酵母菌菌体离心实验步骤
酵母单杂交实验流程
酵母单杂交实验流程概述：酵母单杂交实验是一种常用的研究方法，用于确定基因的遗传方式和相互作用。
通过将两个不同的酵母菌株进行杂交，可以获得具有两个不同亲代特征的杂交子代。
本文将详细介绍酵母单杂交实验的流程。
实验材料和设备准备：1. 两个不同的酵母菌株，分别标记为A和B。
2. 酵母菌培养基。
3. 酵母菌培养皿。
4. 酵母菌细胞计数板。
5. 显微镜和显微镜玻片。
6. 移液器和移液管。
7. 离心机。
实验步骤：1. 预培养酵母菌株：将酵母菌株A和B分别接种到含有适宜培养基的培养皿中，分别培养过夜，以确保菌株处于最佳生长状态。
2. 制备酵母菌株的细胞悬液：用适量的酵母菌培养基将菌落转移到离心管中，用移液管充分混合。
然后，使用显微镜和细胞计数板计数酵母菌细胞的浓度。
调整浓度至所需的菌数。
3. 杂交：将菌株A和B的细胞悬液按照一定比例混合，然后在培养皿中滴加混合液。
确保混合液均匀分布在培养皿表面。
4. 孵育：将培养皿置于恒温培养箱中，培养一定时间，以便杂交子代形成。
5. 筛选杂交子代：从培养皿中挑选出杂交子代的克隆菌落。
使用显微镜检查克隆菌落的形态，选择具有两个亲代特征的菌落。
6. 单克隆培养：将所选菌落分别转移到新的培养皿中，培养过夜。
确保每个菌落都是来自单个细胞的纯系。
7. 验证杂交子代：对单克隆菌落进行遗传分析，以验证杂交子代的基因遗传方式。
可以使用多种遗传分析方法，例如基因重组实验、基因敲除实验等。
8. 结果分析：对杂交子代的遗传方式和相互作用进行统计和分析。
根据结果可以推断出酵母菌株A和B的基因遗传方式和相互作用。
实验注意事项：1. 实验过程中要保持无菌操作，避免外源性污染。
2. 实验室应保持干净整洁，设备要经过正确的消毒和清洗。
3. 实验过程中要注意安全，避免接触有害物质和操作过程中的伤害风险。
4. 实验结果应进行统计分析，并与控制组进行比较，以确保结果的准确性和可靠性。
总结：酵母单杂交实验是一种重要的遗传研究方法，通过将两个不同的酵母菌株进行杂交，可以获得具有两个不同亲代特征的杂交子代。
酵母菌的纯培养实验原理
酵母菌的纯培养实验原理酵母菌是一种单细胞真核生物，广泛存在于自然界中，常见于土壤、果皮和发酵食品等环境中。
酵母菌的纯培养实验是一种常用的实验手段，通过这种实验可以得到纯净的酵母菌培养物，为后续的研究提供了可靠的基础。
酵母菌的纯培养实验主要包括以下几个步骤：酵母菌的分离、酵母菌的培养和酵母菌的纯化。
酵母菌的分离是实验的第一步。
我们可以从自然界中采集到含有酵母菌的样品，比如果皮、土壤等。
将样品放入培养基中，利用其富含的养分和适宜的温度等条件，促使酵母菌开始生长。
然后，通过显微镜观察，可以看到培养基中存在着许多酵母菌细胞。
选取单个酵母菌细胞，将其转移到另一个培养基中，再次进行培养。
经过多次的分离，我们可以得到纯净的酵母菌培养物。
酵母菌的培养是纯培养实验的关键步骤。
酵母菌的培养基一般由碳源、氮源、矿物质和维生素等组成，提供了酵母菌生长所需的养分。
培养基的配制需要根据酵母菌的需求来确定，以确保酵母菌能够正常生长和繁殖。
在培养过程中，温度和氧气供应也是需要注意的因素。
一般情况下，酵母菌的最适生长温度为28-30摄氏度，过高或过低的温度都会对其生长产生不利影响。
此外，酵母菌对氧气的需求较高，需要提供充足的氧气供应。
酵母菌的纯化是实验的最后一步。
在酵母菌培养物中，可能会存在其他微生物的杂菌。
为了获得纯净的酵母菌培养物，我们可以采用多种方法，如温度选择法、抗生素选择法和营养选择法等。
这些方法可以通过调节培养基中的温度、添加抗生素或改变培养基中的营养成分，来选择性地培养酵母菌，排除其他微生物的干扰。
通过以上的步骤，我们可以得到纯净的酵母菌培养物。
这些纯净的酵母菌培养物可以用于研究酵母菌的生理特性、代谢途径、基因表达和蛋白质功能等方面的问题。
同时，纯培养的酵母菌也为酵母菌在工业生产中的应用提供了基础。
总结起来，酵母菌的纯培养实验是一种重要的实验手段，通过分离、培养和纯化等步骤，可以得到纯净的酵母菌培养物。
这些纯净的酵母菌培养物可以为酵母菌的研究提供可靠的基础，也为酵母菌在工业生产中的应用提供了有力支持。
实验一 酵母菌株的筛选分离
一、实验目的：1.通过酒母中酵母的筛选实验，熟悉微生物分离纯化、接种微生物操作实验；2.熟悉产酒精酵母的TTC显色平板等性能筛选实验；二、实验材料与仪器：培养基：YPD培养基、MEB、TTC显色培养基；酵母膏、蛋白胨、葡萄糖、TTC、0.1%吕氏碱性美蓝仪器：灭菌锅、恒温培养箱、厌氧培养箱；移液管、涂布棒，接种环，平板、三角瓶、试管（15*150mm）、硅胶塞、杜氏小倒管、纱布、报纸；三、实验步骤：1.1 培养基的配制YPDS固体培养基（1L）：称取酵母膏10g、蛋白胨20g、葡萄糖20g溶于1L的水当中，分装到三角瓶中后加入2%琼脂粉，115℃灭菌20min；注：为抑制霉菌菌丝的生长。
可在培养基中加入0.5%-1%的脱氧胆酸钠。
