卤虫活性方法

卤虫致死活性实验

卤虫Artemia salina cysts卵购于海风集团有限公司，虫卵的孵化率为84%-85%。

取卤虫卵15 mg置于500 mL三角瓶中，加入处理过的海水300 mL，用充气泵缓缓充气，25℃水浴中孵化48 h，除去卵壳及未孵化的卵，获得卤虫幼体活体备用。

海水处理方法：天然海水，煮沸，棉花过滤，抽滤掉杂质后备用。

卤虫致死活性实验依照Solis的改良法，取24孔培养板，每孔加1 mL含卤虫幼体的溶液（每孔20个卤虫），制成测试培养板。将粗提物、各有机相浸膏及各单体化合物，用DMSO/水配置成2 mg/mL 的溶液，加入培养板孔中，每个粗提物及各相浸膏样品设置100μg/mL, 50μg/mL,10μg/mL三个终浓度，各化合物设置50μg/mL,25μg/mL, 10μg/mL三个终浓度。每个浓度的样品又各设三个平行样。培养24 h 后，记录卤虫死亡个体数目。空白对照组(海水)，加处理过的海水(1 mL)；DMSO对照组(1 mL)含与测试样品相当浓度的DMSO，同样品的测试条件培养计数。

卤虫致死活性采用校正死亡率表示：

校正死亡率%=[(DMSO对照组存活率－样品组存活率)/DMSO 对照组存活率]×100%

空白对照组(海水)的情况用于观察自然条件下卤虫的状态，跟踪、判断实验情况。

实验材料：样品，离心管若干，20μL移液枪，DMSO, 24孔板，培养好的卤虫。

具体步骤：

浸膏称取1mg，用200μL DMSO溶解(此时样品的浓度为5mg/mL)，分别取20、12、2μL加入到24孔板内，此时为100μg/mL, 50μg/mL,10μg/mL用离心管取单体化合物1mg，溶解在200μL DMSO 中(此时样品的浓度为5mg/mL), 用移液枪依次取10μL，5μL，2μL上述配好的样品（样品量依次为50 μg，25μg，10μg）于24孔板中，然后分别加入990μL，995μL，998μL 海水，以配成样品浓度依次为50μg/mL,25μg/mL,10μg/mL。每个样品做2个对照。

每孔加入20只卤虫。

培养24小时后，观察并记录卤虫的存活情况。