红细胞计数、红细胞形态检查、血红蛋白测定
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HiN3法
血液分析仪法
1、氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法
1）原理：在Hb转化液中，除SHb外，Hb被高铁氰 化钾氧化成高铁血红蛋白，再与CN-结合，生成 稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN），吸 收峰为λ540nm，毫摩尔消光系数为44 L·mmol1 ·cm -1 。因此根据标本的吸光度，即可求得血红 蛋白总量（不含SHb）。
1.氧合血红蛋白（oxyhemoglobin, HbO2）:Hb与O2结 合时形成。
2.还原血红蛋白（reduced hemoglobin, Hbred）：未 与O2结合时的Hb。
3.高铁血红蛋白（hemiglo -bin, Hi）或正铁血红蛋白 （methemoglobin, Mhb）: Fe 2+被氧化成Fe 3+。
5个中方格内红细胞数
或= 100
×1012/L
【报告方式】
RBC（/L）= .
× 1012/L
【方法学评价】 1．手工显微镜法 2．血液分析仪法
为目前主要临床检验细胞计数方法 变异系数（coefficient of variation, CV ）小。
【质量控制】 1．手工法 误差来源包括：标本、操作、器
红细胞计数、红细胞形态检查、血红蛋白 测定
目的要求
▪ 1.掌握：①红细胞计数、氰化高铁血红蛋白 测定的原理、方法、质量控制、参考值、 方法学平价及临床意义 ； ②红细胞形态。
▪ 2.了解：血红蛋白测定其他方法 。
目的要求
▪ 重点 :红细胞计数、血红蛋白测定的原理、血片 红细胞形态、
▪ 难点:红细胞检验的形态、质控。
细胞系统，器官主要是在脾脏和肝脏；其次为骨 髓和其他部位。
二、红细胞计数
▪ 红细胞计数（red blood cell count,RBC）即测定单位 体积内红细胞数量。是血液一般检验的基本项目， 常作为诊断贫血和红细胞增多的主要指标之一。
测定方法
显微镜计数法 血液分析仪法
（一）显微镜计数法
【检测原理】 采用等渗稀释液将血标本稀释一定倍数，滴入血 细胞计数室中，显微镜下计数一定区域内红细胞 数，经换算得每升血液中红细胞数量。
ຫໍສະໝຸດ Baidu
2）器材： 分光光度计、移液管、微量吸管、试管等。 3）试剂：血红蛋白转化液（文齐液）成分如下 ①高铁氰化钾：使Hb转化成Hi ②氰化钾：使Hi形成HiCN ③无水磷酸二氢钾：防止混浊，调节pH值 ④TritonX100:非离子型表面活性剂，加速溶血，缩
材、固有误差（计数域误差） 2．仪器法 严格按操作规程；定期作室内和室间质控。
【参考值】 男性 : （4.00-5.50） × 1012/L 女性 : （3.50-5.00） × 1012/L 新生儿:（6.00-7.00） × 1012/L
【校正】WBC>100×109/L时，需校正： 实际红细胞/L=所数细胞总数－白细胞数 （正常红细胞：白细胞=750：1, 可忽略白细胞的 影响）
▪ 1%Hb的铁呈Fe3+状态，称为高铁血红蛋白 （Hi）。
Hb的合成受激素的调节：Epo和雄激素。
▪ 注意事项：1. 如α-链或β-链合成障碍，使三种正常 血红蛋白比例异常，即各型地中海贫血；如多肽 链发生氨基酸置换、丢失、加长，称为血红蛋白 病。
2.病理情况下可出现硫化血红蛋白（SHb）。
（二）血红蛋白衍生物及其吸收光谱
2.柠檬酸盐甲醛盐水 氯化钠 0.6g 调节渗透压 柠檬酸钠 1.0g 调节渗透压，抗凝 36%甲醛 1ml 防腐 蒸馏水加至100ml，过滤2次后使用。 3.生理盐水或加1%甲醛的生理盐水
【操作】 1.中号试管（15×100mm）加等渗稀释液2ml； 2.毛细血管采末梢血10μl加入上述稀释液，立即摇
4.碳氧血红蛋白（HbCO）、硫化血红蛋白 （SHb）：与O2结合的配位键被CO、S等占据。
5.氰化高铁血红蛋白（HiCN）：Hi与CN-结合而成。 波峰540nm，波谷504nm。
正常情况下，血液中血红蛋白主要是HbO2和 Hbred，以及少量HbCO和Hi。
（三）血红蛋白测定方法
手工法：
HiCN法 SLS-Hb法 AHD575法
【器材】 微量吸管，采血针，小试管，计数板，盖片，棉球， 显微镜。 【试剂】红细胞稀释液：任选一种 1.Hayem稀释液：氯化钠1.0g、硫酸钠（含10个结晶 水）5.0g，氯化高汞0.5g，蒸馏水加至200mL，过 滤后使用。 氯化钠---调节渗透浓度 硫酸钠---提高比重防止红细胞粘连 氯化高汞---防腐剂，有毒
【分类】（每个珠蛋白分子含两条α 链和两条非α 链）
正常人：HbA （ α2β2） 占90% 白；
成人主要血红蛋
HbA2（ α2δ2 ） 占2%-3% 成人次要血红蛋白 HbF （ α2γ2 ） 占2%以下 胎儿主要血红蛋白
▪ 生理情况下，99%Hb的铁呈Fe2+状态，称为还原 血红蛋白，亚铁状态的Hb与氧结合称氧合血红蛋 白（HbO2).
