生物指示剂活性确认
3M压力灭菌用生物指示剂的使用方法
3M压力灭菌用生物指示剂的使用方法压力灭菌用生物指示剂1262该压力蒸汽灭菌生物培养指示剂用于压力蒸汽灭菌效果的生物监测(包括下排气锅和预真空锅);通过培养基颜色变化，反应嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌生物监测结果。
1. 将压力蒸汽灭菌生物培养指示剂放于一标准测试包中;2. 按照国家规范, 分别将测试包放于锅内不同位置;3. 灭菌完毕, 取出该生物指示剂;4. 挤破内含的安瓿, 与一支对照管一起放于56℃培养锅内培养;48小时后阅读结果。
结果阅读：1.培养后指示管不变色(呈紫色), 表示灭菌通过;2.培养后指示管变色(呈黄色), 表示灭菌不通过,(必须及时查出灭菌失败原因)。
3.同时培养的对照管应为阳性(呈黄色), 如阴性,可能的原因为: 培养条件不符合要求; 生物指示剂有问题; (应及时查出阴性原因)。
注意事项：1. 灭菌完毕, 含生物指示剂的包裹很热并有一定压力; 需至少冷却10分钟以上, 否则可能引起塑料管内的安瓿破裂, 飞溅的碎片导致损伤;2. 只有对照管为阳性, 其生物监测结果才算有效。
3. 贮存于室温: 15-30℃; 相对湿度为35-60%;避免靠近灭菌器和化学消毒剂。
1292该生物指示剂可用以121℃下排气和132℃预真空压力蒸汽灭菌锅。
3MATTESTTM压力蒸汽灭菌生物培养指示剂(快速)在与3M ATTEST 290 培养锅共用时, 通过酶活性的灭活与否，探测嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌结果。
使用方法:1、在生物指示剂标签上注明灭菌器锅号, 负荷数量, 灭菌日期; 不要在指示剂的瓶或盖上另贴一个标签。
将生物指示剂放于一个标准测试包内，并置于最难灭菌的位置。
2、将含有生物指示剂的测试包放在灭菌器最难灭菌的位置，通常是灭菌器底层，近门或排气口上面。
3、正常装载。
4、灭菌循环完毕, 取出生物指示剂。
5、灭菌结束后，从灭菌器内取出含有生物指示剂的测试包，打开散热5分钟后才能取出生物指示剂。
生物指示剂的原理
生物指示剂的原理生物指示剂是一种用于检测物理、化学因素对生物体影响的工具。
它能够通过对生物体的生理、生化反应和生长发育等方面的观察，反映出环境因素的变化。
生物指示剂可以用于监测环境污染、评价生态系统的健康状况、研究生态系统的功能和相互作用等方面。
本文将从生物指示剂的原理、应用和发展等方面进行阐述。
一、生物指示剂的原理生物指示剂的原理是基于生物体对环境因素的敏感性和反应性。
生物体对环境因素的变化会产生一系列生理、生化反应和生长发育等方面的变化，这些变化可以被观察到和测量。
通过对这些变化的观察和测量，可以得出环境因素的变化情况。
生物指示剂的原理可以用以下几个方面来进行解释：1. 生物体的生理和生化反应生物体的生理和生化反应是一种对环境因素变化的直接反应。
例如，植物叶片的叶绿素含量、叶片的氮、磷含量等，都可以反映出土壤养分的状况；而动物细胞内酶的活性、血液中的生化指标等，都可以反映出环境中毒物质的影响。
2. 生物体的生长发育生物体的生长发育是对环境因素变化的一种长期反应。
例如，树木的生长速度、植物的繁殖能力等，都可以反映出环境因素的变化情况。
3. 生物体的种群结构和数量生物体的种群结构和数量是对环境因素变化的一种间接反应。
例如，某种昆虫的数量和种群结构的变化，可以反映出环境中的污染程度和生态系统的健康状况。
