激素溶解方法
植物组织培养常用激素溶解方法
常用激素溶解方法
1、吲哚乙酸（IAA)：溶于乙醇、热水、碱性溶液，碱性溶液中稳定；一般使用95%酒精、NaOH溶液溶解；
2、吲哚丁酸(IBA)：溶于乙醇、热水、碱性溶液，碱性溶液中稳定；一般使用95%酒精、NaOH溶液溶解；
3、萘乙酸（NAA）：溶于乙醇、碱性溶液；一般使用95%酒精或NaOH溶液溶解；
4、玉米素（ZT)：溶于乙醇或碱性溶液；一般使用95%酒精或NaOH溶液溶解
5、6-苄基氨基嘌呤（6-BA）：溶于碱性溶液或酸性溶液；一般使用0.1molHCl或NaOH溶液溶解；
6、赤霉素（GA3）：溶于乙醇，使用95%酒精溶解
备注：生长素一般使用95%乙醇或NaOH 溶解；
分裂素一般使用NaOH溶液、95%乙醇或稀HCl溶解；。
植物激素的配制方法灭菌方法
母液浓度
生长素
IBA（3-吲哚丁酸）用适量无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
IAA（3-吲哚乙酸）用适量无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。
0.2g/L
α-NAA（a-萘乙酸）可用1M NaOH彻底溶解后，再加水定溶到一定浓度。
0.2g/L
ZT（反式玉米素）先溶于适量1M NaOH中，再加水至一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。（反式用少量1M NaOH溶解后，再加水定容至一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。
0.2g/L
赤霉素
GA3先溶于适量无水乙醇中，再加水定容到一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。
0.2g/L
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
2，4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）用无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再加水定容至一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
细胞分裂素
KT（激动素6-糖氨基嘌呤）和6-BA（6-苄氨基嘌呤）先溶于少量1M NaOH中，再加水定容。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
配制生长素类，例如IAA、NAA、2.4-D、IBA，应先用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解，或者用1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容到一定的浓度。
细胞分裂素，例如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3~4滴1mol/L的盐酸溶解，再用蒸馏水定容。
配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。
配制方法
植物激素配制方法总结
原则
植物激素：每种激素必须单独配制成母液，浓度为0.1mg/ml，0.5mg/ml，1.0mg/ml，激素浓度的表示方法多种，ppm（mg/L）、mol/L、mg/ml，用时根据需要取用。
激素的配制方法
1）0.1 %升汞的配制方法:
称取0.5 g升汞粉末，加入少量浓HCL（1 M）溶解，然后定容至500 ml容量瓶中
2）0.5 mg/ml 6-BA：
用少量1 mol/L的NaOH溶解，然后定容至容量瓶中
3）0.5 mg/ml NAA:
用少量1 mol/L NaOH溶解，然后定容至容量瓶中
4）0.5 mg/ml 2，4-D:
用少量1 mol/L 少量95 %乙醇溶解，然后定容至容量瓶中
5）1 mg/mlTDZ
用少量1 mol/L NaOH溶解，然后定容至容量瓶中
6）Picloram
以无菌水溶解后过滤灭菌
7）IBA 配制0.2 mg/ml
