常用液相色谱柱选择
hplc色谱柱的选择
hplc色谱柱的选择
高效液相色谱（ HPLC）是一种广泛应用于分析化学领域的分离技术。
在（HPLC（分析中，色谱柱的选择是至关重要的，因为它直接影响分离效果和分析结果的准确性。
下面是一些选择（HPLC（色谱柱的要点：
1.（色谱柱类型：HPLC（色谱柱主要分为反相柱、正相柱和离子交换柱等类型。
根据待分析物的性质选择合适的色谱柱类型，例如，对于非极性化合物，通常选择反相柱；对于极性化合物，正相柱可能更合适。
2.（填料粒度：填料粒度越小，分离效率越高，但柱压也会相应增加。
一般来说，分析小分子化合物时选择细粒度填料，分析大分子化合物时选择粗粒度填料。
3.（柱子长度：柱子长度越长，分离效果越好，但分析时间也会延长。
根据分离要求和分析时间的限制选择合适的柱子长度。
4.（柱子内径：柱子内径越小，柱效越高，但柱压也会相应增加。
一般来说，分析小分子化合物时选择细内径柱子，分析大分子化合物时选择粗内径柱子。
5.（固定相：选择合适的固定相可以提高分离效果。
根据待分析物的性质选择合适的固定相，例如，对于非极性化合物，可以选择（C18（固
定相；对于极性化合物，可以选择硅胶固定相。
6.（品牌和价格：不同品牌的色谱柱质量和价格可能存在差异。
在选择色谱柱时，可以参考其他用户的评价和经验，选择性价比较高的产品。
在选择（HPLC（色谱柱时，需要综合考虑待分析物的性质、分离要求、分析时间和成本等因素。
如果对色谱柱的选择有疑问，可以咨询专业的色谱柱供应商或实验室技术人员。
液相色谱柱的选择与使用
液相色谱柱的选择与使用
目录 一、液相色谱柱的选择 1、 分离模式的选择 2、 C-18柱的性能影响因素 3、 保留值与pH的关系 二、液相色谱柱的安装 1 、液相色谱柱的结构 2、 色谱柱的安装 三、液相色谱柱的使用 1 、样品的前处理 2 、流动相的配制 3、 色谱柱的平衡 4、 流动相流速的选择 四、 分析条件调整的影响 五、液相色谱柱的维护
• 可电离的组份的分离可能会随pH变化发生显著变化 —甚至很小的 0.05–0.25 个pH变化单位.
保留值与pH的关系
pH变化： 0.2个pH(7.0~7.2) 保留时间改变： 1.2分钟 (13.6~14.8分钟)
保留时间随pH 改变不明显
保留时间随pH改变 不明显(酸性环境中)
保留时间
保留值与pH的关系
•碳覆盖率 •封端
•硅胶纯度 •色谱柱尺寸 •颗粒形状 •粒径 •表面积 •孔径
C-18柱的性能影响因素：色谱柱物理性质
硅胶纯度 • 填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度
色谱柱尺寸 • 填料床的长度和内径
颗粒形状 • 球型或不规则型
粒径 • 平均颗粒直径, 通常3-10µm
表面积 • 颗粒外表面和内部孔表面的总和, 以m2/gram表示
封端 • 键合步骤之后, 用短链将裸露的硅羟基键
合后封闭起来
C-18柱的性能影响因素：键合类型
CH3
键合类型对色谱分离的影响 ： O Si
单齿键合：
CH3
OSi
CH3
提高传质速率, 加快色谱柱平衡
O Si CH3
CH3
OSi
CH 3
双齿键合：
O Si
增加色谱柱稳定性, 增加色谱柱的载
液相色谱柱的选择和方法开发
液相色谱柱的选择和方法开发液相色谱（HPLC）是一种高效、准确和灵敏的分离和分析技术，在许多领域中具有广泛的应用。
液相色谱柱的选择和方法开发是HPLC分析中的关键步骤之一，它们直接影响到分离效果和分析结果的准确性和可靠性。
本文将详细介绍液相色谱柱的选择和方法开发的相关内容，并提供一些建议和注意事项。
一、液相色谱柱的选择1.分子排阻柱（SEC）：适用于分离和分析高分子物质，如蛋白质、多肽、聚合物等。
根据目标物分子量的大小选择不同的分子排阻柱。
2.反相柱（RP）：适用于分离和分析非极性、低极性化合物。
常用的反相柱有C18、C8、C4等，根据目标物的亲疏水性选择不同的柱材和碳链长度。
3.离子交换柱（IEC）：适用于分离和分析离子化合物，如酸、碱、金属离子等。
根据目标物的离子性质选择阴离子交换柱或阳离子交换柱。
4.亲合性柱：适用于分离和分析具有特定亲和性的目标物，如抗体、酶、细胞等。
常用的亲合性柱有亲和色谱柱、亲和半制备色谱柱等。
二、方法开发方法开发是指在具体的分析目标下，通过调整柱材、流动相、柱温、检测器等参数，寻找出最佳的分离条件和分析方法。
方法开发的过程中，需要进行实验设计、参数调整和结果评估等步骤。
1.实验设计：按照试验的目的和要求，设计合理的实验方案。
包括选择柱材、柱尺寸、流动相、梯度条件、柱温等参数，并确定荧光标准品的浓度和检测波长。
2.参数调整：根据实验设计，逐步调整各种参数，寻找出最佳的分离效果。
需要注意的是，在参数调整的过程中，要逐步变化，避免一次性调整多个参数。
3.结果评估：通过比较不同条件下的分离效果和结果，评估方法的可行性和可靠性。
主要评估指标包括分离度、保留时间、峰形等。
注意事项：1.根据样品的性质和分析目标选择合适的柱材和柱尺寸。