YPD液体培养基（1L）：按YPDS配方配制，不加琼脂，121℃灭菌20min；TTC显色培养基：每100mlYPDS培养基中加入0.05g的TTC；1.2 酵母的分离纯化：1.2.1 梯度稀释将酒样混匀后取1ml加入到9ml的无菌水中制成10-1浓度梯度，之后从中取出1ml再加入到9ml的无菌水当中，浓度梯度为10-2，依次往下推，分别制得10-3,10-4,10-5,10-6不同稀释度的菌液；1.2.2 涂布将稀释得到的10-2,10-3,10-4三个梯度的菌液取0.5 ml到预先倒好的TTC显色培养基平板中，沿一个方向均匀的进行涂布，然后将涂布好的平板用报纸包好避光培养，倒置于恒温厌氧培养箱中28℃培养2-3d。
1.3 酵母的保藏将划线纯化后的酵母菌株接种在YPDS斜面试管上，用记号笔写上将接种的菌名、日期和接种者，28℃培养1-2d，培养好后放置于4℃冰箱保存；四、实验结果1、对实验过程中所得到的实验结果进行拍照；注：左上图浓度梯度10-2，右上图浓度梯度10-3左下图浓度梯度10-4，右下图为酵母菌株接种在YPDS 斜面试管2、 记录所筛选到酵母菌株的颜色分级并进行编号；酵母菌株的颜色随浓度梯度增加而变深，如颜色深：10-2>10-3>10-4五、思考题1、涂布之前稀释的目的？答：稀释涂布平板的目的是降低菌的浓度.浓度过高的菌会在培养基上长出过多的菌落,以至于没法挑出单菌落,那样就无法获得单一种类的菌,或者无法统计菌落数来计算菌液浓度了.2、如何获得纯化的微生物菌株？ 答：1）划线分离法2）稀释分离法3）组织分离法3、酵母菌TTC 筛选的原理是什么？答：TTC （2，3，5一氯化苯基四氮哇）是一种显示剂。
酵母实验文献_实验全过程1
• （选自 共表达_1_3_1_4_葡聚糖酶_省略_酿酒酵母的构建及其性能的应用研 究_鲁健章 浙江大学 博士学位 论文 P60）
酵母感受态制备
1. 将活化的NY—K菌株从平板上接入5mLYPD 液体培养基中，250rpm 30℃过 夜培养。 2. 以0.5%接种量转接至200mL YPD培养基中（为了保证足够的氧气供应，使 用1L 的三角瓶） 摇瓶过夜至1.0—1.3。 3. 3000rpm 4℃下，离心5min，离心，收集细胞沉淀，重悬于200mL冰冷的无 菌水。 4. 3000rpm 4℃下，离心5min，收集细胞沉淀，重悬于100mL冰冷的无菌水。 5. 3000rpm 4℃下，离心5min，收集细胞沉淀，重悬于8mL冰冷的1mol/L山 梨醇溶液。 6. 3000rpm 4℃下，离心5min，收集细胞沉淀，重悬于1mL冰冷的1mol/L山梨 醇溶液。分装，80μl管，即为感受态细胞。-80℃存。 (选自 多基因转化构建重组工业酿酒酵母及其在木薯酒精发酵中的应用研究_ 阳辛凤 海南大学 博士论文 P44)
（选自酿酒酵母生产白藜芦醇关键酶基因4CLcDNA的克隆与转化_王 永智 西北大学 硕士论文 P29）
• 酿酒酵母感受态的制备和转化
1. 挑取酵母 H1246 的单菌落到 10m L 的 YPD 培养基，30℃、180rpm培养 12h。 2. 使用紫外分光光度计测定上述培养物 OD600，转接到 50m L YPD 液体培 养基培养 3h，重新测定培养物的 OD600至 0.4-0.6（不得小于 0.4，否 则 影响转化效率）。 3. 2500rpm 离心菌液 5min，用 40m L 的 1×TE 重悬细胞。 4. 2500rpm 离心 5min 弃上清，加入 2m L 的 1×Li AC/0.5×TE。 5. 室温培养细胞 10min。 6. 接入 10u L 质粒（PYES2-1、PYES2-2、PYES2-3 载体）、10u L 的 10g/L的 ss DNA，上下震荡离心管 5-6 次。 7. 加入 700u L 的 1×Li AC/40%PEG-3350/1×TE，混合均匀。 8. 在 30℃下 200rpm 培养 30min。 9. 加入 88u L DMSO 混合均匀，42℃热激 7 分钟。
酵母菌的分离纯化实验方案
酵母菌的分离纯化∙实验目的1.了解培养基的配置与灭菌技术；2.无菌操作技术；3.工业微生物的分离与纯化技术；4.工业微生物的检测及保藏。
∙基本原理1、培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。
也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。
由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。
不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH 的要求选择合适的PH。
由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。
2、接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。
所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。
3、把特定微生物从混杂的微生物群体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。