一、概 述
1.红细胞的生成
Epo
骨髓造血干细胞---------红系祖细胞--------原红细胞----
无分裂能
早幼----中幼----晚幼----力--网织红细胞--4--8--h--成熟红细胞 每个原红细胞可以生成16个红细胞。
2.红细胞的破坏
▪ 健康人红细胞平均寿命120天。 ▪ 红细胞主要因衰老而消亡，破坏主要在单核-巨噬
匀（稀释200倍）； 3.充池，静置2min后以低倍镜计数中间大方格内四
角和中央5个中方格内的红细胞数。
未染色红细胞呈双凹盘形，有黄绿色折光。
红细胞计数
2ml稀释液
充分混匀
10ul血液 下计数
充池、静止 镜
3mm WBC
WBC
WBC
WBC
【计算】
红细胞数/L=5个中方格内红细胞×5 ×10 ×200 ×106/L
【注意事项】 1.采血及摇匀迅速，防止血液凝固； 2.器械应防酸防碱且干燥； 3.充池要摇匀； 4.计数时，应识别酵母及白细胞。
三、血红蛋白测定
（一）血红蛋白的结构
▪ 血红蛋白结构： 由珠蛋白和亚铁血红素结合组成。
色素部分： Fe 2+ 亚铁血红素 原卟啉 Hb 蛋白质部分：珠蛋白
空间结构：每个血红蛋白有4条珠蛋白肽链， 每条肽链包裹1个亚铁血红素，形成具有 四级空间结构的四聚体。
血液分析仪法
1、氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法
1）原理：在Hb转化液中，除SHb外，Hb被高铁氰 化钾氧化成高铁血红蛋白，再与CN-结合，生成 稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN），吸 收峰为λ540nm，毫摩尔消光系数为44 L·mmol1 ·cm -1 。因此根据标本的吸光度，即可求得血红 蛋白总量（不含SHb）。
1.氧合血红蛋白（oxyhemoglobin, HbO2）:Hb与O2结 合时形成。
2.还原血红蛋白（reduced hemoglobin, Hbred）：未 与O2结合时的Hb。
3.高铁血红蛋白（hemiglo -bin, Hi）或正铁血红蛋白 （methemoglobin, Mhb）: Fe 2+被氧化成Fe 3+。
5个中方格内红细胞数
或= 100
×1012/L
【报告方式】
RBC（/L）= .
× 1012/L
【方法学评价】 1．手工显微镜法 2．血液分析仪法
为目前主要临床检验细胞计数方法 变异系数（coefficient of variation, CV ）小。
【质量控制】 1．手工法 误差来源包括：标本、操作、器
红细胞计数、红细胞形态检查、血红蛋白 测定
目的要求
▪ 1.掌握：①红细胞计数、氰化高铁血红蛋白 测定的原理、方法、质量控制、参考值、 方法学平价及临床意义 ； ②红细胞形态。
▪ 2.了解：血红蛋白测定其他方法 。
目的要求
▪ 重点 :红细胞计数、血红蛋白测定的原理、血片 红细胞形态、
▪ 难点:红细胞检验的形态、质控。
细胞系统，器官主要是在脾脏和肝脏；其次为骨 髓和其他部位。
二、红细胞计数
▪ 红细胞计数（red blood cell count,RBC）即测定单位 体积内红细胞数量。是血液一般检验的基本项目， 常作为诊断贫血和红细胞增多的主要指标之一。
测定方法
显微镜计数法 血液分析仪法
（一）显微镜计数法
【检测原理】 采用等渗稀释液将血标本稀释一定倍数，滴入血 细胞计数室中，显微镜下计数一定区域内红细胞 数，经换算得每升血液中红细胞数量。
ຫໍສະໝຸດ Baidu
2）器材： 分光光度计、移液管、微量吸管、试管等。 3）试剂：血红蛋白转化液（文齐液）成分如下 ①高铁氰化钾：使Hb转化成Hi ②氰化钾：使Hi形成HiCN ③无水磷酸二氢钾：防止混浊，调节pH值 ④TritonX100:非离子型表面活性剂，加速溶血，缩
