酵母菌的分离纯化
酵母菌的分离及培养条件的优化
2. 酵母浸液0.5g (NH4)2SO4 2g 葡萄糖1g (2) 1.酵母浸液0.5g NH4NO3 1g 葡萄糖1g
2. 酵母浸液0.5g NH4NO3 2g 葡萄糖1g
(3) 1.酵母浸液0.5g NaNO3 1g 葡萄糖1g • 2. 酵母浸液0.5g NaNO3 2g 葡萄糖1g • 3.对比试验:酵母浸液0.5g 蛋白胨1g 葡萄糖1g • 4.配置完毕调PH值 PH等于5为准确 • 包三个移液管然后将以上培养基一起拿去灭菌
• 5.3减少进气量，控制罐压在0.02MPa左右后，点 燃接种火圈内的酒精棉球。
• 5.4 拧下进料口螺盖，放入盛有酒精的培养皿中。
• 5.5将接种瓶是瓶口在火焰上烧一下，并在火焰的 保护下拔下瓶塞，迅速将菌种倒入发酵罐内。
• 5.6旋上进料口螺盖后灭火焰，拧紧螺盖，并用酒 精棉球将进料口擦洗干净。
二、配制
1、配多少培养基 10L罐装料量60%：10X60%=6L 接种量10%：培养基5400ml(实际操作培养基
5000ml)，种子液600ml 2、配方用多少
6L:60g酵母浸粉1%,120gc120g葡萄糖2%； 150ml:1.5g酵母浸粉1%,3g酵母浸粉1%,3g葡 萄糖2%.其中100ml加1g琼脂配成固体培养基用于 倒平板；50g原液用于测OD时做标准液。 3、所需器材包扎灭菌 4个装有9ml蒸馏水的试管，6个空试管，4个涂 布器，4个移液管1ml，6个平板
四 实验内容
1、分离单菌落
（1）实验物品灭菌
仪器：包扎9个移液管、9个涂布器、9个装有9ml 蒸馏水的试管、16个平板、
液体：3g酵母浸粉1%、6g蛋白胨2%、6g葡萄糖 2%，配成300ml溶液，取240ml溶液平均分装两个三 角瓶中，然后每个三角瓶放入2.4g琼脂，剩下60ml 为液体培养基，然后将以上设备拿去灭菌
酵母菌的分离与纯化
酵母菌的分离与纯化酵母菌的分离与纯化⼩组组员: ⼀、实验⽬的1.学习分离纯化酵母菌的技术与⽅法2.了解培养基的配置与灭菌技术3.增强⽆菌操作技术的意识⼆、基本原理从混杂的微⽣物群体获得只含某⼀种某⼀株微⽣物的过程叫做微⽣物分离与纯化，酵母菌常见于含糖份⽐较⾼的环境中，如果园⼟、菜园⼟及果⽪等的表⾯。
多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为4.5-6.0.酵母菌⽣长迅速，容易分离培养。
马丁⽒培养基是⼀种⽤来分离真菌的选择性培养基。
此培养基是由葡萄糖、蛋⽩胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、孟加拉红(玫瑰红，Rose Bengal)和链霉素等组成。
其中葡萄糖主要作为碳源，蛋⽩胨主要作为氮源，KH2PO4和MgSO4·7H2O作为⽆机盐，为微⽣物提供钾、磷和镁离⼦。
⽽孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂，对真菌⽆抑制作⽤，因⽽真菌在这种培养基上可以得到优势⽣长，从⽽达到分离真菌的⽬的。
三、实验材料及⽤具1.⽤品：苹果、葡萄糖、琼脂、⽔、1%孟加拉红⽔溶液、马铃薯2.设备与器材：1ml的⽆菌吸管、⽆菌培养⽫等.四、实验步骤1、马铃薯培养基的配置培养基成分:马铃薯 40克、蔗糖（葡萄糖） 4克、琼脂 4克、⽔ 200毫升、 pH ⾃然。
配置⽅法:（1）配制20%马铃薯浸汁：取去⽪马钓薯40g，切成⼩块，加⽔200ml.加热煮游30 min ，⽤纱布过滤，然后补⾜失⽔互所需体积。
121Pa灭菌30min.即成20%马铃馨漫汁，贮存备⽤。
（2）配制时，按每100ml 马铃薯浸汁加⼊2g蔗糖，加热煮沸后加⼊4克琼脂，继续加热融化并补⾜失⽔。
（3）分装、加塞，包扎。
（4）⾼压蒸汽灭菌：121Pa灭菌30min（5）将灭菌培养基放⼊37C°的温室中培养24-48⼩时，观察是否有菌落⽣成，以检查灭菌是否彻底。
2、倒平板：将马铃薯培养基加热融化，冷却⾄55--50C°时，倒平板，倒三⽫3、制备苹果悬液（1）⾸先将1g苹果在研钵中磨细，放⼊装有10ml⽣理盐⽔和玻璃珠的100ml三⾓瓶中去。
酵母菌菌体离心实验步骤
酵母菌菌体离心实验步骤以酵母菌菌体离心实验步骤为标题，写一篇文章如下：酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然环境中，被广泛应用于食品发酵、酿造和生物学研究等领域。
离心实验是一种常用的分离和纯化生物物质的方法，下面将介绍以酵母菌菌体离心实验步骤。
实验所需材料和仪器：1. 酵母菌培养液：含有大量酵母菌菌体的培养液。
2. 离心管：用于离心实验的管状容器。
3. 离心机：用于离心实验的设备，能够以高速旋转离心管。
实验步骤如下：步骤一：准备工作1. 将离心管清洗干净，并确保没有任何杂质。
2. 用无菌技术取出适量的酵母菌培养液，注意避免外界的污染。
3. 准备好离心机，确保离心机内部的离心管是干净的。
步骤二：装样品1. 将取出的酵母菌培养液缓慢倒入离心管中，避免产生气泡。
2. 确保离心管中液体的高度不超过离心管的容积的70%。
步骤三：离心实验1. 将装有酵母菌培养液的离心管放入离心机中。
2. 调节离心机的转速和离心时间。
一般来说，酵母菌的离心转速为3000-5000转/分钟，离心时间为5-10分钟。
3. 启动离心机，使其以设定的速度旋转。
步骤四：离心结束1. 离心结束后，停止离心机的运转。
