胞的活性，鉴别不同免疫细胞在不同疾病中的作用，ANAE测定可作为评价肝细胞损伤、肝纤维化以及肝脏合成功能异常的一项新的血清学指标。
医院检验中心酯酶染色中性非特异性脂酶染色操作规程
医院检验中心酯酶染色---中性非特异性脂酶(α—NAE)染色操作规程[方法学]酯酶染色的方法很多，根据与pH底物等不同作用，将常用的酯酶染色法分为两大类，即特异性酯酶染色和非特异性酯酶染色。
后者又可分为3类：①中性非特异性酯酶染色法：α—乙酸菜酚酯酶、乙酸菜酚酯酶和乙酸菜酚AS-D酯酶。
②酸性非特异性酯酶染色法：α—乙酸菜酯酶和α—丁酸菜酯酶。
②碱性非特异性酯酶染色法：α—丁酸菜酯酶。
中性非特异性酯酶染色是单核细胞与粒细胞白血病区别的重要方法，一般实验室可选用此法。
[原理]α—乙酸萘酚经酯酶水解产生萘酚，萘酚与重氮盐偶联，生成灰黑或棕黑色沉淀物，定位于胞浆中。
[试剂]1．α—醋酸萘酯丙酮液：α—醋酸萘酯1g，加丙酮和蒸馏水混合液100m1，溶解后贮于磨口带塞三角瓶内，4℃保存，可使用半年。
2.pH7．4磷酸盐缓冲液：0．07MNa2HPO4(即Na2HPO4)3．基质液：磷酸盐缓冲液82ml，缓慢滴加α-醋酸萘酯丙酮液1．6ml(滴速约每分钟40滴)，边加边用力振摇。
根据5分钟后，加坚牢蓝B80mg，剧烈振摇10分钟，立即过滤，滤液两杯，各40ml。
4．氟化钠基质液：称取氟化钠(NaF)61mg加入上述其中基质液1杯内，混匀后，标上标记。
[操作](1)新鲜涂片两张，分别标上NSE和NaF记号，滴加10％甲醛生理盐水，固定5分钟，用自来水轻轻冲洗，当心血膜脱落，晾干。
(2)两张涂片同时放入各自染色杯内，37℃水浴1小时。
(3)取出后水洗，晾干后镜检。
不用复染。
[结果观察]在胞浆内若有棕黑色或灰黑色弥漫性颗粒沉淀者为阳性，细胞脑浆为黄色者为阴性。
[临床意义]1．阳性：单核细胞和组织细胞呈强阳性，但可被氟化钠抑制；巨核细胞及血小板呈阳性；早幼粒细胞白血病时早幼粒细胞可阳性，且不受氟化钠抑制。
2．弱阳性及阴性：粒细胞、淋巴细胞一般为阴性，若有弱阳性也可被氟化钠抑制。
3．临床鉴别：主要用于鉴别急性单核细胞性白血病与急性粒细胞性白血病，前者NSE阳性，且受氟化钠(NaF)抑制；而后者NSE阴性，若有阳性也不受氟化钠抑制。
酯酶染色---中性非特异性脂酶(α—NAE)染色
酯酶染色---中性非特异性脂酶(α—NAE)染色[方法学]酯酶染色的方法很多，根据与pH底物等不同作用，将常用的酯酶染色法分为两大类，即特异性酯酶染色和非特异性酯酶染色。
后者又可分为3类：①中性非特异性酯酶染色法：α—乙酸菜酚酯酶、乙酸菜酚酯酶和乙酸菜酚AS-D酯酶。
②酸性非特异性酯酶染色法：α—乙酸菜酯酶和α—丁酸菜酯酶。
②碱性非特异性酯酶染色法：α—丁酸菜酯酶。
中性非特异性酯酶染色是单核细胞与粒细胞白血病区别的重要方法，一般实验室可选用此法。
[原理]α—乙酸萘酚经酯酶水解产生萘酚，萘酚与重氮盐偶联，生成灰黑或棕黑色沉淀物，定位于胞浆中。
[试剂]1．α—醋酸萘酯丙酮液：α—醋酸萘酯1g，加丙酮和蒸馏水混合液100m1，溶解后贮于磨口带塞三角瓶内，4℃保存，可使用半年。
2.pH7．4磷酸盐缓冲液：0．07MNa2HPO4(即Na2HPO4)3．基质液：磷酸盐缓冲液82ml，缓慢滴加α-醋酸萘酯丙酮液1．6ml(滴速约每分钟40滴)，边加边用力振摇。
根据5分钟后，加坚牢蓝B80mg，剧烈振摇10分钟，立即过滤，滤液两杯，各40ml。
4．氟化钠基质液：称取氟化钠(NaF)61mg加入上述其中基质液1杯内，混匀后，标上标记。
