高效液相色谱HPLC的分离模式色谱柱的选择方法根据样品-Shodex
高效液相色谱的色谱柱选择与优化
高效液相色谱的色谱柱选择与优化高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于化学、生物、药物等多个领域。
在HPLC中，色谱柱的选择和优化是至关重要的一步，它直接影响到分析结果的准确性和分离效果的好坏。
本文将探讨HPLC色谱柱选择与优化的相关问题。
一、色谱柱选择的基本原则在选择HPLC色谱柱时，需要考虑以下几个基本原则：1. 样品特性：首先要考虑待分离的样品特性，包括其化学性质、分子量、溶解度等。
不同的样品可能需要不同类型的色谱柱，如反相色谱柱、离子交换色谱柱、手性色谱柱等。
2. 分离效果：色谱柱的分离效果是选择的关键因素之一。
分离效果好的色谱柱能够提供较高的分离度和较好的峰形，从而使得分析结果更加准确可靠。
3. 色谱柱品牌和质量：选择知名品牌和质量可靠的色谱柱是保证分析结果准确性的重要保障。
品牌和质量好的色谱柱通常具有较好的稳定性和耐用性，能够提供稳定的分离效果。
二、色谱柱优化的方法和技巧除了选择合适的色谱柱，还可以通过优化色谱条件来改善分离效果。
以下是一些常用的色谱柱优化方法和技巧：1. 流动相的优化：流动相的选择和组成对于分离效果有着重要影响。
可以通过调整流动相的pH值、浓度、添加剂等来改善峰形和分离度。
此外，还可以尝试使用梯度洗脱法，即在分离过程中逐渐改变流动相的组成，以提高分离效果。
2. 温度的优化：温度对于色谱柱的分离效果也有一定影响。
在某些情况下，调整温度可以改善分离度和峰形。
一般来说，提高温度可以加快分离速度，但也可能导致峰形变宽。
因此，在优化温度时需要综合考虑分离效果和分析时间的平衡。
3. 流速的优化：流速是影响分离效果的重要因素之一。
过高的流速可能导致峰形变宽、分离度下降，而过低的流速则会延长分析时间。
因此，需要根据样品特性和分析要求选择合适的流速。
4. 注射量的优化：注射量的大小也会对分离效果产生影响。
hplc色谱柱的选择
hplc色谱柱的选择
高效液相色谱（ HPLC）是一种广泛应用于分析化学领域的分离技术。
在（HPLC（分析中，色谱柱的选择是至关重要的，因为它直接影响分离效果和分析结果的准确性。
下面是一些选择（HPLC（色谱柱的要点：
1.（色谱柱类型：HPLC（色谱柱主要分为反相柱、正相柱和离子交换柱等类型。
根据待分析物的性质选择合适的色谱柱类型，例如，对于非极性化合物，通常选择反相柱；对于极性化合物，正相柱可能更合适。
2.（填料粒度：填料粒度越小，分离效率越高，但柱压也会相应增加。
一般来说，分析小分子化合物时选择细粒度填料，分析大分子化合物时选择粗粒度填料。
3.（柱子长度：柱子长度越长，分离效果越好，但分析时间也会延长。
根据分离要求和分析时间的限制选择合适的柱子长度。
4.（柱子内径：柱子内径越小，柱效越高，但柱压也会相应增加。
一般来说，分析小分子化合物时选择细内径柱子，分析大分子化合物时选择粗内径柱子。
5.（固定相：选择合适的固定相可以提高分离效果。
根据待分析物的性质选择合适的固定相，例如，对于非极性化合物，可以选择（C18（固
定相；对于极性化合物，可以选择硅胶固定相。
6.（品牌和价格：不同品牌的色谱柱质量和价格可能存在差异。
在选择色谱柱时，可以参考其他用户的评价和经验，选择性价比较高的产品。
在选择（HPLC（色谱柱时，需要综合考虑待分析物的性质、分离要求、分析时间和成本等因素。
如果对色谱柱的选择有疑问，可以咨询专业的色谱柱供应商或实验室技术人员。
hplc高效液相色谱法
HPLC高效液相色谱法简介高效液相色谱法（HPLC）是一种利用液体作为流动相，通过高压输液系统，将样品中的各组分在固定相和流动相之间进行分配或吸附等作用而实现分离和检测的色谱技术。
HPLC具有分离效率高、灵敏度高、选择性强、分析速度快、样品适用范围广等优点，已成为化学、生物、医药、环境等领域中最重要的分析方法之一。
本文将简要介绍HPLC的基本原理、仪器组成、常用的色谱模式和应用领域，以期对HPLC感兴趣的读者有所帮助。
一、HPLC的基本原理HPLC的基本原理是利用样品中的各组分在固定相和流动相之间的不同亲和力，使其在色谱柱内以不同的速度移动，从而达到分离的目的。
固定相是填充在色谱柱内的颗粒状物质，可以是固体或涂于固体载体上的液体。
流动相是通过高压泵送入色谱柱的溶剂或溶剂混合物，可以是极性或非极性的。
样品是通过进样器注入流动相中，并随流动相进入色谱柱。
当样品中的各组分经过固定相时，会发生吸附、分配、离子交换、排阻等作用，导致它们在固定相中停留不同的时间。
这个时间称为保留时间（retention time），通常用tR表示。
保留时间是反映样品组分在色谱柱内分离程度的重要参数，不同的组分有不同的保留时间。
当样品组分从色谱柱出口流出时，会被检测器检测到，并产生一个信号。
这个信号随时间变化而变化，形成一个色谱峰（chromatographic peak）。
色谱峰的位置反映了样品组分的保留时间，色谱峰的面积或高度反映了样品组分的含量或浓度。
将检测器信号随时间变化而绘制出来，就得到了一条色谱图（chromatogram）。