不同的柱材和柱尺寸对分离效果和分析结果有直接影响。
2.合理选择流动相和梯度条件。
流动相的选择应考虑样品的亲疏水性质，梯度条件应选择合理的温度和时间。
常用液相色谱柱使用与保养
常用液相色谱柱使用与保养液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种分离和分析物质的方法，广泛应用于化学、生物化学、环境科学、食品科学等各个领域。
在液相色谱系统中，色谱柱是其中最为重要的组成部分之一，对色谱分离的效果和分析结果有着重要影响。
因此，正确的使用和保养色谱柱是保证色谱实验质量和延长色谱柱寿命的关键。
一、色谱柱的选择1.根据分析需要选择合适的色谱柱类型，如反相、离子交换、凝胶、手性等。
选用的色谱柱应能实现样品分离的目标。
2.考虑色谱柱尺寸，如柱径和柱长。
柱径越小，理论板高度越高，分离效果越好，但同时也容易增大柱后压力。
柱长则决定了分离时间，通常根据样品的复杂程度和实验要求进行选择。
3.考虑色谱柱填充物，如C18、C8、C4等反相填料。
填充物的理化性质不同，会对分离效果产生影响。
根据样品性质和分离目标选择填料。
二、使用色谱柱的注意事项1.在使用前检查色谱柱外观，确保柱壁完好无损，无裂缝或损坏。
同时检查柱头端口是否干净，无污物残留。
2.进行柱前的处理，如样品预处理和溶剂预处理，保证样品的稳定性和纯度，避免对色谱柱产生不利影响。
3.操作时避免剧烈振荡、震动或摇晃色谱柱，以免对柱填料产生机械损伤。
4.在柱温控制装置的帮助下，保持色谱柱运行温度的稳定，以确保分离结果的重复性和再现性。
三、色谱柱的保养1.使用前、使用后和中间暂停使用时需正确保管色谱柱。
使用前，色谱柱应存放在干燥、阴凉的地方，避免阳光直射。
使用后，将色谱柱用保护帽覆盖，防止灰尘、气体和湿气进入柱内。
中间暂停使用时，用适当的主流溶液保养柱床，避免干燥。
保养柱床时需将色谱柱倒放，使柱床保持湿润状态。
2.避免在色谱柱上溢液，以免引起柱床断裂或填料活化。
使用前，尽量将样品溶液过滤或超声处理，避免样品中存在大颗粒杂质。
3.保证洗涤液和贮存液的纯度和质量，避免因杂质和离子引起色谱柱填料的损坏。
对于需要多次使用的色谱柱，洗涤液需要选择与柱填料相容的溶剂进行洗脱。
中药制剂高效液相常见的色谱柱类型及其检测器类型
中药制剂高效液相常见的色谱柱类型及其检测器类型中药制剂高效液相常见的色谱柱类型包括C18、C8、Phenyl、CN、NH2等。
其中C18属于常规的反相色谱柱，适用于大多数化合物的分离；C8柱的分离效果较C18柱略差，但可以用于分离易失活的化合物；Phenyl柱可以增加由于芳香环与反相胶体间的作用而引起的选择性；CN柱比C18柱对亲水性化合物更为灵敏，适合分离极性化合物；NH2柱与CN柱相似，适于极性化合物的分离。
常见的检测器类型包括UV检测器、荧光检测器、电化学检测器和质谱检测器。
UV检测器是常见的检测器类型，根据样品吸收UV光谱特征进行定量或者鉴定；荧光检测器则根据荧光光谱特征进行检测，其对于化合物的灵敏度一般高于UV 检测器；电化学检测器包括阳极和阴极两种类型，可用于检测电化学反应产生的电信号，最常用的电化学检测器是电化学荧光检测器；质谱检测器则可以对化合物的结构进行进一步的确认和鉴定，其灵敏度和选择性都比较高。
色谱柱选择表
Syncronis
2-8
16
100
超纯硅胶，金属杂质含量最低，柱效高，比表面积大，碳载量高，杂质检出灵敏度高，批次重现性高。
Acclaim Mixed-Mode WAX-1
2.5-7.5
120
同时具有疏水性和弱阴离子交换特性。
布他比妥，硝基酚类，防晒剂（水杨酸辛酯，甲氧基肉桂酸辛酯）
Acclaim Trinity P1
Acclaim Trinity P2
300
适合分析API和对离子，P1用于单电荷对离子和弱极性活性药物，P2用于多电荷对离子和强极性活性药物。
适合分离碳水化合物、糖类、有机酸和醇类分析，如2015药典中甘露醇(Ca2+)利巴韦林(H+)、葡甲胺(H+)，人血液制品中糖及糖醇(H+)。
甲酸，草酸，酒石酸，琥珀酸，乌头酸等。
Acclaim Explosives
120
用于醛酮类化合物基线分离，符合EPA 8330要求。
硝酸酯和硝胺中全部的14种爆炸物。
AcclaimCarbamate
120
基线分离EPA 531.2中的氨基甲酸酯类农药。
氨基甲酸酯类。
Acclaim Carbonyl
120
食品环境：有机酸（咖啡酸、阿魏酸），β受体阻滞剂（瘦肉精），饲料中β受体激动剂，水溶性维生素(B,C)（aQ），牛奶中四环素
HypersilClassical
2-8
10
120
如何选择色谱柱
如何选择色谱柱，比较一下C-18及C-8柱的硅烷基质C-18和C-8硅烷色谱柱是高效液相色谱（HPLC）中最常使用的色谱柱，而且，在美国市场上有多于100种C-18和C-8色谱柱出售。
面对这么多可供选择的色谱柱，分析工作者很难从中选出适当的色谱柱来具体使用，同时更难选择出一根合适的替换柱。
