QIAGEN试剂盒提取DNA步骤
QIAGEN微量DNA提取
QIAamp DNA Micro HandbookZhang weiCarrier RNA的作用：它可以提高DNA和柱子的结合能力，尤其是对于低目标分子的样本来说。
如果加入了Carrier RNA，那么最后洗脱下来的产物中会有目的DNA和Carrier RNA。
而且Carrier RNA的量远远大于DNA的量。
因此，通过计算初始加入多少CarrierRNA 的量来确定后续实验中所需要使用的洗脱产物的量。
加入310uLBuffer AE到310ug的Carrier RNA干粉末中，充分溶解，存于-20℃保存，不要反复冻融在3次以上。
轻轻的将Buffer AL和溶解的Carrier RNA混匀，不要产生泡沫。
含有Carrier RNA的Buffer AL可以在常温下（15-25℃）放置48h。
事先溶液准备Buffer ATL如果出现沉淀，可以在70℃下溶解。
Buffer AL如果出现沉淀，可以在70℃下溶解。
Buffer AW1加入25mL无水乙醇。
Buffer AW2加入30mL无水乙醇。
加入Carrier RNA：小量血液提取DNA过程中，每100uLBuffer AL加入1uL溶解的Carrier RNA。
在微量组织中提取DNA中，200uLBuffer AL中加入1uL Carrier RNA。
微量血液中提取DNA（可以从1-100u1-100uL L 血液中提取基因组DNA）（微量细胞的基因组DNA提取可以使用该步骤）1)吸取100uL血液加入1.5mL离心管中2)加入Buffer ATL至最终体积为100uL3)加入10uL蛋白酶K4)加入100uLBuffer AL，关上盖子，涡旋15s5)56℃孵育10min（孵育时反复震荡几次可以增加DNA产出量）6)简单离心，甩下瓶盖上的液滴1)加入50uL无水乙醇，关上盖子，涡旋15s，室温孵育3min（如果室温超过25℃，无水乙醇可以事先冰浴）7)简单离心，甩下盖子上的液滴8)将上步的液体转移至吸附柱里，6000×g（8000rpm）离心1min，弃滤液（个人建议可以将滤液再次吸回吸附柱内在洗脱一次）9)在吸附柱里加入500uL Buffer AW1，6000×g（8000rpm）离心1min，弃滤液10)在吸附柱里加入500uL Buffer AW2，6000×g（8000rpm）离心1min，弃滤液11)空转20000×g（14000rpm）离心3min12)将吸附柱转移至干净的1.5mL离心管，在膜上小心加入20-100uL BufferAE或者双蒸水来溶解，室温放置1min，20,000×g(14,000rpm)离心1min。
QIGEN DNA提取步骤
QIAamp DNA Blood Mini Kit简介：QIAGEN公司出品的QIAamp DNA Blood Mini Kit适用于使用微型离心机或真空处理从全血、血浆、血清、血沉、淋巴细胞以及体液样品中提取总(基因、线粒体和病毒)DNA。
该试剂盒可处理带有EDTA、柠檬酸盐和肝素等常规抗凝剂的新鲜或冷冻的全血样本，样品量可达200μl。
整套基因组的操作时间约为20–40分钟，一般可从200μl健康全血中获得4–12 μg DNA，洗脱体积可在50–200μl范围。
抽提原理：样品中的DNA可以特异性结合到QIAamp的硅胶膜上，通过两次洗涤可以将PCR抑制剂，如：二价阳离子和蛋白完全去除，最后结合在离心柱上的纯核酸可用水或试剂盒中的缓冲液进行洗脱收集。
开始前的注意事项：1. 所以的离心步骤需要在室温（15-25℃）进行2. 如果样品中含有的基因组当量少于10000，请添加载体DNA（carrier DNA）3. 200μl全血样品可以得到约3-12μgDNA开始前的准备工作：1. 将样品平衡到室温（15-25℃）2. 将水浴或是金属浴加热到56℃，以备第4步使用3. 将Buffer AE或蒸馏水平衡到室温，用于第11步的洗脱4. 确保Buffer AW1、AW2以及QIAGEN蛋白酶已经按照说明配置完毕5. 如果在Buffer AL中出现沉淀物，请在56℃孵育使其溶解操作步骤：以下为整个基因组提取操作的流程图，由于真空装置并非所有的实验室都配置，所以这里介绍的是离心法（流程图左侧）。
以下译介自QIAGEN官方出品的说明部分，黑粗体为实验操作的主体部分。
1. 吸取20μl QIAGEN蛋白酶（或者蛋白酶K）至1.5ml离心管的底部。
2. 加入200μl待提取基因组的样品至离心管中。
可以加入不超过200μl的全血、血浆、血清、血沉棕黄层，或者溶于200μl PBS中不超过5*106的淋巴细胞。
如果样品体积不足200μl，请使用PBS补足。
测序QIAGEN提取DNA步骤