[操作](1)新鲜涂片两张，分别标上NSE和NaF记号，滴加10％甲醛生理盐水，固定5分钟，用自来水轻轻冲洗，当心血膜脱落，晾干。
(2)两张涂片同时放入各自染色杯内，37℃水浴1小时。
(3)取出后水洗，晾干后镜检。
不用复染。
[结果观察]在胞浆内若有棕黑色或灰黑色弥漫性颗粒沉淀者为阳性，细胞脑浆为黄色者为阴性。
[临床意义]1．阳性：单核细胞和组织细胞呈强阳性，但可被氟化钠抑制；巨核细胞及血小板呈阳性；早幼粒细胞白血病时早幼粒细胞可阳性，且不受氟化钠抑制。
编写：谢平制定日期：2011.12.12．弱阳性及阴性：粒细胞、淋巴细胞一般为阴性，若有弱阳性也可被氟化钠抑制。
3．临床鉴别：主要用于鉴别急性单核细胞性白血病与急性粒细胞性白血病，前者NSE阳性，且受氟化钠(NaF)抑制；而后者NSE阴性，若有阳性也不受氟化钠抑制。
α-萘酚化学品安全技术说明书
【储运注意事项】：储存于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。保持容器密封。应与氧化剂、碱类、食用化学品分开存放，切忌混储。配备相应品种和数量的消防器材。储区应备有合适的材料收容泄漏物。
防护措施
【工程控制】：严加密闭，提供充分的局部排风。现场备有冲洗眼及皮肤的设备。
【呼吸系统防护】：可能接触其粉尘时，必须佩戴防尘面具（全面罩）。紧急事态抢救或撤离时，应该佩戴空气呼吸器。
【眼睛防护】：呼吸系统防护中已作防护。
【身体防护】：穿连衣式胶布防毒衣。
【手防护】：戴橡胶手套。
【其他防护】：工作现场禁止吸烟、进食和饮水。及时换洗工作服。
α-萘酚化学品安全技术说明书
α-萘酚
【危化品名称】：α-萘酚ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
【中文名】：α-萘酚
【英文名】：α-naphthol
【分子式】：C10H8O
主要组成与性状
【主要成分】：纯品
【外观与性状】：无色或黄色、有苯酚气味、晶体或粉末状。
【主要用途】：用于制染料和香料等, 也用于其他有机合成。
健康危害
【健康危害】：对眼睛、皮肤、粘膜有强烈刺激作用。可引起出血性肾炎。接触后可引起烧灼感、咳嗽、头痛、眩晕、喉炎、气短、恶心和呕吐。误服后，可出现呕吐、腹泻 、腹痛、痉挛、贫血、虚脱
急救措施
【皮肤接触】：立即脱去污染的衣着，用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。就医。
【眼睛接触】：提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。就医。
【吸入】：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。如呼吸停止，立即进行人工呼吸。就医。
【食入】：饮足量温水，催吐。洗胃，导泄。就医。
泄漏应急处理
【泄漏应急处理】：隔离泄漏污染区，限制出入。切断火源。建议应急处理人员戴防尘面具（全面罩），穿防毒服。避免扬尘，小心扫起，置于袋中转移至安全场所。若大量泄漏，用塑料布、帆布覆盖。收集回收或运至废物处理场所处置。
血清酸性α-醋酸萘酯酶的比色测定及初步临床应用
淋巴细胞酸性α—萘乙酸脂酶活性(ANAE)测定法的改进
2士 8
.
.
3%
.
.
36 70
.
92 一 4 3 9 5一 7 7
.
485 65纬 99坏
男战士 女战士
85%
3 士 10 2
.
5%
10 5 12 8
.
% %
,
1 2
66 34
.
7 0一 8 4 %
,
.
士1 2 8 肠
.
.
2
.
6 8 4 1一 7 7
.
.
