苏丹Ⅲ染色液说明书
常用染色液的配制
一、常用染色液的配制⒈碘—碘化钾(I2-KI)溶液能将淀粉染成蓝紫色,蛋白质染成黄色,也是植物组织化学测定的重要试剂.配方:碘化钾2g ;蒸馏水300ml ;碘1g先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,待全溶解后再加碘,振荡溶解后稀释至300mL,保存在棕色玻璃瓶内.用时可将其稀释2—10倍,这样染色不致过深,效果更佳。
⒉苏丹Ⅲ(sudanⅢ或Ⅳ)能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色,是著名的脂肪染色剂。
配方:(1)苏丹III或苏丹Ⅳ干粉;95%酒精10ml ;过滤后再加入10ml甘油(2)先将苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中,再加入70%酒精50ml.(3)苏丹III 70%乙醇的饱和溶液.⒊1%醋酸洋红(aceto carmine)酸性染料,适用于压碎涂抹制片,能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色。
配方:洋红1g ;45%醋酸100ml煮沸2h左右,并随时注意补充加入蒸馏水到原含量,然后冷却过滤,加入4%铁明矾溶液1~2滴(不能多加,否则会发生沉淀),放入棕色瓶中备用.⒋改良苯芬品红染色液(Carbol fuchsine) 核染色剂。
配制步骤:先配成三种原液,再配成染色液。
原液A:3g碱性品红溶于100ml 70%酒精中。
原液B:取原液A10ml加入到90ml 5%石炭酸水溶液中。
原液C:取原液B 55ml,加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林(38%的甲醛).(原液A和原液C可长期保存,原液B限两周内使用)染色液:取C液10~20ml,加45%冰醋酸80~90ml,再加山梨醇1~,配成10%~20%浓度的石炭酸品红液,放置两周后使用,效果显著(若立即用,则着色能力差)。
适用范围:适用于植物组织压片法和涂片法,染色体着色深,保存性好,使用2~3年不变质。
山梨醇为助渗剂,兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色,但效果较差。
⒌中性红(neutral red)溶液用于染细胞中的液泡,可鉴定细胞死活。
苏丹系染色剂
苏丹黄(sudan 1)苏丹黄详细信息中文名称苏丹黄别名溶剂黄16; 2,4-二氢-5-甲基-2-苯基-4-苯偶氮基-3H-吡唑啉-3-酮英文名称 Sudan Yellow 3G = 3-Methyl-1-phenyl-4-(phenylazo)-pyrapl-5-ol英文别名 Solvent Y ellow 16CAS NO. 4314-14-1EINECS 224-330-1分子式C16H14N4O分子量 278.31物理化学性质密度 1.23 熔点155oC分子结构图[1]苏丹橙Ⅱ苏丹橙Ⅱ详细信息中文名称苏丹橙Ⅱ别名1-[(2,4-二甲苯基)偶氮]-2-萘酚; 苏丹II; 苏丹红II; 2,4-二甲基苯偶氮-2-萘酚; 1-二甲苯基偶氨-2-萘酚; 溶剂橙; 苏丹2号英文名称 Sudan II英文别名1-(2,4-Dimethylphenylazo)-2-naphthol; C.I. 12140; Solvent Orange 7; sudan ii (C.I. 12140); 1-(2,4-XYLIDYLAZO)-2-NAPHTHOL; 1-[2,4-XYLYLAZO]-2-NAPHTHOL; FA T PONCEAU; CI 12140; CI NO 12140; CALCO OIL SCARLET BL; CALCO OIL SCARLET ZBLCAS NO. 3118-97-6分子式C18H16N2O分子量 276.33风险术语R40:Possible risks of irreversible effects.;安全术语 S36/37:Wear suitable protective c lothing and gloves.;S45:In case of accident of if you feel unwell, seek medical advice immediately (show the label where possible).;苏丹染液苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ染液可用于脂肪的鉴定。
masson三色染色法
Masson三色染色液说明书【产品名称】Masson三色染色液【包装规格】货号:DC0032套组包装规格:8×20ml/盒、8×100ml/盒、8×250ml/盒【预期用途】主要用于组织中结缔组织、肌肉和胶原纤维的组织细胞学染色。
【检验原理】Masson三色染色又称马松染色,是胶原纤维染色权威而经典的技术方法,所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。
该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关:分子的大小由分子量来体现,小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织;而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织,苯胺蓝的分子量很大,染色后肌纤维呈红色,胶原纤维呈蓝色,主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
【主要组成成分】试剂组成主要成分1、Weigert铁苏木素A液苏木素2、Weigert铁苏木素B液三氯化铁3、酸性乙醇分化液乙醇4、蓝化液碳酸盐5、丽春红品红染色液丽春红、品红6、乙酸溶液乙酸7、磷钼酸溶液磷钼酸8、苯胺蓝染色液苯胺蓝【储存条件及有效期】5℃~35℃保存,原包装未开封染色液的有效期为l8个月,在有效期内的已开封染色液建议在开封后6个月内使用完,每次用后应及时拧紧瓶盖,以免挥发或变质。
【样本要求】组织片充分固定和脱蜡。