首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。
分离纯化的方法通常有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。
此次实验采用梯度稀释涂布平板法。
4、微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法（CFU）、光电比浊计数法等。
本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。
实验器材仪器设备恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器玻璃器皿烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片试剂与材料苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染色液其它纱布、滤纸实验内容及操作步骤(一)、样品的选择酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。
酵母菌纯培养的实验步骤
酵母菌纯培养的实验步骤
酵母菌纯培养的实验步骤如下：
1. 取少量酵母菌样品，使用选择培养基（例如固体葡萄糖、面粉琼脂培养基，添加有特殊药液和增菌剂的选择培养基有利于酵母菌的筛选）进行分离纯化。
2. 筛选出发酵力良好的菌落并进行纯培养。
在酒精发酵实验中发现典型的酵母菌菌落可移种至综合生化管培养箱中进一步鉴定。
3. 使用液体培养基进行酵母菌扩大培养，准备好无菌吸管和无菌锥形瓶，将酵母菌从锥形瓶中转移到试管中。
4. 对酵母菌进行计数，准备血液培养皿和牛肉膏琼脂培养基，接种菌液到培养基中使其生长并繁殖，观察生长情况并进行计数。
通过以上步骤，就可以对酵母菌进行纯培养，请确保所有使用到的工具和试剂都经过灭菌处理。
以上步骤仅供参考，建议您咨询专业人士获取更具体的信息。
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程通常包括以下几个步骤：
1. 采集样品：从自然环境中或已知的发酵样品中采集可能含有酵母
菌的样品，如水、土壤、植物材料、发酵食品等。
2. 预处理样品：对样品进行预处理，如去除杂质、抑制细菌生长等。
这可以通过过滤、离心、稀释等方法实现。
3. 分离酵母：将预处理后的样品通过不同的分离方法（如稀释涂布法、滴管稀释法、涂布法等）分离到培养基上，使单个酵母菌落生长。
4. 筛选途径：根据所需目标酵母菌的特征，选择特定的筛选途径加
以筛选。
- 抗性筛选：在培养基中添加特定的抗生素或抗菌药物，可以筛选出对此类物质具有抗性或耐受能力的酵母菌。
- 产物筛选：培养基中添加特定的检测试剂或基质，通过对应的反应或变色现象，筛选出产生特定产物的酵母菌。
- 形态特征筛选：通过观察酵母菌的形态特征，如菌落形状、颜色、纹理等，筛选出符合要求的酵母菌。
- 发酵能力筛选：通过检测酵母菌的发酵能力，如对糖类底物的发酵能力，选择具有高发酵活性的酵母菌。
5. 分离纯培养：将筛选出来的单个酵母菌菌落分离到新的培养基上
进行纯培养，以获得纯种的酵母菌。
6. 鉴定酵母菌：通过形态学观察、生理生化特征、分子生物学方法
等对所分离出的酵母菌进行鉴定，确定其菌种。
值得注意的是，以上步骤仅为一般的酵母菌筛选思路，具体的筛选
方法和流程可能会因实验目的和需要而有所差异。
酵母菌培养操作
酵母菌培养操作一、引言酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然界中的土壤、水体、植物和动物体内。
它们在生物学、医学和工业领域中具有重要的应用价值。
为了研究酵母菌的生理特性和生物学功能，科研人员经常需要进行酵母菌的培养操作。
本文将介绍一种常用的酵母菌培养方法。
二、材料和试剂准备1. 培养基：选择适合酵母菌生长的培养基，如YPD培养基（1%酵母粉、2%蛋白胨、2%葡萄糖）。
2. 培养器具：培养皿、试管、离心管等。
3. 酵母菌菌株：选择所需的酵母菌菌株。
三、酵母菌的分离和接种1. 从酵母菌菌株保存液中取出所需的菌株。
2. 在无菌条件下，将菌株转移到含有YPD培养基的试管中。
3. 进行适当的稀释，使培养液中的菌落数量适中。
4. 震荡培养液，使菌落均匀悬浮于培养基中。
四、酵母菌的培养条件1. 温度：酵母菌的生长温度一般为28-30摄氏度，根据不同的菌株和实验目的可以进行调整。
2. pH值：酵母菌的最适生长pH通常在5-6之间，也可以根据具体要求进行调整。
3. 培养时间：酵母菌的培养时间根据实验目的和菌株的生长速度而定，一般为24-48小时。
五、酵母菌的培养方法1. 平板培养法：将适量的酵母菌培养液均匀倒在培养皿中，待其凝固后，将所需的酵母菌菌株接种在培养基表面，然后在恰当的温度下培养一段时间，观察菌落形态和数量。
2. 液体培养法：将适量的酵母菌培养液倒入无菌的离心管中，加盖后在恰当的温度下培养一段时间，观察菌液浑浊度和细胞数量的变化。