色谱图上可以看到不同的色谱峰，每个峰对应一个样品组分。
通过比较保留时间和色谱峰面积或高度，就可以对样品进行定性和定量分析。
二、HPLC仪器组成HPLC仪器主要由以下几个部分组成：溶剂供给系统（solvent delivery system）：负责提供恒定压力和流速的流动相，并将溶剂混合成所需比例。
液相层析法中色谱柱选择与操作技巧
液相层析法中色谱柱选择与操作技巧液相层析法（Liquid Chromatography，LC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。
在液相层析实验中，选择合适的色谱柱和掌握操作技巧是非常重要的，本文将探讨液相层析法中色谱柱选择与操作技巧的相关内容。
一、色谱柱的选择1. 相性选择在选择色谱柱时，相性是首要考虑因素之一。
色谱柱的相性应与待分离的化合物相匹配，以保证分离效果。
对于极性化合物，可以选择正相色谱柱，如C18柱；对于非极性化合物，可以选择反相色谱柱，如C8柱。
此外，还有其他特殊相性的色谱柱，如糖酒石酸柱、氨基酸柱等，可以根据需要进行选择。
2. 尺寸选择色谱柱的尺寸也是需要考虑的因素之一。
常见的色谱柱直径有2.1 mm、4.6mm等，长度一般为150-250 mm。
选择合适的柱尺寸可以提高分离效果和样品通量，同时也会影响分离时间和分辨率。
对于复杂的样品，可以选择细柱，如2.1mm×50 mm，以提高峰形和分辨率；对于样品量较大的情况，可以选择大柱径，如4.6 mm×250 mm，以增加样品通量。
3. 粒径选择色谱柱的粒径也是一个重要的选择因素。
粒径是指填充在柱中的固定相颗粒的直径，常见的有3 μm、5 μm、10 μm等。
粒径越小，表面积越大，分离效果越好，但也会带来较高的压力和较长的分离时间。
一般而言，对于常见的分析要求，5μm的粒径已足够满足分离要求；对于更高的分离要求，可以选择更小的粒径。
需要注意的是，选择不同粒径的柱时，需调整相应的操作参数，以保证分离效果。
二、色谱柱的操作技巧1. 前处理样品在液相层析实验中，样品前处理是一个非常关键的步骤。
样品中的杂质和干扰物会对分离效果产生不利影响，因此需要进行适当的前处理。
常见的前处理方法包括：固相萃取（Solid Phase Extraction，SPE）、液液萃取等。
前处理的目的是提取和富集分析物或去除干扰物，以提高检测灵敏度和分离效果。
液相色谱柱的选择和方法开发
液相色谱柱的选择和方法开发液相色谱（HPLC）是一种高效、准确和灵敏的分离和分析技术，在许多领域中具有广泛的应用。
液相色谱柱的选择和方法开发是HPLC分析中的关键步骤之一，它们直接影响到分离效果和分析结果的准确性和可靠性。
本文将详细介绍液相色谱柱的选择和方法开发的相关内容，并提供一些建议和注意事项。
一、液相色谱柱的选择1.分子排阻柱（SEC）：适用于分离和分析高分子物质，如蛋白质、多肽、聚合物等。
根据目标物分子量的大小选择不同的分子排阻柱。
2.反相柱（RP）：适用于分离和分析非极性、低极性化合物。
常用的反相柱有C18、C8、C4等，根据目标物的亲疏水性选择不同的柱材和碳链长度。
3.离子交换柱（IEC）：适用于分离和分析离子化合物，如酸、碱、金属离子等。
根据目标物的离子性质选择阴离子交换柱或阳离子交换柱。
4.亲合性柱：适用于分离和分析具有特定亲和性的目标物，如抗体、酶、细胞等。
常用的亲合性柱有亲和色谱柱、亲和半制备色谱柱等。
二、方法开发方法开发是指在具体的分析目标下，通过调整柱材、流动相、柱温、检测器等参数，寻找出最佳的分离条件和分析方法。
方法开发的过程中，需要进行实验设计、参数调整和结果评估等步骤。
1.实验设计：按照试验的目的和要求，设计合理的实验方案。
包括选择柱材、柱尺寸、流动相、梯度条件、柱温等参数，并确定荧光标准品的浓度和检测波长。
2.参数调整：根据实验设计，逐步调整各种参数，寻找出最佳的分离效果。
需要注意的是，在参数调整的过程中，要逐步变化，避免一次性调整多个参数。
3.结果评估：通过比较不同条件下的分离效果和结果，评估方法的可行性和可靠性。
主要评估指标包括分离度、保留时间、峰形等。
注意事项：1.根据样品的性质和分析目标选择合适的柱材和柱尺寸。
不同的柱材和柱尺寸对分离效果和分析结果有直接影响。
2.合理选择流动相和梯度条件。
流动相的选择应考虑样品的亲疏水性质，梯度条件应选择合理的温度和时间。
如何选择色谱柱
如何选择色谱柱，比较一下C-18及C-8柱的硅烷基质C-18和C-8硅烷色谱柱是高效液相色谱（HPLC）中最常使用的色谱柱，而且，在美国市场上有多于100种C-18和C-8色谱柱出售。
面对这么多可供选择的色谱柱，分析工作者很难从中选出适当的色谱柱来具体使用，同时更难选择出一根合适的替换柱。
对于非极性样品（如小分子芳烃）或弱极性样品（如对羟基苯甲酸酯），C-18和C-8色谱柱是最容易选择的。
对于这类样品，色谱柱之间的主要差异在于保留因子（k）；而在选择性方面却只有微小的差异。
但对于极性和中等极性样品色谱柱的选择却相当困难。
例如含氨基或酸性基团的药物化合物。
分析工作者会发现极性样品在保留时间、选择性和峰形都有很大的差别。
