酵母菌的分离与纯化(借鉴材料)
苹果霉菌和酵母菌的分离与纯化
苹果霉菌和酵母菌的分离和纯化摘要：从酸败腐烂的苹果上挑取霉变物用马丁氏培养基28摄氏度培养2-3天，分离出几个真菌菌株；挑取霉变物用沙堡琼脂培养基37摄氏度培养2-3天将分离菌株重新进行涂布平板，分离出酵母菌菌。
挑取马丁氏培养基单菌落表面的少许孢子继续用马丁氏培养基培养，经28摄氏度培养2-3天于低倍镜下观察，通过菌丝和孢子对分离株进行鉴定。
观察到簇生在分生孢子梗的顶端的呈扫帚状分枝的分生孢子1和有隔菌丝，可鉴定为霉菌；挑取沙堡琼脂培养基单菌落表面的少许孢子继续用沙堡琼脂培养基培养，经37摄氏度培养2-3天于低倍镜下观察观察到单细胞的芽殖孢子，并通过进一步的酵母菌生理生化测定，可鉴定为酵母菌。
关键词：真菌；菌落；菌丝；孢子前言：真菌一词来源于拉丁文的“蘑菇”，现在真菌这一名词的概念不仅包括蘑菇，而是代表着一个相当大的生物类群。
什么是真菌？从生物学观点来看，它们是一大类真核微生物，无根茎叶，不含叶绿素，不能利用无机物来制造食物，靠寄生或腐生生活，仅少数为单细胞，其余为多细胞，大多数真菌有分枝或不分枝的丝状体，能进行有性生殖和无性生殖。
从形态上分为酵母菌、霉菌、担子菌。
真菌不仅种类多，数量大，而且分布极为广泛，与人类生产与生活有着密切的关系。
有些菌丝可引起人与畜禽疾病，有些霉菌还产生霉素，直接或间接的危害人类健康。
因此，了解真菌的培养方法，认识其形态十分重要。
近年来在真菌分类方面趋向于采用Anisworth或者bisby的《真菌学辞典》介绍的分类系统。
该系统认为真菌不属于低等植物，而是属于单独成立的真菌界，以下分为黏菌门和真菌门。
本研究从苹果中分离出几株真菌，并用真菌分类方法对其进行鉴定。
研究意义：让小组成员进一步掌握微生物分离纯化的试验方法和技术。
了解霉变苹果的微生物分布特点，种类组成，数量及优势类群等。
对所分离菌株进行简单的生物学、生理学特性研究。
进一步了解霉菌对我们生活的影响1材料与方法1.1实验材料与器材1.1.1材料酸败腐烂的苹果1.1.2器材无菌室、手提式高压蒸汽灭菌锅、电炉、天平、铁架台、灭菌培养皿、锥形瓶、漏斗、试管、烧杯、胶头滴管、石蕊试纸、接种环、酒精灯、量筒、玻璃棒、纱布、滤纸、试管塞、报纸、扎绳、标签、温箱、盖玻片、载玻片、显微镜、杜氏管、血细胞计数板、血细胞计数器、接种针、香柏油、乙醇乙醚、擦镜纸、灭菌滴管1.1.3 培养基沙堡琼脂培养基马丁氏培养基1.2实验的操作1.2.1 培养基的准备马丁氏培养基的制备、无菌水的制备、沙堡琼脂培养基的制备1.2.2稀释涂布平板法1.2.2.1倒平板将沙堡琼脂培养基、马丁氏培养基溶化，待冷至55-60℃，然后分别倒平板，每种培养基倒三皿，其方法是右手持盛培养基的试管或三角烧瓶，置火焰旁边，左手拿平皿并松动试管塞或瓶塞，用手掌边缘和小指、无名指夹住拨出，如果试管内或三角烧瓶内的培养基一次可用完，则管塞或瓶塞不必夹在手指中。
酵母菌的分离与纯化
酵母菌的分离与纯化酵母菌的分离与纯化⼩组组员: ⼀、实验⽬的1.学习分离纯化酵母菌的技术与⽅法2.了解培养基的配置与灭菌技术3.增强⽆菌操作技术的意识⼆、基本原理从混杂的微⽣物群体获得只含某⼀种某⼀株微⽣物的过程叫做微⽣物分离与纯化，酵母菌常见于含糖份⽐较⾼的环境中，如果园⼟、菜园⼟及果⽪等的表⾯。
多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为4.5-6.0.酵母菌⽣长迅速，容易分离培养。
马丁⽒培养基是⼀种⽤来分离真菌的选择性培养基。
此培养基是由葡萄糖、蛋⽩胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、孟加拉红(玫瑰红，Rose Bengal)和链霉素等组成。
其中葡萄糖主要作为碳源，蛋⽩胨主要作为氮源，KH2PO4和MgSO4·7H2O作为⽆机盐，为微⽣物提供钾、磷和镁离⼦。
⽽孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂，对真菌⽆抑制作⽤，因⽽真菌在这种培养基上可以得到优势⽣长，从⽽达到分离真菌的⽬的。
三、实验材料及⽤具1.⽤品：苹果、葡萄糖、琼脂、⽔、1%孟加拉红⽔溶液、马铃薯2.设备与器材：1ml的⽆菌吸管、⽆菌培养⽫等.四、实验步骤1、马铃薯培养基的配置培养基成分:马铃薯 40克、蔗糖（葡萄糖） 4克、琼脂 4克、⽔ 200毫升、 pH ⾃然。
配置⽅法:（1）配制20%马铃薯浸汁：取去⽪马钓薯40g，切成⼩块，加⽔200ml.加热煮游30 min ，⽤纱布过滤，然后补⾜失⽔互所需体积。
121Pa灭菌30min.即成20%马铃馨漫汁，贮存备⽤。
（2）配制时，按每100ml 马铃薯浸汁加⼊2g蔗糖，加热煮沸后加⼊4克琼脂，继续加热融化并补⾜失⽔。
（3）分装、加塞，包扎。
（4）⾼压蒸汽灭菌：121Pa灭菌30min（5）将灭菌培养基放⼊37C°的温室中培养24-48⼩时，观察是否有菌落⽣成，以检查灭菌是否彻底。
2、倒平板：将马铃薯培养基加热融化，冷却⾄55--50C°时，倒平板，倒三⽫3、制备苹果悬液（1）⾸先将1g苹果在研钵中磨细，放⼊装有10ml⽣理盐⽔和玻璃珠的100ml三⾓瓶中去。
细菌 、放线菌 、酵母菌及霉菌的分离与纯化
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化一、实验目的1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物的技术。
2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。
3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。
4. 学习平板菌落计数法。