以 上 结 果 表 明 不 论 在 儿 童 还 是 在成
蚤元 素
一 样 品接受处 理 方法 》
交稗 日 期
:
1 9 9 6一 0 3一 2 5
淋 巴 细 胞酸 性 一蔡 乙 酸 脂 酶 活 性 ( A N A E ) 测定法 的改 进
邯郸 市 中 心 医 院 邯 摘 要 本 文对
:
a
张秀 芳 张登书
,
刘
静
钢
医
院
A N A E 浏 定 法 作 了改 进
,
减 去 了分 离 淋 巴 细 胞
4 37℃
.
法 复 杂 所 用 仪 器及 试剂 昂 贵 我们对 此 法
4%付
,
品红
,
用 Zm o l H e l 配 制 置
。
,
进 行 了 改 进 获 得 了 满意 的结 果 并 对 6 0 名 3一 5 岁 儿 童 的 和 7 0 名战士 的 进行 了测 定 试剂
1 154
.
,
,
水 溶解 冰 箱 存备 用
-
1947士 58
9331
酸性α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)染色标准操作规程
酸性α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE）染色标准操作规程1.【目的】用于血细胞内α-醋酸萘酚酯酶的染色测定。
2.【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
3.【标本类型及实验前准备】1．标本类型1.新鲜涂片2.样本宜新鲜，若不能及时测定可先用固定液处理后，可保存数天。
3.样本不能沾有酸、碱类物质和有机溶剂，以免产生假阴性。
2.患者准备成人一般取髂后、髂前上棘，其次为胸骨、棘突部位。
2岁以下小儿可穿刺胫骨。
3.容器、添加剂类型骨髓液量不宜过多，不需抗凝，迅速置于载玻片上，必要时可用EDTA2K抗凝。
4.仪器设备捷达骨髓成像系统，OLYMPUS显微镜5.实验试剂1.固定液（Ａ液）：甲醛2.偶氮溶液（Ｂ液）：副品红3.亚硝酸钠溶液（Ｃ液）：亚硝酸钠4.磷酸盐缓冲溶液（Ｄ液）：磷酸盐5.α－醋酸萘酚溶液（Ｅ液）：α－醋酸萘酚6.甲基绿溶液（Ｆ液）：甲基绿7.NaF液：氟化钠4.【测定原理】盐酸副品红与亚硝酸钠反应生成六偶氮副品红（重氮盐），底物α－醋酸萘酚在酯酶的作用下分解产生α－萘酚，α－萘酚与六偶氮副品红结合生成棕红色沉淀，定位于细胞浆中，本染色液对酯酶染色无特异性，故又称非特异性酯酶染色。
5. 【程序性操作步骤】1.工作液配制：1.1浸染工作液配制（一份浸染工作液量为33ml,至少可同时放置8-10张涂片）： 1.1.1重氮盐溶液的准备：B液1ml与C液1ml彻底混匀，静置2分钟；1.1.2染缸（自备染液缸）内加入D液30ml；1.1.3将重氮盐溶液倒入染缸内，混匀；1.1.4再加E液1ml入染缸内，轻轻混匀。
1.2滴染工作液配制（一份滴染工作液量为1.65ml）:使用器材：一次性塑料试管、微量移量液器、一次性吸嘴、滴管。
操作：于试管内加B液50ul、C液50ul，静置1分钟，再加D液1.5ml，E液50ul，混匀，静置2分钟备用（NaF抑制试验加NaF液1滴）。
酸性α-醋酸萘酯酶染色法的改良
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酸性α-乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE)使用说明
酸性α－乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE)使用说明货号：G2390规格：3×10ml保存：有效期6个月。
产品内容：试剂A：ANAE固定液10ml RT避光试剂B；ANAE孵化液B1：pararosaniline solution0.05ml4℃避光B2：Nitrite solution0.05ml4℃避光B3：α-NAE solution0.5ml4℃避光B4：ANAE buffer9.5ml4℃避光临用前，按B1：B2：B3：B4=1：1：10：190充分混合，即为ANAE孵化液，即配即用。
注意应先B1：B2=1:1混匀后，再与B3、B4混匀。
试剂C:甲基绿染色液10ml RT避光试剂D：NaF solution0.2ml RT避光自备材料：载玻片、湿盒、显微镜产品简介：酯酶主要分为非特异性酯酶(non-specific esterase)、酯酶(lipase)、胆碱酯酶(choli-esterase)酸性α-乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE法)又称非特异性酯酶染色液，其原理是酸性条件下细胞中的酸性酯酶将α-乙酸萘酚水解产生α-萘酚，α-萘酚再与六偶氮副品红偶联，生成不溶性红色沉淀，定位于细胞质。