一、试剂盒法精提DNA1、先用1ml生理盐水（NS）洗菌，使管内抗原在NS中充分混匀，8000rpm，3min 离心，弃上清，只留沉淀。
2、向管中加180ul的ATL和20ul的蛋白酶K，混匀，放入56℃金属浴（带摇匀功能的金属浴箱）3h。
3、如要去除RNA，向体系中加4ul的RNA酶，震荡，室温离心2min，使液体全部进入管内，向样品中200ul的AL，混匀，震荡，在金属浴中放置10min（70℃）之后离心。
或4、如不去除RNA，则直接向样品中加200ul的AL，震荡混匀，在金属浴中放置10min（70℃）之后离心。
5、加200μl的乙醇（96%～100%），混匀后短暂离心，将盖上液体离下（全部体系包括沉淀全加柱子上）。
6、全部管内的液体及白色沉淀都加入所试剂盒提供的带柱子的管中。
注意不要碰到管的边缘，盖好管盖，8000rpm离心1min，之后将柱子转移到新的管中（试剂盒提供）。
7、向柱子中加500ul的AW1，盖好管盖离心（8000rpm，1min）之后将柱子转移到新的管中（试剂盒提供）。
8、向柱子中加500ul的AW2，盖好管盖最大转速离心（13800rpm，3min）。
9、换普通的EP管，最大转速下空离3min，确保杂质都不留在柱子上。
10、换普通EP管，开盖晾5~10min，向柱子加200μl的AE，室温放置1min，离心（8000rpm，1min）。
11、在分光光度计上测所提取核酸的浓度。
使用ND-1000V3.2.5软件测DNA浓度（Nucleic Acid）。
在使用分光光度计前用O启该软件的使用，以后每次加样时用纸沾干净之前所加样品。
用溶解核酸ddH2的溶剂调 Blank，使之显示读数为0。
之后加样测浓度（注：每次加样时都要在混匀器上将样品充分混匀。
）测好浓度后在管盖及管壁标明编号、日期和所测核酸的浓度。
必要时电泳看是否真正的提出了核酸。
12、将所提核酸保存在-20℃的冰箱中备用.可以再用水溶一次，水溶模板用于多重PCR鉴定；AE溶模板一般用于测序。
全血 DNA 抽提(QIAGEN,德国)
全血DNA 抽提(QIAGEN，德国)
采用血液基因组DNA 提取试剂盒按说明书进行操作，简述如下：
(1)先将无水乙醇加到漂洗液PW 和缓冲液GD 中，并将血液标本置于室温下平衡至标本完全溶解。
(2)取经RNaseA 酶处理过的离心管，按顺序编号后加入500μl 混匀的标本，随后
加入细胞裂解液CL lml，充分混匀后10000rpm 离心1min。
弃去上清，留下细胞
核沉淀。
(3)加入200μ1 缓冲液GS，振荡混匀。
随后加入20μ1 蛋白酶K 溶液，充分混匀。
加缓冲液GB 200μ1，充分混匀后，56℃水浴10min 至溶液变清亮。
取出后，加
无水乙醇200μl，混匀。
(4)上部物质转移到吸附柱内，12000rpm 离心30s。
弃去液体，并将吸附柱CB3 套在收集管上。
(5)加入500 μl 缓冲液GD，12000rpm 离心30s，弃去液体，将吸附柱CB3 放入收集管中。
(6)加入700μl 漂洗液PW，12000rpm 离心30s，弃去液体，将吸附柱CB3 放入收集管中。
(7)加入500μl 漂洗液PW，12000rpm 离心30s，弃去液体。
12000rpm 继续离心2min，弃去液体。
并把吸附柱置于室温数分钟，彻底晾干吸附材料中的漂洗液。
(8)将吸附柱套上一个干净的离心管中。
向吸附膜中间位置悬空滴加80μl 洗脱缓冲液TB，室温放置5min，12000rpm 离心2min。
将溶液收集到离心管中并标号，置于-20℃冰箱中冻存备用。
QIAGEN中提DNA中文操作手册
质粒DNA中提方法（QIAfilter midi kit 25）适用于100 微克的高质粒或粘粒DNA，使用QIAfilter注射器样元件代替常规离心法以清除细菌裂解物。
低拷贝质粒，加入氯霉素放大后应视为高拷贝。
为质粒选择适当的培养体系。
在开始之前的注意事项■如果是低拷贝，最好增加裂解buffer的用量，以提高裂解效率，裂解缓冲卷，从而增加DNA 产量。
■可选：删除样品的步骤用符号表示☞为监测分析凝胶（见第34 页）的过程。
■加入buffer P3后，样品不再需要冰浴。
在开始之前做的东西■把提供的RNase A 添加到buffer P1 中。
一瓶RNase A (使用之前简要地离心）加入一瓶buffer P1 ，终浓度为100 ug/ml。
■检查buffer P2 是否由于低温存储产生SDS沉淀。
如有必要，37 ° C下使SDS溶解。
.■在4 °C预冷buffer P3。
■可选：使用前将提供的LyseBlue 试剂添加到buffer P1 混合。
每个buffer P1 瓶加入一小瓶LyseBlue （在使用之前简要离心），达到1: 1000 稀释。