二、实验原理将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。
要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。
微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。
表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求样品来源分离对象分离方法稀释度培养基名称培养温度/℃培养时间/d土样细菌稀释分离10-5，10-6，10-7牛肉膏蛋白胨30～37 1～2土样放线菌稀释分离10-3，10-4，10-5高氏1号28 5～7土样霉菌稀释分离10-2，10-3，10-4马丁氏琼脂28～30 3～5面肥或土样酵母菌稀释分离10-4，10-5，10-6马铃薯葡萄糖28～30 2～3细菌分离平板细菌单菌落划线分离10-2 牛肉膏蛋白胨30～37 1～2三、实验材料1. 菌源土样2. 培养基牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见附录Ⅲ。
3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。
4.5 mL无菌水试管(每人5～7支)。
4. 其他物品无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。
（一）系列稀释平板法1. 取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
盛土的容器应是无菌的。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
酵母菌的分离纯化
酵母菌的分离纯化-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵第一部分酵母菌的分离纯化一、实验目的应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。
二、实验原理酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。
多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为酵母菌生长迅速，容易分离培养。
在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。
因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化。
三、器材和用品1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。
2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。
分装三角瓶；试管斜面1支/组3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为左右，再分装试管9ml2支/组。
4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等。
四、实验方法1、接种：取果皮（不需冲洗）或土壤5克，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊。
2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h。
3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。
4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。
5、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分离得到单个菌落。
酵母菌的分离纯化实验方案
酵母菌的分离纯化∙实验目的1.了解培养基的配置与灭菌技术；2.无菌操作技术；3.工业微生物的分离与纯化技术；4.工业微生物的检测及保藏。
∙基本原理1、培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。
也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。
由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。
不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH 的要求选择合适的PH。
由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。
2、接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。
所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。
3、把特定微生物从混杂的微生物群体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。
首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。
分离纯化的方法通常有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。
此次实验采用梯度稀释涂布平板法。
4、微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法（CFU）、光电比浊计数法等。