二、生物指示剂的应用生物指示剂可以用于监测环境污染、评价生态系统的健康状况、研究生态系统的功能和相互作用等方面。
1. 监测环境污染生物指示剂可以用于监测环境污染。
例如，可以利用苔藓、地衣等生物指示剂来检测大气中的污染物质，例如二氧化硫、氮氧化物等。
苔藓和地衣对这些污染物质十分敏感，它们的生长情况和化学成分的变化可以反映出环境中的污染程度。
2. 评价生态系统的健康状况生物指示剂可以用于评价生态系统的健康状况。
例如，可以利用鱼类、昆虫等生物指示剂来评价水域的生态系统健康状况。
鱼类和昆虫对水质的变化很敏感，它们的数量和种群结构的变化可以反映出水域的健康状况。
生物活性物质的分离和鉴定方法
生物活性物质的分离和鉴定方法生物活性物质是一类对生命有重要作用的化合物，例如药物、植物中的有效成分等。
它们的分离和鉴定方法对于药物研发、天然药物提取等方面有着重要的意义。
本文将介绍生物活性物质的分离和鉴定方法。
一、生物活性物质的分离方法1.色谱法色谱法是分离生物活性物质的一种常用方法。
它使用固/液相作为移动相，在固定的填充物上进行柱层析、薄层层析或者高效液相层析等方法将样品组分分离开来。
通过采用不同的填充物和固/液相条件，可以对不同类型的生物活性物质进行有效地分离和纯化。
2.热解法热解法是一种将不同组分分离的方法。
它利用样品中不同组分的不同挥发性，在一定的温度下进行加热，从而实现组分的分离（不同组分的沸点不同）。
利用热解法可以提取天然产物，如香草中的香草酸和香豆素等。
3.抽提法抽提法也是一种常用的天然产物提取方法。
比如常见的用于提取酮体类天然产物的氢氧化钠-酚酞法。
在酸性条件下，用酚酞指示剂标示溶液中碘对应的浓度。
将氢氧化钠溶液加入样品中，使其中的酮体迅速脱羧，生成相应的aromatic acid，同时碘氧化成碘的氧化态+5，和酚酞反应生成红色的碘酸酚酞。
其中的酮体的质量浓度可以根据酚酞的显色程度进行比色测定。
二、生物活性物质的鉴定方法1.逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)RT-PCR是一种将RNA转换为DNA的方法，在转录后将RNA 转换为DNA，通过聚合酶链式反应扩增重要DNA序列，如生长因子、转录因子、糖酵解酶和抗氧化酶等的基因。
利用RT-PCR可以快速、灵敏地检测特定基因的表达情况，同时可以扩增少量的RNA样品，是一种非常有效的生物活性物质鉴定方法。
2.质谱分析质谱分析是一种分析生物活性物质的重要工具。
它可以分析样品分子的质量和数量，并结合色谱技术以进一步分离组分。
质谱分析可以用来鉴定样品中类似生物活性物质的结构，以及尿液和血浆中的蛋白质分离等。
3.生物学活性分析生物学活性分析可以用来检测样品中具生物学最活性的成分。
3M压力灭菌用生物指示剂的使用方法
压力灭菌用生物指示剂1262
该压力蒸汽灭菌生物培养指示剂用于压力蒸汽灭菌效果的生物监测(包括下排气锅和预真空锅);通过培养基颜色变化，反应嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌生物监测结果。
1.将压力蒸汽灭菌生物培养指示剂放于一标准测试包中;
2.按照国家规范,分别将测试包放于锅内不同位置;
注意事项：
1.灭菌完毕,含生物指示剂的包裹很热并有一定压力;需至少冷却10分钟以上,否则可能引起塑料管内的安瓿破裂,飞溅的碎片导致损伤;
2.只有对照管为阳性,其生物监测结果才算有效。
3.贮存于室温:15-30℃;相对湿度为35-60%;避免靠近灭菌器和化学消毒剂。
1292
该生物指示剂可用以121℃下排气和132℃预真空压力蒸汽灭菌锅。?