3. 摇瓶培养法：将适量的酵母菌培养液倒入无菌的摇瓶中，盖紧盖子后在恰当的温度下进行摇床培养，可以获得大量的酵母菌菌液。
六、酵母菌的保存1. 冷冻保存：将酵母菌培养液加入等体积的甘油溶液中，混匀后分装在无菌冷冻管中，置于-80摄氏度的冷冻箱中保存。
2. 高温保存：将酵母菌培养液均匀涂布在含有蔗糖的平板培养基上，置于30-37摄氏度的恒温箱中保存。
七、实验注意事项1. 所有实验操作必须在无菌条件下进行，避免外界细菌和真菌的污染。
实验室培养酵母菌的方法
实验室培养酵母菌的方法
实验室培养酵母菌的方法如下：
1. 样品处理：对种子样品进行表面灭菌处理，并使用无菌研钵进行粉碎，然后将粉末加入到一定量的无菌水中形成原液，一般稀释到10^-6即可。
2. 酵母菌的分离：在无菌条件下，取样品稀释液微升至培养基中，使用无菌涂布器将其接种于培养基中（酵母菌常用培养基包括MEA培养基、PDA培养基、YPD培养基等），每个梯度2-3个平行，28℃培养48-72小时。
3. 纯化培养：在平行平板中选取菌株分布均匀、数量适宜的平板，挑取其中的单菌落将其以平板划线方式接种于新的MEA培养基中，28℃培养48-72小时。
然后挑取单菌落接种至新鲜的MEA斜面上与4℃进行保藏。
以上步骤仅供参考，建议咨询专业人士获取更准确的信息。
酵母双杂实验操作手册和注意事项
酵母双杂（Yeast two-hybrid）实验操作手册和注意事项一. 酵母双杂的原理1989年，Song和Field建立了第一个基于酵母的细胞内检测蛋白间相互作用的遗传系统。
很多真核生物的位点特异转录激活因子通常具有两个可分割开的结构域，即DNA特异结合域（DNA-binding domain，BD）与转录激活域（Transcriptional activation domain ，AD）。
这两个结构域各具功能，互不影响。
但一个完整的激活特定基因表达的激活因子必须同时含有这两个结构域,否则无法完成激活功能。
不同来源激活因子的BD区与AD结合后则特异地激活被BD结合的基因表达。
基于这个原理，可将两个待测蛋白分别与这两个结构域建成融合蛋白，并共表达于同一个酵母细胞内。
如果两个待测蛋白间能发生相互作用，就会通过待测蛋白的桥梁作用使AD与BD形成一个完整的转录激活因子并激活相应的报告基因表达。
通过对报告基因表型的测定可以很容易地知道待测蛋白分子间是否发生了相互作用。
酵母双杂交系统由三个部分组成：(1)与BD融合的蛋白表达载体，被表达的蛋白称诱饵蛋白(bait)。
(2)与AD融合的蛋白表达载体，被其表达的蛋白称靶蛋白(prey)。
(3)带有一个或多个报告基因的宿主菌株。
常用的报告基因有HIS3，URA3，LacZ和ADE2等。
而菌株则具有相应的缺陷型。
双杂交质粒上分别带有不同的抗性基因和营养标记基因。
这些有利于实验后期杂交质粒的鉴定与分离。
根据目前通用的系统中BD来源的不同主要分为GAL4系统和LexA系统。
后者因其BD来源于原核生物，在真核生物内缺少同源性，因此可以减少假阳性的出现。
二.所用的载体及相关信息1. pGBKT7载体的图谱和相关信息The pGBKT7 vector expresses proteins fused to amino acids 1–147 of the GAL4 DNA binding domain (DNA-BD). In yeast, fusion proteins are expressed at high levels from the constitutive ADH1promoter (PADH1); transcription is terminated by the T7 and ADH1 transcription termination signals(TT7 & ADH1). pGBKT7 also contains the T7 promoter, a c-Myc epitope tag, and a MCS. pGBKT7replicates autonomously in both E. coli and S. cerevisiae from the pUC and 2 m ori, respectively. Thevector carries the Kan r for selection in E. coli and the TRP1 nutritional marker for selection in yeast.Yeast strains containing pGBKT7 exhibit a higher transformation efficiency than strains carrying other DNA-BD domain vectors (1).b. pGADT7载体的图谱和相关信息pGADT7-T encodes a fusion of the SV40 large T-antigen (a.a. 86–708) and the GAL4 AD (a.a. 768–881). The SV40 large T DNA (GenBank LocusSV4CG) was derived from a plasmid referenced in Li & Fields (1993) and was cloned into pGADT7 using the EcoR I and Xho I sites. pGADT7-T has not been sequenced.