第八章 液相色谱分离方法
第8章液固-液液色谱法
宋敏
中国药科大学药分教研室
（4）常用于HPLC-GC联用技术
❖由于流动相为有机溶剂，易于气化，所以目 前90%的HPLC-GC中的HPLC部分采用液－ 固吸附色谱，进行正相HPLC。
宋敏
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二、液－液分配色谱法
宋敏
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33
1、液-液分配色谱法的定义
液－液分 配色谱
基于样品组分在固定液和流动相之 间分配系数不同而分离的色谱法称 为液-液分配色谱法（Liquid-Liquid Chromatography，LLC）。
宋敏
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❖ 流动相极性小于固定相极性的液－液色谱法称为正 相液－液色谱法，如以烷烃作为流动相，以含水硅 胶作为固定相的色谱系统。正相液－液色谱法适合 于分离极性化合物。
宋敏
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氧化铝
❖ 氧化铝与硅胶相似，但对水溶液、酸性或碱性水溶 液更加不稳定，所以，极少用作键合固定相的基质。
❖ 氧化铝适宜分离溶于有机溶剂的极性、弱极性的非 强离解型的化合物，尤其适合于分离芳香族化合物。
❖ 当样品为碱性化合物时，用硅胶分离会造成严重吸 附，此时可选用氧化铝进行分离，但酸性易离解的 化合物容易在氧化铝上形成死吸附。
宋敏
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竞争模式
❖ 竞争模式认为在被溶剂平衡的色谱柱中，弱极性或 中等极性的溶剂分子先被吸附剂吸附，覆盖于吸附 剂表面形成单分子层，当溶质分子进入色谱体系后， 便竞争置换（或顶替）溶剂分子而形成吸附。
X. 溶质分子 Y. 溶剂分子 s. 吸附剂 m. 流动相
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双层吸附模型
❖ 双层吸附模型假定吸附剂表面先被流动相中极性较 强的组分以双层溶剂分子的形式所完全覆盖，双层 的结构及形成的程度取决于流动相中极性溶剂的浓 度，溶质通过柱子时与双层溶剂的第二层发生取代 或缔合而使溶质保留。
液相色谱的原理以及操作要点
液相色谱的原理以及操作要点液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种常用的分离和分析技术，它基于不同物质在流动相中的分配行为来实现分离。
本文将介绍液相色谱的原理，同时探讨液相色谱的操作要点。
一、液相色谱的原理液相色谱的原理主要基于两个关键概念：分配系数和吸附性质。
1. 分配系数分配系数（Distribution coefficient）是指样品在固定相和流动相之间的分配比例。
它是液相色谱中物质分离的基础。
分配系数的大小决定了物质在固定相上停留的时间，从而实现了不同成分的分离。
2. 吸附性质液相色谱还涉及到物质在固定相上的吸附行为。
当样品溶液通过固定相时，固定相表面上的吸附剂与样品物质发生相互作用，使得物质被吸附，从而发生分离。
二、液相色谱的操作要点为了有效地进行液相色谱实验，以下是一些操作要点需要注意：1. 样品制备样品制备是液相色谱分析的首要步骤。
样品应准备恰当，并考虑到溶解度、稳定性以及待分析物之间的相互干扰。
此外，样品需要经过适当的前处理（如过滤、稀释等）以达到分析要求。
2. 流动相选择流动相的选择对液相色谱分离效果起到至关重要的作用。
合适的流动相应能够与待分析物有良好的相容性，并且具有适当的溶解性和流动性。
常用的流动相包括水、有机溶剂和缓冲溶液。
3. 固定相选择固定相是液相色谱中的另一个关键部分。
不同的固定相具有不同的化学性质，因此会影响到分离的选择性和效果。
根据待分析物的特性，选择合适的固定相对于分离效果至关重要。
4. 色谱柱选择色谱柱是液相色谱系统中用于分离的核心组成部分。
不同的色谱柱具有不同的长度、直径和固定相材料，这些参数会影响到分离性能和分析时间。
根据待分析物的特性和分离要求，选择合适的色谱柱尤为重要。