LyseBlue 可以提供视觉识别从而防止常见处理错误，如细胞裂解导致效率低下和不完全沉淀的SDS、基因组DNA污染、细胞碎片等。
过程1.摇菌：新鲜划线的选择性平板（接种含有适当的选择性抗生素）挑一个单菌落放入2-5 ml LB 培养基中。
在37 ° C 摇菌约8 h （约300 rpm）。
使用4倍体系容积的试管或锥形瓶。
2.稀释选择性LB 培养基1/500 -1/1000。
若为高拷贝质粒，接种到25 毫升或● 100毫升的介质具有▲ 25—50 µ l 或● 100 – 200 µ l 起始培养液。
若为低拷贝质粒，接种▲ 50 — 100 毫升或● 250 毫升的介质具有▲ 100 – 200 µ l 或● 250-500 µ l 起始培养基。
QIAGEN-组织提取试剂盒
实验步骤
准备样本 将皮肤组织标本从70%的酒精
中取出，放入1 ×TE中浸泡1小时， 取出后用消毒的剪刀，镊子将其剪 成肉泥状。
消化样本
将肉泥状的皮肤组织放入EP管中， 加入消化液ATL180ul和蛋白酶
K20ul,55 ℃消化大约72h，期间用旋
涡混合器振荡混合助溶。消化好的样 本成清亮透明。
提取鼻拭子DNA的方法
刘健
在1.5ml Ep管中放入500ul PBST
.将鼻拭子棉花端剪下，放入Ep管中， 使其棉花端完全浸入PBST中
将Ep管放入4°C冰箱静置4-6小时
从冰箱中取出Ep管，挤干鼻拭子 的水分，并弃去鼻拭子
将Ep管放入4°C离心机， 离心20min，13000转
取出Ep管，小心地吸去 上清，保留沉淀
加入500ul的溶液AW1， 8000rpm离心1分钟
将离心柱置于一个干净的2ml 收集管内， 将含有过滤物的旧管丢弃
加入500ul的溶液AW2， 14000rpm离心3分钟
将离心柱置于一个干净的2ml 收集管内， 将含有过滤物的旧管丢弃
洗脱基因组DNA
将离心柱置于一个干净的1.5ml 的离心管内， 将含有过滤物的旧管丢弃
DNA的提取
田秀君
鉴于从现场收集的麻风标本多为 全血，皮肤活检标本，鼻拭子， 因此着重介绍从全血，皮肤活检 标本中提取DNA的方法。
实验一 皮肤组织中的DNA的提取
实验目的：掌握从皮肤组织中提取麻
风基因组DNA的方法
原理及应用：麻风基因组DNA通常先
用SDS裂解，蛋白酶K消化细胞，利用 酚，酚/氯仿抽提纯化，经异丙醇或乙 醇沉淀，获得基因组DNA。适用于PCR 扩增，Southern分析等实验。
QIAGEN-中文版去内毒素大提试剂盒
纯化高转染级别的质粒DNA 【工作台流程】BENCH PROTOCOL准备工作:1.将RNase A 溶液加入P1缓冲液(Buffer P1)2.加40ml96－100％乙醇(ethanol)于试剂盒的去内毒素水中(endotoxin-fre water)3.可选: 加 LyseBlue 试剂于 Buffer P14.检查 Buffer P2是否有SDS沉淀precipitation 有沉淀可在37摄氏度下暖化溶解5.Buffer P3 置于4摄氏度中预冷pre-chill6.细菌扩增培养1.补充:2.准备4-6个50ml新的或灭菌的离心管用于冷冻离心机下离心过夜菌液, 2个用于接下来的菌块重悬和与buffer混合3.1个无内毒素的30ml聚丙烯（不推荐聚碳酸酯, 因为不耐乙醇）管子（最好用圆底的离心管以利于高速离心）用于收集洗提的质粒DNA4.5个1.5ml的EP管用于收集抽提过程各步骤的产物用于实验后分析和质量控制5.准备1个冰浴盒用于步骤66.准备室温下的异丙醇10.5ml7.4摄氏度冰冻离心机和分光光度仪,琼脂糖凝胶电泳步骤: peocedureA.细菌培养、收获和裂解bacterial culture,harvest & lysis1.100ml高拷贝high-copy或250ml低拷贝low-copy过夜overnight LB培养菌液于冰冻离心机4摄氏度；6000×g；15min从新鲜的抗生素平板上挑取一个单菌落, 2-5ml抗生素LB液体初始培养基30摄氏度孵化约8小时（振荡300rpm, 注意孵化容器容积至少4倍于培养液）抗生素LB液体培养基稀释初始培养液到1:500-1000。
(高拷贝质粒100-200ul初始培养液加于100ml培养基；低拷贝质粒250-500ul初始培养液加于250ml培养基)37摄氏度300rpm振荡12-16小时。
(孵化容器容积至少4倍于培养液, 培养至细菌密度约3-4×109/ml, 即离心后菌块湿重约3g/L培养基)培养基配方：10g蛋白胨+5g酵母+10g氯化钠溶于800ml蒸馏水, 用1 N NaOH 调pH值至7.0, 用蒸馏水调整至1L。
Qiagen80004 抽提RNA、蛋白和DNA