本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。
实验器材仪器设备恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器玻璃器皿烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片试剂与材料苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染色液其它纱布、滤纸实验内容及操作步骤(一)、样品的选择酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。
酵母菌纯培养的实验步骤
酵母菌纯培养的实验步骤
酵母菌纯培养的实验步骤如下：
1. 取少量酵母菌样品，使用选择培养基（例如固体葡萄糖、面粉琼脂培养基，添加有特殊药液和增菌剂的选择培养基有利于酵母菌的筛选）进行分离纯化。
2. 筛选出发酵力良好的菌落并进行纯培养。
在酒精发酵实验中发现典型的酵母菌菌落可移种至综合生化管培养箱中进一步鉴定。
3. 使用液体培养基进行酵母菌扩大培养，准备好无菌吸管和无菌锥形瓶，将酵母菌从锥形瓶中转移到试管中。
4. 对酵母菌进行计数，准备血液培养皿和牛肉膏琼脂培养基，接种菌液到培养基中使其生长并繁殖，观察生长情况并进行计数。
通过以上步骤，就可以对酵母菌进行纯培养，请确保所有使用到的工具和试剂都经过灭菌处理。
以上步骤仅供参考，建议您咨询专业人士获取更具体的信息。
酵母菌的分离纯化实验方案
酵母菌的分离纯化•实验目的1.了解培养基的配置与灭菌技术；2.无菌操作技术；3.工业微生物的分离与纯化技术；4.工业微生物的检测及保藏。
•基本原理1、培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。
也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。
由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。
不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH 的要求选择合适的PH。
由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。
2、接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。
所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。
3、把特定微生物从混杂的微生物群体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。
首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。
分离纯化的方法通常有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。
此次实验采用梯度稀释涂布平板法。
4、微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法（CFU）、光电比浊计数法等。
本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。
实验器材仪器设备恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器玻璃器皿烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片试剂与材料苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染色液其它纱布、滤纸•实验内容及操作步骤(一)、样品的选择酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。
土壤中酵母菌的分离与纯化实验报告结果
土壤中酵母菌的分离与纯化实验报告结果实验步骤：
1.实验前准备：准备好所需的培养基、试剂和实验器材。
2.取一定量的土壤样品，加入无菌水中制备土壤悬浮液。
3.对土壤悬浮液进行预处理：将悬浮液通过过滤器过滤，以去除大颗粒杂质。
4.制备培养基：根据酵母菌的生长要求，配制适宜的培养基。
5.接种培养基：将过滤后的土壤悬浮液均匀地接种在培养基表面，避免接种过多的菌落。
6.培养条件：将接种好的培养基培养于适宜的温度和湿度条件下。
7.观察培养结果：在培养一定时间后，观察培养皿上是否出现酵母菌菌落。
8.分离纯化：选择单个菌落，用无菌技术将其移至新的培养基上，重复培养步骤，直到获得纯种的酵母菌培养物。
实验结果：
经过培养和分离纯化的酵母菌培养物显示出单一的菌落形态，颜色为白色或乳白色。
观察下显微镜下，酵母菌呈现为球形或椭圆形的单细胞结构，直径约为5-10微米。
酵母菌菌落在培养基上呈现出光滑、湿润的表面，并具有边缘清晰的特点。
实验结论：
通过土壤中酵母菌的分离与纯化实验，成功地从土壤样品中分离出纯种的酵母菌培养物。
这些酵母菌菌落形态规整、单一，符合酵母菌的特征。
该实验结果为进一步深入研究酵母菌的生理特性和应用提供了基础。
酿酒酵母分离纯化实验报告
酿酒酵母分离纯化实验报告
酿酒酵母分离纯化实验报告：本实验中使用了四个不同的抑制剂，乙酸、乙酰乙酸乙酯、低浓度苯酚和醋酸，对原始水抽出的酿酒酵母进行了分离纯化。
根据实验数据，发现乙酸和乙酰乙酸乙酯有助于抑制非酿酒酵母菌株和其他微生物菌群增长，可以有效分离酿酒酵母。
低浓度苯酚可以使非酿酒酵母菌群的增长速率大幅下降，而醋酸可以减少正常葡萄酒的发酵速率。