用95 %酒精溶解，再用蒸溜水稀释后分别配制成0.2 mg/ml的母液。
要注意，配制时，要把溶解有IBA的酒精倒入水中，不要把水倒入溶解有IBA的酒精中，否则会引起沉淀。
发生沉淀后不可使用。
8）1 mg/ml 6-KT的溶解方法
用少量1 mol/LNaOH溶解，然后用蒸馏水稀释。
激素测定方法
激素的测定方法参考王学奎（2015）《植物生理生化实验原理与技术》一书中的高效液相色谱法，以2016年采自尚志市水稻田的野慈姑球茎为材料，6-12月每个月测定一次野慈姑球茎内CA3和ABA的含量。
试验材料的处理称取1-2g样品，在冰浴下研磨匀浆，加入80%的预冷甲醇20ml，保鲜膜密封，在4℃冰箱里冷浸过夜。
浸提液抽滤，10ml甲醇润洗研钵2次，过滤后与浸提液合并，40℃下减压蒸发至没有甲醇残余。
剩余水相完全转移到三角瓶中，用30ml石油醚萃取脱色2次，弃去醚相。
加0.01gPVPP（交联聚乙烯吡咯烷酮，crosslinked polyvinylpyrrolidone），超声30mim，抽滤用30ml，乙酸乙酯萃取3次，合并酯相，40℃下减压蒸干。
用甲醇（色谱纯）溶解残留物并定容至2ml，经0.45μm微孔滤膜过滤得待测液，保存于4℃冰箱中。
测定（1）标准曲线的绘制取一定量GA3和ABA标准品，用甲醇（色谱纯）溶解，配制成不同浓度的溶液，点击“运行控制”菜单，再选择“运行方法”，手动或自动进样器进样10-30μL，进行液相检测分析。
在一定浓度范围内，4种激素峰面积与浓度呈良好线性关系时，即可绘制标准曲线。
（2）取同样体积的待测样品，进样。
待样品峰全部出完，冲洗30min待基线平直后，即可分析下一个样品。
（3）定性根据标准品的保留时间判断样品中的对应激素峰。
选择与已知标样具有相同保留时间的样品的峰面积，并根据对应的标准曲线查出对应激素的浓度ρ（μg/mL），然后根据下式计算鲜样（FW）中各激素的含量：样品中激素含量（μg/kg FW）=ρ·V Tm·V S式中：ρ为根据样品峰面积从标准曲线查得的对应激素浓度（μg/mL）；V T为待测样总体积（mL）；V S为进样量（μL）；m为样品鲜质量（g）。
培养基母液配制
培养基母液的配制（一）激素母液由于多数生长调节物质难溶于水，因此配法各不相同，激素母液可以在2~4℃冰箱中保存。
在配制药品前，应准备好一定容积的小烧杯、玻璃棒，用纯净水冲洗干净方可使用：1、IAA、IBA、GA3、ZT可先用少量95%酒精溶解，再加水定容，摇匀后贮于试剂瓶中，贴上标签。
2、2,4-D、KT、可用少量10%的Noah溶解，再加水定容。
3、6-BA可用少量1mol/LHCl溶解后，再加水定容。
4、NAA可溶于热水或少量95%酒精中，再加水定容至一定体积。
5、1mg/ml的2.4-D的配制：称取0.1g2,4-D，用少量1mol/LNaOH 溶解，然后定容到100ml容量瓶中。
6、1mg/ml的6BA的配制：称取0.1g6-BA，用少量1mol/LNaOH 溶解，然后定容到100ml容量瓶中。
7、1mg/ml的NAA的配制：称取0.1gNAA，用少量95%酒精助溶，然后定容到100ml容量瓶中。
8、1mol/L的HCl的配制：量取83.3ml盐酸加水稀释定容至1L。
（一般、组培室用量少，配制500ml即可，即：称取盐酸41.65ml 稀释定容至500ml。
配制盐酸时。
需要带口罩、戴手套。
）9、10%的NaOH的配制：称取10gNaOH，加少量纯净水溶解，然后定容到100ml容量瓶中。
10、HgCl2 的配制：称量1g的HgCl2，加热水后进行溶解定容至1L。
二、培养基配制配错培养基造成的危害比组培技术中其他任何失误都大。
因此，配制培养基和称取其他成分必须绝对小心。
为了降低配错培养基的风险，最好准备一张纸，详细地写出配制培养基过程中所需的成分和配置步骤。
每配完一种成分或配完一种母液，划掉相应的记录。
1、一般而言，分化配方的配制：除萱草琼脂为5.5g/L外，其它植物为琼脂5g/L。
白糖为30g/L。
母液粉为4.74g/L。
用自己配制的母液配培养基时，大量母液（1号）50ml/L，微量（2~5号为5 ml/L）。
03植物激素的配制方法灭菌方法
细胞分裂素，例如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3~4滴1mol/L的盐酸溶解，再用蒸馏水定容。
