-水中总大肠菌群的测定—多管发酵法[1]
多管发酵法检测水中的大肠菌群的实验报告
学院：环境科学与工程学院班级：11级环境科学（2）班姓名：李宝携学号：3111007398实验3 多管发酵法检测水中的大肠菌群一、实验目的（1）了解饮用水和水源水大肠菌群的原理和意义。
（2）学习检测水中大肠菌群的方法。
二、实验原理大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标，也是反映水体被生活污水污染的一项重要监测项目。
大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48小时内发酵乳糖并产酸产气。
我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过三个。
多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。
当发酵产酸时，溴甲酚紫可由紫色变为黄色，乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。
三、实验材料1、水样中心湖湖水2、试剂三倍浓缩乳酸蛋白胨培养液3、仪器及其他用品试管、发酵管、烧杯、量筒、移液枪、高压灭菌锅四、操作过程1、取16支发酵管，其中5支加入5mL三倍乳糖蛋白胨培养液。
取35mL三倍乳糖蛋白胨培养液于烧杯中，量取70mL水进行稀释，将三倍乳糖蛋白胨培养液稀释成一倍的乳酸蛋白胨培养液，分别取10mL一倍的乳酸蛋白胨培养液与10支试管中，最后，1支加入9ml自来水。
2、完成后包装好，于121℃高压灭菌锅中灭菌30min左右。
3、灭菌完毕，冷却后，在无菌操作条件下，向装有三倍的乳酸蛋白胨培养液的5支试管加入10ml水样，向装有一倍的乳糖蛋白胨培养液的5支试管中加入1ml水样。
取1mL的水样于装有9mL自来水的试管中，混合摇匀，并分别移1mL于另外的5支10mL的试管中。
4、将各试管充分混均，包装完成，将其置于37℃恒温箱中培养24h。
5、取出培养液，观察试管的颜色及其中的气泡数并记录数据。
6、观察完毕，清洗仪器并整理数据。
五、实验结果实验现象：有些试管的颜色变成黄色，并且有些试管中的发酵管的底部存在气泡，说明存在产酸产气的大肠杆菌。
生活饮用水 总大肠菌群 多管发酵法方法证实
生活饮用水微生物指标总大肠菌群1.项目概述本实验依据GB-T5750.12-2006 生活饮用水标准检验方法总大肠菌群多管发酵法。
总大肠菌群指一群在37℃培养24 h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
本标准规定了用多管发酵法测定生活饮用水及其水源水中的总大肠菌群。
本法适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的测定。
2.培养基与试剂2.1 乳糖蛋白胨培养液2.1.1 成分A蛋白胨10 gB牛肉膏3gC乳糖5gD氯化钠5gE溴甲酚紫乙醇溶液(16 g/L) 1mLF 蒸馏水1000 mL2.1.2 制法将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中，调整pH为7.2～7.4，再加入1 mL16 g/L的溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，68. 95 kPa (115℃．10 lb)高压灭菌20min，贮存于冷暗处备用。
2.2 二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液按上述乳糖蛋白胨培养液(2.1.1)，除蒸馏水外，其他成分量加倍。
2.3 伊红美蓝培养基2.3.1 成分A蛋白胨10 gB乳糖10 gC磷酸氢二钾2gD琼脂20 g～30 gE 蒸馏水1000 mLF伊红水溶液(20 g/L) 20 mLG美蓝水溶液(5 g/L) 13 mL2.3.2 制法将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH为7.2，加入乳糖，混匀后分装，以68.95 kPa(115℃，10 lb)高压灭菌20 min。
临用时加热融化琼脂，冷至50℃～55℃，加入伊红和美蓝溶液，混匀，倾注平皿。
2.4 革兰氏染色液2.4.1 结晶紫染色液A成分：a结晶紫 1 gb乙醇（95%，体积分数）20 mLc草酸铵水溶液(10 g／L) 80 mLB制法：将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
注：结晶紫不可用龙胆紫代替，前者是纯品，后者不是单一成分，易出现假阳性。
结晶紫溶液放置过久会产生沉淀，不能再用。
2.4.2 革兰氏碘液A成分：a碘1gb碘化钾 2 gc蒸馏水300 mLB制法：将碘和碘化钾先进行混台，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水。
5.水中大肠杆菌的检测（多管发酵法）
5.水中大肠杆菌的检测（多管发酵法）第一篇：5.水中大肠杆菌的检测(多管发酵法)水中大肠杆菌群书的监测（发酵法）一、试验目的：1.了解和学习水中大肠杆菌的测定原理和测定意义。
2.学习和掌握水中大肠杆菌的监测方法。
二、试验原理：水的微生物学的检验，特别是大肠杆菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。
国家饮用水的标准规定饮用水中大肠杆菌群书每升中不超过3个，细菌总数每毫升不超过100个。
水中大肠杆菌的检验方法，常用多管发酵发和滤膜法。
多管发酵发可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。
滤膜法仅用于自来水和深井水。
操作简洁快速，但不适用于杂质较多，易于阻塞滤孔的水样。
三、试验材料：1.培养基：乳糖蛋白胨培养基，伊红美蓝培养基2.器材：灭菌三角瓶、无菌平皿、无菌吸管、无菌试管等。
四、试验内容第一天：1.水样的采集自来水洗将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌，在开放水龙头取水流5ｍｈ，以灭菌山角瓶接水取样以备分析。
2.用发酵法检查大肠杆菌（1）生活饮用水的检验①初步发酵试验：在2个各装有50ｍｈ的3倍乳糖蛋白胨培养液的三角瓶中，以无菌操作各自加水样10ｍｈ。
