显微镜的操作和临时玻片标本的制作

图2机械台及示意图
7.复原归位
(1)旋转粗调节轮，将载物台降至最低。
(2)取下玻片标本，将玻片清洗后擦拭干净，放回原处。
(3)将显微镜机械部分整理干净，同时物镜应回复至最低倍，以方便下一位使用者操作。
(4)将光源亮度调到最低并关掉电源开关、拔下电源线。
三、高倍物镜的使用方法
以显微镜的高倍物镜观察玻片标本时，由于高倍物镜的视野范围较小，且焦距范围也较短，不易找到目标物，所以不宜直接用高倍物镜找寻所欲观察的目标物。高倍物镜的操作大致有以下五个步骤：
盖上盖玻片后，先以低倍物镜观察，再换高倍物镜，观察精子的形态与是否能运动
绘出精子数个
纪录：
植物细胞的观察
1.洋葱表皮细胞
(1)画出洋葱表皮细胞数个，并标示出细胞核及细胞壁。
放大倍率：倍
(2)比较在染色前后，细胞构造上的差异。
2.水蕴草叶片细胞
画出水蕴草叶片细胞数个，并将观察到的构造名称标示出来。
放大倍率：倍
(3)镜头若有污损，应在老师指导下，以拭镜纸做正确擦拭，不可使用其他物品（如面纸）擦拭。
6.移动玻片
(1)显微镜的镜台装有机械台（图2），只要稍微转动机械台的X轴转轮和Y轴转轮，即能将欲观察的目标物移至视野中央。
注：不要用手指直接移动玻片或扳动玻片夹。
(2)显微镜下的影像是上下颠倒、左右相反的虚像，例如：玻片上的“P”字，在目镜中的影像为“ ”。所以，玻片移动的方向正好与视野中物体影像移动的方向相反。
一、复式光学显微镜的构造
复式光学显微镜包含机械系统和光学系统两部分（图1）。
1.机械部分：镜筒、镜臂、镜柱、镜座、载物台、旋转盘、玻片夹、机械台转轮、粗调节轮、细调节轮等。
2.光学部分：目镜、物镜、光圈、照明器（光源）等。
图1复式光学显微镜（注：本机种为载物台升降型）
二、低倍物镜的使用方法
1.拿取与置放
5.盖片：加盖盖玻片。
(1)将盖玻片的一边放于载玻片上的水滴旁边，另一边以镊子或解剖针轻轻托住，使盖玻片和载玻片间约呈45°角（图4）。
(2)再将盖玻片缓缓放下，制成水埋的临时玻片标本。
(3)如果有气泡出现，可用笔尖轻压盖玻片，将气泡压出。
6.染色：为进一步观察细胞的各部分构造，可进行染色（图5）。
3.对焦
(1)使用细调节轮重新对焦，不可用粗调节轮，以免物镜碰触玻片标本，压碎玻片、损伤镜头。
(2)对焦时，使用细调节轮正、负旋转90°即可，动作要慢、要稳。
4.调整视野
(1)由于视野范围变小，目标物常会移到新视野范围外，所以需要重新调整视野。
(2)旋转机械台转轮，将欲观察的目标物移至视野中央。
5.调整光圈
绘出相邻的皮肤细胞数个
3.蛙的红血球（选作项目）
Leabharlann Baidu滴一小滴生理食盐水于载玻片上
再滴一小滴蛙血（由教师准备）于载玻片上
盖上盖玻片后先以低倍物镜观察，再换高倍物镜观察
绘出红血球数个
4.蛙的精子（选作项目）
取出蛙的睪丸，置于盛有少许池水的研钵中，研磨后静置数分钟（可由教师示范，全班共享）
吸取研钵中的溶液一滴，滴加于载玻片上
目次
实验室安全管理规则与注意事项2
显微镜的操作3
临时玻片标本的制作7
绘图技巧8
1 – 1生物细胞的观察9
2 – 1花构造的观察18
2 – 2花粉形态及萌发的观察23
3 – 1血球与神经元的观察30
3 – 2生殖腺与生殖细胞的观察33
实验室安全管理规则与注意事项
一、每次上课前必须作好预习的工作。
二、依规定时间准时到实验室，不得课外单独于实验室进行实验。
三、实验室放置的物品不得擅自携出或随意更动。
四、确实遵守实验室之基本安全守则：
1.穿着实验衣应扣紧钮扣，避免衣、鞋、头发（发饰）出现松散之处。
2.实验前须先思考实验步骤中的顺序，预先设想并防止可能发生的危险。
3.禁止在实验室内饮食、喧哗或奔跑。
4.明了危害物品之种类及标示（参见实验室危害物分类图示）；实验时，危险物品尽可能减量使用。
(1)拿取显微镜时，一手握住镜臂，一手托住镜座。
注：若显微镜有电源线，应连同电线握住，并托在镜座。
(2)置放显微镜于实验桌上时，动作要轻、稳，不要用力过猛。
(3)显微镜应置于实验桌边缘约5公分处。
2.置放玻片