6、检查生物指示剂标签上的化学指示剂，颜色由玫瑰色变成棕色证明生物指示剂经过压力蒸汽灭菌过程的处理。该颜色的变化并非表明该处理达到灭菌的目的，如果化学指示剂没有变化，请检查灭菌过程。
7、戴上防护眼镜，挤碎安瓿，然后培养生物指示剂。详细步骤请参阅3MATTEST290培养锅操作说明。
8、每次培养须同时培养一个未灭菌过的生物指示剂进行阳性对照，阳性对照生物指示剂与经过灭菌处理的生物指示剂为相同生产日期和批号。
阳性对照的目的是保证：
1）正确的培养条件
2）指示剂的活性（不适当的贮存条件可能影响有效期内的指示剂活性）
3）3MATTEST290培养锅功能完好
9、在3MATTEST290培养锅（培养温度62+/-20C）内，培养阳性对照和已处理的指示剂3小时，读出最终结果。阳性对照必须得出荧光阳性结果(阅读器显示为红灯或+)，如阳性对照读出荧光阴性(绿灯或-)，应检查培养锅温度和操作过程，直至阳性对照为阳性结果，生物监测的结果才是有效的。对于经过灭菌处理的指示剂，荧光阳性(红灯或+)表明灭菌过程失败，荧光阴性(绿灯或-)表明灭菌过程合格。
灭菌方法与生物指示剂
生物指示剂 系一类特殊的活微生物制品，可用于确认灭菌设 备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果 的监控等。用于灭菌验证中的生物指示剂一般是 细菌的孢子。
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生物指示剂的形式
一定数量的孢子附着在惰性载体上， 如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等
孢子悬浮液密封于安瓿中
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无菌保证水平
ATCC 14756
用于滤膜孔径为0.22μm 的滤器
用于滤膜孔径为0.45μm harmony 的滤器
湿热灭菌法
指将物品臵于灭菌柜内利用高压饱和蒸 汽、过热水喷淋等手段使微生物菌体中的蛋 白质、核酸发生变性而杀灭微生物的方法。
• 须保证物品灭菌后的SAL≤10-6
• 对热稳定的物品，可采用过度杀灭法，
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常用的灭菌方法
湿热灭菌法 干热灭菌法 气体灭菌法 辐射灭菌法 过滤除菌法
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不同灭菌方式不同的菌种种类的选择
灭菌方法
湿热灭菌法
生物指示剂
嗜热脂肪芽孢杆菌 Bacillus stearothermophilus 生孢梭菌孢子 Clostridium sporogenes
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制药工业常用的灭菌方法
原料药： 化学合成药——较高熔点药物常用于干热灭菌法，对较低 熔点的则用湿热灭菌法 ，对不耐热药物，如是晶体，可 溶解后过滤除菌 ；
植物提取物——若是用常规或高温提取的单一成分的流浸 膏，常用压力蒸汽法、流通蒸汽法消毒灭菌；若是低温提 取物，则优先考虑过滤除菌； 生化药物——化学消毒灭菌剂，如低温乙醇法、低温间歇 法和过滤法等。
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适用范围
不耐热药物的灭菌，医疗器械、容器、高分 子材料、包装材料、生产辅助用品、不受辐射破 坏的原料药及成品等均可用本法灭菌。
灭菌测定方法和步骤
1. 准备一定数量的微生物样本，确保它们对辐射敏感且易于计数。2. 将样本暴露于预定剂量的辐射下。3. 辐射后，将样本在适宜条件下培养。4. 计算并比较辐射前后的微生物存活率，以评估灭菌效果。5. 根据需要，调整辐射剂量并重复测试以优化灭菌条件。
灭菌测定方法和步骤
灭菌方法
测定方法
步骤
热灭菌（如蒸汽剂（如耐热的细菌孢子）。2. 将生物指示剂放置在待灭菌物品中或附近。3. 进行灭菌处理（如蒸汽灭菌）。4. 灭菌后，将生物指示剂取出，在适宜条件下培养。5. 观察并记录培养结果，评估灭菌效果。
化学灭菌（如使用消毒剂）
中和试验法
1. 准备测试样本和对照样本。2. 将消毒剂应用于测试样本，同时确保对照样本不受影响。3. 使用适当的中和剂来停止消毒剂的活性，同时不破坏潜在的微生物。4. 将处理后的样本在适宜条件下培养。5. 观察并记录培养结果，比较测试样本和对照样本的微生物生长情况，评估灭菌效果。
辐射灭菌（如紫外线、γ射线）