配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。
配制方法
脱落酸
ABA（脱落酸）可用少量1M NaOH溶解后，再加水定容至一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
植物组培中，有些植物激素不能加入培养基中随之高压蒸汽灭菌，那么这些激素该如何加入培养皿中？
过滤灭菌后，在无菌条件下将其加入到高压灭菌后的温度下降到约50至60度的未凝固的培养基中，或者适当加热（如50~70°C水浴加热）使之溶解后的培养基中，摇匀，待培养基冷却凝固再接种培养物。
0.2g/L
ZT（反式玉米素）先溶于适量1M NaOH中，再加水至一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。（反式玉米素是天然酶）
0.1g/L
2-ip可用少量1M NaOH溶解后，再加水定容至一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。
0.2g/L
赤霉素
GA3先溶于适量无水乙醇中，再加水定容到一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。
0.2g/L
除菌方式
母液浓度
生长素
IBA（3-吲哚丁酸）用适量无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
IAA（3-吲哚乙酸）用适量无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。
0.2g/L
α-NAA（a-萘乙酸）可用1M NaOH彻底溶解后，再加水定溶到一定浓度。
植物激素的配制方法灭菌方法
α-NAA（a-萘乙酸）可用1M NaOH彻底溶解后，再加水定溶到一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
2，4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）用无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再加水定容至一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
细胞分裂素
KT（激动素6-糖氨基嘌呤）和6-BA（6-苄氨基嘌呤）先溶于少量1M NaOH中，再加水定容。
配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。
配制方法
除菌方式
母液浓度ห้องสมุดไป่ตู้
生长素
IBA（3-吲哚丁酸）用适量无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
IAA（3-吲哚乙酸）用适量无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。
可高压灭菌: IBA，NAA，6-BA，2,4-D;、KT
不可高压灭菌:ZT、2-IP、IAA，GA3
配制生长素类，例如IAA、NAA、2.4-D、IBA，应先用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解，或者用1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容到一定的浓度。
细胞分裂素，例如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3~4滴1mol/L的盐酸溶解，再用蒸馏水定容。
除菌方式：抽滤除菌。
0.2g/L
脱落酸
ABA（脱落酸）可用少量1M NaOH溶解后，再加水定容至一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
植物组培中，有些植物激素不能加入培养基中随之高压蒸汽灭菌，那么这些激素该如何加入培养皿中？