三．实验主要流程A.需要准备的药品和设备1.两种酵母菌种(AH109,Y187)2.酵母培养所需的药品: Yeast nitrogen base without amino acidsAgar (for plates only)sterile 10×Dropout Solution单缺-T,-L(clontech公司)二缺-T/-L (clontech公司)四缺-T/-L/-Ade/-His(clontech公司)3.酵母转化所需的药品: 10×TE buffer10×LiAc40%PEGcarrier DNA4.酵母显色所需要的药品: x- -GAL5.其他仪器设备: 30℃恒温培养箱30℃摇床.水浴锅分光光度计B．DNA-BD和DN-AD fusion protein 载体的分别构建。
实验一摇床培养确定酵母菌体培养和营养条件
实验一微生物(酵母)的培养基优化(指导教师:汪文俊熊海容王海英肖新才实验员: 张继泰) 一．实验目的：掌握微生物斜面培养基、种子培养基及发酵培养基确定方法，学会对已确定菌种确定实验室发酵工艺。
二．实验原理生物量的测定方法有比浊法和直接称重法等。
由于酵母在液体深层通气发酵过程中是以均一混浊液的状态存在的，所以可以采用直接比色法进行测定。
三．仪器与试剂全恒温振荡培养箱，分光光度计、电热恒温水浴槽、天平、电炉。
试剂为葡萄糖、蔗糖、酵母浸粉、KH2PO4。
四．实验方法(1)、培养基的配制(见表1,2)表1 正交表试验设计因素水平葡萄糖蔗糖酵母膏KH2PO41 1.0 0.0 0.5 0.52 2.0 1.0 1.0 1.03 3.0 2.0 2.0 2.0表2 正交表实验方案编号葡萄糖(A) 蔗糖(B)酵母膏(C)KH2PO4（D）生物量（OD）h12h24h36h48h60h1 (1) (1) (1) (1)2 (1) (2) (2) (2)3 (1) (3) (3) (3)4 (2) (1) (2) (3)5 (2) (2) (3) (1)6 (2) (3) (1) (2)7 (3) (1) (3) (2)8 (3) (2) (1) (3)9 (3) (3) (2) (1)（2）将上述培养基配制好以后，每250 ml三角瓶装入培养基100 ml，于121℃下灭菌30 min，冷却。
（3）冷却后接种（接种量为5％），置于28℃培养箱进行培养。
（4）测OD值：将接种0 h、12 h、24 h、36 h、48 h、60 h不同时间的菌悬液摇均匀后于560nm波长、1cm比色皿中测定0D值。
比色测定时，用以未接种的培养基作空白对照，并将0D值填入表中，最终确定最佳培养基的组成及发酵时间。
五．思考题(1)比浊计数在生产实践中有何应用价值?(2)本实验为什么采用560nm波长测定酵母菌悬液的光密度？如果你在实验中需要测定大肠杆菌生长的OD值，你将如何选择波长?实验二紫外线的诱变育种(指导教师:汪文俊熊海容王海英肖新才实验员: 张继泰) 一．目的要求通过实验，观察紫外线对枯草芽孢杆菌的诱变效应，并学习物理因素诱变育种的方法。
酵母菌DNA提取方法
1.将种子液接入100mL液体YPD培养基中培养48h。
2.离心获取湿菌体，用蒸馏水多次洗涤，放在60℃烘箱中烘干备用。
3.选用Eeup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒对DNA进行提取。
（1）取50-100mg新鲜大型真菌（如蘑菇）或20mg干燥的子实体或菌丝用液氮研磨成粉末，加入1.5mL离心管中。
加入200µL Buffer Digestion 和2µLβ-巯基乙醇，再加入20µL Proteinase K液体，震荡混匀。
56℃水浴1h至细胞完全裂解。
（2）加入100µL Buffer PF，充分颠倒混匀，-20℃冰箱放置5min。
（3）室温10000rpm离心5min，将上清转移到新的1.5mL离心管中。
（4）加入200µL Buffer BD，充分颠倒混匀。
（5）加入200µL的无水乙醇，充分颠倒混匀。
（6）将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加入吸附柱中，静置2min，再10000rpm温室离心1min，倒掉收集管中的废液。
（7）将吸附柱放回收集管，加入500µL PW Solution，10000rpm离心30s倒掉收集管中的废液。
（8）将吸附柱放回收集管，加入500µL Wash Solution，10000rpm离心30s倒掉收集管中的废液。
（9）将吸附柱重新放回收集管中，于12000rpm室温离心2min，离去残留的Wash Solution。
（10）取出吸附柱，放入一个新的1.5mL离心管中，加入50µL TE Buffer静置3min，12000rpm室温离心2min，收集DNA溶液。