生物指示物选择、应用与缩短培养时间的验证
环氧乙烷灭菌生物指示物选择、应用与缩短培养时间（RIT）的验证生物指示物是指一类特定的微生物和载体结合，经过特定方法制备的生物制品，这些特定微生物比普通微生物对相应的灭菌模式具有更强的耐受性，用于指示微生物的死亡情况，以反映灭菌效果。
由于生物指示物可以真实可靠的反映灭菌过程中有关时间、温度和湿度等多个因素的关系，因此广泛应用于环氧乙烷等灭菌工艺的验证与日常监控。
验证时应确认所选择的生物指示物的抗力的适宜性，否则将影响灭菌验证的效果与可靠性。
生物指示物的原理是通过检测其中的细菌芽孢是否存活来判断产品是否达到完全灭菌的效果。
产品上的微生物无法经过肉眼观察，而且无法通过灭菌后的抽样检测来确定该批次产品是否合格，是一个特殊过程。
我们只能通过生物指示物中的细菌芽孢模拟产品上带菌的最坏的情况。
生物指示物中的细菌芽孢也是微生物的一种，而且所有对灭菌效果有影响的因素都对其有作用。
同时，由于采用环氧乙烷等最终灭菌的产品，其生产过程中初始污染菌的数量是受控的，其数量远远低于生物指示物所含的菌体数量。
BI中选择的菌株比生产过程中自然环境下所发现的菌株是更难杀灭的菌株，具有更高的抗力。
如果生物指示物中的细菌芽孢全部被杀死，就等同于产品中的微生物全部被杀死。
故此，在环氧乙烷灭菌工艺里面，要确认灭菌是否合格，必须使用生物指示物，没有可以替代的手段或方法。
但是应当注意，生物指示物并不是用来指示与证实灭菌后的物品确实无菌。
也就是说即使生物指示物培养无菌生长，并不能证实或保证灭菌物品100%无菌。
生物指示物只是用来测试某一个已确认的灭菌过程和采用的的灭菌设备的有效性，这种测试的实施原理是：按照无菌保证水平对微生物致死性进行评估，以确定灭菌物品中微生物存活的概率足够低。
1生物指示物（Biological Indicators,BI)生物指示物是一类特定微生物经过确定制备方法制造的生物试剂。
生物指示物对于某种灭菌工艺具有特定的耐受性（USPS1035《Biological indicators for Sterilization》）。
生物指示剂监测阳性处理流程
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生物指示剂使用方法
生物指示剂使用方法生物指示剂是一种用来检测生物体活性、生长情况或生物学过程的工具。
根据不同的应用目的和需要，生物指示剂可以是细菌、酵母、植物细胞等。
下面将详细介绍生物指示剂的使用方法。
首先，使用生物指示剂前需要准备好培养基，并确保培养基的成分符合需要。
培养基是供生物指示剂生长发育所必需的营养物质，可通过配制或购买得到。
通常的培养基成分包括碳源、氮源、生长因子、无机盐等。
根据具体需求，可以添加适当的药品或抗生素以防止细菌污染。
接着，取出所需的生物指示剂，可以是培养基上生长的细菌或培养好的酵母细胞等。
要保证生物指示剂的纯度和活性，可以通过无菌技术操作来确保。
然后，在制备好的培养基上均匀涂布生物指示剂。
可以使用吸管、滴管或移液器等工具将生物指示剂均匀涂布在培养基表面。
为了确保涂布的均匀性，可以采用十字交叉或螺旋形涂布法，将生物指示剂涂布在培养基的不同位置。
接下来，将涂布好生物指示剂的培养基放置在适当的温度和湿度条件下进行培养。
不同的生物指示剂对培养条件有不同的要求，需要根据实验和应用目的进行合理调整。
通常情况下，细菌和酵母的培养温度为30-37摄氏度，湿度为相对湿度80-90%。
在培养过程中，需要定期观察生物指示剂的生长情况和表现。
可以通过目测、显微镜观察或光密度测定等方法来评估生物指示剂的活性和生长情况。
观察指标可以根据实验目的和应用需求来确定，例如细菌生长的菌落形态、颜色、大小等。
最后，根据实验或应用的需要，可以选择在生物指示剂生长达到一定程度后进行各种实验或应用。
例如，可以用生物指示剂来测试特定物质的抗菌活性、抗真菌活性、细胞毒性等。
需要注意的是，在使用生物指示剂的过程中，应该注意无菌操作，避免外源性细菌或真菌的污染。
同时，要严格按照实验室和安全卫生要求进行操作，避免对人体和环境造成危害。
总结起来，生物指示剂的使用方法包括准备培养基、涂布生物指示剂、培养、观察和实验等步骤。
通过合理操作和观察，可以使用生物指示剂来检测生物体活性、生长情况或生物学过程。
灭菌方法与生物指示剂
❖ 化学指示剂验证：物品包外用化学指示剂用于验证物品是 否经过灭菌处理，物品包内中心部位的化学指示剂才可作 为物品是否达到灭菌的参考标志。
❖ 生物指示剂验证：将已知其耐热性的生物指示剂直接接种 在产品溶液或相似溶液中进行验证, 是评判灭菌工艺杀灭 效果最直观有效的方法, 也是灭菌工艺验证必不可少的试 验。