总的来说，本实验表明，通过使用四种不同的抑制剂，可以有效地分离和纯化酿酒酵母，从而提高酿酒质量。
酵母菌的培养与分离纯化
4.接种前应注意无菌工作台的消毒与杀菌，接 1. 24小时，观察试管内培养液的情况并作记录，每组转 接2支试管。 2. 48小时，观察试管内培养液的情况，镜检培养液内菌 的数量，粗略判断是否为酵母菌并作记录，每人蘸取培 养液进行划线分离，并作记录。 3. 72小时后，观察培养皿内菌的生长的情况，挑取单个 菌落进一步划线分离，直到为纯菌落。
酵母菌的培养与分离纯化
实验目的： 了解鉴别酵母菌实验方法，掌握培养酵母菌常 用 培养基的配制方法，并能设计出简单的实验 对酵母菌进行分离纯化，写出完整的试验报告并 且可以自己操作。
实验原理：
大多数酵母菌为腐生，其生活最适pH为4.5－6，常 见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土 及果皮等植物表面。酵母菌生长迅速，易于分离 培养，在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长得快。
（二）、实验的准备 1、甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮、0.1%美蓝染 液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等。 2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基： 原料：马铃薯（200克）、葡萄糖（20克）、琼脂 （15-20克）、蒸馏水（1000ml）。
（三）、实验设计 l、接种：取一小块果皮，不需冲洗，直接接入乳酸马铃薯葡萄糖培养 液管中，置28-30℃，培养24小时，可见培养液变混浊。
2、培养，用无菌吸管取上述培养后培养液0.lml，注入另一管乳酸马 铃薯葡萄糖培养液中，置28—30℃再培养24小时或48小时(过长则霉 菌长出)。
3、观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.l%美蓝染色 液中，混匀后加盖玻片制成水浸片，先用低倍镜后换高倍镜观察酵母 菌的形态和出芽生殖情况。活酵母菌可使美蓝还原，从而使菌体不着 色，用此方法可判断酵母菌的死活。
实验报告：
24小时，观察试管内培养液的情况并作记录， 每组转接2支试管。 48小时，观察试管内培养液 的情况，镜检培养液内菌的数量，粗略判断是否 为酵母菌并作记录，每人蘸取培养液进行划线分 离，并作记录。72小时后，观察培养皿内菌的生 长的情况，挑取单个菌落进一步划线分离，直到 为纯菌落。
分离观察酵母菌实验报告
1. 学习微生物分离纯化的基本原理和方法。
2. 掌握酵母菌的分离纯化技术。
3. 观察酵母菌的形态和培养特征。
二、实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，广泛存在于自然界中。
本实验通过平板划线法将混合菌液中的酵母菌分离纯化，并在适宜的培养基上培养，观察其形态和特征。
三、实验材料1. 菌种：啤酒酵母菌2. 培养基：酵母膏葡萄糖琼脂培养基（YGA）3. 工具：接种环、酒精灯、无菌试管、无菌棉签、培养皿、显微镜等四、实验方法1. 菌种活化：将啤酒酵母菌菌种接种于YGA培养基中，在28℃恒温培养箱中培养24小时。
2. 分离纯化：取活化后的酵母菌菌液，用无菌棉签涂布于YGA平板上，用接种环进行平板划线，划线时注意不要划破菌落。
将平板倒置于28℃恒温培养箱中培养24小时。
3. 观察与计数：观察平板上的菌落，记录菌落形态、大小、颜色等特征。
用无菌棉签挑取单个菌落，接种于新的YGA平板上，重复上述操作，直至获得纯化的酵母菌。
4. 酵母菌形态观察：将纯化的酵母菌接种于YGA培养基中，在28℃恒温培养箱中培养24小时，用无菌吸管吸取少量菌液，滴加于载玻片上，用无菌盖玻片覆盖，在显微镜下观察酵母菌的形态。
五、实验结果1. 菌落特征：酵母菌菌落呈圆形，表面光滑，湿润，边缘整齐，颜色为乳白色。
2. 酵母菌形态：酵母菌为单细胞，呈椭圆形或卵圆形，细胞核明显，细胞壁较厚。
1. 通过平板划线法，成功分离纯化了酵母菌，表明该方法适用于微生物的分离纯化。
2. 酵母菌在YGA培养基上生长良好，菌落特征明显，便于观察和识别。
3. 显微镜下观察酵母菌的形态，有助于了解其生物学特性。
七、实验结论1. 本实验成功分离纯化了酵母菌，掌握了酵母菌的分离纯化技术。
2. 通过观察酵母菌的形态和培养特征，了解了酵母菌的基本生物学特性。
3. 平板划线法是一种简单、有效的微生物分离纯化方法，适用于实验室研究。
八、实验注意事项1. 实验过程中要注意无菌操作，防止杂菌污染。
酵母分离纯化实验报告
一、实验目的1. 掌握酵母菌分离纯化的基本原理和方法。
2. 学习使用显微镜观察酵母菌的形态特征。
3. 熟悉微生物实验室的基本操作技能。
二、实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，广泛分布于自然界。
本实验采用稀释涂布平板法从混合样品中分离纯化酵母菌。
该方法基于菌落形成的原理，通过稀释样品，使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 酵母菌混合样品- 营养琼脂培养基- 无菌水- 灭菌器械（接种环、酒精灯等）- 显微镜2. 实验仪器：- 研钵- 玻璃棒- 离心机- 培养箱四、实验步骤1. 制备平板：- 将营养琼脂培养基加热融化，冷却至约50℃。
- 将融化后的培养基倒入培养皿中，待凝固后备用。
2. 样品稀释：- 将酵母菌混合样品用无菌水进行10倍稀释，制成不同浓度的稀释液。
3. 涂布平板：- 用无菌吸管吸取适量稀释液，滴加到平板中央。
- 用无菌玻璃棒轻轻涂抹，使样品均匀分布在平板表面。