提取的DNA可立即进行下一步实验或-20℃保存。
4.对提取的DNA进行PCR扩增。
5.对提取到的DNA进行琼脂糖凝胶电泳实验，检测DNA的提取情况。
酵母菌实验报告
一、实验目的1. 观察酵母菌的形态特征。
2. 掌握酵母菌的培养和观察方法。
3. 了解酵母菌的繁殖方式及生长条件。
二、实验原理酵母菌是一种单细胞真核微生物，具有明显的细胞核和细胞质，个体比细菌大。
酵母菌的繁殖方式包括出芽生殖和有性生殖。
出芽生殖是酵母菌常见的繁殖方式，即在菌体的一侧长出芽体，芽体逐渐长大并从母体分离，形成新的个体。
有性生殖是通过接合产生子囊孢子。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：啤酒酵母、无菌水、无菌培养皿、无菌接种环、显微镜、载玻片、盖玻片、美蓝染液、碘液。
2. 试剂：无菌生理盐水、葡萄糖溶液、麦芽汁、CaCl2溶液。
四、实验步骤1. 酵母菌培养- 将啤酒酵母接种于无菌生理盐水中，置于28-30℃的培养箱中培养24小时。
- 取适量培养好的酵母菌，接种于麦芽汁中，继续培养24小时。
2. 制片与染色- 取少量培养好的酵母菌，滴于载玻片上，用无菌接种环轻轻涂匀。
- 在载玻片上滴一滴美蓝染液，盖上盖玻片，用吸水纸吸去多余染液。
- 用显微镜观察酵母菌的形态。
3. 酵母菌繁殖方式观察- 取适量培养好的酵母菌，滴于载玻片上，用无菌接种环轻轻涂匀。
- 在载玻片上滴一滴碘液，盖上盖玻片，用吸水纸吸去多余染液。
- 用显微镜观察酵母菌的繁殖方式。
4. 酵母菌生长条件观察- 将培养好的酵母菌分别接种于葡萄糖溶液和麦芽汁中，置于不同温度的培养箱中培养。
- 观察并记录酵母菌在不同温度下的生长情况。
五、实验结果与分析1. 酵母菌形态特征- 酵母菌呈卵圆形或椭圆形，细胞核明显，细胞质均匀。
- 通过美蓝染色，观察到酵母菌细胞核为蓝黑色，细胞质为无色。
2. 酵母菌繁殖方式- 酵母菌的繁殖方式主要为出芽生殖，即在菌体的一侧长出芽体，芽体逐渐长大并从母体分离，形成新的个体。
- 通过碘液染色，观察到酵母菌的芽体为深色。
3. 酵母菌生长条件- 酵母菌在葡萄糖溶液和麦芽汁中均能生长，但在麦芽汁中的生长速度更快。
- 酵母菌在不同温度下的生长情况不同，最适生长温度为28-30℃。
酵母实验方法
酵母实验安排准备工作：1 活化酵母的平板培养基2 摇菌用的液体培养基3 1.5ml离心管，250ml,500ml，1L三角瓶4 去离子水5 TE-LiAC，TE-LiAc-PEG,DMSO,1XTE buffer6 carrierDNA, 目的质粒7 水浴42℃，摇床，离心机等。
酵母转化实验步骤：酵母细胞的准备：1AH109 ，BD-ASR酵母平板划线，活化，30℃培养2-4天2接种1ml培养基到1.5ml离心管中，加入2-4个酵母克隆（选择直径在2-3mm的酵母克隆，培养不超过1周），充分摇晃培养基，直到看不见细胞块存在；3在250ml烧瓶中加入50ml培养基，并加入1ml酵母菌液；30℃，225-250rpm，培养稀释过的菌液18-24h；4检测OD600值，OD600=1.2 ，大于1.2时，加入培养基稀释重摇，小于1.2时，培养1-2h再检测，超过24h仍然小于1.2时，重新摇菌；5在1L的烧瓶中添加300ml培养基，然后吸取50ml的酵母菌液加入，30℃培养3h，225-250rpm；6在1000rpm下离心5min，常温下获取细胞；7除去上清液，用50ml的去离子水重新旋起细胞；8在室温1000rpm离心5min细胞液；9除去上清，并用1.5mlTE-LiAC溶液旋起细胞；感受态细胞的转化：1 carrierDNA 制备，水浴煮沸carrierDNA 20min,迅速放置在冰上冷却；2 将100ul的酵母细胞均匀分在各个离心管中，使用直径较大的离心管；3 在每个离心管中加入100ul carrier DNA；4 在每个离心管中加入100ng的目的质粒，为了双重转化，每种质粒加入200ng,使每管中质粒DNA总量达到400ng；5 加入600ul的TE-LiAc-PEG溶液到每个离心管中，并涡旋混匀；6 在30℃，200rpm，30min培养7 每管中添加70ul的DMSO，慢慢混匀；842℃水浴条件下热激样品10min；9将样品放置在冰上10min ;103000rpm离心样品10s ，收集细胞11用标准移液枪移出离心管中所有上清，如果有必要，可以移出上清后在离心机上离心几秒，移出多余的上清液；12添加0.5ml 1XTE buffer，并涡旋使细胞重悬，如果除去上清时使细胞重悬，则需要用直径较大的枪头，降低吸液的压力。
酵母菌的纯培养实验原理
酵母菌的纯培养实验原理
酵母菌的纯培养实验是通过分离单个酵母菌细胞，并将其培养在含有适当营养物质的培养基中，以获得大量的纯种菌种。
其原理包括以下几个步骤：
1.分离单个酵母菌细胞：将酵母菌培养基平板上生长的菌落通过传统的划线法或微孔过筛法等方法进行单菌分离。
2.稀释法制备适宜浓度细胞悬液：通过向含有适宜营养成分的液体培养基中加入一定浓度的单菌酵母菌悬液进行瓶内培养。