【检验方法】1、组织固定于Bouin氏固定液(另购)或Zenker氏固定液(另购)或10%中性福尔马林固定液(另购)等,流水冲洗,常规脱水包埋;2、切片常规脱蜡至水;3、取适量的Weigert铁苏木素A液和Weigert铁苏木素B液等量混合,即为Weigert铁苏木素染色液,用Weigert铁苏木素染色液染色,流水稍洗;4、酸性乙醇分化液分化数秒,流水冲洗数分钟;5、蓝化液返蓝数秒,流水冲洗数分钟;6、丽春红品红染色液染色数分钟,流水稍冲洗;7、将蒸馏水:乙酸溶液按一定的比例配制乙酸工作液,用乙酸工作液洗切片;8、磷钼酸溶液处理后,倾去玻片上磷钼酸溶液(不用水洗);9、苯胺蓝染色液复染,倾去玻片上染色液(不用水洗);10、用乙酸工作液处理切片,至切片无蓝色脱出(必要时镜下控制);11、95%乙醇迅速脱水,无水乙醇脱水数次后,二甲苯透明,中性树胶封固。
脂肪鉴定实验之苏丹Ⅲ和苏丹Ⅳ性质配制及使用方法
脂肪鉴定实验之苏丹Ⅲ和苏丹Ⅳ性质配制及使用方法前几天,有学生问我,“老师关于课本中的脂肪的检测观察实验有两种方案,其中方案一是向花生子叶制作的组织样液里滴加苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ来检测和观察,但是苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ本来就是有颜色是不是有颜色干扰,如果苏丹Ⅲ和苏丹Ⅳ本身颜色就是橘黄色和红色,那我怎么判断脂肪被染色了呢?”其实关于这个知识点,以前教书都是一笔带过,平时练习考试中也没有出现过这种类型的考题,也就没有真正的去探讨这个问题。
学生的刁钻问题就不得不让我更深入地去了解加苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ两种染料了,下面分享我从网络上整理的加苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ相关知识。
1、苏丹III是一种化学染色剂,红棕色粉末;生物染色剂,如脂肪及其类似物质染色。
主要是用于石油、机油和其他的一些工业溶剂中,目的是使其增色,也用于鞋、地板等的增光;具有致癌性,对人体的肝肾器官具有明显的毒性作用。
2、苏丹Ⅳ为深褐色,苏丹Ⅳ可用于检验脂肪(脂肪被染成红色)。
对脂肪的亲和力比苏丹III好。
从这里可以看出,两种染色剂本身的颜色和与脂肪染色后的颜色还是有区别的,所以可以利用制作的组织样液里滴加苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ来检测和观察。
3、苏丹Ⅲ和苏丹Ⅳ的配制方法:苏丹红Ⅲ配制:取0.1g苏丹Ⅲ,溶解在20ml95%酒精中。
苏丹Ⅳ溶液的配制称取0.1 g苏丹Ⅳ干粉,溶于50 mL丙酮中,再加入体积分数为70%的酒精50 mL,充分混合后即可使用。
4、什么是浮色,为什么用酒精洗?因为苏丹Ⅲ本身有颜色,它碰到脂肪后,会变成橘黄色,与遇脂肪前的颜色不同,所以要检验组织中的脂肪,就必须要除掉那些未与脂肪接触的多余的苏丹三染液,以免对检验结果造成影响。
这个浮色就是指那些没有与脂肪接触而变色的多余的苏丹三染液的颜色。
苏丹三不溶于水,易溶于酒精,所以要用酒精洗,才能把多余的苏丹三溶解并洗净。
5、为什么苏丹Ⅳ比苏丹III染色时间短?苏丹Ⅲ和苏丹Ⅳ染色时间不能太长,时间太长染色太深,反而影响观察。
Masson三色染色液G1006
Masson 三色染色液30ml+20ml*5RT产品简介:由Mallory 三色染色改造,利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色,与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。
根据组织不同的渗透性能,选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色,便可把不同组织成分显示出来。
包装内容:产品货号产品名称规格G1006-1重铬酸钾媒染剂30ml G1006-2Weigert 铁苏木素A 液20ml G1006-3Weigert 铁苏木素B 液20ml G1006-4丽春红酸性品红染液20ml G1006-5磷钼酸溶液20ml G1006-6苯胺蓝染液20ml保存条件:室温保存,有效期1年。
操作说明:1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min ,自来水洗。
2、重铬酸钾染色:切片入重铬酸钾浸泡过夜,自来水洗。
3、铁苏木素染色:铁苏木素A 液与B 液等比混合成铁苏木素染液,切片入铁苏木素3min ,自来水洗,盐酸酒精溶液分化,自来水冲洗。
4、丽春红酸性品红染色:切片入丽春红酸性品红浸染5-10min ,自来水漂洗。
5、磷钼酸染色:磷钼酸水溶液浸染1-3min 。
6、苯胺蓝染色:磷钼酸之后不用水洗,直接入苯胺蓝染液染3-6min 。
7、分化:切片用1%冰醋酸分化,两缸无水乙醇脱水。
8、透明封片:切片放入第三缸无水乙醇5min ,二甲苯5min 透明,中性树胶封片。
9、显微镜镜检,图像采集分析。
染色结果:胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色。
弹力纤维呈棕色。
肌纤维、纤维素和红细胞染红色。
细胞核染蓝黑色。
G 1006注意事项:1、Weigert铁苏木素分A、B两液,临用前将两液等比例混合使用。
不宜预先混合,否则容易氧化沉淀而失去染色力。
2、重铬酸钾染完后水洗要稍快,切片洗干净即可。
3、根据切片的数量对铁苏木素染液进行更换,也可以现配现用;4、丽春红的染色程度要控制好,胶原部分不能是红色或者太红,会影响后续苯胺蓝的着色;5、冰醋酸分化苯胺蓝的过程中,若是分化过度,胶原蓝色太浅,若分化不足,易与丽春红的颜色叠加呈紫蓝色。
脂肪鉴定 脂类细胞化学(苏丹Ⅲ染色法) 实验报告
细胞生物学实验报告脂类细胞化学(苏丹Ⅲ染色法)1.实验目的:用苏丹Ⅲ染液对小鼠的肠系膜细胞染色,观察细胞颜色,掌握苏丹Ⅲ染液的染色方法.2.实验用品:(1)仪器及器材:显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管(2)实验药品:蒸馏水、甲醛钙溶液、70%乙醇水溶液、苏丹Ⅲ染液(3)实验材料:小鼠3.实验原理:(1)由脂肪酸和醇作用生成的酯及其衍生物统称为脂类,这是一类一般不溶于水而溶于脂溶性溶剂的化合物.脂类是机体内的一类有机大分子物质,它包括范围很广,大体上可以分为类脂和油脂两大类。