生孢梭菌孢子 Clostridium sporogenes
枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis
保藏号
NCTC 10007 NCIMB 8157 ATCC 7953
NCTC 8594 NCIMB 8053 ATCC 7955
NCIMB 8058 ATCC 9372
短小芽孢杆菌 Bacillus pumilus
置于放射剂量25kGy条件下，D值约3kGy。
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过滤除菌法
系利用细菌不能通过致密具孔滤材的原理以 除去气体或液体中微生物的方法。
适用范围：
对热不稳定的药物溶液、气体、水或原料的除菌。
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常用生物指示剂
➢ 滤膜孔径为0.22μm的滤器 ：缺陷假单胞菌 (Pseudomonas diminuta, 如ATCC19 146)
无菌保证水平 一批物品的无菌特性只能相对地通过物品中活微 生物的概率低至某个可接受水平来表述，即SAL （sterility assurance level）。
我国及欧美药典都把SAL不得大于百万分之一 作为最终灭菌产品无菌保证的要求，即 SAL≤10－6
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灭菌工艺验证
❖ 验证一个灭菌工艺系统能否使产品灭菌后达到无菌要求, 通常认为灭菌后微生物残存概率小于1×10-6。
生物指示剂
生物指示剂的选择和使用
四.环氧乙烷灭菌用生物指示剂 在环氧乙烷灭菌工艺中，常采用枯草
• 有些生物指示剂可直接将孢子接种至液体灭菌物或具有与 其相似的物理和化学特性的替代品中。使用替代品时，应 用数据证明二者的等效性。
生物指示剂的选择和使用
一.湿热灭菌用生物指示剂 湿热灭菌法最常用的生物指示剂为嗜
热脂肪芽孢杆菌孢子。D值为分钟，每片活 孢子数5×105~5×106个，在121℃、19分钟 下应被完全杀灭。此外，还可使用生胞梭 菌孢子，D值为分钟。
〔3〕制造商还应该提供如下信息：D 值、D 值测定 的方法、微生物数量、生物指示剂在有效期内耐 受才能、推荐的储存条件、使用指令等。
〔4〕生物指示剂制造商还应该提供使用后生物指示 剂处置的本卷须知，确保实验人员平安和防止对 环境造成破坏影响
制备生物指示剂用微生物的根本要求
不同的灭菌方法使用不同的生物指示剂，制备生 物指示剂所选用的微生物必须具备以下特性： ①菌种的耐受性应大于需灭菌产品中所有可能污染 微生物的耐受性； ②菌种应无致病性； ③菌株应稳定。存活期长，易于保存； ④易于培养。 假设使用休眠孢子，生物指示剂中休眠孢子含量要 在90%以上。
生物指示剂
目录
• 生物指示剂的定义 • 生物指示剂的组成形式 • 生物指示剂的制备 • 生物指示剂的选择和使用
生物指示剂的定义
生物指示剂，简称为BI〔biological indicator),是对特定灭菌工艺具有一定耐受 性并且可以定量测定效力的微生物制剂， 适用于制备生物指示剂的微生物多为芽孢 类细菌，这是因为，除辐射灭菌外，芽孢 类细菌比常规的生长态微生物对灭菌工艺 具有更强的耐受性。生物指示剂既可用来 测定一个给定的灭菌工艺条件的灭菌效果 ，也可判别它是否符合无菌保证要求。
细胞活性测定
细胞活性测定方法细胞活性指标通常包括细胞膜对核酸染料的通透性，代谢活性，膜电位等。
核酸染料有多种，如EB带有单个自由正电荷，能通过完整细胞膜。
而PI，TO—PRO—1，TO-PRO-3等等带一个有四铵基团和两个或两个以上正电荷的染料是不能通过完整细胞膜进入细胞内的。
因而吸收了这些多电荷染料的细胞被认为是非活性的。
另外，一些酸性染料，如上面提到的台盼兰，曙红等都是膜非通透性。
代谢活性是另一重要指标，它通过细胞内的酶的活性来判定。
使用细胞某种酶的底物，它能通过（或是不能通过）完整细胞膜，在细胞内被酶切而产生荧光性，膜不通透性产物，能在细胞膜完好的细胞内存留，在细胞膜不完整的细胞内散失很快。
通过检测荧光强度就可知细胞代谢活性。
FDA(fluorescein diacetate)和CTC（5-cyano-2,3-ditolyl tetrazolium chloride）是常用的两种底物。
前者虽然透过细胞膜的速度较慢，但它的产物基本不往外通透。
后者经细胞内脱氢酶催化而具有荧光性，能提供细胞呼吸代谢系统活性和细胞膜完整性信息。