3.筛选最优液体培养基类型：在选择酵母菌的液体培养基时，需充分考虑其酵母菌生长最适宜的环境和所需营养成分。
4.瓶内培养及传代：将原始酵母菌细胞悬液放入培养瓶中进行培养，继续传代使其增殖。
同时进行基因分型分析，确认其为同一纯种菌。
5.酵母菌的鉴定与获得纯种：经过不断的筛选和传代，获得单纯无污染的酵母菌纯种，可通过形态学、生化特性鉴定、分子生物学、基因组测序等方法进行鉴定。
通过上述步骤，可成功获得大量的酵母菌纯种，在酒、面包、气泡饮料、酱油等食品工业中的应用中起到了重要的作用。
酵母菌DNA的提取
酵母DNA提取方法方法一：石英砂法1、5000rpm×5min 收集过夜培养的菌体（5ml左右），于200μL 裂解液(50 mmol/ L Tris-HCl pH 8.0 , 180 mmol/ LEDTA pH 8.0 , 1 % SDS , 现配)中，加入3/10 总体积石英砂在涡流混合器上振荡13min，每隔4min 将离心管取出用力甩几下，然后65℃水浴10min。
2、加入200μL 5mol/L KAc，冰浴8min；3、12000rpm×5min 转移上清至新的离心管中；4、加入 3 mol/L NaAc 35μl，加入异丙醇200μL混匀后冰浴8min，12000rpm×5min收集沉淀；5、200μL TE 溶解，加入RNase10μL，65℃水浴10min；6、加入200μL 氯仿－异戊醇（24:1）,抽提；7、温柔地取上清150μL ，加入20μL 3 mol/L NaAc及375μL 无水乙醇，混匀后12000rpm×8min 收集DNA；8、70% 乙醇洗涤沉淀，吹干后TE 溶解，-20℃保藏。
方法二：蜗牛酶法1. 接种于5 ml的YEPD培养基中在25℃-28℃振荡培养12-16 h。
2. 3500 rpm离心5min沉淀细胞，用1ml 的无菌水洗涤一次，再加0.5ml solution Ⅰ(1M 山梨醇，0.1M EDTA, pH=7.5)重悬。
3. 转移细胞至1.5 ml 的离心管中，加入0.1蜗牛酶(30mg/ml)溶液，37℃保温30-60min, 以获得原生质体。
4. 最大转速离心1min以沉淀细胞，用500ulsolutionⅡ(50mMTris-HCl, 20mM EDTA,pH=7.4)溶液悬浮，然后加入50μl 10% SDS, 混合65℃保温30min。
5. 加入200μl 5M 醋酸钾，放于冰上30 min。
酵母菌表面展示实验中的菌种处理和观察步骤
酵母菌表面展示实验中的菌种处理和观察步骤酵母菌表面展示实验是一种常用的实验方法，用于研究酵母菌表面展示的蛋白质或多肽。
该实验可以帮助科学家们理解酵母菌表面展示机制，并且可以应用于生物技术和医学等领域。
本文将介绍酵母菌表面展示实验中的菌种处理和观察步骤。
一、菌种处理步骤1. 高效产酶酵母菌培养：选择适合酵母菌表面展示实验的菌种，常用的有Saccharomyces cerevisiae。
首先在含有适宜培养基的培养皿中接种高效产酶酵母菌，并在恒温摇床上培养过夜。
培养条件根据实验需要进行调整，一般温度为30℃，转速为200 rpm。
2. 菌液收获与洗涤：在接种的酵母菌培养液达到适宜菌体浓度后，采用离心管将菌液离心，沉淀后将上清液倒掉。
然后用适量的洗涤缓冲液重新悬浮菌体，将菌体再次离心沉淀。
洗涤步骤的目的是去除培养基以及其他杂质。
3. 菌体浓缩：将洗涤后的菌体用适量的缓冲液重新悬浮，通过离心使菌体沉淀。
去掉上清液后，用适量的缓冲液悬浮菌体，使菌体达到所需的浓度。
通过浓缩步骤可以获得更高浓度的酵母菌悬浮液，便于后续实验的进行。
二、观察步骤1. 理化条件准备：在实验开始之前，准备好所需的显微镜和荧光染色剂。
根据需要，可能需要用特定的抗体标记酵母菌表面展示的目标蛋白质或多肽，以便观察与之的结合情况。
2. 荧光染色：根据实验需要，选择合适的荧光染色剂，如FITC（荧光同种亲和素）或荧光标记的抗体。
将这些染色剂添加到酵母菌悬浮液中，按照说明书的步骤进行染色。
染色的时间取决于荧光标记剂的性质，一般需要在室温下孵育15-30分钟。
3. 观察与图像捕捉：将染色后的酵母菌悬浮液滴在玻片上，用显微镜观察菌体的荧光信号。
使用合适的荧光滤光片组对样品进行观察，并在不同的放大倍数下捕捉图像。
4. 图像处理与分析：酵母菌表面展示的蛋白质或多肽通常以荧光信号的形式显示出来。
为了定量分析荧光信号的强度或分布，可以使用图像处理软件进行分析。
分析酵母菌发酵的实验方法
分析酵母菌发酵的实验方法酵母菌发酵是一种广泛应用于食品工业和生物医学研究领域的重要过程。
它可以转化底物为有用的产物，如乳酸、酒精、二氧化碳等。
为了探究酵母菌的发酵机制、优化酵母菌发酵过程，科学家们需要设计合理的实验方法。
以下将详细介绍酵母菌发酵的实验方法及其步骤。
实验材料和设备：1. 酵母菌：选择适合的酵母菌株，如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。
2. 营养培养基：选择适当的培养基，如液体培养基或固体培养基(琼脂糖基质)。
3. 实验容器：例如培养皿、试管、发酵罐等。