2. 注意离心管内可能产生的沉淀，避免晃动或颠倒离心管。
步骤五：收集上清液1. 将离心机中的离心管取出，并小心地将上清液倒入另一个干净的容器中。
2. 注意避免将沉淀带入上清液中。
通过以上实验步骤，我们可以将酵母菌菌体从培养液中分离出来，得到较为纯净的上清液。
离心实验通过利用离心力将悬浮在液体中的颗粒物分离出来，其原理是根据颗粒物在离心力作用下的不同沉降速度来实现分离。
在酵母菌菌体离心实验中，酵母菌菌体由于其较大的体积和密度，会向离心管底部沉积，形成沉淀，上清液中则是相对较为纯净的液体。
需要注意的是，在进行酵母菌菌体离心实验时，应注意使用无菌技术，以避免外界的污染。
此外，在实验过程中，离心机的转速和离心时间的选择也需要根据具体的实验要求和酵母菌的性质进行调整。
细菌 、放线菌 、酵母菌及霉菌的分离与纯化
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化一、实验目的1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物的技术。
2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。
3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。
4. 学习平板菌落计数法。
二、实验原理将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。
要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。
微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。
表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求样品来源分离对象分离方法稀释度培养基名称培养温度/℃培养时间/d土样细菌稀释分离10-5，10-6，10-7牛肉膏蛋白胨30～37 1～2土样放线菌稀释分离10-3，10-4，10-5高氏1号28 5～7土样霉菌稀释分离10-2，10-3，10-4马丁氏琼脂28～30 3～5面肥或土样酵母菌稀释分离10-4，10-5，10-6马铃薯葡萄糖28～30 2～3细菌分离平板细菌单菌落划线分离10-2 牛肉膏蛋白胨30～37 1～2三、实验材料1. 菌源土样2. 培养基牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见附录Ⅲ。
3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。
4.5 mL无菌水试管(每人5～7支)。
4. 其他物品无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。
（一）系列稀释平板法1. 取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
盛土的容器应是无菌的。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
酵母分离培养
YPD培养基YPD 或YPED，：Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L)，又叫酵母浸出粉胨配方：1% Yeast Extract（酵母膏），2% Peptone（蛋白胨），2% Dextrose (glucose)（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉配制方法：1 .溶解10gYeast Extract（酵母膏）, 20gPeptone（蛋白胨）,20g琼脂粉于900ml水中2 .高压 115度 20min3.加入100ml 10×Dextrose (glucose)（葡萄糖），(葡糖糖溶液灭菌后加入) ,注：葡萄糖，yeast extract ,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。
酵母的分离与纯化1、接种：取酵母0.5克，加入到5ml的YPD培养液中，在30℃摇床中过夜培养，可见培养液变浑浊。
2、计数：将酵母菌液稀释到合适的倍数（约102-103倍）以每小格的菌数可数为度，涂于血球计数板上，在高倍显微镜下计数酵母菌数。
3、涂皿：将培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取0.1ml稀释合适倍数的菌液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。
做平行样。
4、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上三区划线，培养后分离得到单个菌落。
5、镜检：挑取单菌落，制片观察其形态。
6、菌种保藏：接种酵母菌到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，长出菌苔后冰箱保藏。
血球计数板使用1.取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液，然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。