正常细胞的细胞膜两侧维持着一个胞内为负的膜电位为梯度，带正电的亲脂性染料，如Cyanines类能因电梯度而通过细胞的脂双层膜聚积在活细胞内，带负电的亲脂性染料如oxonols会被排除在外。
不再维持着膜电位梯度的细胞里，则会吸收更多Oxonols类染料。
用流式细胞仪测量的方法优点是，灵敏，荧光强度精确定量，快速高通量的检测逐个细胞，可同时检测细胞的多个活性指标，提高可信度，结果具有统计意义。
缺点是，实验较MTT等复杂，费用较高。
常用的细胞活性测定方法有台盼蓝染色法、克隆（集落）形成法、3H放射性同位素掺入法、MTT法等。
其中MTT法以其快速简便，不需要特殊检测仪器、无放射性同位素、适合大批量检测的特点而得到广泛的应用。
但MTT法形成的Formazan为水不溶性的，需要加有机溶剂溶解，由于在去上清操作时会有可能带走小部分的Formazan，故有时重复性略差。
活力测定实验报告
一、实验目的1. 了解活力测定的基本原理和方法。
2. 掌握不同活力测定方法的操作步骤。
3. 通过实验，学会运用活力测定方法分析生物样品。
二、实验原理活力测定是研究生物样品中酶、微生物等生物活性的一种方法。
实验中，通过加入特定底物，使生物样品中的活性成分发挥作用，从而产生一系列可检测的产物。
根据产物的变化，可以计算出生物样品的活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：酶、微生物、底物、缓冲液、指示剂等。
2. 仪器：恒温水浴锅、分光光度计、离心机、移液器、试管等。
四、实验方法1. 酶活力测定（1）实验原理：酶催化底物反应，产生可检测的产物。
通过测定产物浓度，计算出酶的活力。
（2）实验步骤：① 准备酶液、底物、缓冲液等。
② 将酶液、底物、缓冲液混合，置于恒温水浴锅中反应。
③ 反应结束后，取出反应液，测定产物浓度。
④ 根据产物浓度和反应条件，计算出酶的活力。
2. 微生物活力测定（1）实验原理：微生物在一定条件下，能够利用底物进行代谢，产生可检测的产物。
通过测定产物浓度，计算出微生物的活力。
（2）实验步骤：① 准备微生物培养液、底物、缓冲液等。
② 将微生物培养液接种到含有底物的培养基中。
③ 在适宜的温度和pH条件下培养微生物。
④ 收集培养液，测定产物浓度。
⑤ 根据产物浓度和培养条件，计算出微生物的活力。
3. 活力测定方法比较（1）实验原理：比较不同活力测定方法的优缺点，选择合适的测定方法。
（2）实验步骤：① 分别采用不同的活力测定方法对同一生物样品进行测定。
② 比较不同方法的测定结果，分析优缺点。
五、实验结果与分析1. 酶活力测定结果根据实验数据，计算出酶的活力。
分析酶活力与底物浓度、温度、pH等条件的关系。
2. 微生物活力测定结果根据实验数据，计算出微生物的活力。
分析微生物活力与底物浓度、温度、pH等条件的关系。
3. 活力测定方法比较结果比较不同活力测定方法的优缺点，分析适用范围。
六、实验结论1. 酶活力测定方法适用于测定酶的催化活性。
环氧乙烷 生物指示剂 要求
环氧乙烷生物指示剂要求环氧乙烷是一种常用的有机化合物，化学式为C2H4O。
它是一种无色、易挥发的液体，具有较高的毒性和易燃性。
环氧乙烷在工业上被广泛应用于消毒、灭菌和杀虫等领域。
然而，由于其毒性较大，使用过程中需要谨慎操作，以避免对人体和环境造成危害。
生物指示剂是一种能够反映环境中生物活性的物质。
在环氧乙烷的应用过程中，生物指示剂可以用来监测和验证环氧乙烷灭菌的效果。
常见的生物指示剂有大肠杆菌、芽孢杆菌等。
大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，广泛存在于环境中。
它具有较高的抵抗力，对环境变化的适应能力强。
因此，大肠杆菌被广泛应用于灭菌过程的监测。
在使用环氧乙烷进行消毒或灭菌时，可以将大肠杆菌作为生物指示剂，将其暴露在环氧乙烷中，然后观察大肠杆菌的存活情况，以评估环氧乙烷的灭菌效果。
芽孢杆菌也是一种常用的生物指示剂。
芽孢杆菌是一种耐热菌，具有较高的抗性和存活能力。
在环氧乙烷灭菌过程中，可以使用芽孢杆菌作为生物指示剂，将其暴露在环氧乙烷中，然后观察芽孢杆菌的存活情况，以验证环氧乙烷的杀菌效果。
使用生物指示剂进行环氧乙烷灭菌过程的监测可以提供更加准确的结果。
通过观察生物指示剂的存活情况，可以判断出环氧乙烷对细菌的杀灭效果。
如果生物指示剂存活率较低，说明环氧乙烷的灭菌效果良好；反之，则说明环氧乙烷的灭菌效果不佳，需要进行进一步的处理。
在使用生物指示剂进行环氧乙烷灭菌过程中，需要注意以下几点。
首先，选择适合的生物指示剂。
大肠杆菌和芽孢杆菌是常用的生物指示剂，但在不同的环境和实验条件下可能会有差异，因此需要根据具体情况选择适合的生物指示剂。
