异烟肼和利福平合用及异烟肼代谢物对人肝细胞的毒性作用
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表4 T ab 4
批 次 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
浓度的丙戊酸镁血浆样品 , 按照 血浆样品处理 项 下平行操作, 于日内不同时间处理 5 份 , 用工作曲 线计算浓度, 考察方法日内精密度 ; 低、 中、 高浓度日 间平行测定处理 5 份, 连续测定 3 d, 考察方法日间 精密度。结果日 内和日间 RSD 均小 于 12% , 符 合 体内药物分析的要求。结果见表 2。
[ 文献标识码 ] A [ 文章编号 ] 1001 5213( 2010) 08 0632 04 [ 中图分类号 ] R965
Cellular toxicity of isoniazid used together with rifampicin and the metabolites of isoniazid on QSG 7701 hepatocytes
目前 , 全世界每年有近千万人感染结核, 有上百 万人由于结核病而死亡, 而且亚洲是结核病发病率 和死亡率最高的地区。目前世界卫生组织推荐的抗 结核病的一线治疗方案仍主要采用利福平( rif am pi cin, RFP ) 和异烟肼 ( isoniazid, INH ) 合用 , 但利福平 和异烟肼合用时产生的肝毒性是其最主要也是最严 重的不良反应之一 。所以 , 研究利福平和异烟肼 合用导致肝毒性的作用及其机制是改善抗结核治疗 方案 , 提高疗效的关键。 本实验利用 Q SG 7701 人肝细胞株, 研究 异烟 肼、 利 福 平 及 异 烟 肼 代 谢 物 乙 酰 肼 ( acet yl hy drazine, AH z) 和肼 ( hydrazine, H z) 对细胞的毒性 作用 , 探讨利福平和异烟肼合用导致肝毒性增加机 制, 为抗结核药的临床合理应用提供依据。 1 材料 分光光度计 ( 日本岛津公司 ) ; 异烟肼、 利福平、 乙酰肼、 肼 ( 美国 Sigm a 公司 ) ; DMEM 培养基、 胎牛 血清 ( 美国 H y clone 公司) ; MT T ; DM SO( 美国 Am r esco 公司 ) ; 乳酸脱氢酶测试盒( 南京建成科技有限 公司 ) ; QSG 7701 人肝 细胞系 ( 白 求恩国际和平 医 院孙殿兴博士惠赠) 。 2 方法 2. 1 肝细胞培养 将冻存于液氮中的 QSG 7701 肝细胞于 37 ∀ 水浴中迅速解冻 , 离心弃上清后 , 沉
参考文献 :
[ 1] [ 2] [ 3] [ 4] 谢华 , 王荣 , 谢景文 . 3 种抗癫痫药物血药浓 度监测及临床用 药分析 [ J] . 西北国防医学杂志 , 2006, 27( 5) : 375. 郁健 , 王广基 , 杜春波 . 高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸 钠的含量 [ J] . 中国药科大学学报 , 1998, 29( 1) : 451. 张华年 , 陈渝军 , 刘智胜 . 毛细 管气相色谱法 测定癫痫患儿血 清中丙戊酸浓度 [ J ] . 中国医院药学杂志 , 2005, 25( 1) : 46. 杨少芳 , 张华年 , 徐华 . 高效毛细管气相色谱法测定片剂中丙 戊酸钠的含量 [ J] . 中国医院药学杂志 , 2005, 25 ( 5) : 434. [ 收稿日期 ] 2009 09 27
2. 5. 6 基质抑制效应实验 1 m g!L
-1
以丙戊酸为研究对象 ,
在丙戊酸标准溶液中加入空白血浆配成含丙戊酸为 的溶液来考察基质效应对测定丙戊酸的 影响。采用 H P LC - M S/ M S 分析, 测定丙戊 酸标 准品得峰面积 A, 保留时间为 1. 07 m in; 采用 H P LC - M S/ MS 对 1 m g!L - 1 丙 戊酸 血浆 标准 溶 液进 行
H PLC M S/ M S 103. 0 # 4. 2 74. 4 # 3. 4 47. 0 # 3. 2 83. 5 # 4. 2 69. 3 # 2. 3 55. 7 # 2. 1 84. 6 # 2. 0 68. 2 # 2. 3 29. 8 # 3. 2 12. 4 # 2. 3 TD X 98. 0 # 3. 4 78. 9 # 3. 0 43. 1 # 1. 3 88. 8 # 3. 2 72. 4 # 2. 7 57. 5 # 2. 7 82. 2 # 3. 0 70. 0 # 3. 1 27. 1 # 4. 1 10. 1 # 3. 0
! 632 ! 2. 5. 4 精密度和准确度考察
中国医院药学杂志 2010 年第 30 卷第 8 期 Chin H os p Pharm J, 2010 A pr, V ol 30, N o. 08
同上配制低、 中、 高