2.静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。
将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。
酵母菌纯培养的实验步骤
酵母菌纯培养的实验步骤
酵母菌纯培养的实验步骤如下：
1. 取少量酵母菌样品，使用选择培养基（例如固体葡萄糖、面粉琼脂培养基，添加有特殊药液和增菌剂的选择培养基有利于酵母菌的筛选）进行分离纯化。
2. 筛选出发酵力良好的菌落并进行纯培养。
在酒精发酵实验中发现典型的酵母菌菌落可移种至综合生化管培养箱中进一步鉴定。
3. 使用液体培养基进行酵母菌扩大培养，准备好无菌吸管和无菌锥形瓶，将酵母菌从锥形瓶中转移到试管中。
4. 对酵母菌进行计数，准备血液培养皿和牛肉膏琼脂培养基，接种菌液到培养基中使其生长并繁殖，观察生长情况并进行计数。
通过以上步骤，就可以对酵母菌进行纯培养，请确保所有使用到的工具和试剂都经过灭菌处理。
以上步骤仅供参考，建议您咨询专业人士获取更具体的信息。
酵母菌的分离纯化实验方案
酵母菌的分离纯化•实验目的1.了解培养基的配置与灭菌技术；2.无菌操作技术；3.工业微生物的分离与纯化技术；4.工业微生物的检测及保藏。
•基本原理1、培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。
也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。
由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。
不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH 的要求选择合适的PH。
由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。
2、接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。
所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。
3、把特定微生物从混杂的微生物群体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。
首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。
分离纯化的方法通常有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。
此次实验采用梯度稀释涂布平板法。
4、微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法（CFU）、光电比浊计数法等。
本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。
实验器材仪器设备恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器玻璃器皿烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片试剂与材料苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染色液其它纱布、滤纸•实验内容及操作步骤(一)、样品的选择酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。
土壤中酵母菌的分离与纯化实验报告结果
土壤中酵母菌的分离与纯化实验报告结果实验步骤：
1.实验前准备：准备好所需的培养基、试剂和实验器材。
2.取一定量的土壤样品，加入无菌水中制备土壤悬浮液。
3.对土壤悬浮液进行预处理：将悬浮液通过过滤器过滤，以去除大颗粒杂质。
4.制备培养基：根据酵母菌的生长要求，配制适宜的培养基。
5.接种培养基：将过滤后的土壤悬浮液均匀地接种在培养基表面，避免接种过多的菌落。
6.培养条件：将接种好的培养基培养于适宜的温度和湿度条件下。
7.观察培养结果：在培养一定时间后，观察培养皿上是否出现酵母菌菌落。
8.分离纯化：选择单个菌落，用无菌技术将其移至新的培养基上，重复培养步骤，直到获得纯种的酵母菌培养物。
实验结果：
经过培养和分离纯化的酵母菌培养物显示出单一的菌落形态，颜色为白色或乳白色。
观察下显微镜下，酵母菌呈现为球形或椭圆形的单细胞结构，直径约为5-10微米。
酵母菌菌落在培养基上呈现出光滑、湿润的表面，并具有边缘清晰的特点。
实验结论：
通过土壤中酵母菌的分离与纯化实验，成功地从土壤样品中分离出纯种的酵母菌培养物。
这些酵母菌菌落形态规整、单一，符合酵母菌的特征。
该实验结果为进一步深入研究酵母菌的生理特性和应用提供了基础。
分离纯化酵母菌的方法
分离纯化酵母菌的方法
分离纯化酵母菌的方法通常包括以下步骤：
1. 选择培养基：选择适合酵母菌生长的培养基，常用的包括酵母培养基（如魏氏酵母氮盐悬液、麦芽葡萄糖培养基等）。
2. 传代培养：从原始酵母菌培养物中，选取单个菌落或分离菌株，进行逐级传代培养。
3. 泛培养：将菌落接种到含有可溶性碳源（如麦芽糖、葡萄糖等）的培养基中，培养一段时间以增加菌量。
4. 单菌落分离：将泛培养液中的菌液均匀涂布于含有琼脂的培养基上，使菌落分离。