其次，正确操作生物指示剂。
在将生物指示剂暴露在环氧乙烷中之前，需要对生物指示剂进行预处理，以确保其在灭菌过程中的准确性和可靠性。
最后，正确解读结果。
观察生物指示剂的存活情况时，需要根据实验条件和标准进行解读，得出准确的结论。
生物指示剂在环氧乙烷灭菌过程中起到了重要的监测和验证作用。
生物指示剂
生物指示剂生物指示剂是指一类能够通过其活性变化来指示环境状态或变化的生物物质。
这些生物指示剂在环境监测和质量评估中起着重要的作用，其应用领域涵盖生态学、环境科学、医学等多个领域。
本文将介绍生物指示剂的定义、分类、应用以及现状。
定义生物指示剂是一类能够通过其活性、生长状态或表型变化来指示环境变化或环境质量的生物物质。
生物指示剂多种类多样，包括植物、微生物、动物等。
在环境监测和评估中，生物指示剂可以快速响应环境变化，提供及时的信息和数据。
分类根据生物指示剂的类型和应用领域，可以将其分为不同的分类。
常见的生物指示剂包括指示植物、生物标记物和环境生物感应器。
指示植物可以通过其生长状态、叶片颜色等变化来指示土壤、水质等环境的污染情况；生物标记物则是通过检测生物体内的代谢产物或细胞成分来评估环境质量；环境生物感应器则是通过植入生物体内的传感器来监测环境参数变化。
应用生物指示剂在环境监测、生态修复、医学诊断等领域都有着广泛的应用。
在环境监测中，研究人员通过监测水生态系统中的藻类、浮游植物等生物指示剂来评估水体质量；在生态修复中，生物指示剂可以帮助检测土壤污染、评估生态系统健康状况；在医学诊断中，一些生物指示剂如生物标记物被广泛应用于癌症早期筛查、疾病诊断等方面。
现状随着环境监测和评估的需求不断增加，生物指示剂作为一种简单、快速、经济且高效的监测方法，受到了越来越多的重视。
研究人员也在不断探索生物指示剂的新型应用，如基因工程改造的生物感应器等。
然而，生物指示剂在应用过程中也面临一些挑战，如生物物种选择、实验标准化、数据处理等问题仍待解决。
总的来说，生物指示剂作为一种重要的环境监测工具，在环境科学、生态学等领域具有广阔的应用前景，未来随着技术的不断更新和完善，生物指示剂的应用范围和效能会进一步扩大。
生物指示剂使用方法
生物指示剂使用方法生物指示剂是一种用于监测环境中生物学有效性的工具。
它们通常是一些微生物的菌株，可以通过对其生长、存活或其他生物学特性的观察，来评估环境中的潜在生物毒性、药物活性或其他有关生物过程的参数。
使用生物指示剂可以帮助研究人员更好地了解环境中的生物活性，并在环境、医药和其他领域中提供有用的信息。
下面是生物指示剂的使用方法：1. 筛选适合的生物指示剂：在选择生物指示剂之前，需要根据具体的应用领域和目标，确定需要监测的生物学参数。
例如，在环境中评估某种污染物的毒性时，可以选择对该污染物敏感的微生物菌株作为生物指示剂。
此外，还需要考虑生物指示剂的生长条件、稳定性和可重复性等因素。
2. 准备生物指示剂培养基：为了保证生物指示剂的生长和繁殖，需要准备适当的培养基。
培养基的成分应根据生物指示剂的需求进行调整，以提供必要的营养物质和生长条件。
一般来说，培养基应包含碳源、氮源、矿物盐和水。
同时，还应注意避免污染和细菌生长。
3. 培养生物指示剂：将所选的生物指示剂接种到培养基中，并提供适当的环境条件进行培养。
这些环境条件包括温度、湿度、氧气浓度和pH值等。
根据生物指示剂的要求进行培养时间，通常需要几小时到几天不等。
4. 添加样品：在生物指示剂达到适当的生长状态后，可以将待测样品添加到培养基中。
样品可以是土壤、水样、空气等。
在添加样品之前，应确保样品经过适当的处理和净化，以消除可能的干扰因素。
5. 观察和测量生物指示剂的反应：在加入样品后，观察并测量生物指示剂的生长、存活或其他生物学特性的变化。
这些变化可以是生物指示剂数量的增加或减少、菌落形成的变化等。
通过对生物指示剂的反应进行监测和分析，可以评估样品中存在的生物活性或其他相关参数。
6. 数据分析和结果解读：根据生物指示剂的反应结果，进行数据分析和结果解读。
根据具体的研究目的，可以通过比较不同样品的反应结果，来评估样品之间的差异或对比不同条件下的变化。
通过数据分析和结果解读，可以获得有关样品中生物活性的信息，并为后续研究或决策提供指导。
自含式生物指示剂操作方法
自含式生物指示剂操作方法
自含式生物指示剂是一种能够自发地显示生物活性的荧光标记物。
下面是一种常见的操作方法：
1. 打开自含式生物指示剂的容器，取出所需的数量。
请注意，避免将指示剂暴露在阳光下或强光下，以免影响其活性。
2. 准备待测试样品。
根据实验需要，可以是细胞培养物、动植物组织、酶反应物等。