分析 , 得到相应的峰面积 B, 以 A/ B 考察方法的基 质效应, 结果证实 A/ B ∃ 1, 结果表明本方法无基质 效应。 2. 6 样品测定结果 按照所建立的 H PL C - M S/ M S 方法, 测定患者血清中丙戊酸含量, 共 10 批次 每次 10 人的血 药浓度, 同时与 FP IA 测定结 果相 比, 见表 4 。
异烟肼和利福平合用及异烟肼代谢物对人肝细胞的毒性作用
张志华1, 2 , 吴红海2 , 薛改2 , 郭丁妮1, 2 , 侯艳宁1, 2
部 , 河北 石家庄 050082 ) [ 摘要 ] 目的 : 探讨异烟肼 、 利福平单用和合用及异烟肼代谢物对培养人肝细胞的毒性作用 。 方法 : 将培养的 Q SG 7701 人肝 ( 1. 河北医科大学 ,wenku.baidu.com河北 石家庄 050017 ; 2 . 白求恩国际和平医院药学
ZH ANG Zhi hua1, 2 , WU H ong hai2 , XU E Gai2 , GU O Ding ni2 , H OU Yan ning 1, 2 ( 1 . Hebei M edical U niv er
sit y, Hebei Shijiazhuang 050017, China; 2. Dept. of Phar maco lo gy , Bethune I nter nat ional Peace H ospital, Hebei Shijiazhuang 050082, China) ABSTRACT: OBJECTIVE T o investig ate the cellular tox icit y of rif am picin used to gether w ith rifampicin and the metabo lites of isoniazid on cultur ed Q SG 7701 cells lines. METHODS I so niazid, r ifampicin, rifam picin and iso niazid, acety lhydrazine, hy drazine wer e added in cult ur al media of Q SG 7701 cells and cultur ed for 48 hours. T he sur viv al rate of cells w er e determined by M T T method. T he cult ur al media and cells w ere co llect ed and t he activity of lactate dehydr ogenase w ere detected w ith chr oma to metry . RESULTS Com par ed w ith contro l g ro up, the sur vival rate decreased sig nificant ly and the lactate dehydrog enase re leased fr om cell increased significantly in cells treated w ith iso niazid, r ifampicin, acety lhydrazine, hydrazine. H ydrazine, the met abo lit e of isoniazid pro duced significant damag e on hepatocy tes in low concent ratio n. CONCLUSION tabo lite. KEY WORDS: isoniazid; r ifampicin; acety lhydrazine; hydrazine; Q SG 7701 cell; hepatoto xicity; lactate dehy dr og enase R ifampicin used t o g ether w ith rifampicin and met abo lites of isoniazid pr oduced cellular to x ic effects and hy dr azine may be the most tox ifero us me
2. 5. 5 稳定性试验
同上配制低、 中、 高浓度的丙
戊酸镁血浆样品, 分 别于配制后 72 h、 4 ∀ 下保 存 10 d、 - 40 ∀ 反复冻融 3 次后取出依法测定。供试 品溶液在上述条件下稳定情况见表 3 。
表 3 稳定性考察结果 ( x # s, g!L - 1 ) T ab 3 Stability data of magnesium valpr ote quality contro ls in human plasmas( x # s , g! L - 1 )
中国医院药学杂志 2010 年第 30 卷第 8 期 Chin H osp Pharm J , 2010 A pr, V ol 30, N o. 08
! 633 !