摇匀后，37℃培养24ｈ第二天：②平板分离：经24ｈ培养后。
特产酸产气及只产酸的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板（EMD培养基上），37℃培养18～24ｈ。
大肠杆菌群在EMD平板上，菌落呈紫黑色，具有或略带或不带有金属光泽，或者呈淡紫红色，仅中心颜色较深，挑取符合上述特征的菌落进行涂片，革兰氏染色，镜检。
第三天：③复发酵试验：将革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌落的剩余部分接于单倍乳糖发酵管中，为防止遗漏，每管可接种来自同一初发酵管的平板上同一类型菌群1～3个，37℃培养24ｈ，如果产酸又产气者，即证实有大肠菌群存在。
第四天：④报告：根据证实有大肠菌群存在的复发酵管的阳性管，查附录1或2，报告每升水样品中大肠菌群数（MPN）五、思考题记录试验结果，并对所测样品作出评价。
总大肠菌的测定实验作业指导书
作业指导书 页码：第 1页，共11页 文件编号：JLQX-03-022 版次：2022版，第0次修订 文件名称：水中总大肠菌群的测定 发布日期：2022 年1 月1 日水中总大肠菌群的测定1、方法依据水质 水中总大肠菌群的测定 多管发酵法2、合用范围总大肠菌群是指那些能在37℃48h之内发酵乳糖产酸气的、需氧及碱性厌氧的革兰式阴性的无芽胞杆菌。
主要包括有埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等菌属的细菌。
总大肠菌群的检验方法中，多管发酵法可合用于各种水样（包括底泥），但操作较繁，需要时间较长；滤膜法主要是用于杂质较少的水样，操作简单快速。
如果是使用滤膜法，则总大肠菌群可重新定义为：所有能在含乳糖的远腾氏培养基上，于37℃24h之内生长出带有金属光泽暗色菌落的、需氧的和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。
粪便中存在有大量的大肠菌群细菌，在水体中存活的时间和对氯的反抗力等于常道致病菌，如沙门氏菌、志贺氏菌等相似，因此将总大肠菌群作为水体受粪便污染的指示菌是合适的。
但在某些水质条件下，大肠菌群细菌在水中能自行繁殖，这是不利之处。
作业指导书 页码：第2页，共11页 文件编号：JLQX-03-022 版次：2022版，第0次修订 文件名称：水中总大肠菌群的测定 发布日期：2022 年1 月1 日3、测定原理3.1水中总大肠菌群的测定多管发酵是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖、产酸产气以及具备革兰氏染色阴性、无芽孢、呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验，以求得水样中的总大肠菌群数。
多管发酵法是以最可能数简称MPN来表示实验结果的。
实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。
如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。
无非只决于那些既显示阳性有显示阴性的稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部份取决于那些即显示阳性又显示阴性的稀释度。
水质 总大肠菌群的测定
水质总大肠菌群的测定多管发酵法方法学报告起始日期：2018年月日结束日期：2018年月日一、实验目的掌握水中总大肠菌群的测定方法及原理。
二、依据标准文献GB/T 5750.12-2006生活饮用水标准检验方法微生物指标 2 多管发酵法三、适用范围生活饮用水及水源水总大肠菌群的测定。
四、方法原理总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的,在37℃生长时能使乳糖发酵,在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
多管发酵法的原理是根据统计学理论，通过三个步骤进行检验求得水样中的总大肠菌群数，估计水体中大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。
试验结果以最可能数，简称MPN 表示。
计算出数量/L。
（most probable number）五、仪器设备(1)立式压力蒸气灭菌器型号：YXQ-LS-50SII 容积：50升(2)恒温培养箱，超净工作台。
(3)酒精灯、镍铬丝接种棒。
(4)培养皿（直径100mm）、试管（5×150mm），吸管（1、5、10mL）、烧杯(5)（200、500、2000mL）、锥形瓶（250、1000mL）、采样瓶。
六、试剂材料培养基：乳糖蛋白胨培养液、伊红美蓝培养基，营养琼脂。
七、实验步骤 1. 试验准备乳糖蛋白胨培养液：按瓶上标志配制好液体培养基后，取10支20毫升试管，5支30毫升试管，内置小导管。
5支30毫升试管加入10 mL 2倍浓度的乳糖蛋白胨培养液，10管加入10 mL 单倍浓度的乳糖蛋白胨培养液，试管加硅胶塞。
伊红美蓝培养基：按瓶上标志配制好300 mL 液体培养基后，倒入锥形瓶500mL 中，加硅胶塞。
营养琼脂：按瓶上标志配制好200mL 液体培养基后，倒入锥形瓶500mL 中，加硅胶塞。
取采样瓶多个，接种棒，培养皿35对，密封包装。
以上物品材料于 121℃高压灭菌器中灭菌 30min 备用。
2. 样品测定取500mL 锥形瓶内的营养琼脂液体培养基，倒入约20mL 灭菌好的培养皿中，超净工作台不同位置各放1对，共10对，操作间不同位置各各放1对，共10对。
多管发酵法检测生活饮用水中总大肠菌群
多管发酵法检测生活饮用水中总大肠菌群摘要：总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的在37℃生长时能使乳糖发酵、在24小时内产酸产气的革兰阴性无芽胞杆菌。
总大肠菌群既包括存在于人及动物粪便的大肠菌群，也包括存在于其他环境中的大肠菌群。
在日常的检测过程中，特别是在饮用水的检测中，总大肠菌群的检测对检测环境、检测人员的操作水平和经验要求都很高，且检测时间长达三天，因此其检测结果的准确率都和那提高。
笔者在长期检测中对一些检测过程中出现的问题着重进行了归纳，通过反复的试验，和仔细观察后，摸索出了一些规律和方法，在此加以总结，有助于以提高总大肠菌群检测的高效性和准确性。