5. 色谱条件优化为了获得最佳的分离效果，需要进行色谱条件的优化。
例如，可以调整流速、梯度程序和柱温等参数，以达到更好的分离和峰形。
6. 数据处理和解释液相色谱实验完成后，需要对得到的色谱图进行数据处理和解释。
中药化学第八章三帖类化合物详解演示文稿
第38页，共80页。
第四节 三萜类化合物的提取与分离 一、三萜类化合物的提取 1．醇类溶剂提பைடு நூலகம்法
为提取皂苷首选方法
第39页，共80页。
glc
6-1
O glc2-1 glc
H OH
HO HH
结构特点
基本碳架与羊毛脂烷型不同的是 9位连有β-CH3，C5、C8、均连 β-H， C10连α-H。
雪胆甲素 R=Ac
glc1-6 glc O
罗汉果甜素Ⅴ
雪胆乙素 A=H
（比蔗糖甜约256倍）
（急性痢疾、肺结核、慢性气管炎）
第11页，共80页。
产生沉淀。 C. 三萜皂苷与胆甾醇产生沉淀没有甾体皂苷稳定。
第29页，共80页。
3.水解反应 (1)酸水解 三萜皂苷所连多是α-OH糖，因此要进行剧烈水解：
由于条件剧烈，因此常使苷元产生脱水，双键移位，构 型
异构酸，水环解合虽的然反易应引。起苷元结构的改变，但可使皂苷中的全部 单糖被水解，有助于了解成苷的单糖种类。
第41页，共80页。
先提总皂苷，再水解苷键，继用石油醚、苯、溶剂汽油、 CHCl3等弱极性有机溶剂提取苷元
第42页，共80页。
3．碱水提取法 提取含羧基皂苷
第43页，共80页。
二、三萜类化合物的分离 1．分段沉淀法
第44页，共80页。
2．胆甾醇沉淀法 利用三萜皂苷能与胆甾醇生成不溶性分子复合物进行分离。
三、双环三萜
OR4
28 29
27
结构特点是基本碳架 OH O O
液相色谱法
色谱法的分类
4. 利用大小不同的分子在多孔固定相中的选 择渗透而达到分离的方法，称为凝胶色谱法或分 子排阻色谱法。
最近，又有一种新分离技术，利用不同组分 与固定相（固定化分子）的高专属性亲和力进行 分离的技术称为亲和色谱法，常用于蛋白质的分 离。
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色谱法的分类
吸附色谱：不同组份在固定相的吸附作用不同； 分配色谱：不同组份在固定相上的溶解能力不同； 离子交换色谱：不同组份在固定相（离子交换剂）上的 亲和力不同； 凝胶色谱（尺寸排阻色谱）:不同尺寸分子在固定相上 的渗透作用。
需 需
R≤ 1
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第二节 柱色谱法
一、液－固吸附柱色谱法 二、液－液分配柱色谱法 三、离子交换柱色谱法 四、凝胶柱色谱法 五、柱色谱法的应用
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第二节 柱色谱法
将固定相均匀填在金属或玻璃制成的管中做 成层析柱，并以此进行分离的方法叫柱色谱法。 根据作用原理，可分为： 吸附柱色谱法 分配柱色谱法 离子交换柱色谱法 凝胶柱色谱法
对吸附剂的要求： 1. 具有较大的表面积与适宜的活性。 2. 与流动相极其样品中各组分不发生化学反
应，在流动相中不溶解。 3. 吸附剂颗粒应有一定的细度，并且颗粒要
均匀。
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第二节 柱色谱法
常用的吸附剂有： 氧化铝、硅胶、聚酰胺
硅胶： 呈微酸性 适用于分离酸性和中性物质，如：有机酸、
氨基酸、萜类、甾类等的分离。
流动相) 中分布的差异，使固定相对各组分的保 留作用不同产生差速迁移而得到分离的一种物理 化学分离分析方法。
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色谱法基本原理
分配系数与保留行为的关系
溶质在色谱柱中被保留的程度常用保留比 （retention ratio）R 表示。
高效液相色谱法
第八章高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatograph)第一节概述（Generalization）以高压液体为流动相的液相色谱分析法称高效液相色谱法（HPLC）。
HPLC是20世纪70年代初发展起来的一种新的色谱分离分析技术。