活率显著降低和乳酸脱氢酶释放显著增加 ; 利 福平和异烟肼合 用导致 细胞存活 率降低 和乳酸 脱氢酶 释放增 加的毒性 剂量低 于其单用的毒性剂量 ; 异烟肼代谢物肼在低浓度即产生 明显的细胞毒性 。 结论 : 利福平和异 烟肼合用及 异烟肼代 谢物肼对人 肝细胞具有细胞毒性作用 , 其中肼的肝细胞毒 性作用最强 。 [ 关键词 ] 异烟肼 ; 利福平 ; 乙酰肼 ; 肼 ; Q SG 7701 肝细胞 ; 肝毒性 ; 乳酸脱氢酶
[ 基金项目 ] 全军 十五 医学科研 基金 ( 01M B 005) com. cn [ 作者 简介 ] 张 志华 , 男 , 博 士 , 教 授 , 电 话 : 0311 87978503, E mail: zz h800018@ yahoo.
[ 通讯作者 ] 侯艳宁, 女 , 博士 , 教授 , 电话 : 0311 87978211, E mail: houyn@ 163. com
样品测定结果 ( n = 10, mg!L - 1 ) Plasma concentr atio ns of valpr ote det er mined by
valpr ote in human plasma( n = 5)
质量浓度 / g! L - 1 2 000 5 000 9 000
H PL C M S/ M S and T DX( n = 10 , mg!L - 1 )
细胞培养液中分别加入异烟 肼 、 利福 平 、 异烟 肼 + 利 福平 、 异烟 肼代 谢 物乙 酰肼 、 肼后 继续 培 养 48 h 。 用 四甲 基 偶氮 唑盐 ( M T T ) 法测定药物处理后肝 细胞的存活率 ; 药物处理后分别收 集培养液和 细胞 , 将 细胞裂解 后 , 用比 色法分 别测定培 养液和 细胞裂解液中的乳酸脱氢酶的活性 。 结果 : 与对照组 比较 , 异烟 肼 、 乙 酰肼 、 肼、 利福平 及利福 平和异 烟肼合 用均使肝 细胞存
2158. 0 # 293. 4 5000. 0 # 375. 5 8804. 0 # 513. 0 2274. 0 # 203. 8 4688. 0 # 416. 6 8512. 0 # 579. 7 2180. 0 # 132. 1 5102. 0 # 246. 9 8836. 0 # 405. 6
质量浓度 / g! L - 1 短期稳定性 ( 3 d, 室温 ) 长期稳定性 ( 10 d, 4 ∀ ) 反复冻融 ( 3 次 , - 40 ∀ - 室温 ) 2000 5000 9000
3 讨论 随着分析技术的不断发展, H PL C- M S/ MS 技 术和仪器不断被推广应用, 因其具有特异性强、 准确 度高的特点, 将成为现代分析仪器的主流。本实验 结果表明 , H PL C - M S/ M S 与 T Dx 仪测定结果有 高度一致性 , 使得 H PL C - MS/ M S 法将 逐渐取代 免疫分析技术成为临床血药浓度监测的常规方法。
表 2 人血浆中丙戊酸 镁的精密度和准确度 ( n = 5) T ab 2 P recisio n and accur acy fo r analysis o f mag nesium
精密度 RSD / % 日内 11. 60 3. 52 5. 98 日间 9. 95 8. 61 3. 74 准确度 / % 日内 109. 40 106. 92 98. 09 日间 105. 17 107. 95 97. 67
批 次 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
浓度的丙戊酸镁血浆样品 , 按照 血浆样品处理 项 下平行操作, 于日内不同时间处理 5 份 , 用工作曲 线计算浓度, 考察方法日内精密度 ; 低、 中、 高浓度日 间平行测定处理 5 份, 连续测定 3 d, 考察方法日间 精密度。结果日 内和日间 RSD 均小 于 12% , 符 合 体内药物分析的要求。结果见表 2。
[ 文献标识码 ] A [ 文章编号 ] 1001 5213( 2010) 08 0632 04 [ 中图分类号 ] R965
Cellular toxicity of isoniazid used together with rifampicin and the metabolites of isoniazid on QSG 7701 hepatocytes