酸性α－乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE)对酯酶染色无特异性，故又称作非特异性酯酶染色液，可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片的非特异性酯酶染色，亦可作氟化钠抑制试验。
该染色液仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
操作说明：1.血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片入ANAE固定液固定10-15min。
2.水洗5min。
3.入配置好的ANAE孵育液，放入湿盒中，室温避光孵育1h，水洗。
4.入甲基绿染色液复染5-15min，水洗，镜检。
染色结果：细胞质暗红色/棕色细胞核绿色氟化钠抑制实验：按NaF solution：ANAE孵育液=1：25的比例，在ANAE孵育液中加入NaF solution，其余按上述染色法进行。
肝病患者血清酸性α-醋酸萘酯酶及其同工酶的变化
肝病患者血清酸性α-醋酸萘酯酶及其同工酶的变化肖芸;王燕;戴志敏;张维;廖若男【期刊名称】《世界华人消化杂志》【年(卷),期】2004(12)8【摘要】目的:探讨肝病患者血清酸性α-醋酸萘酯酶(acid alpha naphthyl aetate esterase,α-ANAE)及其同工酶的临床应用价值. 方法:通过比色法测定血清ANAE 总活性.ANAE同工酶的检测采用琼脂糖凝胶电泳法及聚丙烯酰胺凝胶电泳法. 结果:肝病患者包括肝炎、肝硬化及肝癌血清ANAE含量均低于对照组,肝硬化组及肝癌组明显低于肝炎组.通过琼脂糖凝胶电泳法可以在肝病患者血清中检出两种ANAE 同工酶异常谱形.聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离出更多ANAE同工酶谱带. 结论:血清ANAE含量测定可作为评价肝细胞变性坏死、肝脏合成功能异常的一项血清学指标.肝病患者血清中检出的异常ANAE同工酶谱带性质、组成及在临床应用上的价值还有待于进一步探讨.【总页数】2页(P1932-1933)【关键词】肝病患者;血清;检出;肝癌;临床应用;肝炎;琼脂糖凝胶电泳法;醋酸萘酯;同工酶谱带;酯酶【作者】肖芸;王燕;戴志敏;张维;廖若男【作者单位】贵阳医学院附院血液检验科;贵阳医学院附院消化内科;贵阳医学院附院血液内科【正文语种】中文【中图分类】R575;R735【相关文献】1.血清酸性α-醋酸萘酯酶的比色测定及初步临床应用 [J], 冯春来;黄兴富;范华2.血清酸性α-醋酸萘酯酶的比色测定及初步临床应用 [J], 周玉贵;王传芳;陆晓云;金勇;刘昌元3.血清α-醋酸萘酯酶同工酶琼脂糖凝胶电泳法及临床应用 [J], 黄志华4.肝硬化患者血清和腹水中酸性α-醋酸萘酯酶的含量 [J], 王燕;周力;张永宏;张维;陈玉梅5.Ⅰ型糖尿病血清α-醋酸萘酯酶同工酶出现变异谱带的初步分析 [J], 万晓龙;刘昌元;王敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
青海藏族青年外周血淋巴细胞酸性a——醋酸萘酯酶反应类型及其正常值的探讨
青海藏族青年外周血淋巴细胞酸性a——醋酸萘酯酶反应类型
及其正常值的探讨
王索安;杨风乡;等
【期刊名称】《青海医学院学报》
【年(卷),期】1993(014)003
【摘要】本文用酸性a--醋酸萘酯酶（ANAE）反应标记淋巴细胞的化学方法，对青海105例正常藏族青年外周血淋巴细胞ANAE阳性率进行了观察，发现试验对象外周血淋巴细胞的ANAE总阳性率为77．8±6．61％，并按三种酶型进行统计分析，其中ANAE反应为1－3个“点状颗粒型”的淋巴细胞百分率为
51．15±8．72，4－8个“点状颗粒型的淋巴细胞百分率为18．5±6．94，弥散型的淋巴细胞百分率为8．26±5．18，同时比较了不同性别的正常值及酶型变化，并在方法上进行了探讨。
【总页数】6页(P167-172)
【作者】王索安;杨风乡;等
【作者单位】病理教研室;组胚教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R446.1
【相关文献】
1.冷浴对小鼠外周血淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶活性的影响 [J], 李文荣
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杨风乡