对于非极性样品（如小分子芳烃）或弱极性样品（如对羟基苯甲酸酯），C-18和C-8色谱柱是最容易选择的。
对于这类样品，色谱柱之间的主要差异在于保留因子（k）；而在选择性方面却只有微小的差异。
但对于极性和中等极性样品色谱柱的选择却相当困难。
例如含氨基或酸性基团的药物化合物。
分析工作者会发现极性样品在保留时间、选择性和峰形都有很大的差别。
色谱柱的选择性和峰形受到担体硅胶的影响远大于键合相的影响。
另外，有研究报道在反相色谱中表面硅烷醇、硅酸及金属杂质的影响。
在特殊情况下，选择性的差异可由填料制备时使用的键合过程决定的。
通常情况下，色谱工作者选择HPLC色谱柱是通过比较由色谱柱供应商所提供的填料介质的规格来决定的。
这些规格内容包括：表面积、末端封尾、含碳量、颗粒形状、颗粒尺寸、孔径、孔容积、装填密度和键合度。
含碳量和键合度仅由色谱制造商提供，没有这些规格使用者不可能计算出碳的克数，也不可能计算出一根色谱柱中键合相的微分子数。
分析工作者可使用这两个数据来估计一根色谱柱的疏水性质。
然而，即使制造商提供所有上述规格数据，使用者也不可能精确地预测出色谱柱对含有极性官能团的化合物的选择性。
由于色谱的保留时间是基于分析物和填充基质之间许多微妙的相互作用，我们建议使用混合物测试来比较填充基质的规格与性能。
Engelhardt 和他的同伴回顾了硅烷反相色谱的特性，并且提出用溶解物试验来描述固定相的疏水性和亲硅基醇特性。
另外有一些人也改进了测试条件和方法来解释那些色谱数据，但他们只测试了很少的商品色谱柱，并且在他们的测试混合物中没有羧酸。
怎样选择合适的液相色谱柱
HPLC色谱柱一、色谱分离模式——正相、反相、离子交换、离子抑制、亲水作用正相色谱是色谱的经典形式，使用极性固定相和非极性流动相。
洗脱物通过其极性基团和固定相上的极性基团作用被保留。
这种应用，经典的是使用未键合的硅胶和氧化铝，但现在使用的极性键合相有以下优点：键合相平衡快，对流动相中微量的水不敏感，和产生不同的选择性。
二醇基键合相比纯硅胶极性小，平衡速度快；氰基键合相是保留能力最小的正相吸附剂；氨基键合相适宜分离芳香族碳氢化合物反相色谱已成为最流行的色谱分离模式。
反相色谱中，固定相非极性，流动相极性。
典型的流动相一般是水或水系缓冲液与甲醇、乙腈或四氢呋喃的混合物。
典型的固定相是用脂肪烃硅完化的硅胶键合相，其它用于反相色谱的基质有石墨化碳和苯乙烯-二乙烯苯基质。
反相色谱的性能还受残留的硅醇基的活性的影响。
硅醇基与洗脱物的极性基团作用。
因此，根据硅醇基的活性不同，填料显示出不同的选择性。
而且，常能观察到碱性物质在硅醇基活性高的填料上产生拖尾峰。
修饰硅醇基活性的一个办法是封端，即用硅烷化试剂把硅醇基转变成三甲基甲硅烷基基团。
不过，即使是作了封端，基质表面的硅醇基密度还是比键合配基的密度大。
硅醇基的活性也和硅胶的预处理（基质灭活）、硅胶纯度有关。
碱性分析物的色谱分析推荐使用高纯度硅胶基质、充分封端的键合相。
未封端的填料在许多应用中有可以获得不同选择性的优点。
使用带有离子电荷的固定相，使根据洗脱物电荷进行分离成为可能。
对于硅胶基质的离子交换填料，离子基团通过标准的硅烷化技术键合到硅胶表面。
对于聚合物基质的离子交换填料，离子交换基团分布于交联聚合物的整体（through the matrix）。
有四种离子交换填料：强/弱阳离子交换填料和强/弱离子交换填料。
弱离子交换填料的特征是电量与pH值有函数关系。
以羧酸基为功能基的离子交换剂是弱阳离子交换剂的代表。
弱阴离子交换剂由一级、二级、三级铵为功能基。
大部分强离子交换剂的电荷与pH值无关。
液相色谱柱的选择
液相色谱柱的选择、使用、维护和常见故障及排除液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱;正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团ODS 称为C18柱,其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等;另外还有离子交换柱,GPC柱,聚合物填料柱等;本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用：一、反相色谱柱的选择1．柱子的PH值使用范围反相柱优点是固定相稳定,应用广泛,可使用多种溶剂;但硅胶为基质的填料,使用时一定要注意流动相的PH范围;一般的C18柱PH值范围都在2-8,流动相的PH值小于2时,会导致键合相的水解；当PH 值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解;一旦发生上述情况,色谱柱人口处会塌陷;同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同;如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时,建议选择PH范围大的柱子,例如戴安公司的Acclaim柱PH2-9或Zorbax的PH2-11.5的柱子;2．