5. 纯化：从单菌落中挑取菌落，进行进一步的分离与培养，直至得到纯化的酵母菌。
6. 保存：将纯化得到的酵母菌进行冷冻保存或低温保存，以备今后的实验使用。
以上方法是一种常见的分离纯化酵母菌的方法，具体操作可根据实验目的和需求进行调整和修改。
分离观察酵母菌实验报告
1. 学习微生物分离纯化的基本原理和方法。
2. 掌握酵母菌的分离纯化技术。
3. 观察酵母菌的形态和培养特征。
二、实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，广泛存在于自然界中。
本实验通过平板划线法将混合菌液中的酵母菌分离纯化，并在适宜的培养基上培养，观察其形态和特征。
三、实验材料1. 菌种：啤酒酵母菌2. 培养基：酵母膏葡萄糖琼脂培养基（YGA）3. 工具：接种环、酒精灯、无菌试管、无菌棉签、培养皿、显微镜等四、实验方法1. 菌种活化：将啤酒酵母菌菌种接种于YGA培养基中，在28℃恒温培养箱中培养24小时。
2. 分离纯化：取活化后的酵母菌菌液，用无菌棉签涂布于YGA平板上，用接种环进行平板划线，划线时注意不要划破菌落。
将平板倒置于28℃恒温培养箱中培养24小时。
3. 观察与计数：观察平板上的菌落，记录菌落形态、大小、颜色等特征。
用无菌棉签挑取单个菌落，接种于新的YGA平板上，重复上述操作，直至获得纯化的酵母菌。
4. 酵母菌形态观察：将纯化的酵母菌接种于YGA培养基中，在28℃恒温培养箱中培养24小时，用无菌吸管吸取少量菌液，滴加于载玻片上，用无菌盖玻片覆盖，在显微镜下观察酵母菌的形态。
五、实验结果1. 菌落特征：酵母菌菌落呈圆形，表面光滑，湿润，边缘整齐，颜色为乳白色。
2. 酵母菌形态：酵母菌为单细胞，呈椭圆形或卵圆形，细胞核明显，细胞壁较厚。
1. 通过平板划线法，成功分离纯化了酵母菌，表明该方法适用于微生物的分离纯化。
2. 酵母菌在YGA培养基上生长良好，菌落特征明显，便于观察和识别。
3. 显微镜下观察酵母菌的形态，有助于了解其生物学特性。
七、实验结论1. 本实验成功分离纯化了酵母菌，掌握了酵母菌的分离纯化技术。
2. 通过观察酵母菌的形态和培养特征，了解了酵母菌的基本生物学特性。
3. 平板划线法是一种简单、有效的微生物分离纯化方法，适用于实验室研究。
八、实验注意事项1. 实验过程中要注意无菌操作，防止杂菌污染。
酵母分离纯化实验报告
一、实验目的1. 掌握酵母菌分离纯化的基本原理和方法。
2. 学习使用显微镜观察酵母菌的形态特征。
3. 熟悉微生物实验室的基本操作技能。
二、实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，广泛分布于自然界。
本实验采用稀释涂布平板法从混合样品中分离纯化酵母菌。
该方法基于菌落形成的原理，通过稀释样品，使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 酵母菌混合样品- 营养琼脂培养基- 无菌水- 灭菌器械（接种环、酒精灯等）- 显微镜2. 实验仪器：- 研钵- 玻璃棒- 离心机- 培养箱四、实验步骤1. 制备平板：- 将营养琼脂培养基加热融化，冷却至约50℃。
- 将融化后的培养基倒入培养皿中，待凝固后备用。
2. 样品稀释：- 将酵母菌混合样品用无菌水进行10倍稀释，制成不同浓度的稀释液。
3. 涂布平板：- 用无菌吸管吸取适量稀释液，滴加到平板中央。
- 用无菌玻璃棒轻轻涂抹，使样品均匀分布在平板表面。
4. 培养：- 将平板倒置，放入培养箱中培养。
5. 挑取菌落：- 在适宜的温度下培养，观察菌落生长情况。
- 根据菌落特征（如大小、形状、颜色等）挑取单菌落。
6. 纯化：- 将挑取的单菌落接种到新的平板上，重复培养和挑取过程，直至获得纯化后的酵母菌。
7. 观察与鉴定：- 将纯化后的酵母菌制片，用显微镜观察其形态特征。
- 根据酵母菌的形态特征（如细胞大小、形态、芽殖方式等）进行鉴定。
五、实验结果与分析1. 菌落观察：- 经过培养，平板上形成了不同形状、大小的菌落。
- 通过挑取和纯化，获得了纯化后的酵母菌。
2. 显微镜观察：- 在显微镜下观察，纯化后的酵母菌呈现为球形或椭圆形的单细胞结构，直径约为5-10微米。
3. 鉴定：- 根据酵母菌的形态特征，初步鉴定为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）。
六、实验讨论1. 本实验采用稀释涂布平板法成功分离纯化了酵母菌，该方法简单易行，适用于实验室常规操作。
酵母菌的纯培养实验原理
酵母菌的纯培养实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，广泛存在于自然界各种环境中，包括土壤、水体和植物表面等。
酵母菌的纯培养实验是一种基本的实验手段，用于研究酵母菌的生长、代谢以及其他生物学特性。
本文将探讨酵母菌的纯培养实验的原理和方法。
酵母菌的纯培养实验是指将酵母菌分离出单个纯种，使其在培养基上单独生长。
这样可以避免不同种类的酵母菌相互干扰，从而更好地研究其生物学特性。
纯培养实验的关键是分离出单个酵母菌，实验过程大致分为以下几个步骤。
需要选择适当的培养基。
常用的培养基有酵母抽提物培养基、酵母营养盐琼脂培养基等。
培养基应提供适当的碳源、氮源和其他必需的营养物质，以满足酵母菌的生长需求。
需要从自然环境中分离出酵母菌。
可以通过取样、稀释和涂布等方法，将样品均匀地分布在培养基表面。
