酵母菌的分离与纯化

酵母菌的分离与纯化

酵母菌的分离与纯化

小组组员: 一、实验目的

1.学习分离纯化酵母菌的技术与方法

2.了解培养基的配置与灭菌技术

3.增强无菌操作技术的意识

二、基本原理

从混杂的微生物群体获得只含某一种某一株微生物的过程叫做微生物分离与纯化，酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为4.5-6.0.酵母菌生长迅速，容易分离培养。马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基。此培养基是由葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、孟加拉红(玫瑰红，Rose Bengal)和链霉素等组成。其中葡萄糖主要作为碳源，蛋白胨主要作为氮源，KH2PO4和MgSO4·7H2O作为无机盐，为微生物提供钾、磷和镁离子。而孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂，对真菌无抑制作用，因而真菌在这种培养基上可以得到优势生长，从而达到分离真菌的目的。

三、实验材料及用具

1.用品：苹果、葡萄糖、琼脂、水、1%孟加拉红水溶液、马铃薯

2.设备与器材：1ml的无菌吸管、无菌培养皿等.

四、实验步骤

1、马铃薯培养基的配置

培养基成分:马铃薯40克、蔗糖（葡萄糖）4克、琼脂4克、水200毫升、 pH 自然。配置方法:

（1）配制20%马铃薯浸汁：取去皮马钓薯40g，切成小块，加水200ml.加热煮游30 min ，用纱布过滤，然后补足失水互所需体积。121Pa灭菌30min.即成20%马铃馨漫汁，贮存备用。

（2）配制时，按每100ml 马铃薯浸汁加入2g蔗糖，加热煮沸后加入4克琼脂，继续加热融化并补足失水。

（3）分装、加塞，包扎。

（4）高压蒸汽灭菌：121Pa灭菌30min

（5）将灭菌培养基放入37C°的温室中培养24-48小时，观察是否有菌落生成，以检查灭菌是否彻底。

2、倒平板：将马铃薯培养基加热融化，冷却至55--50C°时，倒平板，倒三皿

3、制备苹果悬液

（1）首先将1g苹果在研钵中磨细，放入装有10ml生理盐水和玻璃珠的100ml三角瓶中去。

（2）激烈震荡约10min,使菌体分散并悬浮与液体中。

（3）用无菌吸管吸取1ml苹果悬液注入盛有9ml生理盐水的试管中，吸取三次并混匀。

（4）再去一只无菌吸取管，从此试管中吸取1ml，注入另一盛有9ml生理盐水的试管中，取三次并混匀。

（5）同法类推制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7的各种稀释度的苹果悬液。

4、涂布

将上述培养基的5个培养基的四个平板分别标上10-3、10-4、10-5、10-6、10-7五种稀释度。取5只无菌吸管，分别从四种苹果悬液的稀释液中各取0.1ml。对号放于已标记好稀释度的平板中，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻涂布均匀。重复以上4步骤。

5、培养

将培养基平板倒置于温室中2-3d

6、挑菌落

观察培养后长出的酵母菌的单个菌落，分别挑取并接种于斜面培养基上，再培养。待菌苔长好后，检查是否有杂菌，若有则需再一次进行分离纯化，直到获得纯菌株培养物。五、实验结果记录及分析