具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广（样品不需气化，只需制成溶液即可）的特点，适用于高沸点、热不稳定有机及生化试样的分离分析。
HPLC基本方法是用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器，由记录仪、或数据处理系统记录色谱信号再进行数据处理而得到分析结果。
高效液相色谱法按固定相不同可分为液－液色谱法和液－固色谱法；按色谱原理不同可分为分配色谱法（液－液色谱）和吸附色谱法（液－固色谱）等。
目前，化学键合相色谱应用最为广泛，它是在液－液色谱法的基础上发展起来的。
将固定液的官能团键合在载体上，形成的固定相称为化学键合相，具有固定液不易流失的特点，一般认为有分配与吸附两种功能，常以分配作用为主。
C18（ODS）是最常使用的化学键合相。
根据固定相与流动相极性的不同，液-液色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法，当流动相的极性小于固定相的极性时称正相色谱法，主要用于极性物质的分离分析；当流动相的极性大于固定相的极性时称反相色谱法，主要用于非极性物质或中等极性物质的分离分析。
《中国药典》中有50种中成药的定量分析采用HPLC法，在中药制剂分析中，大多采用反相键合相色谱法。
一、高效液相色谱法的特点目前经典LC主要用于制备，若用于分析则采用脱机或非连续检测。
经典LC填料缺陷，通常是填料粒度大、范围宽、不规则，不易填充均匀，扩散和传质阻力大，谱带展宽加大。
它存在致命弱点：速度慢、效率低和灵敏度低。
HPLC填料（高效固定相）颗粒细、直径范围窄、能承受高压。
中药化学 第八章 三萜类化合物
25 26 23
27
19 18
30 5
28 29
羊毛脂甾烷型
28 29
达玛烷型
H H H
大戟烷型
HO H
大戟醇
HOOC OH
H3COCO
H
茯苓酸
30 29
30 20 21
H
13
17 22
1 25
26 14
2
10
34 5
27 7
6
23 24
28
1 25
26
3
H
27
HO
H
23 24
29
29
30
20
【分离方法】
⑵胆甾醇沉淀法
利用胆甾醇能和皂苷生成复合物的性质， 但三萜皂苷与胆甾醇形成的复合物没有甾 体皂苷与胆甾醇形成的复合物稳定。先将 皂苷和胆甾醇充分反应，然后用水、醇、 乙醚顺次洗涤沉淀，以除去糖类、色素、 油脂和游离的胆甾醇，再将沉淀干燥，乙 醚回流，提去胆甾醇，剩下为较纯皂苷。
思考题
何谓皂苷，其主要分类依据有哪些？
何谓溶血及溶血指数，其意义何在？
皂苷溶血的机理为何，如何用化学方法解除其 溶血作用。
解释大孔树脂法用于皂苷纯化的特点及工艺流 程。
解释分段沉淀法用于皂苷分离纯化的原理及工 艺流程。
解释正丁醇提取法用于皂苷提取的原理及流程。
【分离方法】
（3）高效液相色谱法 目前最常用， 一般选用反相柱，流动相为甲醇-水， 乙腈-水。
（4）凝胶色谱法 应用较多的是能 在有机相使用的Sephadex LH-20。
第五节 三萜类化合物检识
【理化检识】
1.泡沫试验 中药水提取液振摇后，产生 持久泡沫（15分钟以上），注意假阳性反 应。
五、液相色谱分离法
五、液相色谱分离法（一）色谱法分离原理色谱法（Chromatography）又称层析法，是一种高效分离方法，它利用物质在两相中的分配系数（由物理化学性质：溶解度、蒸汽压、吸附能力、离子交换能力、亲和能力及分子大小等决定）的微小差异进行分离。
当互不相溶的两相做相对运动时，被测物质在两相之间进行连续多次分配，这样原来微小的分配差异被不断放大，从而使各组分得到分离。
本节主要介绍经典的液相色谱法，包括柱色谱、纸色谱和薄层色谱。
1、固定相和流动相色谱分离体系有两个相构成，固定的一相称为固定相（stationary phase），移动的一相称为流动相（mobile phase）。
固定相，在经典柱色谱中也称为柱填料。
通常是一些具有特定的分离性质，具有一定粒度和刚性的颗粒均匀的多孔物质，如吸附剂、离子交换剂、反相填料等。
流动相有气体和液体两种。
在经典柱色谱中流动相也称为洗脱剂，液相色谱的流动相通常由混合溶剂以及一些添加剂（如无机盐、酸等）组成。
流动相对样品组分要有一定的溶解度；粘度小，易流动；纯度要高。