实验目的:白三烯受体mRNA的表达实验方法：（半）定量聚合酶联反应实验步骤：一、抽提RNA实验器具和材料1，实验器具与材料：（1）移液枪：1ml、200ul、10ul（2）吸头：1ml、200ul、20ul（3）吸头台：放置1ml吸头的一个，放置200ul和20ul的吸头一个（4）EP管1.5ml、2ml、200ul、10ul（5）电动匀浆器（6）50ml离心管（7）饭盒（8）冰盒碎冰（9）酒精纱布，供清洁桌面和试管架等。
2, 实验器具的处理与准备（1）金属制品：（镊子等）提前确定组织的重量，如果组织需要分割，还需要一个刀片。
先洗干净，再送干烤3次。
（不需要泡DEPC水）3，试剂配制和准备：（1）DEPC水：直接购买配置好的。
DEPC剧毒，购买那些已经高温高压处理去除DEPC 的水。
（2）配70％乙醇：用DEPC水和无水乙醇按照3：7的比例配置。
实际上，用超纯水配置也可以，因为70％乙醇用来提取蛋白，不涉及RNA降解的问题。
（3）无水乙醇（4）β-ME（5）DTT（6）Buffer RLT 、buffer ALO、 Buffer RPE、buffer AW1、buffer AW2、Buffer EB 准备工作：1. 在每 1 ml Buffer RLT 中加入10 ul β-ME (加入β-ME的Buffer RLT可在室温下放置1月)。
根据实验需要吸取Buffer RLT，不要把β-ME加到瓶子里。
2. 每1ml buffer ALO中加入8mg DTT。
根据实验需要吸取Buffer ALO。
3. Buffer RPE、buffer AW1、buffer AW2中加入一定体积的无水乙醇。
瓶盖上打钩说明已加入无水乙醇，如果没有打钩，需要加入无水乙醇。
4. buffer RLT可能会有沉淀，必要时可适当加热使其溶解，在室温中保存。
5. 预热Buffer EB至70℃（此步骤适用于抽提DNA）。
实验步骤：样本研磨和匀浆。
QIAGEN质粒大提试剂盒
产品简介本试剂盒采用独特的硅胶模吸附技术，高效专一地结合质粒DNA。
同时采用特殊的溶液P4和过滤器CS1，可有效的出去内毒素、蛋白质杂志；整个提取过程仅需1h，方便快捷。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化和细胞转染多种细胞等试验。
推荐每次菌液使用量：高拷贝质粒推荐使用量为100ml，得率一般在500-1500μg左右；低拷贝质粒推荐使用量为200ml，得率一般在200-600μg左右。
注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1.溶液P1在使用前先加入RNase A （将试剂盒中提供的RNase A全部加入)，混匀，置于2-8℃保存。
2.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在漂洗液PW中加入无水乙醇。
3.使用前先检查平衡液BL，溶液P2和P4是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
4.注意不要直接接触溶液P2和P4，使用后应立即盖紧盖子。
5.使用过滤器时请将推柄小心缓慢地从过滤管中抽出，避免滤膜因压力而松动。
6.提取的质粒量与细菌培养浓度，质粒拷贝数等因素有关。
如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、P4的用量；洗脱缓冲液推荐在65-70℃水浴中预热，可以适当延长吸附和洗脱时间，以提高提取效率。
7.实验前使用平衡液BL处理吸附柱，可以最大限度激活硅基质膜，提高得率。
8.用平衡液处理过的柱子最好立即使用，放置时间过长会影响使用效果。
质粒DNA 浓度及纯度检测得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA。
纯化的质粒DNA OD260/OD280通常在1.8-2.0左右，可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的实验中。
操作步骤：1.柱平衡步骤：向吸附柱CP6中（吸附柱放入50ml收集管中）加入2.5ml的平衡液BL，8000rpm（~8228×g）离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
QiaGen粪便DNA提取试剂盒中文说明书
注意:1.准备好70℃水浴锅。
2.所有的离心操作都在室温下(15-25℃),14000转/分钟3.用BufferAL和InhibitEXBuffer溶解任何沉淀都要加热和混匀。
4.Buffer AW1和Buffer AW2都加乙醇。
5.使用之前混合所有缓冲液。
1.称取200ul样品在2ml的离心管中,离心管放在冰上。