3.用酸性α—醋酸萘酯酶染色法测定儿童外周血T淋巴细胞 [J], 陈毓玲;葛桂秀
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医院检验中心酸性磷酸酶染色操作规程
医院检验中心酸性磷酸酶(ACP)染色操作规程
[原理]
酸性磷酸酶在酸性环境中水解甘油磷酸钠，产生磷酸根。
磷酸根与硝酸铅作用生成磷酸铅，定位于胞浆中的磷酸铅再与硫化铵反应生成棕黑色硫化铅沉淀。
[试剂]
1．2mol/L乙酸缓冲液(pH4．7)：1mol／L乙酸100ml 加1mol/L氢氧化钠54．4ml，再加蒸馏水至500mL。
2．孵育液：乙酸缓冲液12m1，508／L硝酸铅2m1，32g ／L β—甘油磷酸钠4ml，蒸馏水74ml。
3．硫化铵溶液：硫化铵1—2ml加蒸馏水到100m1。
4．4．28／L甲基绿：甲基绿2g加蒸馏水100ml。
[操作]
(1)新鲜涂片滴加95％乙醇10滴，固定10分钟。
(2)水洗后晾干。
放入孵育液37℃2—4小时。
(3)水洗数次，置于10g/L硫化铵染色3分钟；
(4)自来水冲洗后，用20g/L甲基绿复染10分钟，水洗，
待干后镜检。
[临床意义]
(1)单核细胞和组织细胞呈阳性反应。
(2) Gaucher3细胞呈强阳性反应，而尼曼—匹克
(Nie-mann-Picks)氏细胞为阴性。
(3)毛细胞性白血病常为阳性反应(加1—酒石酸后
不被抑制)。
(4) T淋巴细胞为阳性。
且被酒石酸抑制；而B淋
巴细胞为阴性。
[附注]
(1)涂片要新鲜，并应尽早固定染色。
若不能及时测定，
应固定后放冰箱保存。
(2)硫化铵试剂出现深黄色，提示有大量硫离子消耗，若
染色效果不佳，应先考虑硫化铵试剂变质，应予更换
后再做试验。
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酸性α－乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE)使用说明
货号：G2390
规格：3×10ml
保存：有效期6个月。
产品内容：
试剂A：ANAE固定液10ml RT避光
试剂B；ANAE孵化液B1：pararosaniline solution0.05ml4℃避光
B2：Nitrite solution0.05ml4℃避光
B3：α-NAE solution0.5ml4℃避光
B4：ANAE buffer9.5ml4℃避光
临用前，按B1：B2：B3：B4=1：1：10：190充分混合，即为ANAE孵化液，即配即用。
注意应先B1：B2=1:1混匀后，再与B3、B4混匀。
试剂C:甲基绿染色液10ml RT避光
试剂D：NaF solution0.2ml RT避光
自备材料：
载玻片、湿盒、显微镜
产品简介：
酯酶主要分为非特异性酯酶(non-specific esterase)、酯酶(lipase)、胆碱酯酶(choli-esterase)酸性α-乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE法)又称非特异性酯酶染色液，其原理是酸性条件下细胞中的酸性酯酶将α-乙酸萘酚水解产生α-萘酚，α-萘酚再与六偶氮副品红偶联，生成不溶性红色沉淀，定位于细胞质。
酸性α－乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE)对酯酶
染色无特异性，故又称作非特异性酯酶染色液，可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片的非特异性酯酶染色，亦可作氟化钠抑制试验。
该染色液仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
操作说明：
1.血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片入ANAE固定液固定10-15min。
2.水洗5min。
3.入配置好的ANAE孵育液，放入湿盒中，室温避光孵育1h，水洗。
4.入甲基绿染色液复染5-15min，水洗，镜检。
染色结果：
细胞质暗红色/棕色
细胞核绿色
氟化钠抑制实验：
按NaF solution：ANAE孵育液=1：25的比例，在ANAE孵育液中加入NaF solution，其余按上述染色法进行。
注意事项：
1.血液或骨髓细胞涂片应新鲜，薄厚适宜，一般2天内染色，否则会影响酶的活性。
2.ANAE孵育液易失效或降低阳性程度，即配即用，不宜久置。
3.ANAE孵育液配置后易出现浑浊，但不会影响染色效果。
4.单核细胞为中度阳性至强阳性，对NaF敏感。
正常粒细胞呈阴性反应。
5.每次染色时，应有阳性对照。