关键词：饮用水、总大肠菌群、多管发酵根据总大肠菌群应具有的生物特性，如革兰氏阴性无芽胞杆菌，在37℃24h内能发酵乳糖并产酸产气，能在选择性培养基上产生典型菌落。
在检测时可用多管发酵法，以100mL水样中污染的总大肠菌群最可能数（MPN）表示的。
不同的方法标准略有差异，但检测步骤大体相同，即：乳糖发酵实验、分离培养和证实试验。
按《生活饮用水标准检验方法》微生物指标GB5750.12-2006的规定，总大肠菌群检测的步骤为：2.1.5.1乳糖发酵实验（初发酵）；2.1.5.2分离培养；2.1.5.3证实实验（复发酵）。
而检测的难点主要在于步骤2.1.5.1、2.1.5.3中“产酸产气”的确认及步骤2.1.5.2中的菌落形态及染色的确认。
初发酵阳性管，不能肯定就是总大肠菌群，经过证实试验后，有时可能成为阴性。
经过多次观察发现在复发酵成阳性的样品，在初发酵时都有着一些共同的现象。
在此，我们从曾经受过微生物污染水样中选出两个最具代表性的样品（污染1＃污染2＃）为例，加以说明。
1、乳糖发酵实验中产酸与产气的判断：分别取10ml水样接种到5只10ml双料乳糖蛋白胨培养液中，置于36℃±1℃的培养箱内培养24h±2h，如所有乳糖蛋白胨培养管都不产酸产气，则报告总大肠菌群阴性，如产酸产气则进行下一步实验。
多管发酵法测定水中大肠菌群
综合实验报告书（2014~2015 学年）实验题目多管发酵法总测定水中大肠菌群学院名称生物与食品工程学院专业（班级）2012级生物工程姓名（学号）孙大林20122151032015年01 月13日多管发酵法测定水中大肠菌群摘要：利用多管发酵法检测自来水和池塘水中大肠菌群的数量，以对不同水样的大肠菌群污染情况做出初步判断。
根据«中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验法»中有关大肠菌群的检测方法与指标对上述水样进行检测。
通过记录阳性管数并查最大可能数表（MPN）查出不同水样中大肠菌群的可能含量。
多管发酵法的原理是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖产酸产气以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过初（步）发酵试验、平板分离和复发酵试验等三个步骤进行实验，得出水样中总大肠菌群数，实验结果以最大可能数MPN表示。
关键词：多管发酵法、大肠菌群、最大可能数（MPN）Abstract: the use of multiple tube fermentation test of tap water and the number of coliform group, pond water in different water samples of coliform bacteria pollution make a preliminary judgment.According to "the People's Republic of China national drinking water standard inspection » in the fecal coliform detection method and index of the water samples fortesting.Tube by a positive record number (MPN) maximum possible log tables and check of coliform bacteria may content in different water samples.Multi-tube fermentation principle is based on fecal coliform bacteria can ferment lactose produce acid gas and possess a gram negative, no spore, assumes the rods and so on characteristics, through the early (step) fermentation test, plate separation and the complex fermentation test three steps of the experiment, it is concluded that the total number of coliform bacteria in water samples, the experimental results with the greatest possible number of MPN said.Key words: multi-tube fermentation coliform groupthe greatest possible number (MPN)由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。
多管发酵法检测水中的大肠菌群的实验报告
学院：环境科学与工程学院班级：11级环境科学（2）班姓名：李宝携学号：3111007398实验3 多管发酵法检测水中的大肠菌群一、实验目的（1）了解饮用水和水源水大肠菌群的原理和意义。
（2）学习检测水中大肠菌群的方法。
二、实验原理大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标，也是反映水体被生活污水污染的一项重要监测项目。
大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48小时内发酵乳糖并产酸产气。
我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过三个。
多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。
当发酵产酸时，溴甲酚紫可由紫色变为黄色，乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。
三、实验材料1、水样中心湖湖水2、试剂三倍浓缩乳酸蛋白胨培养液3、仪器及其他用品试管、发酵管、烧杯、量筒、移液枪、高压灭菌锅四、操作过程1、取16支发酵管，其中5支加入5mL三倍乳糖蛋白胨培养液。