过滤灭菌后，在无菌条件下将其加入到高压灭菌后的温度下降到约50至60度的未凝固的培养基中，或者适当加热（如50~70°C水浴加热）使之溶解后的培养基中，摇匀，待培养基冷却凝固再接种培养物。【下载本文档，可以自由复制内容或自由编辑修改内容，更多精彩文章，期待你的好评和关注，我将一如既往为您服务】
中国药典收载的甾体激素类药物的含量测定方法
中国药典收载的甾体激素类药物的含量测定方法中国药典收载的甾体激素类药物的含量测定方法有以下几种:
1. 容量法：适用于甾体激素类药物的水或乙醇溶解度的测定。
具体测定方法包括蒸馏法和溶剂提取法等。
2. 光谱分析法：适用于甾体激素类药物的光谱分析法，如紫外 - 可见分光光度法、红外光谱法和核磁共振法等。
3. 色谱分析法：适用于甾体激素类药物的色谱分析法，如高效液相色谱法、气相色谱法和凝胶色谱法等。
4. 化学分析法：适用于甾体激素类药物的化学分析法，如酸碱中和法、氧化还原法、盐析法等。
以上方法均可用于甾体激素类药物的含量测定，但具体使用方法应根据药物的性质和测定要求进行选择。
同时，中国药典还收录了一些甾体激素类药物的质量标准和规范，以确保药品的质量和安全性。
高效液相色谱法快速分析植物内源性激素
高效液相色谱法快速分析植物内源性激素植物内源性激素在植物生长和发育过程中起着重要的调节作用。
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）作为一种先进的分析技术，被广泛地用于植物内源性激素的定量分析和研究。
通过快速、准确地分析植物内源性激素，我们可以深入了解植物的生长和发育调控机制，为农业生产和植物育种提供重要的理论指导和实践应用。
一、植物内源性激素的概述植物内源性激素是一类在植物体内合成和调节生长发育的化合物，包括生长素、赤霉素、脱落酸、激素酮、保护素和亚硫酸氨基酸等。
它们在调节植物生长和发育过程中发挥着不可或缺的作用，如控制细胞分裂和伸长、调节根系和茎的形态发育、调控开花和果实发育等。
了解植物内源性激素的合成、分布和调控机制对于揭示植物的生长发育规律具有重要意义。
二、高效液相色谱法在植物内源性激素分析中的优势高效液相色谱法是一种在液相中进行分离和测定的分析技术，具有分离能力强、选择性好、分析速度快以及样品处理简单等优点，因此被广泛应用于植物内源性激素的定量分析中。
与传统的色谱方法相比，高效液相色谱法具有以下几个优势：1.分离能力强：高效液相色谱法能够有效地将混合样品中的激素物质分离出来，得到高纯度的化合物。
这一点对于复杂的植物组织和生理液体样品分析尤为重要。
2.选择性好：高效液相色谱法能够通过调整色谱柱、流动相和检测器等条件，实现对不同内源性激素的选择性分离和测定，从而提高了分析的准确性和可靠性。
3.分析速度快：高效液相色谱法具有快速分析的特点，一般可以在几分钟到几十分钟内完成一次分析，提高了实验效率。
4.样品处理简单：高效液相色谱法在样品处理时通常只需简单的提取和净化步骤，可以大大简化实验过程，提高了实验效率。
三、高效液相色谱法快速分析植物内源性激素的方法高效液相色谱法快速分析植物内源性激素的方法主要包括激素提取、净化和检测。
根据不同植物内源性激素的特性和含量，可以选择不同的样品处理方法和色谱条件。
激素的溶解方法
N－异戊烯氨基嘌呤
（玉米素）
赤霉素分裂素通常
能溶于稀
NaOH，含水
乙醇或稀盐
酸
能溶于乙醇玉米素不耐热，不能高压灭菌。
不耐热不能高压灭菌在愈伤组织和悬浮培养物的启动和保持生长时才需要有时小植株再生时也需要
激素的溶解方法
1.2.4-D将药品溶于少许蒸馏水中,并逐滴加入1M的NaOH至2.4-D完全溶解,定容.
2.6-BA将药品溶于少许蒸馏水中,并逐滴加入1M的HCl稍加热,逐滴加入95%的酒精至6-BA完全溶解,定容.
3.NAA和IAA将NAA溶于蒸馏水中,逐滴加逐滴加入95%的酒精至NAA完全溶解,定容.
219.2
346.4使用浓度范围
0.001－10mg/L
0.001－10mg/L
0.001－10mg/L
0.001－10mg/L母液配制
生长素通常
用NaOH溶
液滴至溶解
成溶液。
能溶于乙醇说明IAA易被植物细胞所氧化。故培养基中很少单独使用。
素吲哚－3－乙酸
吲哚－3－丁酸
细
胞
分
裂
赤
霉
素6－苄基氨基嘌呤
4.KT逐滴加逐滴加入1M的HCl.至完全溶解,定容.
5.ABA逐滴加逐滴加入1M的NaOH至完全溶解,定容.