4. 培养：- 将平板倒置，放入培养箱中培养。
5. 挑取菌落：- 在适宜的温度下培养，观察菌落生长情况。
- 根据菌落特征（如大小、形状、颜色等）挑取单菌落。
6. 纯化：- 将挑取的单菌落接种到新的平板上，重复培养和挑取过程，直至获得纯化后的酵母菌。
7. 观察与鉴定：- 将纯化后的酵母菌制片，用显微镜观察其形态特征。
- 根据酵母菌的形态特征（如细胞大小、形态、芽殖方式等）进行鉴定。
五、实验结果与分析1. 菌落观察：- 经过培养，平板上形成了不同形状、大小的菌落。
- 通过挑取和纯化，获得了纯化后的酵母菌。
2. 显微镜观察：- 在显微镜下观察，纯化后的酵母菌呈现为球形或椭圆形的单细胞结构，直径约为5-10微米。
3. 鉴定：- 根据酵母菌的形态特征，初步鉴定为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）。
六、实验讨论1. 本实验采用稀释涂布平板法成功分离纯化了酵母菌，该方法简单易行，适用于实验室常规操作。
果酒酵母的分离、纯化及选育(实验报告定稿)
一、引言酿酒酵母细胞透明, 呈圆形或椭圆形, 形体比较大, 一般为7×12μm, 含有转化酶能将葡萄汁中的糖转化成乙醇、二氧化碳和其它代谢产物。
优良纯种酵母应具备下列性能: （1）除酿酒水果本身的果香外, 酵母也应产生良好的果香与酒香。
（2）生长速度快, 有较高的发酵能力, 能将糖分全部发酵完。
（3）具有较高的抗S02能力, 有较好的凝集力和较快的沉降速度。
（4）培养基成分简单, 来源广泛, 价格低廉, 对温度, pH, 离子强度, 溶氧等环境因素不敏感。
（5）能在低温或果酒适宜温度下发酵, 以保持果香和新鲜清爽的口味。
由此可见, 酵母的品质对果酒的产量和质量影响很大。
要获得优良的酿酒酵母, 必须对其进行分离选育。
果酒酵母的筛选应从相应的果品及其种植环境中采样分离, 如成熟果实的表皮、自然腐烂发酵的果肉或果汁和果园的土壤等相关场所。
根据实践经验, 在果汁和自然发酵的果酒醪液中检出率较高, 因为它们的基质环境与酿酒环境很相似。
为使我们需要的酵母易于检出, 应对采集的样品进行富集培养, 通过设置较高的酒精浓度、添加SO2 、调整pH 等手段抑制不需要的微生物的生长, 使希望检出的微生物得到增殖。
酵母检出后, 应对其的发酵性能进行考察, 包括酵母的一系列生理生化特性和风味物质形成的能力等, 这些可通过作生理生化实验和三角瓶小型发酵实验分析和测定。
二、实验仪器与材料样品: 新鲜苹果（未经清洗）榨汁。
YEP.培养基（富集培养基）.蛋白胨20g，葡萄糖20g，酵母膏10g，蒸馏水定容至1000ml. （每次根据需要量按如此比例配置，下同....PDA培养基（酿酒酵母培养基）: 马铃薯200g, 葡萄糖20g, 琼脂20g, 蒸馏水定容至1000ml.（马铃薯去皮, 切成块煮沸后再煮30分钟, 然后用纱布过滤, 再加糖及琼脂溶化后定容至1000 ml。
121℃灭菌30分钟。
）PYG培养基（菌种保藏培养基）：蛋白胨 3.5g, 葡萄糖15g, 酵母膏 1.5g, KH2PO42.0 g, MgSO4·7H2O1.0 g, （NH4）2 SO41.0 g, 琼脂20g, 蒸馏水定容至1000ml.试剂：亚硫酸钠、乙醇, 碘液, 无菌生理盐水等。
分离酵母菌的实训报告
一、实训目的1. 学习并掌握酵母菌分离纯化的基本原理和操作方法。
2. 提高实验室操作技能，培养严谨的科学态度和团队协作精神。
3. 了解酵母菌在食品、医药、能源等领域的应用。
二、实训时间2023年X月X日三、实训地点XX大学微生物实验室四、实训材料1. 酵母菌培养液2. 1%氯化钠溶液3. 0.9%生理盐水4. 琼脂5. 酵母菌分离培养基6. 微量移液器7. 细菌培养箱8. 显微镜9. 其他相关试剂和仪器五、实训步骤1. 酵母菌培养液的制备- 将酵母菌培养液置于无菌环境中，恒温培养24小时。
2. 涂布分离- 将酵母菌培养液用无菌玻璃棒均匀涂布在酵母菌分离培养基上。
- 将涂布好的培养基倒置于细菌培养箱中，恒温培养24小时。
3. 挑取单菌落- 在无菌条件下，用无菌镊子挑取酵母菌分离培养基上的单菌落。
- 将挑取的单菌落接种至新的酵母菌分离培养基上。
4. 纯化培养- 将接种好的酵母菌分离培养基倒置于细菌培养箱中，恒温培养24小时。
5. 显微镜观察- 在无菌条件下，用无菌镊子挑取纯化后的酵母菌，滴加1滴0.9%生理盐水，制作临时玻片。
- 在显微镜下观察酵母菌的形态、大小、颜色等特征。
6. 菌落计数- 将纯化后的酵母菌接种至酵母菌计数培养基上。
- 在细菌培养箱中恒温培养24小时后，统计菌落数。
六、实训结果与分析1. 酵母菌形态观察- 通过显微镜观察，发现纯化后的酵母菌为圆形、卵圆形或棒状，细胞壁较厚，细胞质透明。
2. 菌落计数- 经过24小时的培养，菌落计数为2.5×10^8 CFU/mL。
3. 酵母菌纯度分析- 经过多次纯化培养，纯化后的酵母菌纯度较高，未发现杂菌。
七、实训总结1. 本次实训中，我们学习了酵母菌分离纯化的基本原理和操作方法，掌握了实验室操作技能，培养了严谨的科学态度和团队协作精神。
2. 在实训过程中，我们发现了以下问题：- 酵母菌培养液制备过程中，无菌操作不严格可能导致污染。
- 涂布分离时，涂布不均匀可能导致分离效果不佳。
酵母菌的培养与分离