取35mL三倍乳糖蛋白胨培养液于烧杯中，量取70mL水进行稀释，将三倍乳糖蛋白胨培养液稀释成一倍的乳酸蛋白胨培养液，分别取10mL一倍的乳酸蛋白胨培养液与10支试管中，最后，1支加入9ml自来水。
2、完成后包装好，于121℃高压灭菌锅中灭菌30min左右。
3、灭菌完毕，冷却后，在无菌操作条件下，向装有三倍的乳酸蛋白胨培养液的5支试管加入10ml水样，向装有一倍的乳糖蛋白胨培养液的5支试管中加入1ml水样。
取1mL的水样于装有9mL自来水的试管中，混合摇匀，并分别移1mL于另外的5支10mL的试管中。
4、将各试管充分混均，包装完成，将其置于37℃恒温箱中培养24h。
5、取出培养液，观察试管的颜色及其中的气泡数并记录数据。
6、观察完毕，清洗仪器并整理数据。
五、实验结果实验现象：有些试管的颜色变成黄色，并且有些试管中的发酵管的底部存在气泡，说明存在产酸产气的大肠杆菌。
多管发酵法检测水中大肠菌群数量
利用多管发酵法检测水中大肠菌群数量作者：摘要：本实验利用多管法检测水中大肠菌群数量，以反映城市供水是否符合标准。
关键词：多管发酵法大肠杆菌最大可能数(MPN) 发酵试验平板分离前言：城市生活供水水质与人们生活息息相关，为确保饮水合用水安全，必须对其进行严格的常规监测。
但是水体中直接检测出病原微生物比较困难，因为它们数量极少，而且培养条件苛刻，分离鉴定比较困难。
因此常选用指示微生物作为水体中病原微生物数量的指标。
大肠菌在人体内和粪便中存在很多，受气污染的水体中较容易检测到大肠菌的存在，并且检测方法简单。
因此，常用大肠菌群为指标评价水的卫生质量。
1．原理：多管发酵法是根据大肠杆菌群细菌能发酵乳糖产酸产气及具备革兰氏染色阳性、无芽孢呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行实验，以求得水样中的总大肠菌群数，最大可能数（MPN）来表示实验结果。
2．实验2．1实验材料2．1．1 实验仪器：超净工作台、恒温培养箱、显微镜等。
2．1．2 培养基：乳糖蛋白胨培养基（分装于10支试管中，内涵倒置杜氏小管）、3倍浓度乳糖蛋白胨培养基（分装于5支试管中，内涵倒置杜氏小管）、伊红—美蓝（EMB）培养基。
（培养基均为灭过菌的）2．1．3染色剂：草酸铵结晶紫染色液、路哥碘液、番红染色液。
2．1．4水样：拧开龙头流水5分钟后取自来水。
2．1．5其他：灭菌移液管、载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯、无菌水、擦镜纸等。
2．2 实验步骤2．2．1初发酵试验：a 取5支装有3倍浓度乳糖蛋白胨无菌培养基的试管，标记水样名称和加水体积10ml；取5支装有乳糖蛋白胨无菌培养基的试管，标记水样名称和加水体积1ml；取5支装有乳糖蛋白胨无菌培养基的试管，标记水样名称和加水体积0.1ml。
b 用灭菌移液管分别吸取10ml水样加入到标记号的3倍浓度培养基试管中；分别吸取1ml水样加入到标记号的1倍浓度培养基试管中；分别吸取0.1ml水样加入到标记号的1倍浓度培养基试管中。
水中大肠杆菌的检测(多管发酵法)
水中大肠杆菌群书的检测（发酵法）一、试验目的：1.了解和学习水中大肠杆菌的测定原理和测定意义。
2.学习和掌握水中大肠杆菌的检测方法。
二、试验原理：水的微生物学的检验，特别是大肠杆菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。
国家饮用水的标准规定饮用水中大肠杆菌群书每升中不超过3个，细菌总数每毫升不超过100个。
水中大肠杆菌的检验方法，常用多管发酵发和滤膜法。
多管发酵发可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。
滤膜法仅用于自来水和深井水。
操作简洁快速，但不适用于杂质较多，易于阻塞滤孔的水样。
三、实验器材：1. 水样：自来水2.试剂：乳糖蛋白胨发酵管内有倒置小套管三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管瓶内有倒置小套管伊红美蓝或复红亚硫酸钠琼脂平板革兰氏染液。
3.仪器及其它用品：载玻片灭菌带玻璃塞空瓶灭菌吸管灭菌试管革兰氏染液显微镜香柏油二甲苯擦镜纸吸水纸灭菌三角瓶等四、实验步骤：第一步：1.水样的采集自来水洗将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌，在开放水龙头取水流5ｍｈ，以灭菌山角瓶接水取样以备分析。
2.用发酵法检查大肠杆菌（1）生活饮用水的检验①初步发酵试验：在2个各装有50ｍｈ的3倍乳糖蛋白胨培养液的三角瓶中，以无菌操作各自加水样10ｍｈ。
摇匀后，37℃培养24ｈ第二步：②平板分离：经24ｈ培养后。
特产酸产气及只产酸的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板（EMD培养基上），37℃培养18～24ｈ。
大肠杆菌群在EMD平板上，菌落呈紫黑色，具有或略带或不带有金属光泽，或者呈淡紫红色，仅中心颜色较深，挑取符合上述特征的菌落进行涂片，革兰氏染色，镜检。
第三步：③复发酵试验：将革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌落的剩余部分接于单倍乳糖发酵管中，为防止遗漏，每管可接种来自同一初发酵管的平板上同一类型菌群1～3个，37℃培养24ｈ，如果产酸又产气者，即证实有大肠菌群存在。
第四步：④报告：根据证实有大肠菌群存在的复发酵管的阳性管，查表，报告每升水样品中大肠菌群数（MPN）.。
实验十一多管发酵法测定水中大肠菌群
了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。
02
学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法。
01
一、实验目的
发酵法： 又称多管发酵法或三步发酵法
1
2
将不同稀释度的水样，分别接种于含有乳糖等糖类的培养液中（3倍或1倍乳糖液），经37 ºC培养24 h，观察产酸产气情况，培养基内加有溴甲酚紫作为PH指示剂，细菌产酸后，培养基即由原来的紫色变为黄色，以初步判断是否有大肠菌群存在。
将上述可能为大肠菌群的菌落再次转接入1倍乳糖培养液中，经37 ºC培养24 h，产酸产气者即最后确证为存在大肠菌群。
产酸、产气分别记为阳性反应，不产酸、产气则记为阴性反应；
根据阳性管数量，查表求得水体大肠菌群的数量。