3. 将自含式生物指示剂添加到待测试样品中。
添加的量应根据实验需要和指示剂的浓度而定。
一般来说，添加量在样品总体积的5-10%之间。
4. 轻轻地混合样品，确保指示剂充分溶解。
5. 将样品放置在适当的条件下进行培养或反应。
根据实验需要，可以在室温或其他特定的温度下进行。
6. 观察荧光信号的出现。
自含式生物指示剂通常会通过变化荧光强度或颜色来显示生物活性的变化。
使用荧光显微镜或荧光分光光度计等设备进行观察。
注意事项：
- 对于每个实验，应根据自含式生物指示剂的特性和样品的要
求来确定最佳的操作条件，如浓度、反应时间等。
- 在实验过程中避免过度曝光于光线，以免影响指示剂的活性。
- 根据实验需求，可使用几种不同的自含式生物指示剂，如染料、荧光蛋白等。
生物指示剂生产工艺流程
生物指示剂生产工艺流程1.首先，挑选合适的微生物菌株进行培养。
First, select the appropriate microbial strains for cultivation.2.将挑选好的微生物菌株进行预处理，确保其纯度和活性。
Pre-treat the selected microbial strains to ensure their purity and activity.3.在合适的培养基中进行大规模发酵，以增殖微生物菌株。
Conduct large-scale fermentation in suitable culture medium to proliferate the microbial strains.4.对发酵后的细菌进行离心分离，获取生物指示剂的原料。
Centrifuge and separate the fermented bacteria to obtain the raw materials for the biological indicators.5.对原料进行蛋白质提取和纯化，获得高纯度的生物指示剂成分。
Extract and purify the proteins from the raw materials to obtain high-purity biological indicator components.6.进行生物指示剂的配方设计和调制，确保其活性和稳定性。
Design and formulate the biological indicator to ensure its activity and stability.7.将配制好的生物指示剂进行包装和标签，准备进行进一步的处理。
Package and label the prepared biological indicators for further processing.8.进行生物指示剂的灭菌处理，确保其不受外部微生物的污染。
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1.目的：规范本公司生物指示剂活性确认操作，保证测试结果准确、可靠。
2.范围：适用于本公司购买的生物指示剂。
3.职责：中心化验室管理人员、QA人员负责监督本规程的执行；QC微生物实验员按本规定严格执行。
4.内容：
4.1生物指示剂活性确认
取同一批次的生物指示剂2支，将塑料瓶中的菌纸片取出一同放进1支装有4个玻璃珠和5.0ml的0.9%无菌氯化钠溶液的试管中。
将试管振摇5-10分钟，直到菌纸片浸渍成浆状，再往试管中加入5.0ml0.9%无菌氯化钠溶液，再振摇1分钟。
振摇完毕后立即从中吸取1.0ml溶液至0.9%无菌氯化钠溶液9.0ml的试管中，作为1号管，同法制2号管。
将1号管于80℃水浴中放置15min，作为热处理。
分别将1号和2号管做连续10倍稀释（10-1、10-2、10-3），然后吸取后两个稀释级（10-2、10-3）的菌悬液1ml，各加入两个无菌平皿中，然后倒入15～20ml冷却至50℃左右的胰酪大豆东琼脂培养基，混合后待冷却。
倒置平皿在56℃下培养48小时。
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培养结束后，计数每个平皿碟上的菌落数，计算热处理组和未处理组各稀释液中的平均菌落数，然后计算出生物指示剂纸片上平均实际活菌数和活芽孢数。
生物指示剂合格标准：每条带菌纸片上的平均活菌数不小于制造商标明的平均数的95%，同时纸片上的活芽孢数也不小于活菌数的一半，则该批次生物指示剂判定为合格。
将结果记录在“生物指示剂的活性确认表”上，每批购买的生物指示剂均应进行本项检查。
经确认批次的生物指示剂若用于验证，还应将该表附在相应的验证文件中。
5、附件：
QC-SOP(B)007-00 第2页共2页。