(1)永久玻片标本须先擦拭干净，水埋玻片标本须先以吸水纸将玻片上多余的水分拭去。注：载玻片下表面、盖玻片上表面及周围不可残留水分。
1.擦拭：用面纸或卫生纸将盖玻片与载玻片擦拭干净。
2.滴液：以滴管吸取清水或生理食盐水等，滴一滴于载玻片上。
3.取材：选取适当的材料，有的需切成薄片才能观察。
注：遵守“标本要小”、“标本要少”、“标本要薄”三项原则。
4.装片：将材料置于载玻片上。有的材料为液状，需涂抹均匀，如血液（图3）；有的材料为薄膜状，则需展平、不重迭，如洋葱鳞叶的表皮细胞。
滴一滴水于载玻片上，再将透明表皮置于载玻片上使其展平，并盖上盖玻片
以吸水纸吸去四周溢出的水分
先以低倍物镜观察，再换
高倍物镜观察
观察后，以滴管滴加1、2滴染剂（亚甲蓝液或碘液）于盖玻片的一侧，用吸水纸自另一侧吸取染料，使标本浸染于染料中
先以低倍物镜观察，再换
高倍物镜观察
观察染色前后细胞的差异
绘出相邻的表皮细胞数个，
(2)置放玻片标本时，标本须正对通光孔中心。
(3)以玻片夹夹住玻片标本，注意不可太用力掀玻片夹，以免变形。
(4)载物台上要保持干净。
注：使用水埋玻片标本时，不可使用倾斜关节（有些显微镜具有此种构造），以免水液流出，污损显微镜。
3.调节光线
(1)选用最大光圈，对准通光孔。
(2)转动旋转盘，使低倍物镜对准通光孔。
1.选择目标物
(1)在低倍物镜下，选好欲观察的目标物。
(2)移动玻片标本，将此目标物移至视野中央。
2.换至高倍物镜
(1)若为等焦距显微镜，直接转动旋转盘，将高倍物镜对准通光孔。
注：转换物镜时，要使用旋转盘，不可直接扳动物镜。
(2)若为非等焦距显微镜，先提升镜筒2～3mm，再转动旋转盘，将高倍物镜对准通光孔，以免物镜碰触玻片标本。
注：转换物镜时，要使用旋转盘，不可直接扳动物镜。
(3)若为单目镜显微镜，两眼需同时张开，以任一眼注视目镜；若为双目镜显微镜，则以两眼同时观察。调整灯泡亮度旋钮，直到视野亮度适中为止。
(4)调节光圈大小，以达最佳的强弱对比。
注：若标本未染色或染色太浅，可将光圈缩小，否则光圈大小应维持在80%～90%。
1.口腔上皮细胞
以牙签在口腔内膜轻刮，取上皮细胞制作玻片标本，以亚甲蓝液或碘液染色后，置于显微镜下观察，注意上皮细胞的形状及细胞核的特征。
2.蛙的皮肤细胞（选作项目）
取蛙脱落的皮肤（由教师准备）置于载玻片上，将蛙的皮肤展平
滴加生理食盐水及亚甲蓝液（可用碘液替代亚甲蓝液）各一小滴于蛙的皮肤上
盖上盖玻片后，先以低倍物镜观察，再换高倍物镜观察
(1)用滴管吸取染料，滴加在载玻片上靠近盖玻片的一侧。
(2)以吸水纸在盖玻片的另一侧吸取水液，使染料能浸染到标本而将标本染色。
图3血液抹片的制作方法图4盖片图5染色
绘图技巧
1.绘图需使用尖细的铅笔，以HB或H的铅笔最适合。
2.绘图时应以点和线来描绘，不可涂抹。
3.图线需明确清晰，线条流畅，点的大小需一致，无涂抹、无污迹。
(1)需用尺来画标示线，各标示要互相平行，字要上下对齐。
(2)标示线末端不可加箭号。
(3)标示线不可相互交错。
(4)标注不可迭在图上。
(5)需用正楷字体书写标注。
9.需依据实验所观察的标本来描绘，不可抄袭书本。
10.每个图需有图号与标题，并置于图的下方。
11.图6与图7显示正确与不佳的绘图之差别。
图7有以下缺点：
动物细胞的观察
1.口腔上皮细胞
画出口腔上皮细胞数个，并将观察到的构造名称标示出来。
放大倍率：倍
2.蛙的皮肤细胞
画出蛙的皮肤细胞数个，并将观察到的构造名称标示出来。
放大倍率：倍
3.蛙的红血球
画出蛙的红血球数个，并将观察到的构造名称标示出来。
放大倍率：倍
4.蛙的精子
画出蛙的精子数个，并将观察到的构造名称标示出来。
并标示出细胞核及细胞壁
2.水蕴草叶片细胞
滴一滴水于载玻片上，再将一片水蕴草叶片置于载玻片上，并盖上盖玻片
先以低倍物镜观察，再换高倍物镜观察。观察细胞壁与叶绿体的位置与构造，并注意不同部位细胞叶绿体流动的情形
绘出相邻的水蕴草叶片细胞数个
动物细胞的观察
（注本实验可用永久玻片标本替代，教师亦可依时间自行调整选作的项目）
放大倍率：倍
问题：