目前 , 全世界每年有近千万人感染结核, 有上百 万人由于结核病而死亡, 而且亚洲是结核病发病率 和死亡率最高的地区。目前世界卫生组织推荐的抗 结核病的一线治疗方案仍主要采用利福平( rif am pi cin, RFP ) 和异烟肼 ( isoniazid, INH ) 合用 , 但利福平 和异烟肼合用时产生的肝毒性是其最主要也是最严 重的不良反应之一 。所以 , 研究利福平和异烟肼 合用导致肝毒性的作用及其机制是改善抗结核治疗 方案 , 提高疗效的关键。 本实验利用 Q SG 7701 人肝细胞株, 研究 异烟 肼、 利 福 平 及 异 烟 肼 代 谢 物 乙 酰 肼 ( acet yl hy drazine, AH z) 和肼 ( hydrazine, H z) 对细胞的毒性 作用 , 探讨利福平和异烟肼合用导致肝毒性增加机 制, 为抗结核药的临床合理应用提供依据。 1 材料 分光光度计 ( 日本岛津公司 ) ; 异烟肼、 利福平、 乙酰肼、 肼 ( 美国 Sigm a 公司 ) ; DMEM 培养基、 胎牛 血清 ( 美国 H y clone 公司) ; MT T ; DM SO( 美国 Am r esco 公司 ) ; 乳酸脱氢酶测试盒( 南京建成科技有限 公司 ) ; QSG 7701 人肝 细胞系 ( 白 求恩国际和平 医 院孙殿兴博士惠赠) 。 2 方法 2. 1 肝细胞培养 将冻存于液氮中的 QSG 7701 肝细胞于 37 ∀ 水浴中迅速解冻 , 离心弃上清后 , 沉
参考文献 :
[ 1] [ 2] [ 3] [ 4] 谢华 , 王荣 , 谢景文 . 3 种抗癫痫药物血药浓 度监测及临床用 药分析 [ J] . 西北国防医学杂志 , 2006, 27( 5) : 375. 郁健 , 王广基 , 杜春波 . 高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸 钠的含量 [ J] . 中国药科大学学报 , 1998, 29( 1) : 451. 张华年 , 陈渝军 , 刘智胜 . 毛细 管气相色谱法 测定癫痫患儿血 清中丙戊酸浓度 [ J ] . 中国医院药学杂志 , 2005, 25( 1) : 46. 杨少芳 , 张华年 , 徐华 . 高效毛细管气相色谱法测定片剂中丙 戊酸钠的含量 [ J] . 中国医院药学杂志 , 2005, 25 ( 5) : 434. [ 收稿日期 ] 2009 09 27
2. 5. 6 基质抑制效应实验 1 m g!L
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以丙戊酸为研究对象 ,
在丙戊酸标准溶液中加入空白血浆配成含丙戊酸为 的溶液来考察基质效应对测定丙戊酸的 影响。采用 H P LC - M S/ M S 分析, 测定丙戊 酸标 准品得峰面积 A, 保留时间为 1. 07 m in; 采用 H P LC - M S/ MS 对 1 m g!L - 1 丙 戊酸 血浆 标准 溶 液进 行
H PLC M S/ M S 103. 0 # 4. 2 74. 4 # 3. 4 47. 0 # 3. 2 83. 5 # 4. 2 69. 3 # 2. 3 55. 7 # 2. 1 84. 6 # 2. 0 68. 2 # 2. 3 29. 8 # 3. 2 12. 4 # 2. 3 TD X 98. 0 # 3. 4 78. 9 # 3. 0 43. 1 # 1. 3 88. 8 # 3. 2 72. 4 # 2. 7 57. 5 # 2. 7 82. 2 # 3. 0 70. 0 # 3. 1 27. 1 # 4. 1 10. 1 # 3. 0
! 632 ! 2. 5. 4 精密度和准确度考察
中国医院药学杂志 2010 年第 30 卷第 8 期 Chin H os p Pharm J, 2010 A pr, V ol 30, N o. 08
同上配制低、 中、 高
分析 , 得到相应的峰面积 B, 以 A/ B 考察方法的基 质效应, 结果证实 A/ B ∃ 1, 结果表明本方法无基质 效应。 2. 6 样品测定结果 按照所建立的 H PL C - M S/ M S 方法, 测定患者血清中丙戊酸含量, 共 10 批次 每次 10 人的血 药浓度, 同时与 FP IA 测定结 果相 比, 见表 4 。
异烟肼和利福平合用及异烟肼代谢物对人肝细胞的毒性作用
张志华1, 2 , 吴红海2 , 薛改2 , 郭丁妮1, 2 , 侯艳宁1, 2