色谱分离应根据被分离物质的结构和性质，选择合适的固定相和流动相，使分配系数K值适当，以实现定量分离的目的。
因此，固定相和流动相的选择是色谱分离的关键。
2、色谱分配系数在色谱分离时，溶质随着流动相向前迁移，在这个过程中，它既能进入固定相，又能进入流动相，即在两相之间进行分配。
分配系数定义为对于确定的色谱体系，K值在低浓度和一定温度下是个常数，它的大小取决于的溶质的溶解、吸附、离子交换等性质。
在色谱分离过程中，K值大的溶质，在固定相的停留时间长，移动速度慢。
两个化合物之间的K值相差越大，越容易分离。
（二）柱色谱柱色谱（Column Chromatography）是最常见的色谱分离形式，它具有高效、简便和分离容量较大等特点，常用于复杂样品分离和精制化合物的纯化。
柱色谱主要有吸附色谱和分配色谱两类。
前者常用氧化铝或硅胶为柱填料。
现代色谱分析试题
现代⾊谱分析试题第⼀章⾊谱法概论1. 综述各种⾊谱法的特点及其应⽤。
2. 简要说明⽓相⾊谱法（GLC、GSC）、⾼效液相⾊谱法（HPLC的各类⽅法）特点及其应⽤范围？3. 试⽐较⾊谱法（GC、HPLC）之间的异同？第⼆章⾊谱基本理论例1 采⽤3M⾊谱柱对A、B⼆组分进⾏分离，此时测得⾮滞留组分的t M值为0.9min ，A组分的保留时间（t R(A)）为15.1min，B组分的t R为18.0min，要使⼆组分达到基线分离（R=1.5），问最短柱长应选择多少⽶（设B组分的峰宽为1.1 min）？解⽅法（1）：由已知条件，得n B=16(18.0/1.1)2=4284r i,B=18.0-0.9/15.1-0.9=1.20K/B=18.0-0.9/0.9=19则因为所以故⽅法（2）：同⽅法（1）得n B=4284；r i,B=1.20；K/B=19所以则n B (R=1.5)=16 (1.5)2(1.2/0.2)2[(1+19)/19]2=1425故L=n (R=1.5)H=14250.07=99.8cm1m1.A、B ⼆组分的分配系数之⽐为0.912，要保证⼆者的分离度达到1.20，柱长因应选择多少⽶？设有效塔板⾼度为0.95mm.。
2.有⼀液相⾊谱柱长25cm,流动相速度为0.5ml/min，流动相体积为0.45ml，固定相体积为0.25ml,现测得萘、蒽、菲、芘四组分（以A、B、C、D）的保留值及峰宽如表3-1。
根据已知条件试计算出：（1）各组分容量及分配系数；（2）各组分的n及n eff；（3）各组分的H 值及H eff值；（4）画出四组分的K/值之间的关系曲线表3-1 在HPLC柱上测得的A、B、C、D 的组分t R(min) W h/2(min)⾮滞留组分ABCD 4.06.513.514.620.10.420.971.101.38答：（1）K/（A=0.60；B=2.38；C=2.65；D=4.03）；（2）（A=4021；B=3099；C=2818；D=3394）n eff（A=595；B=1535；C=1486；D=2178）;（3）H（A=0.06；B=0.08；C=0.09；D=0.07）H eff（A=0.42；B=0.16；C=0.17；D=0.11）;(5)根据已有数据，绘出K/--n--n eff曲线，⾃⾏判断正确与否，并分析原因。
液相分离度的原理
液相分离度的原理液相分离是化学和生物学实验中非常常见的过程。
它是一种将混合溶液中的各种成分分离的技术。
液相分离是基于不同的物理和化学特性运用在不同物质之间产生的差异上的。
这些差异可以被利用来引导同一混合物中的成分分离到不同的区域，最终使得它们成为单独的成分。
液相分离主要需要依靠以下三种方式来实现：色谱、离子交换和凝胶过滤。
这些方法都有各自的作用和原理。
1. 色谱分离色谱分离依据溶液中不同分子的相互作用差异将物质分离。
色谱分离公式是：移动速度（Vm） = 多项式（分子大小，极性，等等） X 运行介质（gas，liquid，etc）。
在这里，分子大小、化学性质和极性是色谱分离的三个基本特征。
当在不同的溶剂体系中进行色谱分离时，溶剂的不同极性和化学性质会影响各种成分在某一介质中的迁移速率。
这便是为什么不同的成分在色谱分离过程中可以被分离到不同的区域。
2. 离子交换分离离子交换属于离子交换色谱技术的一种，依赖于离子交换树脂与混合溶液中离子的电荷差异。
在离子交换分离过程中，树脂以负离子或正离子的形式交换吸附溶液中的离子。