2.每个样品添加1mlInhibitEXBuffer,然后持续旋涡混合1min或者直到样品混合均匀。
3.在70℃加热悬浮液5min(难以溶解的细胞溶解温度可以提高到95℃),然后旋涡混合15s。
4.离心样品1min析出沉淀。
5.另取1.5ml离心管加15ulProteinaseK。
6.移取200ul步骤4的上清液至1.5ml含ProteinaseK的离心管中。
7.然后添加200ulBufferAL,旋涡混合15s。
(注意:不要直接添加ProteinaseK到BufferAL中,样品和BufferAL必须充分混合成均匀混合液)8.70℃孵育10min。
9.添加200ul乙醇到溶解液中,旋涡混合。
10.小心移取600ul步骤9的裂解液到QIAamp旋转柱中,盖上盖子,离心1min。
把QIAamp旋转柱放到一个新的2ml的收集管中,丢掉含有滤液的管。
11.小心打开QIAamp旋转柱,添加500ulBufferAW1,离心1min。
把QIAamp旋转柱放到一个新的2ml收集管中,丢掉包含滤液的收集管。
12.小心打开QIAamp旋转柱,添加500ulBufferAW2,离心3min,丢掉包含滤液的收集管。
13.把QIAamp旋转柱放到一个新的2ml的收集管中,丢掉旧的含有滤液的收集管,离心3min。
14.把QIAamp旋转柱放到一个新的1.5ml的离心管,直接移取200ulBufferATE到QIAamp薄膜上。
室温孵育1min,然后离心1min洗提DNA。
通过UV吸收度判断DNA纯度,使用BufferATE做空白设计避免结果错误。
QIAgen_FFPE_DNA_kit石蜡组织提取DNA说明书
1) 实验试剂的准备a. 配置QIAamp DNA FFPE Tissue试剂盒缓冲液检查Buffer ATL及Buffer AL原液是否有沉淀物形成。
有沉淀形成时，须升温至70℃同时适度晃动，使沉淀物全部溶解。
b. 配置Buffer AW1在19ml Buffer AW1原液中加入25ml(96-100%)无水酒精，盖紧瓶盖并摇匀。
在试剂瓶上作已加入无水酒精的标记，同时须标注配置时间。
配置好的溶液可在室温(15-20℃)下保存一年。
c. 配置Buffer AW2在13ml Buffer AW2原液中加入30ml(96-100%)无水酒精，盖紧瓶盖并摇匀。
在试剂瓶上作已加入无水酒精的标记，同时须标注配置时间。
配置好的溶液可在室温(15-20℃)下保存一年。
2) 操作步骤a. 使用刻刀修整石蜡组织上组织周围多余的石蜡。
b. 根据组织大小不同切取10μm厚的石蜡组织切片4~10张。
如石蜡标本组织面暴露于空气中时间过长，须舍弃前2~3张石蜡组织切片。
c. 将切取的石蜡组织切片置入已做好标记的1.5ml eppendorf tube中，加入1ml 二甲苯。
盖紧盖子并使用vortex振荡器充分振荡10s。
d. 使用Thermo离心机在全速状态下离心2min。
实验全程须保持在室温状态下进行(15~25°C)。
e. 离心结束后，使用移液器吸取并遗弃上部已溶解石蜡的二甲苯溶液，操作中应注意不要将下方的组织也同时丢弃。
f. 加入1ml 96％~100%无水酒精，再次vortex振荡器充分振荡。
目的是用酒精充分溶解组织中残留的二甲苯。
g. 在室温下全速离心2min。
h. 使用移液器吸取并遗弃上部已溶解二甲苯的酒精溶液，操作中应使用细小的移液器头并应注意不要移去下方荡洗后的组织。
i. 在室温下打开eppendorf tube盖子，静置至所有残余酒精全部挥发。
j. 加入180μl buffer ATL及20μl蛋白酶K，vortex振荡器充分振荡。
qiagen 56304提取原理
qiagen 56304提取原理
Qiagen 56304是一种用于DNA提取的试剂盒，其提取原理如下：
1. 预处理：首先，细胞样品需要经过预处理步骤，包括细胞裂解和蛋白质降解。
细胞裂解是将细胞膜破裂，释放细胞内的DNA，通常会使用裂解缓冲液和表面活性剂来实现。
然后，
蛋白质降解酶会将细胞中的蛋白质分解，以消除蛋白质的干扰。
2. 绑定：在这一步骤中，DNA会与硅胶膜相互作用。
硅胶膜
是具有高亲和力的材料，可以与DNA形成非特异性的结合。
将细胞裂解产物与试剂盒中的绑定缓冲液混合，并在硅胶膜上进行吸附。
3. 洗涤：洗涤步骤旨在去除非特异性结合的杂质。
通过添加洗涤缓冲液，硅胶膜上的非特异性结合物质会被冲洗掉，而
DNA仍然保留在硅胶膜上。
4. 解吸：解吸步骤是将DNA从硅胶膜上解吸下来。
使用低盐
含量的洗涤缓冲液，可以使DNA从硅胶膜上解吸下来溶于溶
液中。
通过上述步骤，Qiagen 56304试剂盒能够高效地提取纯度较高
的DNA样品，可用于后续的分析和实验。
QIAGEN试剂盒--动物组织样品DNA提取方法