色谱柱的选择性和峰形受到担体硅胶的影响远大于键合相的影响。
另外，有研究报道在反相色谱中表面硅烷醇、硅酸及金属杂质的影响。
在特殊情况下，选择性的差异可由填料制备时使用的键合过程决定的。
通常情况下，色谱工作者选择HPLC色谱柱是通过比较由色谱柱供应商所提供的填料介质的规格来决定的。
这些规格内容包括：表面积、末端封尾、含碳量、颗粒形状、颗粒尺寸、孔径、孔容积、装填密度和键合度。
含碳量和键合度仅由色谱制造商提供，没有这些规格使用者不可能计算出碳的克数，也不可能计算出一根色谱柱中键合相的微分子数。
分析工作者可使用这两个数据来估计一根色谱柱的疏水性质。
然而，即使制造商提供所有上述规格数据，使用者也不可能精确地预测出色谱柱对含有极性官能团的化合物的选择性。
由于色谱的保留时间是基于分析物和填充基质之间许多微妙的相互作用，我们建议使用混合物测试来比较填充基质的规格与性能。
Engelhardt 和他的同伴回顾了硅烷反相色谱的特性，并且提出用溶解物试验来描述固定相的疏水性和亲硅基醇特性。
另外有一些人也改进了测试条件和方法来解释那些色谱数据，但他们只测试了很少的商品色谱柱，并且在他们的测试混合物中没有羧酸。
怎样选择合适的液相色谱柱
HPLC色谱柱一、色谱分离模式——正相、反相、离子交换、离子抑制、亲水作用正相色谱是色谱的经典形式，使用极性固定相和非极性流动相。
洗脱物通过其极性基团和固定相上的极性基团作用被保留。
这种应用，经典的是使用未键合的硅胶和氧化铝，但现在使用的极性键合相有以下优点：键合相平衡快，对流动相中微量的水不敏感，和产生不同的选择性。
二醇基键合相比纯硅胶极性小，平衡速度快；氰基键合相是保留能力最小的正相吸附剂；氨基键合相适宜分离芳香族碳氢化合物反相色谱已成为最流行的色谱分离模式。
反相色谱中，固定相非极性，流动相极性。
典型的流动相一般是水或水系缓冲液与甲醇、乙腈或四氢呋喃的混合物。
典型的固定相是用脂肪烃硅完化的硅胶键合相，其它用于反相色谱的基质有石墨化碳和苯乙烯-二乙烯苯基质。
反相色谱的性能还受残留的硅醇基的活性的影响。
硅醇基与洗脱物的极性基团作用。
因此，根据硅醇基的活性不同，填料显示出不同的选择性。
而且，常能观察到碱性物质在硅醇基活性高的填料上产生拖尾峰。
修饰硅醇基活性的一个办法是封端，即用硅烷化试剂把硅醇基转变成三甲基甲硅烷基基团。
不过，即使是作了封端，基质表面的硅醇基密度还是比键合配基的密度大。
硅醇基的活性也和硅胶的预处理（基质灭活）、硅胶纯度有关。
碱性分析物的色谱分析推荐使用高纯度硅胶基质、充分封端的键合相。
未封端的填料在许多应用中有可以获得不同选择性的优点。
使用带有离子电荷的固定相，使根据洗脱物电荷进行分离成为可能。
对于硅胶基质的离子交换填料，离子基团通过标准的硅烷化技术键合到硅胶表面。
对于聚合物基质的离子交换填料，离子交换基团分布于交联聚合物的整体（through the matrix）。
有四种离子交换填料：强/弱阳离子交换填料和强/弱离子交换填料。
弱离子交换填料的特征是电量与pH值有函数关系。
以羧酸基为功能基的离子交换剂是弱阳离子交换剂的代表。
弱阴离子交换剂由一级、二级、三级铵为功能基。
大部分强离子交换剂的电荷与pH值无关。
shodex sc1011色谱柱说明书
shodex sc1011色谱柱说明书Shodex SC1011色谱柱是一种广泛应用于高效液相色谱（HPLC）分析的色谱柱。
它具有出色的分离能力和高效的分析性能，适用于多种样品的分离和检测。
本文将对Shodex SC1011色谱柱进行详细介绍。
首先，Shodex SC1011色谱柱采用高品质的硅胶填料，填料颗粒均匀细小，具有较大的比表面积。
这种设计能够提供较大的相互作用表面，从而更好地实现目标分子与填料之间的吸附分离。
同时，柱内充满的填料能够提高混合物的扩散速率，使得分离更加迅速和高效。
其次，Shodex SC1011色谱柱具有优异的化学稳定性和机械稳定性。
它能够承受高压下的运行，并且对常见的有机溶剂和酸碱溶液具有良好的耐受性。
这使得Shodex SC1011色谱柱适用于各种复杂样品的分离与分析，无需担心柱的性能受到损害。
第三，Shodex SC1011色谱柱具有较宽的pH范围和温度范围，可适应不同分析条件的需求。
它可以在酸性、中性和碱性条件下使用，并且在较高温度下仍能保持较好的分离性能。
这为用户提供了更多的实验自由度，使他们能够根据样品的特性和分析要求来选择适当的条件。
最后，Shodex SC1011色谱柱还具有良好的再生性能和较长的使用寿命。
在合适的条件下，使用者可以通过后续的再生步骤和保养操作来延长柱的使用寿命。
这使得Shodex SC1011色谱柱成为研究人员和实验人员们的理想选择，能够提供持久、稳定和可靠的分离性能。
总结起来，Shodex SC1011色谱柱以其卓越的分离能力、优异的化学稳定性、机械稳定性和较长的使用寿命而闻名。
通过使用这一色谱柱，分析者们可以高效、准确地进行多种样品的分离、检测和分析。
无论是在学术研究、医药分析还是环境监测领域，Shodex SC1011色谱柱都能够发挥重要作用，并为使用者提供可靠的分析结果。
高效液相色谱柱的选择
