高效液相色谱HPLC的分离模式

基
的分离模式。
质
分离模式
键
特征
合
·根据在固定相（填料）和流动相（溶剂）中分配系数不同分离
相
反相法（RPC）
·固定相极性比流动相低 ·采用甲醇、乙腈、THF等有机溶剂和水或缓冲溶液的混合溶液作流动相
配 位
·流动相极性越低，洗脱力越强
体
·根据亲水性相互作用进行分离
·使用极性高的固定相
亲水性相互作用法（HILIC）
柱 的 选 择 方
离子交换法（IEC）
·根据离子交换体和离子溶质的静电相互作用（结合）进行分离 ·采用在分析试样电荷差最大的pH下具有充分缓冲能力的缓冲液作流动相 ·可通过流动相的pH、盐浓度或离子强度来调节样品的洗脱位置
法︵ 根 据
·根据疏水性相互作用进行分离
样
疏水性相互作用法（HIC）
·固定相键合疏水性基团 ·通常情况下高盐浓度下吸附，盐浓度降低后洗脱
··
·
HPLC
高效液相色谱HPLC的分离模式
色
谱
柱
液相色谱是以液体作为流动相、以填料为固定相，根据分离组分在流动相与固定相之间作用力之差来分离混合物，是物理化学分离分析
的 类
法中的一种。
型
利用高压输送流动相，快速、高效分离的方法称之为高效液相色谱（HPLC）。根据使用的固定相和流动相的组合不同，能够得到各种各样
色谱柱的选择方法（根据样品特点和分离模式）
样品的溶解性 样品的分子量
分离模式
样品的溶解性 样品的分子量
分离模式
RPC
LEX
IEX
≥ 2,000
SEC
≥ 2,000
SEC
分离模式缩写
IEC
RPC ：反相法
HIC HILIC ：亲水性相互作用法
溶于水
AFC
溶于有机溶剂
NPC ：正相法
RPC
LEX ：配位体交换法
HILIC LEX
RPC
IEX ：离子排阻法
IC ：离子色谱法 IEX
≤ 2,000
IC
≤ 2,000
N百度文库C
SEC ：尺寸排阻法
SEC
IEC ：离子交换法
IEC
HIC ：疏水性相互作用法
AFC
SEC
AFC ：亲和色谱法
CS
CS ：手性分离法
3
离子色谱法（IC）
·因为使用低浓度的流动相，可以使用电导检测器
色
·主要适用于无机离子的分析
谱
尺寸排阻法（SEC）
·利用高分子填料的网状结构或细孔的分子筛作用来分离 ·基于尺寸排阻色谱法来分离，必须在填料与样品分子间无相互作用力的条件下测试 ·样品中的成分按照分子尺寸从大到小的顺序洗脱 ·适用于高分子化合物的分子量测定、分子量分布测定及低聚物的组成分析等
配位体交换法（LEX）
·采用与磺基配位金属离子的固定相 ·组合使用尺寸排阻法和亲水性相互作用法分离机制
的 分 离
·根据离子交换体和离子溶质的静电相互作用（排斥）进行分离
模
离子排阻法（IEX）
·离子化较早洗脱，非离子化物质较晚洗脱
式
·主要适用于有机酸的分析
·根据离子交换体和离子溶质的静电相互作用（结合）分离
·采用乙腈等有机溶剂和水或缓冲溶液的混合溶液作流动相
高
·流动相的极性越高，洗脱力越强
效
·适用于分析极性高的物质
液
正相法（NPC）
·样品在固定相和流动相中分配系数不同进行分离 ·固定相极性比流动相高 ·采用己烷、异丙醇等有极性差异的有机溶剂的混合溶液作流动相
相 色 谱
·流动相极性越高，洗脱力越强
·根据络合原理分离
品 特
·主要适用于蛋白质的分析
点
和
·根据生物的分子识别能力来分离
分
亲和色谱法（AFC）
·有很高的选择性 ·采用相互作用及配位体种类、pH、离子强度适合分析样品的缓冲液
离 模
·主要适用于生理活性物质的净化和浓缩
式
·根据手性分子识别能力的不同来分离
︶
手性分离法（CS）
·有很高的选择性
复合模式
·支持复合分离模式分离