类脂包括磷脂(phospholipids),糖脂(glycolipid)和胆固醇及其酯(cholesterol and cholesterol ester)三类。
而油脂可以分为常温下常温液态的油和常温下固态的脂肪两类.这几种脂类化学结构有很大差异,生理功能各不相同.其共同物理性质是不溶于水而溶于有机溶剂,在水中可相互聚集形成内部疏水的聚集体。
(2)在固定细胞时,通常使用脂溶性固定液。
然而,鉴定的材料是脂肪时,脂溶性的固定液会溶解脂肪,致使把切片放到显微镜下观察时,观察不到被染色的脂肪,只能看到脂肪细胞中有很大的空洞。
最好的固定材料是甲醛类的固定液.如医学上保存尸体采用的是福尔马林,即40%的甲醛水溶液,本次实验采用的则是甲醛钙溶液。
(3)光学显微镜的切片多是石蜡切片.在熔接石蜡时,需要用到脂溶性溶剂,而脂溶性溶剂会溶解细胞中的脂肪,因此本次实验不可采用石蜡切片。
但是锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等有机溶剂,可以采用石蜡切片.(4)制作切片有多种方法,如冰冻切片、明胶包埋冰冻切片、本次实验采用的是操作简单的铺片法。
(5)脂类染色的原理是,染料溶于脂类显色。
选择溶剂时应注意,溶剂必须既溶解的染料,又不溶解掉脂类。
4.实验步骤:(1)用断头法处死小鼠,置于解剖盘中。
剪开腹腔,用镊子提起小肠,使盖玻片紧贴于肠系膜.用剪子将连同盖玻片和其上粘的肠系膜剪下,反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上,固定15分钟,(2)吸蒸馏水滴于载玻片、载玻片之间冲洗,用滴管不断吸取液体以去除固定液.(3)用70%的乙醇水溶液代替蒸馏水重复上一步骤,进行冲洗。
Masson三色染色液使用说明
Masson三色染色液使用说明规格:7×50ml/7×100ml有效期:12个月有效产品简介:结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维:胶原纤维、网状纤维、弹力纤维、而胶原纤维(collagen fiber)是分布最广、含量最多的一种纤维。
Masson三色染色又称马松染色,是结缔组织染色中最经典的一种方法,是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。
所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。
该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关:分子的大小由分子量来体现,小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织,而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。
然而,淡绿或苯胺蓝的分子量很大,因此Masson染色后肌纤维呈红色,胶原纤维呈绿色或蓝色,主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
Masson试剂盒的特点:◆染色稳定;◆分化时间短,1-2秒;◆色彩清楚鲜艳;◆使用范围广,适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色;◆所染切片保存时间长且不易褪色。
产品组成:试剂(B):酸性乙醇分化液50ml100ml RT 试剂(C):Masson蓝化液50ml100ml RT 试剂(D):丽春红品红染色液50ml100ml RT避光试剂(E):弱酸溶液50ml100ml RT试剂(F):磷钼酸溶液50ml100ml RT避光试剂(G):苯胺蓝染色液50ml100ml RT避光使用说明书1份自备材料:固定液:选用甲醛升汞或甲醛盐溶液、蒸馏水、系列乙醇、二甲苯、染缸操作步骤(仅供参考):1、切片常规脱蜡至水。
2、Weigert铁苏木素染色液染色5min-10min。
3、酸性乙醇分化液分化、水洗。
4、Masson蓝化液返蓝、水洗。
5、蒸馏水洗1min。
6、丽春红品红染色液染色5-10min。
7、在上述操作过程中按蒸馏水:弱酸溶液=2:1比例配置弱酸工作液,用弱酸工作液洗1min。
8、磷钼酸溶液洗1-2min9、用配置好的弱酸工作液洗1min。
第四次实验 脂类化学—苏丹III染色法
苏丹染料是一种脂溶性染料,易溶于乙醇但更易溶于脂肪,所以当含有脂肪的标本与苏丹染料接触时,苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂肪结构中而使其显色。
脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂,丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂,这样可以染色大的脂肪积累块,但是小的脂肪滴会溶解。60%异丙醇当溶剂,可以减轻脂类的溶解。丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质,但是能溶解染料,是比较理想的溶剂。用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀,防止蒸发,因蒸发会引起染料在材料中积累。常用相同溶剂洗掉多余的染料,然后再用水洗,可以防止多余的染料在材料中沉淀。
但从图中也可看出,脂肪细胞多层叠在一起,且染色并不充分,细胞没有呈现出明显的桔红色,而是一种呈一种偏淡黄的颜色。造成这种现象可能的原因为:铺片时,没有将肠系膜铺的足够充分,导致脂肪细胞重叠,影响观察,进而影响了染色,因为细胞层数多,染液很难进入到细胞中,30min后,细胞依然没有呈现出桔红色。
在铺片时应掌握好力度,若用力过大,则肠系膜容易被撕破,铺片不成功;若用力过小,则细胞不能被铺呈单层,影响染色及观察。
3.材料:小鼠
【实验原理】
脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质,根据其性质可以分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。很多细胞都含有脂肪,游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内,比较显著的如肝细胞。脂肪小滴可以集合,将细胞质及细胞核挤到一旁,如脂肪细胞。如果组织中脂肪过多,将会影响其正常功能。如脂肪肝。
实验结果图示脂肪染色局部放大图分析与讨论脂肪细胞血管脂肪细胞血管结果分析由以上三幅图可看出染色较为成功可以观察到脂肪细胞呈圆球形内充满橘色脂类物质并可以观察到小鼠肠系膜上脂肪细胞附着的血管
脂类化学—苏丹Ⅲ染色法2011年3月31日
第四次实验 脂类化学—苏丹III染色法
在铺片时应掌握好力度,若用力过大,则肠系膜容易被撕破,铺片不成功;若用力过小,则细胞不能被铺呈单层,影响染色及观察。
【实验步骤】
1、断头法处死小鼠,置于解剖盘中,剪开腹腔,用镊子提起小肠,将盖玻片紧贴于肠系膜,用剪刀连同盖玻片和其上粘附的肠系膜剪下,反扣与载玻片上,由盖玻片一边滴入甲醛,使其渗入盖玻片与载玻片间的空隙里,固定20min。
2、吸蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗,用滴管不断吸去液体,以除去固定液。
3、用70%乙醇溶液代替蒸馏水重复步骤2的操作,再进行一次冲洗。
苏丹染料是偶氮染料,它对脂类的显示是一种简单的物理变化。
苏丹染料是一种脂溶性染料,易溶于乙醇但更易溶于脂肪,所以当含有脂肪的标本与苏丹染料接触时,苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂肪结构中而使其显色。
脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂,丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂,这样可以染色大的脂肪积累块,但是小的脂肪滴会溶解。60%异丙醇当溶剂,可以减轻脂类的溶解。丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质,但是能溶解染料,是比较理想的溶剂。用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀,防止蒸发,因蒸发会引起染料在材料中积累。常用相同溶剂洗掉多余的染料,然后再用水洗,可以防止多余的染料在材料中沉淀。
㈡实验中注意事项有:
1.在抓握小鼠时,应迅速掐住其两耳之间的皮肤,使其头部不可扭动,并用同一只手掐住其背部至尾巴的皮肤,使小鼠整个腹部皮肤紧绷,不能反击。
粪便苏丹Ⅲ染色检查
粪便苏丹Ⅲ染色检查简介粪便检查是医学临床诊断中常用的一种检查方法,通过对患者的粪便样本进行染色观察,可以帮助医生判断患者的肠道健康状况。
粪便苏丹Ⅲ染色检查是其中的一种检查方法,具有较高的特异性和敏感性,常用于检测肠道感染和炎症等疾病。
检查原理粪便苏丹Ⅲ染色检查是通过特殊染色方法将粪便样本中的脂质类物质染色,进而观察细胞结构和细胞内脂质沉积情况。
苏丹Ⅲ染色是一种脂类颗粒染色方法,能够使细胞内的脂质颗粒呈现红色或橙色,从而帮助医生判断细胞内脂质含量的丰富程度。
检查步骤1.采集粪便样本:在患者排便后,用无菌容器收集新鲜的粪便样本。
2.制备涂片:取少量粪便样本涂布在载玻片上,待干燥后固定。
3.苏丹Ⅲ染色:将固定的载玻片依次浸入苏丹Ⅲ染色溶液中,定时染色。
4.脱色:将染色后的载玻片在适当的脱色液中脱色。
5.干燥:在通风干燥处晾干载玻片。
6.镜检:在显微镜下观察载玻片,观察粪便细胞的染色情况及脂质颗粒的分布。
检查结果分析1.正常情况下,粪便细胞内脂质颗粒很少,呈现淡红色或橙色。
2.异常情况下,粪便中脂质颗粒增多,呈现较深的红色或橙色。
这可能是由于肠道感染、炎症或其他疾病引起的细胞内脂质变化。
应用领域粪便苏丹Ⅲ染色检查主要应用于以下领域:•检测肠道感染性疾病,如细菌性痢疾、阿米巴肠病等。
•评估炎症性肠病,如溃疡性结肠炎、克罗恩病等。
•判断肠道吸收功能,如脂肪吸收障碍等。
注意事项1.采集样本应避免杂质和尿液等其他物质的污染。
2.染色操作应按照标准操作规程进行,避免染色不均匀或过度染色。
3.检查结果需结合临床病史和其他检查结果进行综合分析,不能单凭染色结果做出诊断。
结语粪便苏丹Ⅲ染色检查是一种简单而有效的肠道检查方法,对于一些肠道疾病的筛查和诊断具有重要意义。
医务人员在使用该检查方法时应掌握操作技巧,准确解读检查结果,从而提高检查的准确性和临床应用价值。
常用染色液的配制
常用染色液的配制1.吕氏(Loefflev)美蓝染色液A液:2%美蓝(Methylene blue)95%酒精溶液B液:10%KOH溶液取A液30ml、B液0.1ml与100ml蒸馏水混合。
2.石炭酸复红染色液A液:4%碱性复红(basic fuchsin)95%酒精溶液将碱性复红在研钵中研磨后,逐渐加入95%酒精,继续研磨使其溶解、配成A液。
B液:5%石炭酸溶液取A液10ml、B液90ml混合即可。
一般可将此溶液稀释5-10倍使用。
但稀释液易变质失效,一次不宜多配。
3.革兰氏(gram)染色液(1)草酸铵结晶紫染液:A液:1%结晶紫(Crystal violet)95%酒精溶液B液:1%草酸铵(Ammonium oxalate)溶液取A液20mlB液80ml,静置48/小时后使用。
(2)路哥氏(Lugol)碘液:碘片1.0g、碘化钾2.0g、蒸馏水300ml先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液另,待碘全部溶解后,加够水即成。
(3)95%酒精溶液(4)蕃红(沙黄)复染液:2.5%蕃红(Safranlne O)95%酒精溶液。
取此液10ml与90ml蒸馏水混匀即成。
4.芽孢染色液(1)5%孔雀绿(Malachite green)溶液。
(2)0.5%蕃红溶液。
(3)苯酚品红溶液称取11g碱性品红溶于100ml无水酒精中。
再取上述溶液10ml与100ml 5%的苯酚溶液混合,过滤备用。
(4)黑色素(nigrosin)溶液10%黑色素溶液,置沸水浴中30min后,滤纸过滤二次,补加水到100ml, 然后加入40%甲醛0.5%(v/v)作防腐剂。