6.玉米素先溶于95%酒精，再加热水。
类别
生
长名称
2，4－二氯苯氧乙酸
α－萘乙酸缩写词
2，4－D
NAA
IAA
IBA
BA
KT
ZT
GA
3分子量
221.0
186.2
175.2
203.2
225.2
215.2
环境雌激素及其降解途径_刘先利[1]
![环境雌激素及其降解途径_刘先利[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/0c82ce39647d27284b73511c.png)
环境雌激素及其降解途径刘先利1,2, 刘 彬1,2, 吴 峰1, 邓南圣1(1.武汉大学环境科学系,武汉 430072; 2.黄石高等专科学校环化系,黄石 435003)摘 要:结合近期国内外以及作者对环境雌激素降解的研究,指出环境雌激素可以通过多种途径迁移、降解,环境雌激素主要降解途径为生物降解和光解;一般情况下多数不易降解,易富集,研究其降解具有重要的意义。
关键词:环境雌激素; 降解; 途径中图分类号:X171 文献标识码:A 文章编号:1003-6504(2003)04-0003-03 近年来,关于外源性化学物质干扰人类和动物的内分泌系统,影响健康和生殖的研究等与日俱增,环境雌激素污染物对人类健康的影响是人们极为关注的问题,当今世界上很多科学家正致力于环境雌激素污染物方面的研究[1],这已成为国际研究的热点。
环境内分泌干扰物质是指环境中存在的能干扰人类或动物内分泌系统诸环节并导致异常效应的物质。
由于目前所发现的干扰动物及人体内分泌系统的有机化合物绝大多数都具有雌激素特征,因此通常又将环境雌激素称做“内分泌干扰化合物”(endocrine disrupt-ing chemicals或endocrine disrupto rs)。
环境雌激素问题只是在最近几年才引起世界关注,但由于环境雌激素污染范围广、影响大,对人类生存的威胁更直接,目前,西方国家将环境雌激素问题与臭氧层破坏及温室效应相提并论,足见对其重视程度。
“环境内分泌干扰物”和“持久性有机污染物”是目前环境科学工程研究领域中的两大热点,目前国际公约中所规定的12种首批列入控制的POPs物质—即所谓“Dirty Dozen”均属环境内分泌干扰物质的范畴[2]。
影响内分泌系统的物质分类有:天然雌激素,植物性雌激素与真菌性雌激素,人工合成的雌激素,以及环境化学污染物。
目前已确定的约70种环境雌激素污染物广泛存在于空气、水以及土壤等环境介质中。
最常见的环境化学污染物有农药(DDT、艾氏剂、狄氏剂等)、树脂增塑剂(双酚A)、洗涤剂及表面活性剂(壬基苯酚)、多氯联苯类物质(PCBs)、二恶英类以及重金属类(Hg、Pb、Cd等)化合物。
名词解释
组织培养复习资料名词解释：（1）组织培养：是指通过无菌操作分离植物体的一部分接种到培养基上，在人工控制的条件下（包括营养、激素、温度、光照、湿度）进行培养，使其产生完整植株的过程。
（2）外植体：从活体植物体上分离下来的用于离体培养的材料（原生质体、悬浮细胞、组织、器官）。
（3）愈伤组织:原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组培中则指在离体培养过程中由外植体诱导形成的具有分生能力的一团不规则、无序生长的薄壁细胞，多在植物体切面上产生。
（4）细胞培养：是对由愈伤组织等进行液体振荡培养所得到的能保持较好分散性的离体单细胞或花粉单细胞或很小的细胞团的培养。
（5）原生质体培养：是用酶及物理方法除去细胞壁的原生质体的培养（6）分化：细胞在分裂过程中发生结构和功能上的改变，从而在个体发育中形成各类组织和器官完成整个生活周期。
（7）再分化：脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器官的过程。