微生物学大实验实验指导编者：生物技术教研室2007.3目录实验一酵母菌的培养与分离‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2实验二酵母菌的鉴定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥7实验三酵母菌耐受能力的测定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥19实验四酵母菌发酵工艺条件的优化‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥22实验五耐高温酵母菌株的诱变选育‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥24实验六酿酒酵母细胞固定化与酒精发酵‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥27耐高温酒精酵母菌的选育及发酵条件的研究实验一酵母菌的培养与分离一、实验目的学习培养和分离酵母菌的技术和方法二、基本原理大多数酵母菌为腐生，其生活最适pH为4.5－6，常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。
酵母菌生长迅速，易于分离培养，在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长得快。
利用酵母菌喜欢酸性环境的特点，常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液（这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长），然后在固体培养基上用划线法分离之。
三、实验主要内容和要求（一）本次实验的方案由同学们自己制定，实验包括：1．马铃薯葡萄糖培养基, 乳酸马铃薯葡萄糖培养液的配制。
2.菌株的筛选,根据一定的生产目的并从特定的样品筛选出高产酒精的适宜的酵母菌株。
3.酵母菌的分离,要求接种一次, 28-30℃，培养24小时，转接一次，28-30℃，培养24小时，并用镜检的方法独立判定所分离菌株是否为酵母菌。
4.用划线分离法对酵母菌进行纯化，要求每组挑取单个菌落，连续划线分离4代，镜下为单一纯菌株，每组扩繁10支斜面菌种，备用。
四、实验的准备1、甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等。
2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：原料：马铃薯（200克）、葡萄糖（20克）、琼脂（15-20克）、蒸馏水（1000ml）。
配制方法：（1）先将马铃薯去皮，切片，称200克并加蒸馏水1000ml，煮沸半小时，用纱布过滤，补足蒸馏水量至1000ml ，制成20%的马铃薯汁。
酵母菌的分离纯化.
酵母菌的分离纯化.酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵第一部分酵母菌的分离纯化一、实验目的应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。
二、实验原理酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。
多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为4.5-6.0.酵母菌生长迅速，容易分离培养。
在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。
因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化。
三、器材和用品1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。
2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。
分装三角瓶；试管斜面1支/组3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为5.5左右，再分装试管9ml2支/组。
4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等。
四、实验方法1、接种：取果皮（不需冲洗）或土壤5克，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊。
2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h。
3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。
4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取0.1ml 加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。
5、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分离得到单个菌落。
酵母菌的分离筛选方法
酵母菌的分离筛选方法酵母菌多数为腐生，一般生长在含糖较高，偏酸的环境中，在通气条件下，液体培养比霉菌快。
菌落与细菌相似，较大而厚，多数不透明，菌落光滑湿润粘稠，乳白色，少数干皱，边缘整齐，呈红色或粉红色，圆形椭圆卵形，液体培养基生长会生成沉淀或菌膜。
含高糖浓度（45%），分离蜂蜜酵母，球拟酵母属等嗜高渗透压的酵母。
1.培养基：1.1葡萄糖50g/L 尿素1g/L （NH4）2SO41g/L KH2PO42.5g/LNa2HPO40.5g/L MgSO41g/L FeSO4 0.1g/L 酵母膏 0.5g/L 孟加拉红 0.03g/L PH4.5-5.0 （富集用）★1.2乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基：马铃薯200g/L 葡萄糖（霉菌用蔗糖）20g/L 乳酸5ml马铃薯去皮切片200g，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L，PH自然。