部 , 河北 石家庄 050082 ) [ 摘要 ] 目的 : 探讨异烟肼 、 利福平单用和合用及异烟肼代谢物对培养人肝细胞的毒性作用 。 方法 : 将培养的 Q SG 7701 人肝 ( 1. 河北医科大学 ,wenku.baidu.com河北 石家庄 050017 ; 2 . 白求恩国际和平医院药学
ZH ANG Zhi hua1, 2 , WU H ong hai2 , XU E Gai2 , GU O Ding ni2 , H OU Yan ning 1, 2 ( 1 . Hebei M edical U niv er
sit y, Hebei Shijiazhuang 050017, China; 2. Dept. of Phar maco lo gy , Bethune I nter nat ional Peace H ospital, Hebei Shijiazhuang 050082, China) ABSTRACT: OBJECTIVE T o investig ate the cellular tox icit y of rif am picin used to gether w ith rifampicin and the metabo lites of isoniazid on cultur ed Q SG 7701 cells lines. METHODS I so niazid, r ifampicin, rifam picin and iso niazid, acety lhydrazine, hy drazine wer e added in cult ur al media of Q SG 7701 cells and cultur ed for 48 hours. T he sur viv al rate of cells w er e determined by M T T method. T he cult ur al media and cells w ere co llect ed and t he activity of lactate dehydr ogenase w ere detected w ith chr oma to metry . RESULTS Com par ed w ith contro l g ro up, the sur vival rate decreased sig nificant ly and the lactate dehydrog enase re leased fr om cell increased significantly in cells treated w ith iso niazid, r ifampicin, acety lhydrazine, hydrazine. H ydrazine, the met abo lit e of isoniazid pro duced significant damag e on hepatocy tes in low concent ratio n. CONCLUSION tabo lite. KEY WORDS: isoniazid; r ifampicin; acety lhydrazine; hydrazine; Q SG 7701 cell; hepatoto xicity; lactate dehy dr og enase R ifampicin used t o g ether w ith rifampicin and met abo lites of isoniazid pr oduced cellular to x ic effects and hy dr azine may be the most tox ifero us me
2. 5. 5 稳定性试验
同上配制低、 中、 高浓度的丙
戊酸镁血浆样品, 分 别于配制后 72 h、 4 ∀ 下保 存 10 d、 - 40 ∀ 反复冻融 3 次后取出依法测定。供试 品溶液在上述条件下稳定情况见表 3 。
表 3 稳定性考察结果 ( x # s, g!L - 1 ) T ab 3 Stability data of magnesium valpr ote quality contro ls in human plasmas( x # s , g! L - 1 )
中国医院药学杂志 2010 年第 30 卷第 8 期 Chin H osp Pharm J , 2010 A pr, V ol 30, N o. 08
! 633 !