高效液相色谱柱的选择色谱柱是色谱技术核心之一，色谱柱的选择是高效液相色谱分析方法开发中重要环节，选择合适的色谱柱可以缩短方法开发时间，并使开发的方法更稳定。
色谱柱的选择包括分离模式、色谱填料基质及基质物理化学性质等。
分离模式选择首先需要检索资料，了解待检样品的结构、分子量、溶解性、离子化、极性、pH值等物理化学性质，再参照下图选择适合的分离模式：色谱填料基质1 硅胶基质填料正相色谱：正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
反向色谱：反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。
反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
色谱柱性能影响因素中物理性质包括硅胶纯度、色谱柱尺寸、颗粒形状、粒径、表面积、孔径，化学性质包括键合类型、炭覆盖率、封端，下面以C18柱为例，依次介绍各参数对色谱柱性能的影响。
1 物理性质硅胶纯度：硅胶纯度对强极性化合物的分离最为重要，残留金属离子浓度、硅胶的杂质会影响化合物的峰形，硅胶表面的金属含量高会影响碱性化合物的峰形，易发生拖尾。
A型硅胶是由金属硅酸盐制备而来，具有很高的金属含量，硅胶纯度较低，可用作中性化合物和非离子化合物的分离。
B型硅胶是以无金属的工艺制备而来，纯度高、酸性较弱、只含有微量的金属，可用于分离离子化合物、可电离化合物，特别是碱性化合物。
现在的色谱柱填料以B型硅胶为主，但是不同品牌、不同类型的色谱柱的硅胶表面金属含量还是略有差别的，如果色谱峰形较差，需要关注不同品牌色谱柱的硅胶纯度。
色谱柱的选择SelectofHPLCColumns
高 稳 定 性
高 灵 敏 度
快 速 分 析
低 溶 剂 消 耗
快 速 平 衡
酸 碱 兼 容
Y Y Y Y Y
Y
Y Y
Y
Y
Y
HPLC柱选择对照表
通 高 高 低 高 用 柱 容 柱 分 性 效 量 压 辨 高 率
60A 100A 300A 3% 10%
高 上 样 量 Y
大 分 子 分 析
高 稳 定 性
高 灵 敏 度
高 稳 定 性
高 灵 敏 度 Y
快 速 分 析
低 溶 剂 消 耗 Y
快 速 平 衡
酸 碱 兼 容
Y Y Y Y Y Y Y Y
HPLC柱选择对照表
通 高 高 低 高 用 柱 容 柱 分 性 效 量 压 辨 高 率
3um 5um 10um 30mm 150mm 300mm
高 上 样 量
大 分 子 分 析
2
)
1 7
C H
3
。C18/ODS/RP-18 。高非极性，保留基于与疏水样品的相 互作用
R S i R (C H
2
)7 C H
3
。C8/RP-8 。非极性，保留基于与疏水样品的相 互作用
键合相的选择
H R S i (C H 2 ) 3 R H C C C H C C C H H
。苯基 。非极性，保留基于与疏水样品的相 互作用及- 作用，非极性保留接近 C8，但因为与缺电子的官能图作用具 有独特的选择性
快 速 分 析
低 溶 剂 消 耗
快 速 平 衡
酸 碱 兼 容
Y Y
Y Y Y
HPLC柱选择对照表
通 用 性 高
20% 单点键合 多点键合 球形 无定型
高效液相色谱柱的选择
高效液相色谱柱的选择现代高效液相色谱中，分离效果好坏的一个重要指标是色谱填料的选择。
但是色谱填料的选择范围很宽，因此，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。
一、硅胶基质填料1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
2、反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。
反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
二、聚合物填料聚合物填料多为聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等，其重要优点是在PH值为1—14均可使用。
相对于硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物对蛋白质等样品的分离非常有效。
现有的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。
三、其它无机填料其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化由于其特殊的性质，一般仅限于特殊的用途。
如，石墨化碳黑正逐渐成为反向色谱柱填料。
这种填料的分离不同于硅胶基质烷基键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性。
该柱填料一般比烷基键合相硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强。
石墨化碳可用于分离某些几何异构体，由于在HPLC流动相中不会被溶解，这类柱可在任何PH与温度下使用。