具有不同电荷的离子在催化剂中的吸附作用不同，从而实现了混合溶液的分离。
3. 凝胶过滤分离凝胶过滤法是一种多孔性质的溶胶技术。
通过组成凝胶的空间中的间隙，大小不同的成分可以通过这个空间的大小作为动力进行分离。
在凝胶过滤过程中，溶液中的细胞、蛋白质、聚合物和其他成分将被分离，并随凝胶的筛网逐渐洗净。
凝胶过滤法也被广泛地应用在温度敏感性的和具有高极性的物质的分离中。
综上所述，液相分离依靠物质在分子大小、分子化学性质、分子表面电荷等方面的差异实现分离。
液相分离的原理与方式各不相同，但通常依赖于极性、电荷异性和孔径差异之共存来实现成分之间的分离。
由于液相分离的原理复杂，需要精细的实验条件和高质量的实验仪器，所以一些条件或时区的不匹配或者操作不当，可能会导致分离结果产生错误。
五、液相色谱分离法
五、液相色谱分离法（一）色谱法分离原理色谱法（Chromatography）又称层析法，是一种高效分离方法，它利用物质在两相中的分配系数（由物理化学性质：溶解度、蒸汽压、吸附能力、离子交换能力、亲和能力及分子大小等决定）的微小差异进行分离。
当互不相溶的两相做相对运动时，被测物质在两相之间进行连续多次分配，这样原来微小的分配差异被不断放大，从而使各组分得到分离。
本节主要介绍经典的液相色谱法，包括柱色谱、纸色谱和薄层色谱。
1、固定相和流动相色谱分离体系有两个相构成，固定的一相称为固定相（stationary phase），移动的一相称为流动相（mobile phase）。
固定相，在经典柱色谱中也称为柱填料。
通常是一些具有特定的分离性质，具有一定粒度和刚性的颗粒均匀的多孔物质，如吸附剂、离子交换剂、反相填料等。
流动相有气体和液体两种。
在经典柱色谱中流动相也称为洗脱剂，液相色谱的流动相通常由混合溶剂以及一些添加剂（如无机盐、酸等）组成。
流动相对样品组分要有一定的溶解度；粘度小，易流动；纯度要高。
色谱分离应根据被分离物质的结构和性质，选择合适的固定相和流动相，使分配系数K值适当，以实现定量分离的目的。
因此，固定相和流动相的选择是色谱分离的关键。
2、色谱分配系数在色谱分离时，溶质随着流动相向前迁移，在这个过程中，它既能进入固定相，又能进入流动相，即在两相之间进行分配。
分配系数定义为对于确定的色谱体系，K值在低浓度和一定温度下是个常数，它的大小取决于的溶质的溶解、吸附、离子交换等性质。
在色谱分离过程中，K值大的溶质，在固定相的停留时间长，移动速度慢。
两个化合物之间的K值相差越大，越容易分离。
（二）柱色谱柱色谱（Column Chromatography）是最常见的色谱分离形式，它具有高效、简便和分离容量较大等特点，常用于复杂样品分离和精制化合物的纯化。
柱色谱主要有吸附色谱和分配色谱两类。
前者常用氧化铝或硅胶为柱填料。
第八章 高效液相色谱各种方法(离子色谱等)
离子色谱是20世纪70年代发展起来的一项 新的液相色谱技术，是离子交换色谱的一种特 殊形式。 以无机、特别是无机阴离子混合物为 主要分析对象, 固定相：离子交换树脂 流动相：电解质溶液 检测器：一般为电导检测器
（1） 双柱离子色谱 淋洗液→泵→进样器→分离柱→抑制柱→电 导检测器→记录仪 通过抑制柱除去流动相的电解质背景，只有被检 离子在检测器上产生讯号。
例：以阴离子交换树脂为分离柱，阳离子交换 树 脂 为 抑 制 柱 ， NaHCO3 为 流 动 相 ， 分 离 F- 、Cl-混合液。
NaF 2R-HCO3 + 交换： NaCl R-F +2NaHCO3 R-Cl
凝胶过滤
{
固定相：亲水性凝胶 （如葡聚糖、凝胶）
流动相：水系溶剂
（如缓冲溶液，水等）
应用：分离聚合电解质，多肽等。
凝胶渗透
{
固定相：疏水性凝胶 （聚苯乙烯等） 流动相：非水系有机溶剂 （如四氢呋喃）
应用：测定聚合物的分子量分布。
讨论： ① B以下分子随溶剂流出，其他均在此 之前，不会残留 ② 不能进行梯度洗脱 ③ 严格按分子大小顺序流出，易定性 ④ 柱容量有限，大小过于接近者 （<10%)不能分离 ⑤ 谱带宽度大致相等
原理: 采用交换容量非常低的特制离子交换树脂 为固定相， 在分离柱后，用另外一支抑制柱来消除淋 洗液的高本底电导; 采用电导检测器检测流出组分。快速分离 分析微量无机离子混合物; 各种抑制装置及无抑制方法的出现，发展 迅速.