3） 复发酵试验(完成实验）
01
02
乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小套管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌水。
将经24 h和48 h培养后产酸产气的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37 ℃培养18～24 h，将符合下列特征的菌落进行染色镜检。
深紫黑色，有金属光泽；
紫黑色，不带或略带金属光泽；
淡紫红色，中心颜色较深。
平板分离
复发酵试验 将镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌株重复初步发酵试验。并根据初发酵管试验的阳性管查表，即得大肠菌群数。
3
初发酵（推测试验）：
二、实验原理
水中除大肠菌群外，尚有其它细菌可能引起糖类发酵，因此需要进一步证实。
将初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红美兰培养基，37 ºC培养24 h，根据菌落特征（带核心的、有金属光泽的深紫色菌落），挑取可能为大肠菌群的菌落制片，经革兰氏染色，进一步证实是否为大肠菌群。
实验十一 多管发酵法测定水中大肠菌群
实验十一(综合实验）多管发酵法测定水中大肠菌群一、实验目的1、学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法。
2、了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。
二、实验原理发酵法：又称多管发酵法或三步发酵法1) 初发酵（推测试验）：将不同稀释度的水样，分别接种于含有乳糖等糖类的培养液中（3倍或1倍乳糖液），经37 ºC培养24 h，观察产酸产气情况，培养基内加有溴甲酚紫作为PH指示剂，细菌产酸后，培养基即由原来的紫色变为黄色，以初步判断是否有大肠菌群存在。
2）平皿分离（证实试验）⏹水中除大肠菌群外，尚有其它细菌可能引起糖类发酵，因此需要进一步证实。
⏹将初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红美兰培养基，37 ºC培养24 h，根据菌落特征（带核心的、有金属光泽的深紫色菌落），挑取可能为大肠菌群的菌落制片，经革兰氏染色，进一步证实是否为大肠菌群。
3）复发酵试验(完成实验）⏹将上述可能为大肠菌群的菌落再次转接入1倍乳糖培养液中，经37 ºC培养24 h，产酸产气者即最后确证为存在大肠菌群。
⏹产酸、产气分别记为阳性反应，不产酸、产气则记为阴性反应；⏹根据阳性管数量，查表求得水体大肠菌群的数量。
三、实验材料1、培养基：乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小套管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌水。
2、仪器或其他用具：载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管，灭菌试管等。
四、操作步骤1．水样的采取实验室提供水样2．河水的检查（1）初（步）发酵实验水样的稀释：10-1与10-2接种：分别吸取1ml 10-2 、10-1和原水样接入装有10ml普通浓度乳糖蛋白胨发酵管；另取10ml原水样接入装有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管，混匀后，37 ℃培养24 h，24 h未产气的继续培养48 h。
（2）平板分离将经24 h和48 h培养后产酸产气的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37 ℃培养18～24 h，将符合下列特征的菌落进行染色镜检。
多管发酵法测定水中大肠菌群 实验报告
多管发酵法测定水中大肠菌群摘要：初步发酵实验中将水样接种与乳糖蛋白胨液体培养基的发酵管内，37度下培养，24内小管中有气体形成，并且培养基浑浊，颜色改变，说明水中存在大肠杆菌，为阳性如果，如果出现产生气泡但不变色或者变色但不产气的情况，应该延长培养至48小时，若仍不的为阴性反应。
平板分离实验中把初实验产期产酸的试管的菌接到伊红美兰琼脂平板上然后培养24小时。
复发酵实验中将以上大肠杆菌阳性菌落，经涂色染色为革兰阴性无芽孢杆菌，通过次试验进一步证实原理：初发酵实验：发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一个杜氏小管。
乳糖能其选着作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠杆菌能发酵乳糖而产气产酸。
为便于观察细菌的产酸情况，培养基内加有溴甲酚紫作为指示剂，细菌产酸后培养基由原来的紫色变为黄色。
初步发酵实验中将水样接种与乳糖蛋白胨液体培养基的发酵管内，37度下培养，24内小管中有气体形成，并且培养基浑浊，颜色改变，说明水中存在大肠杆菌，为阳性如果，如果出现产生气泡但不变色或者变色但不产气的情况，应该延长培养至48小时，若仍不产气的为阴性结果。
平板分离：伊红美兰琼脂培养基有伊红和美兰两种染料，在此作为指示剂，大肠杆菌发酵乳糖造成酸性环境时，该两种染料及结合，使培养基产生有金属光泽的深紫色菌落。
复发酵实验：以上大肠杆菌阴性菌落，经涂片染色为革兰氏阴性无芽孢的，通过此试验进一步证实。
原理与初发酵实验相同，经24小时培养产酸产气的，最后确定为大肠杆菌阴性结果。
材料与用具：1.培养基乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置杜氏小管）三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（内有杜氏小管）伊红美兰琼脂平板2．无菌水3. 用具载玻片灭菌带玻璃塞空瓶灭菌试管灭菌吸管方法：1水样的采取从不同水体（自来水、河水）中采集样品2自来水检查（1）初发酵实验在2个含有50ml三倍浓缩的乳糖蛋白胨发酵烧瓶中，各加入100ml水样。
在10支含有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中，各加入10ml水样。
实验十六 多管发酵法检测水体中的大肠菌群概要