氧化铝也可以用于HPLC。
高效液相色谱仪法
高效液相色谱仪法高效液相色谱仪法一、前言随着现代科学技术的不断发展，化学分析技术也逐渐得到了提升，高效液相色谱仪法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）便成为其中一种重要的手段。
HPLC技术已经广泛应用于药物分析、食品安全监测、环境污染物检测等领域。
本文将介绍HPLC技术的原理、操作流程以及其在不同领域中的应用。
二、HPLC技术原理HPLC是一种基于分离技术的化学分析方法，通常是基于样品分子的物理化学性质来实现不同分子间的分离。
该技术能够比传统色谱分离技术更快速、更灵敏、更精确地完成对复杂混合物的分离和定量分析。
通过设定流动相、色谱柱类型和样品属性等参数，HPLC能够分离出样品中多种化合物，并能够定量分析各分离物的含量，不受化学转化和分解的影响。
三、HPLC技术操作流程1.准备样品：样品的准备是HPLC分析的基础。
在样品处理过程中，需注意一定的专业知识和技巧，以确保样品质量和分离效果。
2.选择色谱柱类型：色谱柱是HPLC分离的关键部件之一，根据样品的不同物理化学性质和分子大小选择不同的色谱柱，以取得最佳的分离结果。
3.设置流动相：流动相是色谱分离中不可或缺的部分，它需要与样品之间发生化学反应，并在色谱柱内进行流动。
流动相的选择与调节可能需要花费较长的时间，以便得到最佳的分离结果。
4.进行色谱分离：分离过程需要严格控制色谱柱的温度和流动速率，同时需要注意柱和检测器之间的连通方式。
5.浓缩和检测分离后的化合物：使用检测器测量样品或已分离化合物的特定属性，通常是荧光、吸收、电导率或电位。
还可以对化合物进行分析和定量。
四、HPLC技术应用领域1.药品分析：高效液相色谱仪法已经成为药品质量控制和药效评价的重要手段。
2.食品安全监测：在食品中发现的各种污染物质（如重金属、农药残留、有害添加剂等）可以通过HPLC技术进行检测和监测。
3.环境污染物检测：HPLC可以检测大气、水和土壤中的有毒污染物质，提供了有效的环境保护手段。
高效液相色谱柱的选择
高效液相色谱柱的选择液相色谱柱的选择、使用、维护和常见故障的排除液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。
正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。
另外还有离子交换柱，GPC柱，聚合物填料柱等。
本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用：一、反相色谱柱的选择1．柱子的PH值使用范围反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。
但硅胶为基质的填料，使用时一定要注意流动相的PH范围。
一般的C18柱PH值范围都在2~8，流动相的PH值小于2时，会导致键合相的水解；当PH值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。
一旦发生上述情况，色谱柱人口处会塌陷。
同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。
如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时，建议选择PH范围大的柱子，例如戴安公司的Acclaim柱PH 2-9或Zorbax的PH 2-11. 5的柱子。
2．填料的端基封尾（或称封口）把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。
如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物，最好选用填料经端基封尾的色谱柱。
3．戴安公司Acclaim柱子介绍—极性封尾C16固定相柱戴安公司有28种类型的柱子，Acclaim反相柱填料高纯，金属含量极低，完全封尾。
PH 2-9范围内兼容，低流失，高柱效。
尤其是2003年推出的Acclaim极性封尾C16柱，是最先商品化的磺酰氨-O 链接键的色谱柱，具极低的硅羟基活性，能在极性溶剂甚至100%水的条件下长期使用。
对酸性和碱性化合物有极为尖锐的好的色谱峰形，与现有的一流色谱柱相比有更好的立体选择性。
（下图是Acclaim极性封尾C16柱和市售极性封尾一流色谱柱分离酸性化合物谱图的比较）二、液相色谱柱的使用色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
怎样选择色谱柱及流动相
怎样选择高效液相色谱柱高效液相色谱柱怎样选择色谱柱现代高效液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。
但是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。
中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。