(8)初代培养：芽、茎段、叶片、花器等外植体在离体培养条件下诱导愈伤组织、侧芽或不定芽、胚状体过程。
（9）继代培养：更换新鲜培养基来繁殖同种类型的材料（愈伤组织、芽）。
（10）生根培养：将芽苗转接到生根培养基上培养成为完整植株的过程.（12）植物生长调节剂：是指一些具有植物激素活性的人工合成的物质。
（13）灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的微生物全部杀死。
（14）消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用.（15）器官培养包括离体的根、茎、叶、花器和果实的培养。
（16）茎尖培养：切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分，进行无菌培养。
（17）微茎尖培养: 带有1-2个叶原基的生长锥, 其长度不超过0.5mm。
（19）花器官的培养：花器官培养指整个花器及其组成部分如花托、花瓣、花丝、花柄、子房、花药等的无菌培养。
（20）无病毒苗木：是指不含该植物主要的危害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表现为阴性反应的苗木。
甾体激素性状特征
甾体激素性状特征
二、比旋度
示例 取炔诺适量，精密称定，加丙酮溶解并定量稀释制成每 1ml约含10mg的溶液，依法测定，比旋度为-37°至-32°
甾体激素性状特征
三、吸收系数
甾体激素类药物具有紫外吸收，最大吸收波长和吸收系 数可以反映药物的紫外吸收特征，具有鉴别意义。 具有α，β-不饱和酮基团的药物在240nm波长附近有最 大吸收，A环为苯环并具有酚羟基的雌激素类药物在 280nm波长附近有最大吸收
甾体激素性状特征
Байду номын сангаас
甾体激素性状特征
一、性状与溶解度
本类药物为白色至微黄色的粉末。出钠盐外，多数在三 氯甲烷中微溶至易溶，在甲醇或乙醇中微溶至溶解，在 乙醚或植物油中极微溶，在水中不溶或几乎不溶。
甾体激素性状特征
二、比旋度
甾体激素类药物多有手性碳原子，具有旋光性。 在二氧六环、三氯甲烷、丙酮或醇等溶剂中多数药物显 右旋特征。而左旋诺孕酮、炔诺酮和炔雌醇为左旋。
甾体激素类药物的分析——含量测定
第四节含量测定 容量法、⽐⾊法、紫外分光光度法、荧光法、⽓相⾊谱法、⾼效液相⾊谱法等，本章重点讨论四氮唑⽐⾊法、异烟肼⽐⾊法、Kober反应⽐⾊法、紫外分光光度法、⾼效液相⾊谱法等。
⼀、四氮唑⽐⾊法 （⼀）四氮唑的种类两种：2，3，5-三苯基氯化四氮唑（缩写为TTC），其还原产物为不溶于考，试⼤收集整理⽔的深红⾊三苯甲簪，λmax在480~490nm，也称红四氮唑（缩写为RT）。
蓝四氮唑（缩写BT），其还原产物为暗蓝⾊的双甲簪，λmax在525nm左右。
TTC和BT的结构式如下： （⼆）反应原理 ⽪质激素C17-α-醇酮基具有还原性，在强碱性溶液中能将四氮唑盐定量地还原为有⾊甲簪。
可能路线为α-醇酮基，失去2个电⼦氧化为20-酮基-21醛基，在碱催化下，分⼦内部重排；有部分形成20-羟基-21-醛基，C20-C21键断裂形成甾基甲酸衍⽣物和甲醛，以前者为主。
四氮唑盐得到2个电⼦，开环形成甲簪显⾊。
（三）测定⽅法 USP（23）采⽤蓝四氮唑；中国药典（1995版）和BP（1993）采⽤红四氮唑。
中国药典收载地醋酸泼尼松龙软膏的含量测定⽅法如下： 1.对照品溶液制备：精密称取醋酸泼尼松龙对照品20mg，置100ml量瓶中，加⽆⽔⼄醇振摇使溶解，并稀释⾄刻度，摇匀，即得。