QIAGEN试剂盒--动物组织样品DNA提取方法QIAGEN试剂盒提取组织DNA试验前的注意事项1、仔细阅读试剂盒使用说明。
2、所有的离心操作应在15-25℃下完成。
3、涡旋一般进行5-10s。
4、对于福尔马林或石蜡浸泡过样品，另见说明。
5、总RNA提取另见说明。
试验准备1、Buffer ATL 和Buffer AL保存时可能会出现沉淀，如果必要的话，可置于56°C水浴至完全溶解。
2、提供的Buffer AW1 和Buffer AW2是高浓度液，使用前需用96-100%的乙醇稀释至瓶子上注明的使用浓度。
3、预备一个热的振荡器或摇床或摇动的平板至56°C备步骤2使用。
4、如果为冻存的组织，需要将其溶至室温。
但是要避免此类的反复溶解。
应额外准备的物品：200μL枪及枪头；20μL枪及枪头；2mL的微量离心管；96-100%乙醇；56℃水浴锅；离心机（20,000 ×g (14,000 rpm)）；小镊子；振荡器操作步骤：1、取25mg的动物组织（脾脏最多10mg）粉碎成碎片放入1.5ml的微量离心管中。
对于啮齿类的尾巴，择取两只小鼠或一只大鼠尾巴0.4-0.6cm。
加入180μL buffer ATL，并将对应的动物作以标记。
（保证足够量的组织样本，对于脾脏由于其细胞含量丰富，我们建议不超过10mg。
我们强烈建议将组织粉碎以便于溶解提取DNA。
最好的方法是在添加bufferATL和蛋白酶K之前置于液氮中冻融。
同时，也可以采用QIAGEN公司产的几种组织匀浆机进行组织粉碎）2、加入20μL蛋白酶K，涡旋混合均匀，56℃孵育直至溶解。
在组织溶解的过程中不断（偶尔）涡旋使组织充分散开，或将该微量离心管置于摇晃的平台上，如摇床等。
（不同组织溶解时间不同，通常组织为1-3h，小鼠尾巴为6-8h。
如果试验条件许可，可以溶解过夜，其不会影响DNA提取）3、涡旋15s。
加入200μL buffer AL并涡旋使充分混匀，70℃孵育10min，然后加入200μL 乙醇（96%-100%），再次涡旋混合。
QIAGEN提取DNA
QIAGEN提取DNA的步骤缓冲液AP1和AP3/E可能在贮藏过程中形成沉淀，使用前检查，必要时65℃预热溶解。
(注意加完乙醇后就不能再加热)缓冲液AW和AP3/E第一次使用要加入适量乙醇（96-100%）。
1在磨碎的植物材料（湿重最大不超100 mg，干重不超20 mg）或真菌材料中加入400 µl 缓冲液AP1和4 µl RNase A 贮液（100 mg/ml），剧烈涡旋。
2将混合物在65℃下温育10 min，在温育过程中上下倒置试管混和2-3次。
3加入130 µl缓冲液AP2，混和，在冰上放置5 min。
（不必）可选条件：在20000 × g（14000 rpm）离心5 min。
4（先迅速离心清盖后）将裂解物置于QIAshredder Mini Spin Column（柱）中，下置2 ml 收集管，在20000 × g（14000 rpm）离心2 min。
5将步骤4中的滤液转移到一新的试管中，不要搅动细胞碎片小球。
6 在溶解清液中加入1.5倍体积的缓冲液AP3/E，吹吸混匀。
7将步骤6中650 µl 混和液（包括形成的沉淀）加入DNeasy Mini Spin Column（柱），下置试剂盒提供的2 ml收集管。
在≥6000 × g（≥8000 rpm）离心1 min，丢弃滤液。
8用剩余的混和液，重复步骤7，丢弃滤液与收集管。
9将DNeasy Mini Spin Column（柱）下置试剂盒提供的2 ml收集管，加入500 µl缓冲液AW，在≥6000 × g（≥8000 rpm）下离心1 min，丢弃滤液，在步骤10中再用一次收集管。
10 在DNeasy Mini Spin Column（柱）中加入500 µl缓冲液AW，在≥20000 × g（14000 rpm）下离心2 min，使膜干燥。
QIAGEN试剂盒提取DNA步骤
意加完乙醇后就不能再加热）缓冲液APW和AP3/E第一次使用时要加入适量乙醇（96%-100%1. 研磨前擦拭工作台。
2. 研钵里加入液氮，预冷。
研磨材料，加3-5次材料，充分研磨。
液氮预冷离心管后加入材料，加至1/2或2/3处。
若暂时不加缓冲液，就放入至液氮冷冻，用时拿出。
拿出后立即轻轻开盖，防止材料喷出。
3. 力口入440 I缓冲液AP1 （必须为预热好的），。
盖好后使劲颠倒混匀材料和缓冲液。
4. 加4 IRNase后，剧烈涡旋，使管底的材料也与液体混合。
5. 将混合物在65摄氏度下温浴15min,每5min中上下轻轻颠倒试管2-3次。
准备冰盒。
6. 加入130 l缓冲液AP2,上下颠倒混匀，在冰上放置5Min。
7. 14000rpm/min 离心5min.8. 仔细缓慢将上层液体（500 l ）置于QIAshredder Mini Spin Colum （柱）中（紫色）。