5.荚膜染色液(1)黑色素水溶液将黑色素在蒸馏水中煮沸5min,配成5%溶液,然后加入40%甲醛0.5%(v/v)作防腐剂。
(2)蕃红染色液与革兰氏染色液中的蕃红复染液相同。
6.鞭毛染色液A液:单宁酸5.0g、FeC131.5g、蒸馏水100ml,福尔马林(15%)2.0ml、NaOH(1%)1.0ml。
实验报告 脂类的化学——苏丹三染色
姓名 xxxx 班级 xxxxxx 同组人 xxxxxxxx 科目细胞生物学实验题目脂类的化学——苏丹Ш染色组别第2组一.实验目的1.熟悉脂类的显示技术。
2.了解脂类在细胞中的分布。
二.实验原理脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质,根据其性质可以分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。
很多细胞都含有脂肪,游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内,比较显著的如肝细胞。
脂肪小滴可以集合,将细胞质及细胞核挤到一旁,如脂肪细胞。
脂肪不溶于水,易溶于浓乙醇、苯、氯仿和乙醚等,因此制作脂类标本一般不用石蜡切片,而用冰冻切片或者铺片法以保存脂类,固定多用甲醛类固定液。
其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。
脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂,丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂,这样可以染色大的脂肪积累块,但是小的脂肪滴会溶解。
60%异丙醇当溶剂,可以减轻脂类的溶解。
丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质,但是能溶解染料,是比较理想的溶剂。
用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀,防止蒸发,因蒸发会引起染料在材料中积累。
常用相同溶剂洗掉多余的染料,然后再用水洗,可以防止多余的染料在材料中沉淀。
用锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等类似的液体,可用于石蜡切片,但是脂肪的标本一般不用石蜡切片或火棉胶包埋,而用如下方法:冰冻切片,明胶包埋冰冻切片,铺片法。
本实验中使用的脂溶性染料显示法利用苏丹染料中的苏丹III、苏丹IV或者苏丹黑等溶于脂类,而使脂类显色的原理显示脂类,使用时,要注意选择溶剂,要求既要溶解苏丹染料,又不溶掉脂肪。
苏丹染料是偶氮染料,它对脂类的显示是一种简单的物理变化。
苏丹染料是一种脂溶性染料,易溶于乙醇但更易溶于脂肪。
当它与含有脂类的标本接触时,苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂结构中使其显色。
三.实验仪器及试剂1.仪器解剖盘,解剖剪,镊子,盖玻片,载玻片,显微镜,胶头滴管2.试剂苏丹Ш染液,甲醛钙溶液,70%乙醇溶液,蒸馏水3.材料小白鼠一只四.实验步骤1.断头法处死小鼠,置于解剖盘中。
苏丹Ⅲ染色
姓名:学号:201000232---学院:生命科学学院班级:临床医学七年制四班实验名称:脂类细胞化学-------苏丹Ⅲ染色实验目的:了解脂类染色原理,操作步骤及脂类标本制片原则。
实验原理:脂类包括的范围很广,有单纯脂、复合脂、衍生物等,脂肪依其性质可分中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、髓磷脂以及其他类型脂质。
通常,各种脂与类脂质在体内不是单独存在,是以某种程度混合存在。
此外,脂肪与类脂质和蛋白质结合时,往往不易显出,但用重铬酸钾、升汞、硝酸钻或硝酸铀氧化组织块或切片,可以显现出脂肪及类脂类。
脂类不溶于水,易溶于酒精、苯、乙醚、氯仿,因此脂肪标本的制作,需用不含酒精或不能溶脂的液体固定,一般常用甲醛类固定剂。
用锇酸固定的脂肪不溶与无水乙醇、二甲苯等类似的液体,可用于石蜡切片。
但是脂肪的标本一般不用石蜡切片或火棉胶包埋,而用如下方法:冰冻切片明胶包埋冰冻切片铺片发脂溶性燃料有:苏丹燃料中的苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ(猩红)、苏丹黑实验材料:小白鼠一只,苏丹Ⅲ染液,70%的乙醇溶液,蒸馏水,甲醛钙,镊子两个,剪刀一把,解剖盘。
实验步骤:1、断头法处死小鼠,并置于解剖盘中。
剪开腹腔,用镊子提取小肠将盖玻片紧贴于肠柔膜,用剪刀连同盖玻片和其上粘的肠柔膜取下,反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上,固定20分钟。
2、吸取蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗,用滴管不断吸去液体,以去除固定液。
3、用70%的乙醇溶液代替蒸馏水重复与步骤2的操作,再进行一次冲洗。
4、用苏丹Ⅲ染液染色30分钟。
5、吸取溢出的染液擦净盖玻片的表面和周边,在显微镜下观察。
实验结果:脂肪细胞是圆球型,内充满橘红色脂类物质,。
细胞核呈指环状靠细胞边缘。
注意事项:1、染料溶于脂类而使脂类显色,使用时注意选样溶剂,要求既要溶解(苏丹)燃料,又不溶掉脂类。
2、找肠系膜时应尽量小心,以免将肠系膜扯破。
3、制作装片时尽量用盖玻片撑开肠系膜。
苏丹三染色
苏丹三染色一)实验目的:1)了解小鼠肠系膜的剪取方法,熟悉小鼠结构。
2)熟悉并掌握苏丹三染色的原理及其步骤。
二)实验原理:脂肪和苏丹染液有比较强的亲和力,苏丹3遇脂肪变橘黄色。
(即萃取原理)苏丹Ⅲ是弱酸性染料,呈红色粉末状,易溶于脂肪和酒精(溶解度为0.15%)。
苏丹Ⅲ是脂肪染色剂。
适合用于生物脂肪材料的鉴定,可在光学显微镜下看到被染成橘黄色的小粒。
苏丹是鉴别脂肪的染液,由NAOH CU(SO)4组成。