（去掉乳酸可用于酵母菌和霉菌培养用）（富集用）★1.3麦芽汁培养基：1：4水60-65℃水浴3-4小时，4-6层纱布过滤，可加一个蛋清加水20mL调均生泡沫，倒入糖化液中，煮沸过滤，10-15波林，氯霉素0.1g/L PH6.0-6.4 121℃20min（分离保存用）灭菌后加入300u/ml硫酸链霉素（集菌用）★1.4虎红（孟加拉红）培养基：蛋白胨5.0g/L 葡萄糖10g/LKH2PO41.0g/L MgSO40.5g/L 孟加拉红0.033g/L 氯霉素0.1g/L 琼脂15g/L PH自然（分离纯化用）★1.5豆芽汁培养基：黄豆芽100g/L 葡萄糖50g/L PH自然。
100g黄豆芽，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L1.6察氏培养基：主要培养霉菌观察形态用蔗糖30g/L 硝酸钠3g/L 磷酸氢二钾1g/L 氯化钾0.5g/L 硫酸镁0.5g/L 硫酸亚铁0.01g/L 琼脂15-20g/L 121℃ 20min PH自然一般分离黄酒酵母酒精酵母使用曲汁培养基，啤酒酵母用酒花麦汁培养基，葡萄酒酵母用葡萄汁培养基。
优良葡萄酵母菌的分离纯化与保藏报告
优良葡萄酵母菌的分离纯化与保藏一、实验器材和试剂1、器材手动榨汁机，培养皿，试管，接种环，酒精灯，棉塞，无菌工作台，生化培养箱，牛皮纸，高压蒸汽灭菌锅，显微镜，纱布，250ml锥形瓶，手持折光仪，漏斗，烧杯，玻璃棒，胶头滴管，广口瓶A14-100ml，100ml量筒，分析天平，读数吸管，软管，发酵瓶，干燥滤器，水浴锅，蒸发皿，烘箱，干燥器，托盘天平。
（用量及规格参看附表）2、试剂琼脂，盐酸，葡萄糖，白砂糖，酒石酸，NaHSO3，50%的葡萄酒蒸馏酒，含糖量为20%的葡萄汁，蒸馏水，双蒸水，发酵葡萄酒用葡萄汁3、实验所用基本培养基及其制备方法（1）含有2%琼脂的新鲜葡萄汁培养基：取250ml锥形瓶，在其中加入含有2%琼脂的新鲜葡萄汁100ml,并调节pH至4-4.5,加棉塞后包上牛皮纸,置于高压蒸汽灭菌锅内用1.1MPa压蒸汽灭菌20min,取出后将其冷却至45℃左右,作为培养基。
（2）PDA-AS即马铃薯葡萄糖琼脂培养基加入50μg/mL 的氨苄青霉素和链霉素，并调节pH至4-4.5。
PDA-AS 培养基是用来培养真菌的（氨苄青霉素和链霉素2种抗生素可以抑制细菌的生长）二、实验原理经查阅资料可知葡萄表面主要含有以下几种菌：李斯特菌的，大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，酵母菌，镰刀菌，假单胞菌属，青霉菌。
它们的部分特性差别如条件下培养，可以除去青霉菌与假单胞菌属等好氧菌。
然后，再在有氧条件下培养培养，可以去除镰刀菌等厌氧菌。
接着，在转接到加有抗生素的培养基上培养，可以除去李斯特菌与金黄色葡萄球菌。
最后根据大肠杆菌为短杆菌，而酵母菌很少有杆状形态的区别，借助显微镜观察即可分离出酵母菌而排除大肠杆菌。
三、取材与菌种的富集培养在八九月份，到沙城某葡萄园，在葡萄园分散的取适量熟透的葡萄，然后迅速带回实验室，进行榨汁处理，然后用四层纱布过滤，得到葡萄汁，调节pH至4-4.5，分别取100ml装入三个250ml三角瓶中，在无氧培养箱中进行富集培养，每隔72小时取10ml富集培养液转接到装有100mlpH为4-4.5的新鲜无菌葡萄汁的250ml三角瓶中培养，如此反复三次，除去其中的不耐酸性环境的和好氧型菌。
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酵母菌的分离与纯化
土壤是微生物生活的大本营，是寻早有重要应用潜力的微生物的主要菌源。
不同图样中各类微生物的含量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。
放线菌一般在较干燥、偏碱性、有机质较多的土壤中较多；霉菌在含有机质丰富、偏酸性、通气性较好的土壤中较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少，而在酒曲、面肥、水果表皮、果园土壤中数量多些。
（一）菌源
1土样用无菌的采样小铲在橘树果园中取土壤表层下1~10cm土壤10g，装入灭菌的牛皮纸袋内。
封好袋口，记录取样地点、环境及日期。
图样采集后应及时分离，饭不能立即分离的样品，应保存在低温、干燥的条件下，以减少其中菌相的变化。
2面肥
（1）面粉500克，白酒100克，水250，和好静置发酵就可以了。
冬季10个小时。
（2）在温水中兑一点酒，倒入适量面粉拌匀后放入绝缘保温盛器（陶瓷，砂锅）中，用布将整个盛器盖好置于温度较高处，6小时后即成面肥。
*以上方法做出的面肥只能保存几天，不宜放置太久。
3水果果皮
桔子和葡萄等的果皮上含有数量较多的酵母菌，既可单独作为菌源也可以和果园土壤作为混合菌源。
（二）酵母菌的分离
1制备菌悬液
称取菌源1g，加入盛有99ml无菌水或无菌生理盐水并装有玻璃珠的锥形瓶中。
振荡20min，即成10-2的菌源悬液。
再一次稀释成10-4、10-5、10-6三个稀释度。
2涂布法分离
取融化并冷却至45~50度左右的豆芽汁葡萄糖培养基，每皿分别倾注约12ml培养基到培养皿内。
注意，温度过高易将菌烫死，皿盖上冷凝水太多也会影响分离效果；低于45度培养基易凝固，平板高低不平。
呆平板冷却后，用无菌移液管分别吸取上述已经制好的菌源稀释液10-4、10-5、10-6三个稀释度菌悬液各0.1ml，依次滴加于相应编号的豆芽汁葡萄糖培养基平板上。
每个稀释度做2~3个平行皿。
左手拿培养皿，并用拇指将皿盖打开一缝，再火焰旁右手持无菌玻璃涂棒将菌液自平板中央均匀向四周涂布扩散。
注意，切忌用力过猛，这样会将菌液直接推向平板边缘或将培养基划破。