4. 温控设备：保持发酵过程中的恒定温度。
5. pH计：用于监测发酵过程中的pH值。
6. 酵母菌发酵监测设备：例如发酵曲线分析系统。
实验步骤：1. 预处理酵母菌：从冷冻培养物中选择适当数量的酵母菌，接种到含有适宜培养基的试管或培养皿中，培养于恒定温度下。
培养时间一般为24-48小时，直到酵母菌的生长进入指数增长期。
2. 制备酵母菌悬浮液：将酵母菌培养物转移到搅拌均匀的培养基中，并在适当的温度下继续培养至细胞密度达到预定值。
通过离心、冲洗和重悬的步骤，获得所需的酵母菌悬浮液。
3. 准备发酵实验样品：将合适体积的酵母菌悬浮液转移至实验容器中，可以是试管、培养皿或其他具有合适体积和通气性的容器。
加入适量的底物，例如葡萄糖或其他营养物质。
确保实验容器密封良好，以便收集产生的气体。
4. 开始发酵实验：将实验容器置于温控设备中，使温度保持在适宜的发酵温度范围内。
同时，以一定时间间隔测量和记录发酵过程中的重要参数，如产生的气体量、溶液pH值和温度变化等。
5. 分析结果：根据实验记录，绘制发酵曲线并分析发酵过程中的变化趋势。
其中，发酵曲线可绘制出产气量与时间的变化关系图，pH值和温度等参数的变化也可整合到曲线图中以进行分析。
6. 结束实验：在实验完成后，停止搅拌或通气过程，并进行相关的后处理工作。
如计算产生的底物转化率、产气速率、气体组成等。
破碎试验作业步骤
破碎试验作业步骤
细胞破碎实验
1. 培养并收集酵母菌细胞，在酵母消解酶缓冲液重悬菌体沉淀之前，测定压紧细胞的体积，以下所有步骤均在4℃进行。
2. 用1体积的玻璃珠破菌缓冲液重悬细胞。
3. 用2体积的玻璃珠破菌缓沖液与细胞混合，加4体积冰冷的酸洗玻璃珠。
4、当压紧的细胞休积＜10 ml，将细胞悬液转移至合适大小的带螺口的离心管中（悬液占离心管≤60%~70%的容积），于4℃以最大速度下振荡30~60 s，将管置于冰上放置1~2 min，重复3~5次，在显微镜下检査破细胞的程度。
5、当压紧的细胞体积＞10 ml，将细胞悬液转移到合适大小的玻璃珠搅拌容器中（建议用导热性能好的不锈钢材料）并加玻璃珠破菌缓冲液至容器的边缘，但加到容器中的缓冲液不超过1个细胞悬液的体积。
装好搅拌杆和螺盖，确保将容器中所有空气排尽（排除空气以防止起泡和蛋白质变性这一点非常重要），高速搅拌60 s，冰上放置1~2 min，重复3~5次。
6、沉淀玻璃珠，轻轻倒出上清，加入2~4体积的玻璃珠破菌缓冲液，颠倒管5~10次，待玻璃珠沉淀后轻轻倒出上清，合并上清液。
7、合并的上清液于4℃，12 000 g 离心60 min，收集上清即为抽提液。
长期贮存时，将其分成小份于液氮中快速冷冻，-80℃贮存。
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酵母菌菌体离心实验步骤
以酵母菌菌体离心实验步骤为标题，写一篇文章如下：
酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然环境中，被广泛应用于食品发酵、酿造和生物学研究等领域。
离心实验是一种常用的分离和纯化生物物质的方法，下面将介绍以酵母菌菌体离心实验步骤。
实验所需材料和仪器：
1. 酵母菌培养液：含有大量酵母菌菌体的培养液。
2. 离心管：用于离心实验的管状容器。
3. 离心机：用于离心实验的设备，能够以高速旋转离心管。
实验步骤如下：
步骤一：准备工作
1. 将离心管清洗干净，并确保没有任何杂质。
2. 用无菌技术取出适量的酵母菌培养液，注意避免外界的污染。
3. 准备好离心机，确保离心机内部的离心管是干净的。
步骤二：装样品
1. 将取出的酵母菌培养液缓慢倒入离心管中，避免产生气泡。
2. 确保离心管中液体的高度不超过离心管的容积的70%。
步骤三：离心实验
1. 将装有酵母菌培养液的离心管放入离心机中。
2. 调节离心机的转速和离心时间。
一般来说，酵母菌的离心转速为3000-5000转/分钟，离心时间为5-10分钟。
3. 启动离心机，使其以设定的速度旋转。
步骤四：离心结束
1. 离心结束后，停止离心机的运转。
2. 注意离心管内可能产生的沉淀，避免晃动或颠倒离心管。
步骤五：收集上清液
1. 将离心机中的离心管取出，并小心地将上清液倒入另一个干净的容器中。
2. 注意避免将沉淀带入上清液中。
通过以上实验步骤，我们可以将酵母菌菌体从培养液中分离出来，得到较为纯净的上清液。
离心实验通过利用离心力将悬浮在液体中的颗粒物分离出来，其原理是根据颗粒物在离心力作用下的不同沉降速度来实现分离。
在酵母菌菌体离心实验中，酵母菌菌体由于其较大的体积和密度，会向离心管底部沉积，形成沉淀，上清液中则是相对较为纯净的液体。
需要注意的是，在进行酵母菌菌体离心实验时，应注意使用无菌技术，以避免外界的污染。
此外，在实验过程中，离心机的转速和离心时间的选择也需要根据具体的实验要求和酵母菌的性质进行调整。
总结起来，酵母菌菌体离心实验是一种常用的分离和纯化生物物质的方法。
通过将酵母菌培养液进行离心，可以将菌体从液体中分离出来，得到较为纯净的上清液。
这一实验步骤简单易行，是进行酵母菌研究和应用的重要基础实验方法之一。