三)实验试剂及器材:1、器材:镊子两把显微镜托盘一个剪刀一个把滴管一支2、试剂:苏丹三染液蒸馏水70%乙醇四)实验步骤:1、断头法处死小鼠,置于解剖盘中,剪开腹腔,用镊子提起小肠将盖玻片紧贴于肠系膜,用剪刀连同盖玻片和其上粘的肠系膜取下,反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上,固定20min。
2、用吸管吸取蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗掉甲醛钙溶液。
3、用70%乙醇溶液代替蒸馏水重复步骤二的操作,冲洗。
4、滴加苏丹三于盖玻片上,染色30min。
5、吸去载玻片上溢出的染液,擦净载玻片表面及周边,显微镜观察。
五)实验结果:脂肪细胞呈圆球形,内充满橘黄色之类物质,细胞外液有分散的橘黄色的圆脂肪滴。
如下图所示:放大典型的油煎蛋形,黄色的是油脂粒,周围的是细胞质。
六)结果分析:结果分析脂肪细胞变为橘黄色苏丹三遇脂肪变为橘黄色细胞染色效果较为明显染色时间充足,细胞被染液浸泡紧密。
细胞内圆圆的黄色物质脂肪滴遇苏丹三变为橘黄色七)注意事项:1、截取小鼠肠系膜时最好反扣载玻片,这样不易破坏肠系膜。
2、截取好的肠系膜要减去多余的肠管,以防干扰观察。
3、观察前将多余染液除去,排除干扰,易于观察。
八)实验总结;1、在染色过程中,苏丹三脂溶性易穿过细胞膜,进入脂肪细胞内与脂肪反应。
2、因小鼠肠系膜细胞上含有脂肪细胞,且肠系膜较薄,易于观察,所以在做小鼠的脂肪细胞苏丹三染色试验中,取小鼠肠系膜为染色对象。
百度文库-苏丹三染色液说明书
广州市外显子生物技术有限公司Http//苏丹Ⅲ染色液产品说明:脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称,其共同的物理特性是不溶于水,易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。
人体的脂肪主要有两种:1、储存脂肪,如中性脂肪,主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。
2、结构脂肪,如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等),主要分布于细胞内。
中性脂肪是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类,呈中性。
中性脂肪是储存能量的方式之一,在氧化时释放出能量。
在正常情况下,除脂肪细胞外,其他细胞在光学显微镜下几乎看不到脂滴,如果细胞质内出现大量脂滴即为脂肪变性,常见于肝细胞、心肌细胞、肾曲管上皮细胞等。
中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。
苏丹染料脂质染色的机理一般认为纯属物理学的脂溶作用和吸附作用。
苏丹类染料由于在脂质中的溶解度大于在有机溶剂的溶解度,所以染色时染料便从染液中转移到被染的脂质中去,使脂质呈现出染液的颜色。
产品组成:货号产品规格储存条件S-1524苏丹Ⅲ染色液50ml RT避光Harris苏木素染色液50ml RT避光-- 说明书1份实验前说明:1、要先做预实验,掌握基本操作。
2、石蜡切片不可用于脂肪染色,如果做脂肪组织冰冻切片,冰冻温度比普通要低,切片厚度加厚一般为6-10um 。
过程说明:1.新鲜组织低温切片,一般-20℃~-25℃,如标本为脂肪瘤,应调节至-30℃。
2.冰冻切片5-10um(6~8um为佳),贴于载玻片上。
3.滴入70%乙醇20s-30s,4.甩掉70%乙醇,放入苏丹Ⅲ染色液中,37℃烘箱10-20分钟。
5.吸取少量70%乙醇冲洗标本。
水洗。
6. Harris苏木素染核2-3分钟,返蓝,水洗,甘油明胶封片。
染色结果:肝组织×400结果判定:脂肪呈猩红色,细胞核呈蓝色。
苏丹Ⅲ染色液
苏丹Ⅲ染色液
简介: 中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑 B、油红 O 法等。苏丹染料
脂质染色的机理一般认 为纯属物理学的脂 溶作用和吸附作 用。苏丹类染料 由于在脂质中的 溶解度大于在有机溶剂 的溶解度,所以染 色时染料便从染 液中转移到被染 的脂质中去,使 脂质呈现出染液的颜色 。苏丹Ⅲ染色液主 要用于显示组织 器官的脂肪变性 和类脂质的异常 沉着,常发生于肝、肾 、心等实质脏器的 脂肪变性,细胞 内出现多数中性 脂肪滴;鉴别和 诊断脂肪组织中所发生的肿瘤及其性质。
组成:
名称
编号 DL0005 Storage
3×50ml
试剂(A): Mayer 苏木素染色液
50ml RT 避光
试剂(B): 苏丹Ⅲ分化液
50ml RT
试剂(C): 苏丹Ⅲ染色液
50ml RT 避光
使用说明书
1份
操作步骤(仅供参考):
1、 新鲜组织低温切片,一般-20℃~-25℃。如样本为脂肪瘤,应调节至-30℃。 2、 冰冻切片 6~15μm(6~8μm 为佳),贴于载玻片上。 3、 蒸馏水稍洗。 4、 入 Mayer 苏木素染色液复染核。 5、 自来水洗后,苏丹Ⅲ分化液分化数秒,流水洗至核为蓝色。 6、 蒸馏水冲洗后,入 70%乙醇稍微浸洗一下。 7、 入苏丹Ⅲ染色液浸染。 8、 70%乙醇分化数秒,自来水洗。 9、 用滤纸将切片及周围的水分吸去,让其稍微干燥。 10、 甘油明胶封固。
染色结果:
中性脂肪 细胞核
Байду номын сангаас
橘红色 淡蓝色
注意事项:
北京雷根生物技术有限公司
1、 标本丌宜采用含有乙醇的固定液、也丌宜用石蜡切片,需用冰冻切片。如需固定应采用 10%中性福尔马林固定液或 10%甲醛-钙液。
Masson三色染色液染色步骤及注意事项
Masson三色染色液染色步骤及注意事项步骤一:预处理1. 切片:将需要染色的组织标本切成厚度约为5um的切片,将切片均匀地放置在已经预先烘干和标记好的玻片上。
2.固定:用10%中性缓冲福尔马林固定切片,固定时间约为24小时。
步骤二:染色1. 染色剂的准备:将Masson三色染色液购买回来后,根据品牌推荐比例稀释至适当浓度。
不同品牌染色液稀释比例可能有所不同,因此以具体品牌的说明为准。
2.染色操作:(1)将切片放入染色盒中,并将染色盒放入水浴中加热,温度为60-70摄氏度,时间为20-30分钟。
(2)将加热后的染色盒取出,用水冲洗2-3分钟,直至明显的污染物被冲走。