材、固有误差（计数域误差） 2．仪器法 严格按操作规程；定期作室内和室间质控。
【参考值】 男性 : （4.00-5.50） × 1012/L 女性 : （3.50-5.00） × 1012/L 新生儿:（6.00-7.00） × 1012/L
【校正】WBC>100×109/L时，需校正： 实际红细胞/L=所数细胞总数－白细胞数 （正常红细胞：白细胞=750：1, 可忽略白细胞的 影响）
▪ 1%Hb的铁呈Fe3+状态，称为高铁血红蛋白 （Hi）。
Hb的合成受激素的调节：Epo和雄激素。
▪ 注意事项：1. 如α-链或β-链合成障碍，使三种正常 血红蛋白比例异常，即各型地中海贫血；如多肽 链发生氨基酸置换、丢失、加长，称为血红蛋白 病。
2.病理情况下可出现硫化血红蛋白（SHb）。
（二）血红蛋白衍生物及其吸收光谱
2.柠檬酸盐甲醛盐水 氯化钠 0.6g 调节渗透压 柠檬酸钠 1.0g 调节渗透压，抗凝 36%甲醛 1ml 防腐 蒸馏水加至100ml，过滤2次后使用。 3.生理盐水或加1%甲醛的生理盐水
【操作】 1.中号试管（15×100mm）加等渗稀释液2ml； 2.毛细血管采末梢血10μl加入上述稀释液，立即摇
4.碳氧血红蛋白（HbCO）、硫化血红蛋白 （SHb）：与O2结合的配位键被CO、S等占据。
5.氰化高铁血红蛋白（HiCN）：Hi与CN-结合而成。 波峰540nm，波谷504nm。
正常情况下，血液中血红蛋白主要是HbO2和 Hbred，以及少量HbCO和Hi。
（三）血红蛋白测定方法
手工法：
HiCN法 SLS-Hb法 AHD575法
【器材】 微量吸管，采血针，小试管，计数板，盖片，棉球， 显微镜。 【试剂】红细胞稀释液：任选一种 1.Hayem稀释液：氯化钠1.0g、硫酸钠（含10个结晶 水）5.0g，氯化高汞0.5g，蒸馏水加至200mL，过 滤后使用。 氯化钠---调节渗透浓度 硫酸钠---提高比重防止红细胞粘连 氯化高汞---防腐剂，有毒
【分类】（每个珠蛋白分子含两条α 链和两条非α 链）
正常人：HbA （ α2β2） 占90% 白；
成人主要血红蛋
HbA2（ α2δ2 ） 占2%-3% 成人次要血红蛋白 HbF （ α2γ2 ） 占2%以下 胎儿主要血红蛋白
▪ 生理情况下，99%Hb的铁呈Fe2+状态，称为还原 血红蛋白，亚铁状态的Hb与氧结合称氧合血红蛋 白（HbO2).
一、概 述
1.红细胞的生成
Epo
骨髓造血干细胞---------红系祖细胞--------原红细胞----
无分裂能
早幼----中幼----晚幼----力--网织红细胞--4--8--h--成熟红细胞 每个原红细胞可以生成16个红细胞。
2.红细胞的破坏
▪ 健康人红细胞平均寿命120天。 ▪ 红细胞主要因衰老而消亡，破坏主要在单核-巨噬
匀（稀释200倍）； 3.充池，静置2min后以低倍镜计数中间大方格内四
角和中央5个中方格内的红细胞数。
未染色红细胞呈双凹盘形，有黄绿色折光。
红细胞计数
2ml稀释液
充分混匀
10ul血液 下计数
充池、静止 镜
3mm WBC
WBC
WBC
WBC
【计算】
红细胞数/L=5个中方格内红细胞×5 ×10 ×200 ×106/L
【注意事项】 1.采血及摇匀迅速，防止血液凝固； 2.器械应防酸防碱且干燥； 3.充池要摇匀； 4.计数时，应识别酵母及白细胞。
三、血红蛋白测定
（一）血红蛋白的结构
▪ 血红蛋白结构： 由珠蛋白和亚铁血红素结合组成。
色素部分： Fe 2+ 亚铁血红素 原卟啉 Hb 蛋白质部分：珠蛋白
空间结构：每个血红蛋白有4条珠蛋白肽链， 每条肽链包裹1个亚铁血红素，形成具有 四级空间结构的四聚体。