3培养
接种后，平版倒置于30度恒温箱中，培养2~3天，观察结果。
4纯化
用接种环挑取单个单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分离得到单个菌落。
酵母扩培方案
一、培养基制备
(一)麦芽汁培养基的配制
1．培养基成分
新鲜麦芽汁一般为10-15波林。
2．配制方法
(1)用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。
(2)取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液，加2滴碘液，如无蓝色出现，即表示糖化完全)。
(3) 糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清，加水20 m1，调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，再过滤)。
(4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度，将滤液用水稀释到10-15波林，调pH至6．4。
如当地有啤酒厂，可用未经发酵，未加酒花的新鲜麦芽汁，加水稀释到10-15波林后使用。
(5)如配固体麦芽汁培养基时，加入2％琼脂，加热融化，补充失水。
(6)分装、加塞、包扎。
(7)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
（二)马铃薯葡萄糖培养基的配制
1、培养基成分
马铃薯 20g
葡萄糖 2 g
琼脂 1.5-2g
水 100ml
自然pH
2．配制方法
(1)配制20％马铃薯浸汁取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000m1。
80℃浸泡lh，用纱布过滤，然后补足失水至所需体积。
100 Pa灭菌20 min。
即成20％马铃薯浸汁，贮存备用。
（2)配制时，按每100 m1马铃薯浸汁加入2g葡萄糖，加热煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化并补足失水。
(3)分装、加塞、包扎。
(4)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
(三)豆芽汁葡萄糟培养基的配制
1．培养基成分
黄豆芽 10g
葡萄糖 5g
琼脂 1.5-2g
水 100ml
自然pH
2．配制方法
(1)称新鲜黄豆芽10g，置于烧杯中，再加入100 m1水，小火煮沸30 min，用纱布过滤，补足失水，即制成10％豆芽汁。
（2)配制时，按每100 m1 10％豆芽汁加入5g葡萄糖，煮沸后加入2 g琼脂，继续加热融化，补足失水。
(3)分装、加塞、包扎。
(4)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
(四)察氏(czapck)培养基的配制
1．培养基成分
蔗糖 3g
NaN03 0.3g
K2HP04 0.1g KCl 0.05g
MgSO4·7H2O 0.05 g
FeS04 0.001 g 琼脂 1.5-2g
蒸馏水 100ml
自然pH
2．配制方法
(1)称量及溶化量取所需水量约2／3左右加入到烧杯中，分别称取蔗糖、
NaNO3 、K2HP04 、KCl、MgSO4。
依次逐一加入水中溶解。
按每100 ml培养基加
入1ml 0.1％的FeS04溶液。
（2）定容候药品全部溶解后，将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。
（3）加琼脂加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。
(4)分装、加塞、包扎。
(5)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
YPD培养基
YPD 或YPED，：Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L)，又叫酵母浸出
粉胨葡萄糖培养基，加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖（YPD）琼脂培养基
用于酵母菌的培养
配方：1% Yeast Extract（酵母膏），2% Peptone（蛋白胨），2% Dextrose
(glucose)（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉
配制方法：
1 溶解10gYeast Extract（酵母膏）, 20gPeptone（蛋白胨）于900ml水中，
如制平板加入20g琼脂粉
2 高压 121度 20min
3 加入100ml 10×Dextrose (glucose)（葡萄糖），(葡糖糖溶液灭菌后加入)
注：葡萄糖，yeast extract ,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学
反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。
YPEG：除了用3%乙醇和3%甘油代替葡萄糖作为碳源外，其他成分同YPD
二、接种操作
【器具】：酒精灯、酒精棉、剪刀、接种针、镊子、定量移液器或吸管等。
【仪器】：超净工作台等。
【方法】
无菌室使用前，使用紫外线灯照射20~30分钟进行杀菌；进入无菌室换无菌工作
服；所有操作采用无菌操作。
〖活化〗
①操作前将冷冻管菌种置于室温下，使之内部培养基达到室温后，振荡均匀；无
菌操作，将冷冻管内的培养液全部转入盛有5mL培养基的试管中，于25±1℃培
养72±2小时。