然后，将培养皿放置在适当的温度和湿度条件下，等待酵母菌的生长。
接下来，需要进行单菌分离。
当培养皿上出现酵母菌生长的斑点时，可以使用显微镜和接种针等工具，将单个酵母菌菌落转移到新的培养基上。
这个步骤需要非常细心和准确，以确保每个菌落只含有一个酵母菌。
需要进行鉴定和纯化。
通过观察酵母菌的形态特征、生长性状和代谢产物等，可以初步鉴定酵母菌的种类。
然后，可以将纯培养的酵母菌菌落转移到新的培养基上，进行进一步的培养和研究。
酵母菌的纯培养实验不仅可以研究其基本生物学特性，还可以应用于酵母菌的育种和工业生产等领域。
例如，通过培养高产酵母菌株，可以提高酵母菌的发酵产物的产量和质量；通过培养抗逆性强的酵母菌株，可以提高发酵过程的稳定性和效果。
酵母菌的纯培养实验是一种重要的实验手段，用于研究酵母菌的生物学特性和应用价值。
通过适当的培养基和实验方法，可以成功地分离和纯化酵母菌，并进行进一步的研究和应用。
酵母菌的纯培养实验对于推动酵母菌研究的发展和应用具有重要意义。
果酒酵母的分离、纯化及选育(实验报告定稿)
一、引言酿酒酵母细胞透明, 呈圆形或椭圆形, 形体比较大, 一般为7×12μm, 含有转化酶能将葡萄汁中的糖转化成乙醇、二氧化碳和其它代谢产物。
优良纯种酵母应具备下列性能: （1）除酿酒水果本身的果香外, 酵母也应产生良好的果香与酒香。
（2）生长速度快, 有较高的发酵能力, 能将糖分全部发酵完。
（3）具有较高的抗S02能力, 有较好的凝集力和较快的沉降速度。
（4）培养基成分简单, 来源广泛, 价格低廉, 对温度, pH, 离子强度, 溶氧等环境因素不敏感。
（5）能在低温或果酒适宜温度下发酵, 以保持果香和新鲜清爽的口味。
由此可见, 酵母的品质对果酒的产量和质量影响很大。
要获得优良的酿酒酵母, 必须对其进行分离选育。
果酒酵母的筛选应从相应的果品及其种植环境中采样分离, 如成熟果实的表皮、自然腐烂发酵的果肉或果汁和果园的土壤等相关场所。
根据实践经验, 在果汁和自然发酵的果酒醪液中检出率较高, 因为它们的基质环境与酿酒环境很相似。
为使我们需要的酵母易于检出, 应对采集的样品进行富集培养, 通过设置较高的酒精浓度、添加SO2 、调整pH 等手段抑制不需要的微生物的生长, 使希望检出的微生物得到增殖。
酵母检出后, 应对其的发酵性能进行考察, 包括酵母的一系列生理生化特性和风味物质形成的能力等, 这些可通过作生理生化实验和三角瓶小型发酵实验分析和测定。
二、实验仪器与材料样品: 新鲜苹果（未经清洗）榨汁。
YEP.培养基（富集培养基）.蛋白胨20g，葡萄糖20g，酵母膏10g，蒸馏水定容至1000ml. （每次根据需要量按如此比例配置，下同....PDA培养基（酿酒酵母培养基）: 马铃薯200g, 葡萄糖20g, 琼脂20g, 蒸馏水定容至1000ml.（马铃薯去皮, 切成块煮沸后再煮30分钟, 然后用纱布过滤, 再加糖及琼脂溶化后定容至1000 ml。
121℃灭菌30分钟。
）PYG培养基（菌种保藏培养基）：蛋白胨 3.5g, 葡萄糖15g, 酵母膏 1.5g, KH2PO42.0 g, MgSO4·7H2O1.0 g, （NH4）2 SO41.0 g, 琼脂20g, 蒸馏水定容至1000ml.试剂：亚硫酸钠、乙醇, 碘液, 无菌生理盐水等。
分离酵母菌的实训报告
一、实训目的1. 学习并掌握酵母菌分离纯化的基本原理和操作方法。
2. 提高实验室操作技能，培养严谨的科学态度和团队协作精神。
3. 了解酵母菌在食品、医药、能源等领域的应用。
二、实训时间2023年X月X日三、实训地点XX大学微生物实验室四、实训材料1. 酵母菌培养液2. 1%氯化钠溶液3. 0.9%生理盐水4. 琼脂5. 酵母菌分离培养基6. 微量移液器7. 细菌培养箱8. 显微镜9. 其他相关试剂和仪器五、实训步骤1. 酵母菌培养液的制备- 将酵母菌培养液置于无菌环境中，恒温培养24小时。
2. 涂布分离- 将酵母菌培养液用无菌玻璃棒均匀涂布在酵母菌分离培养基上。
- 将涂布好的培养基倒置于细菌培养箱中，恒温培养24小时。
3. 挑取单菌落- 在无菌条件下，用无菌镊子挑取酵母菌分离培养基上的单菌落。
- 将挑取的单菌落接种至新的酵母菌分离培养基上。
4. 纯化培养- 将接种好的酵母菌分离培养基倒置于细菌培养箱中，恒温培养24小时。
5. 显微镜观察- 在无菌条件下，用无菌镊子挑取纯化后的酵母菌，滴加1滴0.9%生理盐水，制作临时玻片。
- 在显微镜下观察酵母菌的形态、大小、颜色等特征。
6. 菌落计数- 将纯化后的酵母菌接种至酵母菌计数培养基上。
- 在细菌培养箱中恒温培养24小时后，统计菌落数。
六、实训结果与分析1. 酵母菌形态观察- 通过显微镜观察，发现纯化后的酵母菌为圆形、卵圆形或棒状，细胞壁较厚，细胞质透明。
2. 菌落计数- 经过24小时的培养，菌落计数为2.5×10^8 CFU/mL。
3. 酵母菌纯度分析- 经过多次纯化培养，纯化后的酵母菌纯度较高，未发现杂菌。
七、实训总结1. 本次实训中，我们学习了酵母菌分离纯化的基本原理和操作方法，掌握了实验室操作技能，培养了严谨的科学态度和团队协作精神。
2. 在实训过程中，我们发现了以下问题：- 酵母菌培养液制备过程中，无菌操作不严格可能导致污染。
- 涂布分离时，涂布不均匀可能导致分离效果不佳。
酵母菌的分离纯化
酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵第一部分酵母菌的分离纯化一、实验目的应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法.二、实验原理酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。
多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为4。
5-6。
0。
酵母菌生长迅速，容易分离培养.在液体培养基中,酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。
因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化.三、器材和用品1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。
2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基:马铃薯200g(煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。
分装三角瓶;试管斜面1支/组3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为5。
5左右，再分装试管9ml2支/组。
4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等.四、实验方法1、接种：取果皮（不需冲洗)或土壤5克，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊。
2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28—30℃培养箱中培养24h。
3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。
4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取0。
1ml 加富培养液到平板中,用涂棒涂匀后培养24h。
5、分离纯化:用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线,培养后分离得到单个菌落.6、镜检：挑取单菌落，制片观察其形态。
酵母菌的分离筛选方法
酵母菌的分离筛选方法酵母菌多数为腐生，一般生长在含糖较高，偏酸的环境中，在通气条件下，液体培养比霉菌快。
菌落与细菌相似，较大而厚，多数不透明，菌落光滑湿润粘稠，乳白色，少数干皱，边缘整齐，呈红色或粉红色，圆形椭圆卵形，液体培养基生长会生成沉淀或菌膜。
含高糖浓度（45%），分离蜂蜜酵母，球拟酵母属等嗜高渗透压的酵母。
1.培养基：葡萄糖 50g/L 尿素1g/L （NH4）2SO41g/L L L MgSO41g/LFeSO4 L 酵母膏 L 孟加拉红 L （富集用）★乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基：马铃薯200g/L 葡萄糖（霉菌用蔗糖）20g/L 乳酸5ml马铃薯去皮切片200g，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L，PH自然。
（去掉乳酸可用于酵母菌和霉菌培养用）（富集用）★麦芽汁培养基：1：4水60-65℃水浴3-4小时，4-6层纱布过滤，可加一个蛋清加水20mL调均生泡沫，倒入糖化液中，煮沸过滤，10-15波林，氯霉素L 121℃ 20min （分离保存用）灭菌后加入300u/ml硫酸链霉素（集菌用）★虎红（孟加拉红）培养基：蛋白胨L 葡萄糖10g/LL L 孟加拉红L 氯霉素L 琼脂15g/L PH自然（分离纯化用）★豆芽汁培养基：黄豆芽100g/L 葡萄糖50g/L PH自然。
100g黄豆芽，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L察氏培养基：主要培养霉菌观察形态用蔗糖30g/L 硝酸钠3g/L 磷酸氢二钾1g/L 氯化钾L 硫酸镁L 硫酸亚铁L 琼脂15-20g/L 121℃ 20min PH自然一般分离黄酒酵母酒精酵母使用曲汁培养基，啤酒酵母用酒花麦汁培养基，葡萄酒酵母用葡萄汁培养基。
2.集菌：研究酵母菌生态和某种基物或样品中的酵母菌区系，一般不进行集菌，以免改变其中不同种类数量间的对比，将样品制成菌悬液按常规法分离。
若从样品中分离特定种类时先集菌。
集菌发酵力强菌株，加酸性含糖的培养基，酸性豆汁，必要时注入高浓度的酒精（13-17%），霉菌在液体中形成菌丝体，酵母不形成菌丝，25-28℃2-3d，遇到菌丝体用接种环挑去烧掉，去掉上清液，取沉淀酵母一至两环移植另一液体培养基中，集菌连续两至三次才能完成，要配合镜检。
酵母菌的分离与培养条件的优化
2、设备空消
2.1空消前，将控制系统退出自动运行状态，小心取出 PH电极和DO电极，进行清洗、校检、备用，并装好 电极堵头。 2.2打开夹套排污阀，同时打开夹套蒸汽阀进汽，在同 时向罐内排光冷凝水之后，关闭夹套蒸汽阀，直至空 消结束。 2.3缓慢打开进气阀及底阀处的蒸汽阀进汽，待压力升 至0.01Mpa后，打开罐面排气阀进行排气。 2.4调节罐面排气阀，保持罐压0.01Mpa,维持温度在 120℃~125℃之间，计时空消30min