水样接种于发酵管内，37℃下培养，24h内小套 管中气体形成，并且培养基混浊，颜色改变， 说明水中存在大肠菌群，为阳性结果。
但也有个别其它类型的细菌在此条件下也可能 产气；此外产酸不产气的也不能完全说明是阴 性结果，在量少的情况下，也可能延迟48h后才 产气，此时应视为可疑结果，因此，以上两种 结果均需继续做下面的部分实验，才能确定是 否是大肠菌群。48h后仍不产气的为阴性结果。
2、初（步）发酵实验 将水样分别接入10支装有10ml三倍浓缩乳糖蛋 白胨发酵管中，37℃培养24h，24h未产气的继 续培养48h。
3、平板分离
将经24h和48h培养后产酸产气的发酵管，分 别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于 37℃培养18～24h，将符合下列特征的菌落 进行染色镜检。 深紫黑色，有金属光泽； 紫黑色，不带或略带金属光泽； 淡紫红色，中心颜色较深。
2、平板分离
伊红美蓝培养基平板含有伊红与美蓝染料， 亦作为指示剂，大肠菌群发酵乳糖造成酸 性环境时，该两种染料即结合成复合物， 使大肠菌群产生带核心的、有金属光泽的 深紫色(龙胆紫)菌落。初发酵管24h内产酸 产气和48h产酸产气的均需在以上平板上划 线分离菌落。
3、复发酵试验
EMB平板上大肠菌群阳性菌落，经过涂片染 色为革兰氏阴性菌且无芽孢者，通过此试 验再进一步证实。原理与初发酵试验相同， 经24h培养产酸又产气的，最后确定为大肠 菌群阳性结果。
实验十六
多管发酵法测定 水中大肠菌群
一.实验目的及要求
1、学习检测水中大肠菌群的方法 2、了解大肠菌群数量与水质状况的关系
二.实验原理
大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生 细菌领域的用语，它不代表某一个或某一 属细菌，而指的是具有某些特性的一组与 粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及 血清学方面并非完全一致，其定义为：需 氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产 气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该 菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆 菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
总大肠菌群多管发酵法测定步骤
总大肠菌群多管发酵法测定步骤1. 什么是总大肠菌群？总大肠菌群，这个名字听上去是不是有点拗口？其实它就是咱们肚子里的一种细菌，主要生活在肠道里。
别看它们个头小，作用可大着呢！总大肠菌群可以帮助消化食物，维护肠道健康。
不过，如果它们出现在不该出现的地方，比如水里或者食物中，那可就麻烦了。
所以，监测总大肠菌群的数量，就显得尤其重要。
2. 为什么要用多管发酵法？说到检测总大肠菌群，咱们就不得不提到“多管发酵法”了。
这种方法简单易行，适合各种实验室使用，关键是准确度也杠杠的。
用这方法，咱们可以快速判断出样本中是否含有大肠菌群，真是一箭双雕嘛！而且，这个过程就像做个小实验，感觉就像是科学家在实验室里调配药水，嘿嘿，兴奋得很。
2.1 准备工作首先，咱得准备一些工具和材料。
首先，你得有样本，可能是水或者食物，随便哪个都行。
然后，你需要一些培养基，像是琼脂培养基或者液体培养基。
接着，准备一组试管，最好是八个，这样可以多做几组对比。
最后，别忘了准备好接种环和无菌操作的工具，保证你的实验环境洁净卫生，万一有其他细菌混入，那就得不偿失了。
2.2 实验步骤好啦，准备工作做得差不多了，接下来就进入核心步骤。
首先，咱得将样本取出，记得用无菌的方式哦，这可是科学的基本要求。
然后，把样本稀释，比如取1毫升样本，加9毫升的生理盐水，轻轻摇匀。
接着，咱就开始接种了！用接种环轻轻地从稀释液中取出一些，接种到试管里的培养基中。
哇，感觉像是在给细菌开派对一样，嘿嘿！然后，把试管放在温控箱里，一般温度设定在3537度，这样有利于大肠菌群的生长。
等个24小时，咱们就可以来看结果了。
结果出来后，看看试管里的液体是否变成浑浊状态，这就是发酵的表现哦。
如果有气泡产生，那就说明有总大肠菌群在派对上欢乐地唱歌跳舞啦！3. 结果分析实验结果出来之后，咱们可得好好分析一下。
要是有发酵的现象，那就得进一步确认大肠菌群的具体数量。
这里面有个技巧，就是要用不同的稀释倍数进行多次接种，这样可以帮助咱们更准确地估算出总大肠菌群的数量。
实验十一_多管发酵法测定水中大肠菌群
图1 多管发酵测定水中大肠菌群的操作步骤和结果解释
3） 复发酵试验(完成实验） 复发酵试验(完成实验）
将上述可能为大肠菌群的菌落再次转接入 1倍乳糖培养液中，经37 ºC培养24 h，产酸产 培养24 h， 倍乳糖培养液中， 气者即最后确证为存在大肠菌群。 气者即最后确证为存在大肠菌群。 产酸、产气分别记为阳性反应，不产酸、 产酸、产气分别记为阳性反应，不产酸、 产气则记为阴性反应； 产气则记为阴性反应； 根据阳性管数量， 根据阳性管数量，查表求得水体大肠菌群 的数量。 的数量。
三、实验材料
1、培养基： 培养基： 乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），三倍 乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），三倍 ）， 浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小套 浓缩乳糖蛋白胨发酵管（ ）（内有倒置小套 管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌水。 ），伊红美蓝琼脂平板，灭菌水。 伊红美蓝琼脂平板 2、仪器或其他用具： 仪器或其他用具： 载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管，灭 载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管， 菌试管等。 菌试管等。
（3）复发酵试验 将镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌株重复 初步发酵试验。并根据初发酵管试验的阳性管 初步发酵试验。 查表1 即得大肠菌群数。 查表1，即得大肠菌群数。