活率显著降低和乳酸脱氢酶释放显著增加 ; 利 福平和异烟肼合 用导致 细胞存活 率降低 和乳酸 脱氢酶 释放增 加的毒性 剂量低 于其单用的毒性剂量 ; 异烟肼代谢物肼在低浓度即产生 明显的细胞毒性 。 结论 : 利福平和异 烟肼合用及 异烟肼代 谢物肼对人 肝细胞具有细胞毒性作用 , 其中肼的肝细胞毒 性作用最强 。 [ 关键词 ] 异烟肼 ; 利福平 ; 乙酰肼 ; 肼 ; Q SG 7701 肝细胞 ; 肝毒性 ; 乳酸脱氢酶
[ 基金项目 ] 全军 十五 医学科研 基金 ( 01M B 005) com. cn [ 作者 简介 ] 张 志华 , 男 , 博 士 , 教 授 , 电 话 : 0311 87978503, E mail: zz h800018@ yahoo.
[ 通讯作者 ] 侯艳宁, 女 , 博士 , 教授 , 电话 : 0311 87978211, E mail: houyn@ 163. com
样品测定结果 ( n = 10, mg!L - 1 ) Plasma concentr atio ns of valpr ote det er mined by
valpr ote in human plasma( n = 5)
质量浓度 / g! L - 1 2 000 5 000 9 000
H PL C M S/ M S and T DX( n = 10 , mg!L - 1 )
细胞培养液中分别加入异烟 肼 、 利福 平 、 异烟 肼 + 利 福平 、 异烟 肼代 谢 物乙 酰肼 、 肼后 继续 培 养 48 h 。 用 四甲 基 偶氮 唑盐 ( M T T ) 法测定药物处理后肝 细胞的存活率 ; 药物处理后分别收 集培养液和 细胞 , 将 细胞裂解 后 , 用比 色法分 别测定培 养液和 细胞裂解液中的乳酸脱氢酶的活性 。 结果 : 与对照组 比较 , 异烟 肼 、 乙 酰肼 、 肼、 利福平 及利福 平和异 烟肼合 用均使肝 细胞存
2158. 0 # 293. 4 5000. 0 # 375. 5 8804. 0 # 513. 0 2274. 0 # 203. 8 4688. 0 # 416. 6 8512. 0 # 579. 7 2180. 0 # 132. 1 5102. 0 # 246. 9 8836. 0 # 405. 6
质量浓度 / g! L - 1 短期稳定性 ( 3 d, 室温 ) 长期稳定性 ( 10 d, 4 ∀ ) 反复冻融 ( 3 次 , - 40 ∀ - 室温 ) 2000 5000 9000
3 讨论 随着分析技术的不断发展, H PL C- M S/ MS 技 术和仪器不断被推广应用, 因其具有特异性强、 准确 度高的特点, 将成为现代分析仪器的主流。本实验 结果表明 , H PL C - M S/ M S 与 T Dx 仪测定结果有 高度一致性 , 使得 H PL C - MS/ M S 法将 逐渐取代 免疫分析技术成为临床血药浓度监测的常规方法。
表 2 人血浆中丙戊酸 镁的精密度和准确度 ( n = 5) T ab 2 P recisio n and accur acy fo r analysis o f mag nesium
精密度 RSD / % 日内 11. 60 3. 52 5. 98 日间 9. 95 8. 61 3. 74 准确度 / % 日内 109. 40 106. 92 98. 09 日间 105. 17 107. 95 97. 67