实验四不规则抗体筛选与鉴定、效价测定

2.鉴定 2.鉴定
标管： ⑴标管：11支1-10、自c 加样： ⑵加样：Ps2滴+谱细胞1滴 离心、观察结果： ⑶离心、观察结果： ①直接观察 ②4℃10min观察 ③恢复室温观察，有格局为IgM ④37℃观察有无凝集 ⑤凝聚胺法或抗人球法（上谱细胞），观 察格局可判断有无IgG抗体 测效价： ⑷测效价：若有抗体，测效价
注意事项
1.筛选细胞凝集（盐水法、聚凝胺法、抗人球 法），要鉴定抗体特异性。 2.谱细胞凝集程度试管集中对比观察1+w、1+、 1+s。 3.自身凝集与否要进行观察。 4.盐水中有凝集可能为：有格局（抗-M、抗P）；无格局（抗-I、抗-HI）。无凝集用凝聚 胺法或抗人球法，以检查有无IgG抗体。
二、血型抗体效价测定（IgM、IgG） 二、血型抗体效价测定（IgM、IgG）
37℃水浴箱 37℃水浴箱
试剂:筛选细胞、 试剂:筛选细胞、谱细胞 标本: 标本:血清或血浆
操 作
1.筛选 1.筛选
(聚凝胺法 聚凝胺法) 聚凝胺法 (抗人球法 抗人球法) 抗人球法
Βιβλιοθήκη Baidu
⑴标管8支:S1、S2、S3、S1’、S2’、S3’、K、自c 标管8 ⑵加样：受检血清2滴+上述细胞1滴检测 加样 ⑶观察结果:阳性进行不规则抗体鉴定 观察结果: ⑷测抗体效价（室温、4℃10min、恢复室温 测抗体效价 10min、37℃3min ）
不规则抗体筛选与鉴定 及抗体效价检测
临检教研室
一、不规则抗体筛选与鉴定
目的： 目的： 检测有临床意义的不规则抗体 原理：受检血清+筛选细胞 一组3人份） 筛选细胞（ 原理：受检血清 筛选细胞（一组3人份）
受检血清+谱细胞 一组10人份） 10人份 受检血清 谱细胞 （一组10人份） 筛选 鉴定
方法:①盐水法②聚凝胺法③抗人球法 方法: 盐水法②聚凝胺法③ 器材: 小试管、滴管、试管架、记号笔、冰箱、离心机、 器材: 小试管、滴管、试管架、记号笔、冰箱、离心机、
目的 掌握抗体效价的测定方法 原理 Ab经过倍比稀释加入悬浮红细胞，以肉眼可 见“±”凝集的最高稀释倍数为抗体效价。 器材 试剂 小试管、记号笔、滴管、离心机 悬浮红细胞、血清、生理盐水
实验步骤 1.标记管号 标记管号：1、2、4、8、16、32…… 标记管号 2.从2号开始各管分别加生理盐水50ul 从 号开始各管分别加生理盐水50ul 3.加血清 加血清：1、2管各加血清 加血清 4.倍比稀释 倍比稀释：将2号管混匀，从中吸出50ul移入 倍比稀释 第3管，混匀；再从第3管吸出50ul移入第4 管，以此类推，至最后一管，吸出50ul弃去。 5.加悬红 加悬红：每管各加50ul ，混匀。 加悬红 6.3000r／min离心 离心15秒，直接观察结果 观察结果、 离心 观察结果 4℃10min、室温10min、37℃3min观察结果。
注意事项 1.更换滴管， 1.更换滴管，防止干扰 更换滴管 2.防止前带现象， 2.防止前带现象，看结果从高稀释度开始 防止前带现象 3.试剂细胞 3.试剂细胞 4.稀释液体积越小， 4.稀释液体积越小，产生误差越大 稀释液体积越小
思考题
1.为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水、 1.为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水、 为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水 聚凝胺、抗人球介质中进行。 聚凝胺、抗人球介质中进行。 2.抗体效价检测的临床应用 2.抗体效价检测的临床应用