1.在水蕴草（或水王孙）叶肉细胞中，叶绿体的位置是固定的吗？
答：不是，此现象称为细胞质流动。为什么会有细胞质流动？主要原因是因细胞骨架组
成的蛋白质构造变化所造成，因其所涉及的内容较深，教师可视学生程度做提示。
2.本探讨活动中观察到的动、植物细胞是否都具有细胞核？是否能据此推断所有的细胞都具有细胞核？
答：不是，虽本实验中所观察的蛙红血球在中心具有一明显的细胞核，但人类及其他哺
乳类的红血球就没有细胞核，所以才可容纳大量的血红素，外观并具有两面凹陷的
特色。
3.本探讨活动中观察到的动、植物细胞是否都具有细胞壁？
答：不是，本实验观察植物细胞或动物细胞。植物细胞有细胞壁，动物细胞没有。
4.对焦
(1)眼睛注视物镜，旋转粗调节轮使载物台缓缓上升至最高点。
注：因为低倍镜不会碰到标本。
(2)眼睛注视目镜，旋转粗调节轮使载物台徐徐下降，直到影像出现。
(3)旋转细调节轮，直到最清晰的影像出现。
5.观察标本
(1)以细调节轮进行微调，观察标本。
(2)欲得到清晰的影像，需要调节光源强弱和光圈，以得到适当的亮度和对比。若经过这些步骤还看不清楚，就应向老师求助。
显微镜的操作
放大镜或立体解剖显微镜（stereo microscope）的放大倍率由数倍至100倍，能将像果蝇大小的物体之细部形态清晰呈现。而细菌、原生生物及一般细胞的平均大小约5～15µm，就必须使用复式显微镜来观察，复式显微镜可放大至1000倍，观察的标本需切成可透光的薄片，并给予适当的染色。
一般复式光学显微镜
(1)由低倍物镜转换成高倍物镜时，视野的亮度通常会降低，故需重新调整。
(2)调整光圈或反光镜，选取适宜的光线。
注：若旋转盘上装有100倍物镜，为油镜，使用时必须在玻片标本和物镜间加一滴油镜用油才能清楚观察标本。除非经过老师指示或允许，否则不要使用100倍油镜。
临时玻片标本的制作
实验时，玻片标本通常可分为永久玻片标本和临时玻片标本两种。永久玻片标本可直接以显微镜观察，而临时玻片标本则需经过简单的制作步骤才能观察。制作水埋临时玻片标本的过程大致如下：
4.图中不可加影线，若需要表现明暗，可用铅笔点的疏密来表示。
5.图中各部分需合乎标本的比例。
6.不可用尺或圆规绘画图线，除非绘制构造的标示线，或所绘的标本真有如此直或圆的结构。
7.图画好后要标注各部分结构的名称，标注应尽量注明于图的右侧，若标注不下，可按左→上→下的顺序继续标示。
8.图中各部分加记标注时，需留意以下各点：
2.水蕴草或水王孙适量
3.雄蛙1只
4.亚甲蓝液或碘液适量
5.约0.7％（或0.65％）NaCl适量
6.水果刀1支
7.研钵1组
水王孙
每组使用
1.显微镜1台
2.载玻片6片
3.盖玻片6片
4.解剖针1支
5.滴管1支
6.镊子1支
7.牙签数支
步骤
植物细胞的观察
1.洋葱表皮细胞
将洋葱纵切成小块
取一枚鳞叶，反折露出表皮，以镊子撕下一小片外表皮
11.每次实验后必须清理所使用过的器材及周围环境。
12.移动显微镜等器材时，不可只用单手抓握，须用另一手托住镜座。
13.破损的器皿及使用过的材料，须依规定丢弃。
五、值日生须负责于实验前分发及清点器材，并于实验后点收器材、清扫实验室、倒垃圾、关闭电源及门窗。
六、将实验按过程记录在探讨活动纪录簿中，并准时缴交。
5.对实验用的化学物质，应视为可能具有危险性而加以注意。
6.需要使用手套及安全眼镜时，应尽量使用。
7.记得所有相关安全设施（急救箱、灭火器、洗眼器等）的位置。
8.绝对不可用口吸取任何化学物质，不可直接闻、触任何化学物质。
9.实验物品不可置于靠近桌缘的地方，并应避免碰撞、翻倒或掉落。
10.操作实验仪器前，须先确实了解该仪器之性能及操作步骤，发现任何问题，即使看似与安全无关的裂痕，亦须向老师报告。
(1)图太小。
(2)各结构不符合比例。
(3)图中有斜线和涂黑。
(4)标示线不直且交错。
(5)标示线加箭头。
(6)标注潦草。
(7)缺少标题。
(8)细胞核有缺口。
(9)描边线条未一笔完成。
图6正确的绘图图7不佳的绘图
探讨活动1-1生物细胞的观察
目的
观察植物与动物细胞的形态及构造。
器材
全班共享
1.洋葱或其他蔬菜1个