反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。
二、聚合物填料质等样品的分离非常有效。
现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。
三、其他无机填料用途。
如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。
这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性，该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强，石墨化碳可用于分离某些几何导构体，又由但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用，度，其重要用途与优势尚在进行中。
怎样选择填料粒度但不是唯一的因素。
如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选择更小粒度的填料短的色谱柱，以缩短分析时间，另外，可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力。
一、如何保证良好的柱性能与柱寿命名称别名功能基团正相反相离子对应用Silica -OH√非极性和中等极性以及非离子性有机化合物。
SAS C1 -(CH3)3√在所有的烷基键合相中对非极性化合物保留最弱，典型用于中等极性和多官能团化合物.Butyl C4 -C4H9 √√分离肽和蛋白质，保留时间比C8和C18短。
MOS C8， -C8H17√√中等极性相中对中等化合物，小肽和蛋白质， Octyl极性药族化合物和环境样品。
ODS C18 -C18H37√√烷基键合相中对中等极性化合物保留最强。
关于高效液相色谱色谱柱、流动相以及检测器的选择
关于高效液相色谱色谱柱、流动相以及检测器的选择1.概述高效液相色谱已成为化学、医学、工业和法学等学科领域中一项十分重要的分离分析技术。
近年来，我国对食品安全有了更高的关注度，越来越多的研究人员将高效液相色谱应用于食品安全检测中，获得了良好的效果。
高效液相色谱是色谱法中十分重要的一个分支，这项技术采用高压输液系统将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂作为流动相，由流动相携带需测定的混合物液体泵入有固定相的色谱柱中，而在色谱柱中各成分能够得到有效的分离，分离完成后将其输送到检测器中进行检测，能帮助工作人员对样本进行有效的分析，了解其中存在的不同物质。
高效液相色谱在应用过程中可通过选择固定相和流动相以及调节流动相比例达到最优的分离效果，不仅速度较快且重复性较高，检测时间能控制在十几分钟至几十分钟。
同时高效液相色谱柱能反复使用，在进样分离测定时为仪器自动化处理，具有较高的分析精度，可减少人为干扰及误差。
2.高效液相色谱色谱柱的选择童优芸[1]等人使用高效液相色谱法同时检测液体食品中6种人工合成色素，该研究选择的色谱柱为美国安捷伦XDB-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)。
色谱柱是分离的核心，选择色谱柱的要求是柱效高、选择性好、分析速度快等。
市售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等，其粒度一般为3、5、7、10 μm等。
C18和C8色谱柱的应用较为广泛，都属于反相色谱柱。
C8适合分析大分子类的物质，其对同一个物质的保留能力比C18柱弱，保留时间比C18柱早，一些物质出峰过于靠前时使用C8柱很难实现分离。
C18柱对中等极性化合物保留最强，主要应用于羧基、脂肪酸、苯胺、甘油酯等物质的测定，对分子量较小的物质有较好的分离效果。
因此，考虑合成色素的保留时间和分离度，选用C18柱作为此次试验的色谱分析柱。
刘艳荣[2]等人在保健食品中叶黄素总量的高效液相色谱分析测定中选择的色谱柱为C18色谱柱，5μm,250 mm×4.6 mm（内径），在该研究中比较了C18和C30这两种色谱柱的分离效果，结果表明，叶黄素都能很好的出峰。
液相色谱柱选择方法
液相色谱柱选择方法一、液相色谱柱选择方法|液相色谱柱选择的简单思路1.确定分离目的确定你的应用是否要求高分离度、短分析时间、高灵敏度、长柱寿命，低的操纵本钱等等。
2.评估分析物的化学性质评估分析物的化学性质..诸如化学结构、溶解性、稳定性等等。
3.选择合适的色谱柱了解色谱填料的物理和化学性质。
二、液相色谱柱选择方法|液相色谱柱选择的条件A填料基质1.硅胶基质：纯度高本钱低，强度大，化学修饰轻易，但pH值范围有限。
大多硅胶基质填料在pH2-8之间稳定，但经过特殊修饰的硅胶键合相可以稳定在pH1.5-10。
2.聚合物基质：应用pH值范围宽，温度稳定(高温可以达到80度以上)，机械强度小。
B颗粒外形大多现代HPLC填料都是球形颗粒，但有时是不规则的颗粒。
球形颗粒提供较低的柱压、较高的柱效和稳定性以及较长的柱寿命在使用高粘度的活动相时;不规则颗粒有较大比表面积和相对低廉的价格。