(3)将切片置于70%酒精中,时间为5分钟。
(4)在20%盐酸酒精中浸泡1-2秒钟,然后立即将切片漂洗至酸性的第一盐酸酒精。
(5)在酸性的第一盐酸酒精中浸泡30秒至1分钟,然后漂洗至酸性的第二盐酸酒精中。
(6)在酸性的第二盐酸酒精中浸泡30秒至1分钟,然后漂洗至蒸馏水中。
(7)转移到可溶性亮蓝GR中染色5分钟。
(8)快速漂洗后,放入蒸馏水中清洗1-2分钟。
(9)再次转移到1%醋酸中染色1分钟。
(10)最后,在6%石蜡溶液中浸泡5-10分钟。
步骤三:封片1.脱水:将切片放入95%乙醇中,时间为1-2分钟,然后放入绝对乙醇脱水2-3分钟。
2.渗透:将切片放入二氯甲烷中,时间为5分钟,再在房温下放置3-5分钟以充分渗透。
3. 封片:将切片放入500-1000ml锡兰红封片剂中,时间为1-2分钟,然后将切片转到盖玻片上,将封片剂挤满,盖上玻片,压平后放在60摄氏度的烘箱中加热2-3小时。
注意事项:1.操作中应注意个人防护,佩戴手套和口罩,避免接触有害物质。
2.染色过程中要严格控制温度和时间,避免染色过程中出现偏差。
3.在脱水和封片过程中要注意将切片完全浸透,防止切片变形或脱落。
4.染色溶液和液体处理过程中,应注意防止溅溢和污染,保持操作环境清洁。
脂类细胞化学—苏丹Ⅲ染色
山东大学实验报告2011年4月13日姓名张行润系年级2009级生科4班学号200900140177 同组者张少华科目细胞生物学实验题目脂类细胞化学—苏丹Ⅲ染色仪器编号105 一、实验目的熟悉并掌握苏丹Ⅲ染色的原理及步骤二、实验原理脂肪是由甘油和脂肪酸组成的三酰甘油酯,其中甘油的分子比较简单,而脂肪酸的种类和长短却不相同。
脂肪酸分三大类:饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸。
脂肪不溶于水而易溶于乙醚、氯仿等非极性溶剂中的物质脂肪细胞体积大,一般核扁,在边缘,细胞呈空泡状。
脂肪细胞常见的有两类:单泡脂肪细胞〔左〕和多泡脂肪细胞〔右〕图1:两类脂肪细胞结构示意图单泡脂肪细胞,细胞中央有一大脂滴,胞质呈薄层,位于细胞周缘,包绕脂滴。
多泡脂肪细胞内散在许多小脂滴,线粒体大而丰富,核圆形,位于细胞中央。
脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料,最常用的有苏丹Ⅲ,苏丹Ⅳ,苏丹黑及油红O 等。
脂肪被染色,实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。
苏丹Ⅲ(Sudan Ⅲ) 能使木栓化,角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成橙黄色。
组织中脂质在液态或半液态时,对苏丹染料着色效果最好。
根据这一原理,适当提高温度(37℃-60℃)对组织切片染色效果是有好处的。
三、实验器材解剖盘、解剖剪、镊子、盖玻片、载玻片、光学显微镜等四、实验材料甲醛钙溶液、70%乙醇溶液、蒸馏水、苏丹三染液、小鼠一只等五、实验操作1.断头法处死小鼠,置于解剖盘中,剪开腹腔,用镊子提起小肠将盖玻片紧贴于肠系膜,用解剖剪连同盖玻片和其上黏着的肠系膜一同取下,反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上,固定20min;吸蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗,用滴管不断吸去液体以除去固定液; 3.用70%乙醇溶液代替蒸馏水重复步骤2的操作,再进行一次冲洗; 4.用苏丹三染色30min ; 5. 吸去溢出染液,擦净盖玻片表面及周边,放置于显微镜下观察。
六、 注意事项1. 肠系膜的选取:最好选带有血管的且周围脂肪组织不要太厚太多的肠系膜,因为血管周围会有脂肪组织给予保护,易于观察;而太多的脂肪组织致使显微镜下脂肪细胞叠加,给观察带来困难;2. 肠系膜比较薄因而比较容易破碎,在用镊子选取的过程中要小心,以免将肠系膜扯破,制片时应用载玻片和盖玻片将肠系膜完全撑开,便于染色等操作和观察;3. 染色时间不宜太短,因为时间太短导致染色不明显七、 实验结果(一) 实验结果脂肪细胞呈圆球形,内充满橘红色脂类物质,细胞外也有散在的橘红色圆脂肪滴,脂肪细胞中的脂质和脂肪滴中的脂质有明显的区别:前者有一定结构,比较规则;后者没有规则的结构,显得比较明亮,形状一般为圆球形,比较集中。
实验三 苏丹
实验三苏丹Ⅲ染色法染小鼠肠系膜脂肪细胞【实验目的】1、熟悉脂肪显示技术,了解脂肪在脂肪细胞中的分布2、用苏丹Ⅲ染液对小鼠的肠系膜细胞染色,观察细胞颜色,掌握苏丹Ⅲ染液的染色方法。
【实验原理】脂类包括的范围很广,有单纯脂、复合脂、衍生脂等,脂肪依其性质可分中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、髓磷脂以及其他类脂质。
通常,各种脂与类脂质在体内不是单独存在,是以某种程度混合存在。
脂肪于类脂质和蛋白质结合时,往往不易显出,但用重铬酸钾、升汞、硝酸钴或硝酸铀氧化组织块或切片,可以显现出脂肪及类脂类。
脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质,根据其性质可分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。
很多细胞都含有脂肪,游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内,比较显著的如肝细胞。
脂肪小滴可以集合,将细胞质及细胞核挤到一旁,如脂肪细胞。
脂类不溶于水,易溶于酒精、苯、乙醚、氯仿。
因此脂肪标本的制作,需要不含酒精或不能溶脂的液体固定。
一般常用甲醛类固定剂。
其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。
脂溶性染料显示法即采用苏丹染料中的苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ或苏丹黑等溶于脂类使脂类显色的原理显示脂类,使用时,注意选择溶剂,要求既要溶解苏丹染料,又不溶掉脂肪。
其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。