稀释10倍
0.117A 0.105A 0.097A 0.061A 0.130A 0.143A 0.178A
原液
1.018A 0.863A 0.889A 0.830A 0.845A 0.836A 1.180A
测发酵瓶的PH值OD值 及残糖量
• 一小时后（12：30） • PH值均为5 • OD值 • 稀释 （NH4）2SO4 2% 0.210A （NH4）2SO4 4% 0.167A NH4NO3 2% 0.192A • NH4NO3 4% 0.106A • NaNO3 2% 0.167A • NaNO3 4% 0.161A • 对比 0.262A
2.5空消完毕，关闭进气阀及底阀处的蒸汽阀，打开 底阀开始排污。 2.6开大罐面排气阀，卸去罐压后，打开罐盖上的进 料口加入培养基。
3 、加培养基
3.1 投料前，应校正并安装PH电极和OD电极。 3.2 按工艺要求配置好培养基原液，加入发酵罐内。 3.3 加水定容至60%-65%左右后，启动电机搅拌 5min
• 3.4 按工艺要求调整好PH后，拧紧进料口螺盖。 • 操作注意；实消时蒸汽冷凝水约占培养基体积 10%左右，固定容是必须扣除此容积。
• 4 、培养基实消
• 4.1 投料结束后，启动电机。慢速搅拌。 • 4.2 微开夹套排污阀，打开夹套蒸汽阀，保持夹 套压力为0.11mpa左右，待培养基预热达到95℃ 以上时停搅拌，关闭夹套蒸汽阀，开大夹套排污 阀。 • 4.3 培养基温度达到95 ℃后，缓慢打开进气阀及 底阀处的蒸汽阀，同时向罐内进气，待罐压升至 0.11mpa后，打开罐面排气阀进行排气。
制作酵母菌过程
制作酵母菌过程
酵母菌制作过程主要包括以下步骤：
1. 酵母菌种植：从食品厂或研究机构购买酵母菌培养基，选用适合的菌种进行预培养，使其活跃起来。
2. 加入基质：将预培养好的酵母菌加入基质中进行进一步培养。
基质可以选用糖水、面粉、麦芽等材料，也可以直接用酒、酸奶等天然发酵物作为基质。
3. 发酵：将加有酵母菌和基质的发酵罐保持在适宜的温度和湿度下，让其进行发酵。
通常发酵时间为1-2天。
4. 分离纯化：将发酵液离心分离，去除杂质，得到纯化后的酵母菌。
这一步可以使用离心机、过滤器等工具进行操作。
5. 干燥：将纯化后的酵母菌通过喷雾、真空干燥等方法进行干燥处理，制成酵母粉。
6. 包装：将酵母粉包装好，贴上标签，进行存储和销售。
以上就是制作酵母菌的主要步骤。
不同的酵母菌制作过程有所差异，但基本上都是以上几个步骤的组合使用。
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酵母菌的分离纯化-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN
酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵
第一部分酵母菌的分离纯化
一、实验目的
应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。
二、实验原理
酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。
多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为酵母菌生长迅速，容易分离培养。
在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。
因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化。
三、器材和用品
1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。
2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。
分装三角瓶；试管斜面1支/组
3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为左右，再分装试管9ml2支/组。
4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等。
四、实验方法
1、接种：取果皮（不需冲洗）或土壤5克，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊。
2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h。
3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。
4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。
5、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分
离得到单个菌落。
6、镜检：挑取单菌落，制片观察其形态。
7、菌种保藏：接种酵母菌到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，长出菌苔后冰箱保藏。
第二部分酵母菌的固定化技术
一、实验目的
1.了解固定化细胞的原理。
2.掌握用海藻酸钠制备固定化酵母细胞的方法。
二、实验原理
固定化细胞技术是指用物理或化学的手段将游离细胞定位于限定的空间区域，并使其保持催化活性、反复使用的方法。