C颗粒粒径粒径越小柱效越高、分离度越高，但同时会导致较高柱压降。
选择1.5-3μm的填料以解决一些复杂样品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒径的填料用作半制备或制备柱。
D含碳量含碳量指的是硅胶表面键合相的比例，与比表面积和键合覆盖度等有关。
高含碳量进步柱容量、分辨率及分析时间，用于要求高分离度的复杂样品;低含碳量分析时间短、展现不同的选择性，用于快速分析简单样品及需要高含水活动相条件的样品。
一般C18的含碳量在7-19%不等。
E孔径和比表面积HPLC吸附介质是多孔的颗粒，尽大多数的反应表面于孔内。
因此，分子必须进进孔内才能被吸附和分离。
孔径和比表面积是相辅相成的两个概念。
孔径小比表面积大，反之亦然。
比表面积大，增加样品与键合相之间的反应，增加保存,上样量和复杂成分的分离度;比表面积小，平衡时间快，适合梯度分析。
F孔容和机械强度孔容，又称“孔体积”。
指单位颗粒的空隙体积大小。
它能很好的反应填料的机械强度。
孔体积大的填料相对孔体积小的填料机械强度要略弱。
液相色谱柱选择方法及保存 液相色谱常见问题解决方法
液相色谱柱选择方法及保存液相色谱常见问题解决方法液相色谱柱选择方法及保存一、液相色谱柱选择方法液相色谱柱选择的简单思路1.确定分别目的确定你的应用是否要求高分别度、短分析时间、高灵敏度、长柱寿命，低的操纵本钱等等。
2.评估分析物的化学性质评估分析物的化学性质.诸如化学结构、溶解性、稳定性等等。
3.选择合适的色谱柱了解色谱填料的物理和化学性质。
液相色谱柱的保存1.反相色谱柱每天试验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应当在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
2.长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必需存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度*好是室温。
一）压力异常操作压力的变化往往是故障的征兆。
A、没有压力显示，没有流动相流动：原因解决方法1、电源问题接通电源，开机2、保险丝被烧坏更换保险丝3、掌控器设定不正确或设定失败实行恰当的设定、修理或更换掌控器4、柱塞杆折断更换柱塞杆5、泵头内有空气溶剂脱气、启动泵抽出空气6、流动相不足补充流动相、更换入口滤头7、单向阀损坏更换单向阀8、漏液拧紧或更换手紧接头B、流动相流动正常，但没有压力显示：原因解决方法1、仪表损坏更换仪表2、压力传感器损坏更换压力传感器C、压力持续偏高原因解决方法1、流速设定过高调整流速设定2、柱前筛板堵塞反冲色谱柱、更换筛板、更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀使用恰当的流动相、冲洗柱塞杆。
4、色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱5、进样阀损坏清洗或更换进样阀6、柱温过低提高温度7、掌控器失常修理或更换掌控器8、保护柱堵塞清洗或更换保护柱9、在线过滤器堵塞清洗或更换在线过滤器D、压力持续偏低：原因解决方法1、流速设定过低调整流速2、系统漏液确定漏液位置并维护和修理3、色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱4、柱温过高降低温度5、掌控器失常维护和修理或更换掌控器E、压力波动：原因解决方法1、泵中有气体溶剂脱气、从泵中除去气体2、单向阀损坏更换单向阀3、泵密封损坏更换泵密封4、脱气不充分重新过滤一遍、溶剂脱气5、系统漏液确定漏液位置并维护和修理6、使用梯度洗脱由于流动相粘度的变化引起的压力波动二）漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。
HPLC分离技术
液相色谱分离技术一、液相色谱分离条件选择HPLC可供选择的固定相及流动相选择都有自身的特点和应用范围。
选择分离类型应根据分离分析的目的、试样的性质和量的多少、现有设备条件等来确定最佳分离方法．1、依据相对分子质量选择一般的液相色谱(吸附、分配及离子交换)最适合的相对分子质量范围200—2000．对于相对分子质量大于2000的样品，则用空间排阻色谱较佳．2、根据溶解性能选择如果样品可溶于水并属于能离解的物质，以采用离子交换色谱为佳；如果样品溶于烃类(如苯或异辛烷)，则可采用液固吸附色谱；如果样品溶于四氯化碳，则大多数可采用常规的分配或吸附色谱分离；如果样品既溶于水，又溶于异丙醇，则可采用液—液分配色谱，以水和异丙醇的混合物为流动相，以憎水性化合物为固定相．3、根据分子结构选择判断样品存在什么官能团．然后确定合适的色谱分离类型．例如，样品为酸、碱化合物，则采用离子交换色谱；样品为脂肪族或芳香族，可采用液—液分配色谱或液—固吸附色谱；异构体采用液—固吸附色谱；同系物不同官能团及强氢键的样品可用液—液分配色谱．现在将其列入表18．10，作为选择分离类型的参考．4、流动相的选择a、液相色谱中流动相的一般要求①化学稳定性好．与样品不发生化学反应；与固定相不发生不可逆作用，应保持色谱柱效或柱的保留性能长期不变．②对样品组分具有合适的极性和良好的选择性．③必须与检测器相适应，例如，采用紫外检测器，所选用的检测波长(工作波长)应比溶剂的紫外截止波长更长．所谓溶剂的紫外截止波长是当小于外截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，它严重干扰组分的吸收测量．表18．11列出了部分常用溶剂的紫外截止波长。