14000rpm/min 离心2min.9. 将上步中的滤液（450 l）缓慢吸至一新的离心管（自己准备的Axygen离心管）中，注意别吸到管底细胞碎片小球。
10. 在溶解清液中仔细缓慢加入倍体积（675 l ）的缓冲液AP3/E。
一定要仔细，慢慢抽吸至两者充分混匀。
11. 将上步中650 l混合液（包括形成的沉淀）加入Dneasy Mini Spin Colum （柱）中（白色），其余的混合液留着，用于再次抽提。
8000rpm/min （一般用14000rpm/min ）离心1Min，丢弃废液。
准备灭菌的去离子水于65摄氏度水浴锅中预热。
12. 剩余的混合液继续加入上一步的Dneasy Mini Spin Colum （柱）中，8000rpm/min （一般用14000rpm/min ）离心1Min，丢弃废液和收集管。
13. 将Dneasy Mini Spin Colum （柱）下置试剂盒提供的2ml离心管（取时手不要伸进去，隔着塑封袋捏出离心管）。
DNA提取步骤中文版
一．DNA的抽提（QIAGEN试剂盒）。
（1）标记1.5mlEP管，吸取20ul蛋白酶K加入1.5mlEP管底部。
（2）加入200ul血清至1.5mlEP管。
若血清不足200ul，可加适量PBS 补充。
（余血清-20℃保存）（3）加200ul缓冲液AL至样品管，震荡混匀15s。
（4）56℃孵育10min。
（5）稍微离心，将EP管壁上的液体离心下去。
（6）加200ul无水乙醇至样品管中，震荡混匀15s，稍微离心。
（7）混合液转移至QIAamp螺旋住置于2ml收集管上，小心勿沾湿边缘。
（加样器垂直于螺旋住，将混合液慢慢加至滤膜中间）。
关盖，标记，8000rpm离心1min。
再将QIAamp螺旋住转移至一个清洁的2ml 收集管内，弃含滤液的收集管。
（8）打开QIAamp螺旋柱加入500ul缓冲液AW1，勿沾湿边缘。
关盖，8000rmp离心1min。
再将QIAamp柱转移至一个清洁的2ml收集管内，弃含滤液的收集管。
（9）打开QIAamp柱加入500ul缓冲液AW2，勿沾湿边缘。
关盖，全速12000rpm离心3min。
（10）标记1.5ml离心管，将QIAamp柱置于一个清洁的1.5mlEP管，弃含滤液的收集管。
打开QIAamp柱加入50ul缓冲液AE。
室温孵育3min。
12000rpm离心1min。
继续下一步实验操作或-20℃保存。
二：目的片段的扩增第一轮PCR反应体系30ul（要有一个阳性对照和一个阴性对照），n个标本10×Buffer 3n uldNTP（200ul/ml） 3n ulprimer 上游引物 0.3n ul下游引物 0.3n ulTaq酶 0.5n ulH2O 20n ul模板DNA 3 ul反应条件94℃ 1min94℃ 20sec55℃ 20sec72℃ 1min20sec反应35个循环注意：配体系时先配总反应体系（混匀），分装后，再加标本（一管一枪头）。
防止污染。
配置体系要在超净台内操作。
Qiagen全血基因组DNA提取标准步骤(51185)
全血基因组DNA提取
试剂盒名称：
QIAamp DNA Blood Midi Kit（100）
Qiagen全血基因组DNA提取试剂盒
试剂盒货号：
51185
前期准备：
1.5mL EP管、水浴锅、水平转子离心机、震荡器等设备耗材准备，试剂盒提供的蛋白酶溶解、AW1和AW2使用前加入相应体积的无水乙醇。
注：所需设备耗材由新华医院分子诊断实验室提供。
实验步骤：
1、往15mL离心管管底加入100微升Qiagen蛋白酶。
2、加入1mL全血。
注：全血体积不足1mL时，PBS补齐1mL。
3、加入1.2mL AL缓冲液，充分混匀，震荡器上斡旋震荡至少一分钟，使溶液成为均相溶液。
4、70℃水浴锅温育10分钟。
5、加入1mL无水乙醇，充分震荡。
6、转移液体至吸附柱中，3000rpm离心3分钟，拿出吸附柱，倾倒滤液，将吸附柱重新放回15mL离心管中。
7、小心加入AW1缓冲液至吸附柱中，盖上盖子，5000rpm离心
1分钟。
8、加入2mL AW2缓冲液至吸附柱中，盖上盖子，5000rpm离心15分钟。
9、将吸附柱转移至一新的15mL离心管中，弃去装有滤液的收集管。
10、加入200微升AE洗脱液，室温静置5分钟，5000rpm离心2分钟。
11、将获得的基因组DNA进行浓度及质量测定。
QIAampDNAMiniKitprotool（中文版）
组织样品DNA的提取(QIAamp DNA Mini Kit)实验前注意：⏹样品保持于室温（15-25℃）⏹准备好水浴两组：一组56℃用于步骤3，一组70℃用于步骤5⏹步骤11中用于洗脱的Buffer AE和蒸馏水保持于室温（15-25℃）⏹Buffers AW1 and AW2按照17页说明准备⏹如果Buffer ATL或AL中有沉淀形成，则于56℃中水浴以溶解之具体步骤：1.切割组织样品。