10ml×100 × 3× × 1支 支
× 1ml×100 1ml×10-1 1ml×10-2 × × 1× × 1× × 1× × 各3支 支
2）平皿分离（证实试验） 平皿分离（证实试验）
水中除大肠菌群外，尚有其它细菌可能引 水中除大肠菌群外， 起糖类发酵，因此需要进一步证实。 起糖类发酵，因此需要进一步证实。 将初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红美 兰培养基， 培养24 h，根据菌落特征， 兰培养基，37 ºC培养24 h，根据菌落特征，挑 取可能为大肠菌群的菌落制片，经革兰氏染色， 取可能为大肠菌群的菌落制片，经革兰氏染色， 进一步证实是否为大肠菌群。 进一步证实是否为大肠菌群。
实验十一 多管发酵法测定水中大肠菌群
实验十一(综合实验）多管发酵法测定水中大肠菌群一、实验目的1、学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法。
2、了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。
二、实验原理发酵法：又称多管发酵法或三步发酵法1) 初发酵（推测试验）：将不同稀释度的水样，分别接种于含有乳糖等糖类的培养液中（3倍或1倍乳糖液），经37 ºC培养24 h，观察产酸产气情况，培养基内加有溴甲酚紫作为PH指示剂，细菌产酸后，培养基即由原来的紫色变为黄色，以初步判断是否有大肠菌群存在。
2）平皿分离（证实试验）⏹水中除大肠菌群外，尚有其它细菌可能引起糖类发酵，因此需要进一步证实。
⏹将初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红美兰培养基，37 ºC培养24 h，根据菌落特征（带核心的、有金属光泽的深紫色菌落），挑取可能为大肠菌群的菌落制片，经革兰氏染色，进一步证实是否为大肠菌群。
3）复发酵试验(完成实验）⏹将上述可能为大肠菌群的菌落再次转接入1倍乳糖培养液中，经37 ºC培养24 h，产酸产气者即最后确证为存在大肠菌群。
⏹产酸、产气分别记为阳性反应，不产酸、产气则记为阴性反应；⏹根据阳性管数量，查表求得水体大肠菌群的数量。
三、实验材料1、培养基：乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小套管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌水。
2、仪器或其他用具：载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管，灭菌试管等。
四、操作步骤1．水样的采取实验室提供水样2．河水的检查（1）初（步）发酵实验水样的稀释：10-1与10-2接种：分别吸取1ml 10-2 、10-1和原水样接入装有10ml普通浓度乳糖蛋白胨发酵管；另取10ml原水样接入装有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管，混匀后，37 ℃培养24 h，24 h未产气的继续培养48 h。
（2）平板分离将经24 h和48 h培养后产酸产气的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37 ℃培养18～24 h，将符合下列特征的菌落进行染色镜检。
总大肠菌群多管发酵法测定步骤
总大肠菌群多管发酵法测定步骤总大肠菌群多管发酵法测定步骤，这可是个不简单的活儿。
咱们得一步一步来，不能马虎。
先说说第一步，准备工作。
1.1 准备实验器材和试剂咱们得准备好实验用的器材和试剂。
实验器材包括：多管发酵装置、恒温水浴锅、磁力搅拌器、显微镜、比色计等。
试剂方面，主要有大肠杆菌培养基、胰蛋白胨、酵母提取物等。
这些器材和试剂都是实验成功的关键，可不能马虎。
1.2 准备大肠杆菌培养基接下来，咱们要准备大肠杆菌培养基。
这个过程可不像吃火锅那么简单，需要耐心和细心。
将胰蛋白胨和酵母提取物分别加入到适量的水中，加热至120°C左右，然后冷却至50°C左右。
接着，将培养基中的氯化镁、硫酸铜等成分加入到上述溶液中，搅拌均匀。
将培养基倒入培养皿中，放入恒温箱中进行灭菌处理。
第二步，大肠杆菌的接种与培养。
2.1 接种大肠杆菌在完成了培养基的制备后，接下来就是接种大肠杆菌了。
这个过程可不能让大肠杆菌逃跑哦！将待测样品加入到培养基中，然后用无菌吸管轻轻搅拌均匀。
接着，将搅拌好的样品转移到多管发酵装置中，进行后续的发酵操作。
2.2 培养大肠杆菌将大肠杆菌接种到培养基中后，接下来就是等待它们成长的过程了。
这个过程可不像看电影那么轻松，需要耐心等待。
一般来说，大肠杆菌在适宜的温度和湿度条件下，大约需要24-48小时才能开始繁殖。
在这个过程中，我们可以观察到大肠杆菌的数量随着时间的推移而逐渐增加，这是一个很好的信号。
第三步，发酵过程的控制与监测。
3.1 控制发酵条件在完成了大肠杆菌的接种与培养后，接下来就是控制发酵条件了。
这个过程可不像玩游戏那么简单，需要我们时刻关注。
我们需要将多管发酵装置放入恒温水浴锅中进行恒温培养。
我们需要使用磁力搅拌器对发酵液进行搅拌，以保证发酵过程的顺利进行。
我们还需要定期检测发酵液中的大肠杆菌数量、营养物质含量等指标，以便及时调整发酵条件。
3.2 监测发酵过程在控制好发酵条件后，接下来就是监测发酵过程了。
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水中总大肠菌群的测定—多管发酵法
一．原理
总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。
多管发酵法的原理是根据大肠菌群能发酵乳糖、产酸、产气，以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验求得水样中的总大肠菌群数。
试验结果以最可能数（most probable number），简称MPN 表示。
三．仪器
(1)高压蒸气灭菌器。
(2)恒温培养箱、冰箱。
(3)生物显微镜、载玻片。
(4)酒精灯、3mm接种环。
(5)培养皿（直径100mm）、试管（5×150mm），吸管（1、5、10mL）、烧杯（200、500、2000mL）、锥形瓶（500、1000mL）、采样瓶、移液枪。
