QIAGEN试剂盒提取DNA步骤

QIAGEN试剂盒提取DNA步骤

缓冲液AP1和AP3/E可能在储藏过程中沉淀，使用前检查，必要时65摄氏度预热溶解（注意加完乙醇后就不能再加热）

缓冲液APW和AP3/E第一次使用时要加入适量乙醇（96%-100%）

1.研磨前擦拭工作台。

2.研钵里加入液氮，预冷。研磨材料，加3-5次材料，充分研磨。液氮预冷离心管后

加入材料，加至1/2或2/3处。若暂时不加缓冲液，就放入至液氮冷冻，用时拿出。拿出后立即轻轻开盖，防止材料喷出。

3.加入440l缓冲液AP1（必须为预热好的），。盖好后使劲颠倒混匀材料和缓冲液。

4.加4lRNase后，剧烈涡旋，使管底的材料也与液体混合。

5.将混合物在65摄氏度下温浴15min,每5min中上下轻轻颠倒试管2-3次。准备冰盒。

6.加入130l缓冲液AP2，上下颠倒混匀，在冰上放置5Min。

7.14000rpm/min离心5min.

8.仔细缓慢将上层液体（500l）置于QIAshredder Mini Spin Colum（柱）中（紫色）。

14000rpm/min离心2min.

9.将上步中的滤液（450l）缓慢吸至一新的离心管（自己准备的Axygen离心管）中，

注意别吸到管底细胞碎片小球。

10.在溶解清液中仔细缓慢加入倍体积（675l）的缓冲液AP3/E。一定要仔细，慢慢抽

吸至两者充分混匀。

11.将上步中650l混合液（包括形成的沉淀）加入Dneasy Mini Spin Colum（柱）中（白色），

其余的混合液留着，用于再次抽提。8000rpm/min（一般用14000rpm/min）离心1Min，丢弃废液。准备灭菌的去离子水于65摄氏度水浴锅中预热。

12.剩余的混合液继续加入上一步的Dneasy Mini Spin Colum（柱）中，8000rpm/min（一

般用14000rpm/min）离心1Min，丢弃废液和收集管。

13.将Dneasy Mini Spin Colum（柱）下置试剂盒提供的2ml离心管（取时手不要伸进去，隔

着塑封袋捏出离心管）。加入500l缓冲液AW，放置3-5min，8000rpm/min（一般用14000rpm/min）离心1Min,丢弃废液，收集管再用一次。

14.Dneasy Mini Spin Colum（柱）中加入500l缓冲液AW，放置3-5min，14000rpm/min

离心3Min,丢弃废液, 收集管再用一次。

15.Dneasy Mini Spin Colum（柱）中加入500l无水乙醇，放置3-5min，14000rpm/min离

心3Min,丢弃废液和收集管

16.在Dneasy Mini Spin Colum（柱）下置或2ml离心管（自己准备的Axygen离心管）,吸取

100l灭菌的去离子水（必须为预热的）加到Dneasy膜上。65摄氏度水浴5min。

8000rpm/min（一般用14000rpm/min）离心1min洗提DNA。