2.供试品溶液的制备：精密称取本品4g（约相当于醋酸泼尼松龙20mg），置烧杯中，加⽆⽔⼄醇约30ml，置⽔浴上加热，充分搅拌，使醋酸泼尼松龙溶解，在置冰浴中放冷后，滤过，滤液滤⼊100ml量瓶中，同法提取3次，滤液并⼊量瓶中，加⽆⽔⼄醇稀释⾄刻度，摇匀，即得。
3.测定法：精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置⼲燥具塞试管中，各精密加⽆⽔⼄醇9ml与氯化三苯四氮唑试液2ml，摇匀，再精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25℃暗处放置40~45min，照分光光度法，在485nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。
内源激素测定方法
内源激素的提取、纯化和测定各时期取强、弱势粒置液氮中冷冻后于-80 ℃冰箱中保存，用于GA3、Z、ZR、IAA、ABA的提取和测定。
激素的提取和纯化参照陈远平[84]的方法并稍加改进，具体如下：0.5－1.0 g （叶片为1.0 g，籽粒为0.5 g）↓80 %甲醇约4+4+4+4ml（4ml磨，12ml洗）冰上研磨成匀浆↓4 ℃浸提12 h4 ℃5000 rpm离心15 min↓上清液，50ml离心管冰箱保存（F0650，6个）沉淀↓+80 %甲醇约10 ml （1）4 ℃5000 rpm离心15 min↓沉淀重复（1）↓合并上清液于50ml离心管（20+10+10ml）↓ 36 ℃旋转蒸发浓缩至5 ml-10 ml[约用1ml80%甲醇冲洗残余至浓缩瓶中][转速在173-193左右，吸附在壁上为止][温度32以上时拔掉插头]↓超纯水水洗2次，每次3 ml，简单震荡，合并↓0.1 g PVPP，4 ℃冰浴振荡1 h-70 ℃冰箱，完全冻结↓4 ℃冰箱融化↓4 ℃10000 rpm离心15 min上清液↓冷阱冷冻干燥（超低温冰箱预冻2h）1ml甲醇溶解，1ml甲醇润洗↓5 ml 100%甲醇活化C18小柱↓5 ml 80% （v/v）甲醇平衡，弃去用于活化和平衡的甲醇↓样品洗液过Sep-Pak C18小柱↓用5 ml 100%甲醇洗脱↓收集过柱液样品液和洗脱液分别浓缩至干，上机前用流动相1ml溶解↓0.45 μm微孔滤膜过滤10 μl进样以上处理都在弱光下进行。
激素测定采用高效液相色谱法（HPLC）。
色谱条件：Dubhe C18 4.6×250，5 μm，流动相：乙氰-甲醇- 0.6 % 乙酸（体积比5:50:45），流速：1.0 ml min-1，梯度洗脱见表1，检测波长254 nm；柱温30 ℃，进样量10 μl。
样品回收率为96.5±2.6%，每一个样品至少重复4次。
外标法定量。
粉剂生长激素的注射方法
第一步，溶解
注射前 20min将药物从冰箱里取出，去掉药盒，将安瓿瓶 放置于桌上，使药物恢复室温。 20min 过后，准备当天注射时所需的操作物品（注射器， 2ml 注射用水，砂轮，酒精消毒棉片）。 洗手。 检查注射器：拆开包装后，拉动注射器活塞，打开注射器 盖帽检查针尖是否完好无损，有无倒钩或歪斜。如发现有 异常情况需及时更换，如无异常情况则进行下一操作步 骤——溶解药物。 在 2ml 灭菌注射水瓶的安瓿瓶上有一个蓝色的小圆点，用 砂轮在蓝色小圆点正下方凹陷处划割数次。再用酒精棉片 消毒摩擦处，蓝点朝上，用均匀的力道轻轻将安瓿瓶掰开。
第二步，选择注射部位
第三步，注射
消毒皮肤。选择好注射部位后，进行皮肤消毒，以注射
点为中心向外螺旋形擦拭皮肤消毒皮肤的直径不少于 5cm。 捏起待注射部位的皮肤（较瘦的孩子注射肚皮时亦可绷紧 皮肤）。待皮肤上的消毒液自然挥发干后（切勿用手扇、 用嘴吹来加速消毒液的挥发，这样会使得消毒区域再次污 染），提捏起皮肤褶皱（用左手拇指、食指和中指轻轻捏 起皮肤，提捏时不需太用力，以降低注射至肌肉层的概 率）。