脂溶性染料显示法即采用苏丹染料中的苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ或苏丹黑等溶于脂类使脂类显色的原理显示脂类,使用时,注意选择溶剂,要求既要溶解苏丹染料,又不溶掉脂肪。
苏丹Ⅲ的70%酒精饱和液或丙酮和70%酒精等量饱和液,可将脂肪染为橙红色。
用锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等类似的液体,可用于石蜡切片。
脂肪标本一般不用石蜡切片或火胶棉包埋,而用如下方法。
冰冻切片,明胶包埋冰冻切片,铺片法。
脂肪细胞主要是贮存脂肪,而脂肪组织主要是由脂肪细胞组成,从而贮存能量。
主要由两种脂肪组织,白色脂肪组织(WAT)和棕色脂肪组织(BAT),它们是由两种不同的脂肪细胞组成,在小鼠的肠系膜中主要是WAT。
苏丹iii染液成分
苏丹III染液成分一、引言苏丹III染液是一种常用的组织染色剂,广泛应用于医学、生物学和病理学领域。
本文将对苏丹III染液的成分进行详细的探讨,包括其化学组成、制备方法以及应用领域等方面。
二、化学组成苏丹III染液的主要成分是苏丹III染料,它属于亚硝基苯胺类染料。
苏丹III染料的化学结构为苯胺基团与亚硝基团的结合物,其化学式为C22H16N4O3。
除了苏丹III染料外,苏丹III染液中还包含了一些辅助成分,如染液稳定剂、溶剂和pH调节剂等。
这些辅助成分的添加可以提高染液的稳定性和染色效果。
三、制备方法苏丹III染液的制备方法相对简单,一般可以按照以下步骤进行:1.准备苏丹III染料:将苏丹III染料溶解于适量的溶剂中,如乙醇或甲醇,并搅拌均匀,得到苏丹III染料溶液。
2.添加辅助成分:将染液稳定剂、溶剂和pH调节剂等辅助成分逐步加入苏丹III染料溶液中,并搅拌均匀,得到最终的苏丹III染液。
3.过滤和灭菌:为了去除杂质和微生物,可以将苏丹III染液进行过滤和灭菌处理,以保证染液的纯净度和无菌性。
4.包装和储存:将制备好的苏丹III染液进行适当的包装和储存,以防止其受到外界环境的影响。
四、应用领域苏丹III染液在医学、生物学和病理学等领域有着广泛的应用。
下面将分别介绍其在这些领域中的应用。
4.1 医学应用在医学领域,苏丹III染液常用于组织切片的染色。
它可以染色细胞核和细胞质,使组织切片在显微镜下更清晰地展示细胞结构和组织形态。
这对于医生进行病理诊断和研究具有重要意义。
4.2 生物学应用在生物学研究中,苏丹III染液可用于染色细胞内的脂质。
脂质是细胞内常见的有机化合物,苏丹III染液可以与脂质结合形成特定的染色物质,从而帮助研究人员观察和分析细胞内脂质的分布和含量。
4.3 病理学应用在病理学领域,苏丹III染液可用于染色肿瘤组织。
由于肿瘤组织中脂质含量较高,苏丹III染液可以与肿瘤细胞内的脂质结合,使肿瘤组织呈现红色或橙色,有助于病理医生对肿瘤的定性和定量分析。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
苏丹Ⅲ染色液说明书
货号:G1510
规格:100ml/500ml
保存:室温避光保存,有效期12个月。
产品说明:
脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称,其共同的物理特性是不溶于水,易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。
人体的脂肪主要有两种:1、储存脂肪,如中性脂肪,主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。
2、结构脂肪,如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等),主要分布于细胞内。
中性脂肪(Neutral fat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类,呈中性。
中性脂肪是储存能量的方式之一,在氧化时释放出能量。
在正常情况下,除脂肪细胞外,其他细胞在光学显微镜下几乎看不到脂滴,如果细胞质内出现大量脂滴即为脂肪变性,常见于肝细胞、心肌细胞、肾曲管上皮细胞等。
中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。
苏丹染料脂质染色的机理一般认为纯属物理学的脂溶作用和吸附作用。
苏丹类染料由于在脂质中的溶解度大于在有机溶剂的溶解度,所以染色时染料便从染液中转移到被染的脂质中去,使脂质呈现出染液的颜色。
苏丹Ⅲ染色液主要用于显示组织器官的脂肪变性和类脂质的异常沉着,常发生于肝、肾、心等实质脏器的脂肪变性,细胞内出现多数中性脂肪滴;鉴别和诊断脂肪组织中所发生的肿瘤及其性质。
标本不采用含有乙醇的固定液(如需固定可采用10%中性福尔马林)、也不采用石蜡切片,需用冰冻切片或碳蜡切片。
自备材料:
1、载玻片
2、70%乙醇
3、Mayer苏木素染色液
4、分化液
5、蒸馏水
6、显微镜
7、甘油明胶封固液
第1页,共2页
操作步骤(仅供参考):
1.新鲜组织低温切片,一般-20℃~-25℃。
如样本为脂肪瘤,应调节至-30℃。
2.冰冻切片6~15μm(6~8μm为佳),贴于载玻片上。
3.蒸馏水稍洗。
4.入Mayer苏木素染色液,复染核1min。
5.自来水洗后,苏丹Ⅲ分化液分化数秒,流水洗至核为蓝色。
6.蒸馏水冲洗后,70%乙醇稍微浸洗一下。
7.入苏丹Ⅲ染色液,浸染30min。
8.70%乙醇分化数秒,自来水洗。
9.用滤纸将切片及周围的水分吸去,让其稍微干燥。
10.甘油明胶封固。
染色结果:
中性脂肪橘红色
细胞核淡蓝色
注意事项:
1、标本不宜采用含有乙醇的固定液、也丌宜用石蜡切片,需用冰冻切片。
如需固定应采用10%中性福尔马林固
定液或10%甲醛-钙液。
2、在染色过程中必须防止染料发生沉淀。
故切片入染液时应密封,勿不流动空气相接触,避免溶液挥发时发生
沉淀。
3、冰冻切片较易着色,Mayer苏木素复染时应避免过染。
4、苏丹染料容易褪色,应密闭保存。
5、甘油明胶封固的样本,保存时间不长。
如需长期保存,可以在盖玻片与载玻片交界的边缘用中性树胶封闭。
6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
第2页,共2页。