④高纯度，不纯的试剂会引起基线不稳定，或产生“伪峰”．⑤低粘度，溶剂黏度过高，使压力增加，不利于分离；粘度过低，容易产生气泡；常用低粘度溶剂有丙酮、乙腈、甲醇等．B、液—固色谱的流动相在液—固吸附色谱中，流动相称为洗脱剂．对极性大的组分采用极性强的洗脱剂；反之，采用极性弱的洗脱剂．在实际工作中，溶剂的选择需通过实验来确定，合理配制二元溶剂，精细控制组分的K值，有可能使大多数样品组分实现良好分离．如果组分的K值范围很宽，则应采取梯度洗脱．C、液—液色谱的流动相在液—液分配色谱中，流动相与固定相的极性差异越大越好．正相分配色谱的流动相是以烃类(如己烷、庚烷等)为主，加入少量极性溶剂(如氯仿、甲醇等)改变流动相的极性和组成。
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AFC ：亲和色谱法
SEC
CS ：手性分离法
3
的 选
·适用于高分子化合物的分子量测定、分子量分布测定及低聚物的组成分析等
择
方
离子交换法 (IEC)
·根据离子交换体和离子溶质的静电相互作用（结合）进行分离 ·采用在分析试样电荷差最大的pH下具有充分缓冲能力的缓冲液作流动相 ·可通过流动相的pH、盐浓度或离子强度来调节样品的洗脱位置
法︵ 根 据
·根据疏水性相互作用进行分离
样
疏水性相互作用法 (HIC)
·固定相键合疏水性基团 ·通常情况下高盐浓度下吸附，盐浓度下降后洗脱
品 特
·主要适用于蛋白质的分析
点
·根据生物的分子识别能力来分离
和 分
亲和色谱法 (AFC)
·有很高的选择性 ·采用相互作用及配位体种类、pH、离子强度适合分析样品的缓冲液
离 模
·主要适用于生理活性物质的净化和浓缩
离子色谱法 (IC)
·采用低离子交换体积的固定相 ·因为使用低浓度的流动相，可以使用电导检测器 ·主要适用于无机离子的分析
色 谱
·利用高分子填料的网状结构或细孔的分子筛作用来分离
柱
尺寸排阻法 (SEC)
·基于尺寸排阻色谱法来分离，必须在填料与样品分子间无相互作用力的条件下测试 ·样品中的成分按照分子尺寸从大到小的顺序洗脱
基
样的分离模式。
质
分离模式
键
特征
合
·根据在固定相（填料）和流动相（溶剂）中分配系数不同分离
相
反相法 (RPC)
·固定相极性比流动相低 ·采用甲醇、乙腈、THF等有机溶剂和水或缓冲溶液的混合溶液作流动相
配 位
·流动相极性越低，洗脱力越强
体
·根据亲水性相互作用进行分离
·使用极性高的固定相
亲水性相互作用法（HILIC)
HIC HILIC ：亲水性相互作用法
溶于水
AFC
溶于有机溶剂
NPC ：正相法
RPC
LEX ：配位体交换法
HILIC LEX
RPC
IEX ：离子排阻法
IC ：离子色谱法 IEX
≤ 2,000
IC
≤ 2,000
NPC
SEC ：尺寸排阻法
SEC
IEC ：离子交换法
IEC
HIC ：疏水性相互作用法
AFC CS
··
·
HPLC
高效液相色谱HPLC的分离模式
色
谱
柱
液相色谱是以液体作为流动相、以填料为固定相，根据分离组分在流动相与固定相之间作用力之差来分离混合物，是物理化学分离分析
的 类
法中的一种。
型
利用高压输送流动相，快速、高效分离的方法称之为高效液相色谱（HPLC）。根据使用的固定相和流动相的组合不同，能够得到各种各
式
·根据手性分子识别能力的不同来分离
︶
手性分离法 (CS)
·有很高的选择性
复合模式
·支持复合分离模式分离
色谱柱的选择方法（根据样品特点和分离模式）
样品的溶解性 样品的分子量
分离模式
样品的溶解性 样品的分子量
ห้องสมุดไป่ตู้
分离模式
RPC
LEX
IEX
≥ 2,000
SEC
≥ 2,000
SEC
分离模式缩写
IEC
RPC ：反相法
·采用乙腈等有机溶剂和水或缓冲溶液的混合溶液作流动相
·流动相的极性越高，洗脱力越强
高
·适用于分析极性高的物质
效
液
·样品在固定相和流动相中分配系数不同进行分离
相
正相法 (NPC)
·固定相极性比流动相高 ·采用己烷、异丙醇等有极性差异的有机溶剂的混合溶液作流动相
色 谱
·流动相极性越高，洗脱力越强
·根据络合原理分离
配位体交换法 (LEX)
·采用与磺基配位金属离子的固定相 ·组合使用尺寸排阻法和亲水性相互作用法分离机制
的 分
·根据离子交换体和离子溶质的静电相互作用（排斥）进行分离
离
离子排阻法 (IEX)
·离子化较早洗脱，非离子化物质较晚洗脱
模
·主要适用于有机酸的分析
式
·根据离子交换体和离子溶质的静电相互作用（结合）分离