注意事项：
每次注射前都应检查注射部位，需避开出现疼痛、皮肤凹 陷、皮下硬结、出血、瘀斑、感染的部位。如发现皮下硬 结，请确认出现硬结的部位及大小，避开注射。要轮换部 位注射，连续两次注射部位之间间隔2-3㎝，交替选择注射 部位，避免产生皮下脂肪硬结，影响药液吸收。
注射。用右手拇指、食指和中指配合持针，针尖斜面朝
上与皮肤成45°角快速进针进针后左手松开褶皱皮肤，左 手缓慢推注药液，右手保持稳定切勿晃动。 拔针。药液推注完后，不要立即拔针，待针头在皮下停留 十秒钟，使得药物充分的吸收，再迅速拔针（拔针后如有 出血点，棉签轻轻擦拭即可）。 注射原则：两快一慢一停留（进针、拔针时要快，推注药 液时要慢，推注完后针头皮下停留10秒钟）。 注射完后注射器装置在利器盒内，不可随意丢弃！
生产激素实验报告
一、实验目的1. 了解激素的生产原理和实验方法。
2. 掌握激素的提取、纯化和鉴定技术。
3. 学习实验室操作规范，提高实验技能。
二、实验原理激素是一种生物体内部分泌物质，具有调节生理功能的作用。
本实验采用化学合成法生产激素，通过模拟生物体内分泌过程，使激素在体外产生。
三、实验材料1. 试剂：氢氧化钠、盐酸、硫酸、乙醇、丙酮、无水硫酸钠、活性炭等。
2. 仪器：反应瓶、冷凝管、蒸馏装置、旋转蒸发仪、分析天平、电热套等。
四、实验步骤1. 激素合成（1）将适量的氢氧化钠溶解于蒸馏水中，制成氢氧化钠溶液。
（2）将氢氧化钠溶液与适量的硫酸混合，搅拌均匀。
（3）在搅拌下，缓慢加入适量的盐酸，调节pH值至6.0。
（4）加入适量的活性炭，搅拌脱色。
（5）过滤，收集滤液。
2. 激素提取（1）将滤液与适量的乙醇混合，静置过夜。
（2）过滤，收集滤渣。
（3）将滤渣与适量的丙酮混合，搅拌溶解。
（4）过滤，收集滤液。
3. 激素纯化（1）将滤液置于旋转蒸发仪中，蒸去溶剂。
（2）加入适量的无水硫酸钠，搅拌干燥。
（3）将干燥后的固体溶解于适量的蒸馏水中。
（4）过滤，收集滤液。
4. 激素鉴定（1）取少量滤液，加入适量的比色剂，观察颜色变化。
（2）根据颜色变化，判断激素的存在。
五、实验结果与分析1. 激素合成通过上述实验步骤，成功合成了目标激素。
反应过程中，氢氧化钠与硫酸反应生成硫酸钠，同时产生大量热量，使得反应体系温度升高。
在加入盐酸后，pH值逐渐降低，最终达到6.0。
加入活性炭后，滤液颜色变浅，表明活性炭具有良好的脱色效果。
2. 激素提取通过乙醇和丙酮的混合溶剂，成功提取了目标激素。
在静置过夜的过程中，乙醇和丙酮与目标激素形成了络合物，便于后续的过滤操作。
3. 激素纯化通过旋转蒸发和干燥，成功纯化了目标激素。
在加入无水硫酸钠后，固体干燥迅速，表明无水硫酸钠具有良好的干燥效果。
4. 激素鉴定根据比色剂的颜色变化，成功鉴定了目标激素的存在。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
常用激素溶解方法
1、吲哚乙酸（IAA)：溶于乙醇、热水、碱性溶液，碱性溶液中稳定；一般使用95%酒精、NaOH溶液溶解；
2、吲哚丁酸(IBA)：溶于乙醇、热水、碱性溶液，碱性溶液中稳定；一般使用95%酒精、NaOH溶液溶解；
3、萘乙酸（NAA）：溶于乙醇、碱性溶液；一般使用95%酒精或NaOH溶液溶解；
4、玉米素（ZT)：溶于乙醇或碱性溶液；一般使用95%酒精或NaOH溶液溶解
5、6-苄基氨基嘌呤（6-BA）：溶于碱性溶液或酸性溶液；一般使用0.1molHCl或NaOH溶液溶解；
6、赤霉素（GA3）：溶于乙醇，使用95%酒精溶解
备注：生长素一般使用95%乙醇或NaOH 溶解；
分裂素一般使用NaOH溶液、95%乙醇或稀HCl溶解；。