癫痫动物模型的制备

❖ 若无发作或发作未达到Ⅲ-Ⅴ级, 则每隔 30min腹腔注射PILO 10mg/（kg·次) ,最多 6次, 其间癫痫发作>Ⅲ级的大鼠认为致成功。
方法特点
❖ PILO首次剂量为20mg/kg,以后小剂量给 予PILO(10mg/kg), 简单易用，可按个体差 异控制PILO的用量，成功率较高。
❖ 此方法的致癫痫率和自发发作的出现率基 本一致,明显优于传统方法。是研究颞叶癫 痫的理想模型。
方法特点
❖ 用KA杏仁核微量注射, 为全身给药点燃用 量的万分之一, 点燃成功率高达90%。
❖ 点燃一旦建立, 动物的这种脑细胞及惊厥 行为敏感性可长期维持, 是研究脑细胞兴奋 性、可塑性以及学习和记忆、癫痫发病机制、 癫痫外科手术预后判断的理想动物模型 。
3.2机械损伤制备大鼠癫痫模型
❖ 颅脑外伤是癫痫的常见病因之一。外伤后 癫痫(PTE)的发病机制目前尚未阐明。现有 研究表面，突触重建在PTE的发病发展过程 中起着重要作用。
❖ 中国癫痫患病率约为7‰，每年新发病40 万例，患者总数超过900万，其中超过一半 是儿童及青少年。
2.癫痫模型制备原理
❖ 利用药物制备癫痫模型，通过破环脑部神 经递质释放的平衡，阻断兴奋性氨基酸的循 环通路，从而诱发癫痫形成与发作。
❖ 利用手术制备癫痫模型，主要用于模拟外 伤后癫痫。具体的发病机制尚不十分明确， 目前研究显示与各神经元细胞之间的突触连 接的改变有关。
3.1.3穿刺注射海人酸法
❖ 点燃模型(Kindling model)是通过重复给 予一个首发阈下电或化学刺激引起部分或全 面性癫痫发作的癫痫模型, 具备慢性、自发 性和复发性特征。
❖ 海人酸(kainic acid ,KA)具有很强的神经 毒性作用,海马富含KA受体, KA脑内注射能 使动物产生长时间肢体型癫痫发作。
3.不同的癫痫模型制备方法
癫痫动物模型
1.药物建模
通过药物注射 的方式建立癫痫 动物模型。
2.手术建模
利用外科手术 的方法建立癫痫 动物模型
3.1药物建模的几种方法
1
注射 合成红藻氨 酸制备大鼠 癫痫模型
2
注射 氯化锂-匹罗 卡品致大鼠 癫痫模型
3
穿刺注射 海人酸杏仁 核点燃大鼠 癫痫模型
3.1.1注射合成红藻氨酸法
制备过程
❖ Wistar大鼠麻醉后30min用5μL微量注射 器吸KA1μL,颅骨穿刺以右侧杏仁基底核为 KA注射部位，速度为1μL/min ,留针5min， 以确保药物被完全吸收。
❖ 实 验 大 鼠 在 KA 杏 仁 核 注 射 后 平 均 41 和 61min分别依次出现部分性发作和癫痫性大 发作
❖ 突 触 素 (synaptophysin.p38) 和 苔 藓 纤 维 (mossy fiber，MF)与突触重建关系密切， 是突触功能和突触重建的重要标志之一。
制备过程
❖ 正 常 Wistar 大 鼠 用 2 ％ 戊 巴 比 妥 钠 (50mg/kg)腹腔麻醉后，矢状位切开头部皮 肤，剥离颅骨外膜，左侧顶距矢状缝旁 3.5mm ， 冠 状 缝 后 4.0mm 处 钻 一 直 径 3.0mm的骨窗，保持硬脑膜完整。
实验动物学
癫痫动物模型的制备
介绍 2 癫痫模型制备原理 3 不同的癫痫模型制备方法 4 讨论与展望
1.癫痫流行病学介绍
❖ 癫痫是一种脑部疾患，特点是存在能产生 癫痫发作的脑部持久性改变，并出现相应神 经生物学、认知、心理学以及社会学等方面 的后果。
❖ 红藻氨酸(kainic acid, KA)是红海藻的提 取物，可作用于脊椎动物中枢神经系统的谷 氨酸受体,可直接兴奋神经元,又可增强钠离 子的通透性而使神经细胞去极化,诱发癫痫 的发生。
❖ 利 用 KA 的 人 工 合 成 品 , 即 合 成 红 藻 氨 酸 (syn thetical kainic acid, SKA)制作大鼠癫 痫模型。
❖ 此时接液压打击装置，压强152-202kPa， 时 程 40-50ms 。 打 击 后 ， 缝 合 头 皮 ， 清 醒 后自由进食、水。
液压打击手术部位图示
方法特点
❖ 手术后连续观察实验动物行为三个月，根 据不同等级的癫痫发作，可研究外伤后癫痫 的发病机制。
❖ 液压脑损伤制备的动物模型，较好的模拟 了人类PTE的显著特征—晚期、慢性、反复、 自发性发作。 是研究外伤后癫痫理想的动 物模型。
❖ 近年来一直被认为是研究颞叶癫痫的理想 模型。
制备过程
❖ 正 常 Wistar 大 鼠 经 过 腹 腔 注 射 LiCl 125mg/kg,18-24h 后 腹 腔 注 射 PILO 20 mg/kg达到Ⅲ-Ⅴ级发作则为进入癫持续状 态(status epilepticus, SE) ,致成功。
方法特点
❖ 注射合成红藻氨酸诱发大鼠癫痫，SKA 512mg/kg 腹腔注射可诱发大鼠癫痫发作, 以10mg/kg剂量为佳。
❖ 合成红藻氨酸诱发大鼠癫痫发作的阶段性 明显、行为学表现规律、稳定,死亡率低， 适宜大规模建立癫痫动物模型 。
3.1.2注射氯化锂-匹罗卡品法
❖ 注 射 氯 化 锂 （ Licl ） 和 匹 罗 卡 品 (pilocarpine, PI-LO)致癫痫模型在动物行 为、脑电图、病理及药理特性上与人类颞叶 癫非常类似。
制备过程
❖ 正常Wistar 大 鼠 腹腔注 射 10mg/kgSKA 后 约 5min, 大 鼠 出 现 凝 视 行 为 (Ⅰ 级 ), 之 分 别 在 约 23min 、 97min 、 129min 和 140min 动 物 顺 序 出现Ⅱ-Ⅴ级癫痫发作。3h后症状减轻，7-8小 时后停止，14小时基本恢复正常。
4.讨论与展望
❖ 导致癫痫发病的因素非常复杂, 癫痫的发 病类型多, 目前还没有一种动物模型能够模 拟出所有的癫痫发作类型。
❖ 以上介绍的几种癫痫动物模型，都有其独 特之处。不同方法制备的癫痫动物模型，将 会为癫痫发病机制和治疗的研究做出贡献。
4.讨论与展望
❖ 导致癫痫发病的因素非常复杂, 癫痫的发 病类型多, 目前还没有一种动物模型能够模 拟出所有的癫痫发作类型。