优点：细胞密度高、反应速度快、耐毒害能力强、产物分离容易、可反复使用、能实现连续操作，可大大提高生产能力。
用于生产各种胞外产物，包括酒精酒类、氨基酸、有机酸、酶、辅酶、抗生素。
细胞固定化的方法有多种，如吸附法、交联法和包埋法等。
吸附法：又叫载体结合法，依据带电的微生物细胞和载体之间的静电、表面张力和黏附力的作用，使细胞固定在载体表面和内部；简便，活力损失小；但细胞与载体作用力小，易脱落。
交联法：利用双功能或多功能试剂，直接与细胞表面的反应基团（如氨基酸、羟基、咪唑基等）发生反应，使其彼此交联形成网状结构的固定化细胞，其结合力是共价键。
此法制备麻烦，活力损失较大；但细胞与载体结合较紧。
包埋法：分为凝胶包埋法和半透膜包埋法。
凝胶包埋法是将细胞包埋在各种凝胶内部的微孔中而使细胞固定；半透膜包埋法是将细胞包埋在由各种高分子聚合物制成的小球内。
简单，条件温和，稳定性好，包埋细胞容量高。
工业上常用包埋法固定微生物细胞。
海藻酸盐是一种广泛应用的固定化介质，具有化学稳定性好、无毒、包埋效率高且价格低廉等优点。
在海藻酸钠呈溶液状时，将细胞加入混匀，然后在氯化钙中凝固形成海藻酸钙凝胶，凝胶颗粒中的微小空格将细胞固定。
海藻酸钙凝固的颗粒能反复使用，细胞在空格中可以新陈代谢（固定活细胞)。
三、实验材料
1、分离的酵母菌。
2、培养基：酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖30g，蒸馏水1000m L，p H自然，115℃灭菌20m i n。
3、试剂：m o l/L氯化钙溶液150m l/瓶（氯化钙，蒸馏水1000m L）、2%海藻
酸钠50m l/瓶：称取一定的海藻酸钠加入无菌烧杯中，先加少量水调成糊状，在不足水份适当加热融化。
4、器具：200m l无菌烧杯1个、玻璃棒1根、无菌注射器1个（20m l）、无菌吸管1支，无菌水200m l/三角瓶、10m l培养基试管1支、200m l三角瓶培养基1个、青霉素、天平、纱布、细绳、电炉、培养箱、棉塞等。
四、实验步骤
1、将酵母菌接入10m l培养基中,于30℃培养箱中培养24h后待用。
2、取3m l酵母菌培养液（预热到35℃左右）加入到50m l2%海藻酸钠溶液中（冷却到45℃左右），均匀混合后用注射器吸入制成小球滴入m o l/L氯化钙溶液中，搅拌成珠（固定酵母）。
3、待凝胶珠在氯化钙溶液中浸泡30m i n后，用蒸馏水洗涤固定酵母2次后，再转入到灭过菌的200m L液体培养基中（其中加入1m g青霉素）。
4、将固定酵母于28℃静置培养3天后观察，可见培养基中有大量的C O2气泡产生，嗅气味有酒香；用刀片切开固定酵母，镜检可见大量密集的酵母菌。
第三部分酵母菌的酒精发酵
一、实验目的
1.掌握酵母菌生产酒精的方法。
2.了解酒精发酵的主要类型及其控制条件。
二、实验原理
在厌氧条件下，己糖分解为乙醇并放出二氧化碳的作用，称为酒精发酵作用。
酒精发酵的类型有三种：即通过E M P途径的酵母菌酒精发酵、通过H M P途径的细菌酒精发酵（即异型乳酸发酵）和通过E D途径的细菌酒精发酵。
在工业酒精和各种酒类的生产中，酒精发酵的主要作用是由酵母菌来完成的。
酵母菌通过E M P途径分解己糖生成丙酮酸，在厌氧和微酸性条件下，丙酮酸继续分解为乙醇。
但是，如果在碱性条件下或在培养基中加入亚硫酸盐时，产物主要是甘油，这就是工业上的甘油发酵。
因此，如果酵母菌要进行酒精发酵，就必须控制发酵液在微酸性条件下。
三、实验材料
1、菌种：分离的酵母菌。
2、培养基：
白糖（蔗糖）80g、(NH4)2SO4、KH2PO4、H2O 1000ml；pH自然，115℃灭菌20m i n。
150m l三角瓶装上述培养基50m l，250m l三角瓶装培养基100m l，大试管中装一个注满培养基的杜氏小管，再装入10m l培养基。
3、试剂：10%的NaOH、10%H2SO
4、1%K2Cr2O7。
4、器材：150m l三角瓶1个、250m l三角瓶1个、大试管1支、杜氏小管1支、无菌吸管1支。
接种环、培养箱、100m L量筒、纱布、细绳、天平、棉塞3个。
四、实验步骤
1、取分离的酵母菌种一环，接入150m l的三角瓶中，于28-30℃培养箱中培养24h，作为液体种子。
将上述液体种子以5%的接种量分别接入250ml的三角瓶和大试管中，在于28-30℃培养箱中培养24-36h，后观察结果。
2、二氧化碳生成的检验
1）观察三角瓶中的发酵液有无泡沫或气泡溢出，再观察发酵试管中的杜氏小管中有无气体聚集。
2）取10%的NaOH溶液1ml注入发酵试管内，轻轻搓动发酵管，观察杜氏小管内液面是否上升，如气体逐渐消失，则证明气体为发酵过程中产生的二氧化碳。
3、酒精生成的检验：
1）打开发酵瓶塞子，嗅闻有无酒精味；
2）取发酵液5ml加入试管，加10% H2SO4溶液2ml；向试管中滴入1% K2Cr2O7溶液10～20滴；如管内由橙黄色变为黄绿色，证明有酒精生成。
2K2Cr2O7+ 8H2SO4+ 3CH3CH2OH →3CH3COOH + 2K2SO4+ 2Cr2(SO4)3(黄绿色) + 11H2O
实验报告：
1、酵母菌的形态以及增殖方式怎样判断酵母菌的死活细胞
2、海藻酸钠溶液滴进氯化钙溶液中为什么会凝固
3、细胞固定化有何意义如何制备固定化细胞
4、固定化细胞与游离细胞比较，有什么优点
5、固定化细胞制备过程中观察到的现象
6、酒精发酵过程中观察到的现象。