离子色谱具有以下优点：
分析速度快：
可在数分钟内完成一个试样的分析；
《液相色谱分离法》课件
3 后续学习和深入研
究的建议
建议进一步学习和掌握 液相色谱的原理和应用， 以及最新的技术进展， 为研究和实验提供更丰 富的分析手段。
数据的处理与分析
数据的处理与分析包括峰的识别、峰面积的计算和结果的解释，以完成定量和定性分 析。
应用和拓展
1 液相色谱在实际应用中的常见场景 2 液相色谱的技术进展和未来发展
方向
液相色谱广泛应用于医药、食品、环境、
化工等领域，例如药物检测、食品安全监
液相色谱在仪器设备、分离介质和检测方
测和污染物的分析。
手性色谱
手性色谱是一种用于分离 和鉴定手性化合物的方法， 常用于药物合成和生化分 析。
仪器设备
1 液相色谱仪的基本构成
2 液相色谱仪的使用方法和操作流程
液相色谱仪由进样系统、色谱柱、检测器 和数据处理软件等组成，确保分离和检测 的可靠性和准确性。
液相色谱仪的使用方法包括样品准备、进 样、运行方法设置和数据分析等步骤。
法等方面不断发展，为更高效、更精确的
分离和分析提供了新的可能。
总结
1 液相色谱分离法的
优缺点
液相色谱分离法的优点 包括分离效果好、选择 性高和适用性广泛，缺 点是分离时间长和一些 化合物不易分离。
2 液相色谱在实验中
的重要性
液相色谱在分离和定量 分析方面具有重要的应 用价值，是科学研究和 实验室工作中不可或缺 的技术手段。
《液相色谱分离法》PPT课件
这个PPT课件将介绍液相色谱分离法的基本原理、仪器设备和实验步骤，以 及其在实际应用中的应用场景和技术进展。同时还探讨了液相色谱分离法的 优缺点，以及深入研究的建议。
什么是液相色谱分离法
液相色谱分离法是一种基于样品在液体流动相与固定相之间的分配行为进行物质分离的技术。它广泛应 用于药物分析、食品安全监测和环境污染检测等领域。
高效液相色谱基本原理与主要分离类型.ppt
二、 液-液分配色谱
liquid- liquid partiti互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流 动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之 ，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。 正相与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合 到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。
第四节 影响分离的因素与操作条件选择
factors influenced separation and choice of operation condition
第五节 离子色谱法
ion chromatograph
第六节 超临界流体色谱
supercritical fluid chromatograph
一、 液-固吸附色谱
liquid-solid adsorption chromatography
固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使 用的是5～10μm的硅胶吸附剂；
流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有 官能团的化合物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；
阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对 离子；
反相离子对色谱：非极性的疏水固定相(C-18柱)，含有 对离子Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相，试样离子X-进入 流动相后，生成疏水性离子对Y+ X -后；在两相间分配。
2024/9/27
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流动相
正相分配
极性
非极性
反相分配
非极性
极性
分配色谱
充填剂：多孔聚合物
３、离子交换色谱
是根据固定相的离子交换基和样品成分中的 离子性基进行交换来分离的
4、凝胶色谱
凝胶色谱分离方法是 利用分子振动效应， 根据样品分子的大小 而进行分离。所以又 称为排斥色谱
充填剂多采用：一定 孔径的多孔性聚合物
HPLC的介绍及应用
一、HPLC的分离方式
1、吸附色谱 2、分配色谱 3、离子交换色谱 4、凝胶色谱
1、吸附色谱
根据填充剂吸附活性 点对样品的吸收系数 不同而分离
充填剂：硅胶
2、分配色谱
根据固定相与流动相的极性不同而分为 正相分配色谱和反相分配色谱 两者的区别如下图所示：
固定相
二、LC在环保方面的应用
1、农药残留量分析 ：含氯农药 、有机 磷农药 、除虫菊
2、致癌物质 ：霉素 、亚硝胺(香烟中的 亚硝胺) 、苯并芘
3、水质分析
三、LC在生化方面的应用
1、蛋白质分析 2、肽类的分析 3、核酸 4、氨基酸
四、LC在药物方面的应用
1、药品的预处理：片剂，油膏，水剂等 2、体液：血、尿、脊椎液、唾液等 3、抗菌素 ：青霉素 、甾族(激素)