应少于25mg（脾组织则少于10mg）。
DNA产量与组织类型和大小有关。
一般，1mg组织可得到大约0.2-1.2μg的DNA。
2.（剪碎）将剪成尽量小的碎块，置于2ml离心管中，加入180μl Buffer ATL。
（研磨）将25mg组织置于液氮中，充分研磨后倒入2ml离心管中，加入180μl Buffer ATL。
此过程中，液氮可以挥发，但组织不能融化。
（匀浆处理）将25mg组织置于2ml离心管中，加入不超过80μl的PBS，匀浆器处理。
加入100μl Buffer ATL。
Buffer ATL不稀释时，推荐（研磨）。
3.加入20μl proteinase K，振荡处理20s，56℃水浴至组织完全裂解。
proteinase K必须使用，因为QIAGEN Protease在Buffer ATL存在的情况下活性已降低。
裂解时间视组织块大小而定，通常1-3h即可完全裂解。
过夜处理是合理的，无不良影响。
为保证裂解效率，应使用振荡水浴或者振荡台。
4.短时离心，以去除离心管盖内沿液体。
5.加入200μl Buffer AL，振荡15S，70℃水浴10min。
短时离心，以去除离心管盖内沿液体。
加入Butter AL后，可能会产生白色沉淀物，70℃水浴中大都可以溶解。
这些沉淀物对于抽提过程和后续实验没有影响。
6.加入200μl乙醇（96%-100%），振荡15s，短时离心，以去除离心管盖内沿液体。
加入乙醇后，可能会产生白色沉淀物。
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QIAGEN试剂盒提取DNA步骤
缓冲液AP1和AP3/E可能在储藏过程中沉淀，使用前检查，必要时65摄氏度预热溶解（注意加完乙醇后就不能再加热）
缓冲液APW和AP3/E第一次使用时要加入适量乙醇（96%-100%）
1.研磨前擦拭工作台。
2.研钵里加入液氮，预冷。
研磨材料，加3-5次材料，充分研磨。
液氮预冷离心管后
加入材料，加至1/2或2/3处。
若暂时不加缓冲液，就放入至液氮冷冻，用时拿出。
拿出后立即轻轻开盖，防止材料喷出。
3.加入440l缓冲液AP1（必须为预热好的），。
盖好后使劲颠倒混匀材料和缓冲液。
4.加4lRNase后，剧烈涡旋，使管底的材料也与液体混合。
5.将混合物在65摄氏度下温浴15min,每5min中上下轻轻颠倒试管2-3次。
准备冰盒。
6.加入130l缓冲液AP2，上下颠倒混匀，在冰上放置5Min。
7.14000rpm/min离心5min.
8.仔细缓慢将上层液体（500l）置于QIAshredder Mini Spin Colum（柱）中（紫色）。
14000rpm/min离心2min.
9.将上步中的滤液（450l）缓慢吸至一新的离心管（自己准备的Axygen离心管）中，
注意别吸到管底细胞碎片小球。
10.在溶解清液中仔细缓慢加入倍体积（675l）的缓冲液AP3/E。
一定要仔细，慢慢抽
吸至两者充分混匀。
11.将上步中650l混合液（包括形成的沉淀）加入Dneasy Mini Spin Colum（柱）中（白色），
其余的混合液留着，用于再次抽提。
8000rpm/min（一般用14000rpm/min）离心1Min，丢弃废液。
准备灭菌的去离子水于65摄氏度水浴锅中预热。
12.剩余的混合液继续加入上一步的Dneasy Mini Spin Colum（柱）中，8000rpm/min（一
般用14000rpm/min）离心1Min，丢弃废液和收集管。
13.将Dneasy Mini Spin Colum（柱）下置试剂盒提供的2ml离心管（取时手不要伸进去，隔
着塑封袋捏出离心管）。
加入500l缓冲液AW，放置3-5min，8000rpm/min（一般用14000rpm/min）离心1Min,丢弃废液，收集管再用一次。
14.Dneasy Mini Spin Colum（柱）中加入500l缓冲液AW，放置3-5min，14000rpm/min
离心3Min,丢弃废液, 收集管再用一次。
15.Dneasy Mini Spin Colum（柱）中加入500l无水乙醇，放置3-5min，14000rpm/min离
心3Min,丢弃废液和收集管
16.在Dneasy Mini Spin Colum（柱）下置或2ml离心管（自己准备的Axygen离心管）,吸取
100l灭菌的去离子水（必须为预热的）加到Dneasy膜上。
65摄氏度水浴5min。
8000rpm/min（一般用14000rpm/min）离心1min洗提DNA。