四．培养基及染色剂的制备
1．乳糖蛋白胨培养液：将10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g乳糖和5g 氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节溶液pH为7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于试管中，于121℃高压灭菌器中灭菌15min，贮存于冷暗处备用。
2．三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液：按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。
除蒸馏水外，各组份用量增加至三倍。
3．伊红美蓝培养基：
①贮备培养基的制备：于2000mL烧杯中，先将20g琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解。
再加2.0g邻酸二氢钾及10g蛋白胨，混合使之溶解，用蒸馏水补充至1000mL，调节溶液pH值为7.2～7.4。
趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入10g乳糖，混匀后定量分装于250mL或500mL锥形瓶内，于121℃高压灭菌15min，贮于冷暗处备用。
②平皿培养基的制备：将上述制备的贮备培养基融化。
根据锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例分别吸取一定量已灭菌的2%伊红水溶液（0.4g伊红溶于20mL水中）和一定量已灭菌的0.5%美蓝水溶液（0.065g美蓝溶于13mL水中），加入已融化的贮备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡），立即将此培养基适量倾入已灭菌的空平皿内，待冷却凝固后，置于冰箱内备用。
4．革兰氏染色剂：
①结晶紫染色液：将20mL结晶紫乙醇饱和溶液（称取4～8g结晶紫溶于100mL95%乙醇中）和80mL 1%草酸铵溶液混合、过滤。
该溶液放置过久会产生沉淀，不能再用。
②助染剂：将1g碘与2g碘化钾混合后，加入少许蒸馏水，充分振荡，待完全溶解后，用蒸馏水补充至300mL。
此溶液两周内有效。
当溶液由棕黄色变为淡黄色时应弃去。
为易于贮备，可将上述碘与碘化钾溶于30mL蒸馏水中，临用前再加水稀释。
③脱色剂：95%乙醇。
④复染剂：将0.25g沙黄加到10mL95%乙醇中，待完全溶解后，加90mL蒸馏水。
五．测定步骤
水源水
①于各装有5mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有倒管），分别加入10mL水样；于各装有10mL乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有倒管），分别加入1mL水样；再于各装有10mL乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有倒管）分别加入1mL 1∶10稀释的水样。
共计15管，三个稀释度。
将各管充分混匀，置于37℃恒温箱内培养24h。
②平板分离：上述各发酵管经培养24h后，将产酸、产气及只产酸的发酵管分别接种于伊红美蓝培养基培养基上，置于37℃恒温箱内培养24h，挑选符合下列特征的菌落：
a．伊红美蓝培养基上：深紫黑色，具有金属光泽的菌落；紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落；淡紫红色，中心色较深的菌落。
③取上述特征的群落进行革兰氏染色：
a．用以培养18～24h的培养物涂片，涂层要薄；
b．将涂片在火焰上加温固定，待冷却后滴加结晶紫溶液，1min 后用水洗去；
c．滴加助色剂，1min后用水洗去；
d．滴加脱色剂，摇动玻片，直止无紫色脱落为止（约20～30s），用水洗去；
e．滴加复染剂，1min后用水洗去，晾干、镜检，呈紫色者为革兰氏阳性菌，呈红色者为阴性菌。
④复发酵试验：上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢的杆菌，则挑选该菌落的另一部分接种于装有普通浓度乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管），每管可接种分离自同一初发酵管（瓶）的最典型菌落1～3个，然后置于37℃恒温箱中培养24h，有产酸、产气者（不论倒管内气体多少皆作为产气论），即证实有大肠菌群存在。
根据证实有大肠菌群存在的阳性管（瓶）数查附表1“大肠菌群检数表”，报告每升水样中的大肠菌群数。
结果与分析：
初发酵实验
10ml原水+5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养基：5管有产酸产气现象1ml原水+10ml普通浓度乳糖蛋白胨培养基：2管有产酸产气现象，1管有产酸现象
1ml1：10稀释水样+10ml普通浓度乳糖蛋白胨培养基：1管有产酸产气现象
复发酵实验：
10ml原水+5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养基：5管有产酸产气现象1ml原水+10ml普通浓度乳糖蛋白胨培养基：2管有产酸产气现象1ml1：10稀释水样+10ml普通浓度乳糖蛋白胨培养基：1管有产酸产气现象
结论：从最可能数（MPN）表中查检验结果5～2～1，得知100mL
水样中的总大肠菌群数为70个，故1L 水样中的总大肠菌群数为70×10=700个。
对污染严重的地表水和废水，初发酵试验的接种水样应做1∶10、1∶100、1∶1000或更高倍数的稀释，检验步骤同“水源水”检验方法。
如果接种的水样量不是10mL 、1mL 和0.1mL ，而是较低或较高的三个浓度的水样量，也可查表求得MPN 指数，再经下面公式换算成每100mL 的MPN 值：
)
()
(10mL mL MPN MPN 接种量最大的一管指数值⨯
=
附表1 大肠菌群检数表
接种水样总量300mL （100mL2份，10mL10份）
附表2 最可能数（MPN）表
（接种5份10mL水样、5份1mL水样、5份0.1mL水样时，不同阳性及阴性情况下100mL水样中细菌数的最可能数和95%可信限值）。