填料的端基封尾或称封口把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾,可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了,有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了,组分的保留时间重现性就好;如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物,最好选用填料经端基封尾的色谱柱;3．戴安公司Acclaim柱子介绍—极性封尾C16固定相柱戴安公司有28种类型的柱子,Acclaim反相柱填料高纯,金属含量极低,完全封尾;PH2-9范围内兼容,低流失,高柱效;尤其是2003年推出的Acclaim极性封尾C16柱,是最先商品化的磺酰氨-O链接键的色谱柱,具极低的硅羟基活性,能在极性溶剂甚至100%水的条件下长期使用;对酸性和碱性化合物有极为尖锐的好的色谱峰形,与现有的一流色谱柱相比有更好的立体选择性;下图是Acclaim极性封尾C16柱和市售极性封尾一流色谱柱分离酸性化合物谱图的比较二、液相色谱柱的使用色谱柱在使用前,最好进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考;在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行出厂测试所使用的条件是最佳条件,只有这样,测得的结果才有可比性;但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;1、样品的前处理a、最好使用流动相溶解样品;b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质;c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质;2、流动相的配制液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的,因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力,保证样品组分不会沉淀在柱中或长时间保留在柱中;b、流动相与样品不产生化学反应c、流动相的黏度要尽量小,以便得到好的分离效果；降低柱压降,延长泵的使用寿命可运用提高温度的方法降低流动相的黏度;d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应;如使用UV检测器,最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制;e、流动相沸点不要太低,否则容易产生气泡,导致实验无法进行;f、在流动相配制好后,一定要进行脱气;除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测,还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用;3、流动相流速的选择因柱效是柱中流动相线性流速的函数,使用不同的流速可得到不同的柱效;对于一根特定的色谱柱,要追求最佳柱效,最好使用最佳流速;对内径为4.6mm的色谱柱,流速一般选择1ml／min,对于内径为4.0mm柱,流速0.8ml／min为佳;当选用最佳流速时,分析时间可能延长;可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间如使用反相柱时,可适当增加甲醇或乙腈的含量;注意：a．含水流动相最好在实验前配制,尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜;最好加入叠氮化钠,防止细菌生长;b．流动相要求使用0.45μm滤膜过滤,除去微粒杂质;c．使用HPLC级溶剂配制流动相,使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命,提高柱性能;三．色谱柱的维护1.色谱柱的平衡反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的;新柱应先使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱;请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶;每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱,您就会在处理问题方面获得最大的"补偿",而且您的色谱柱的寿命也会变得更长操作步骤：a.平衡开始时将流速缓慢地提高,用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线缓冲盐或离子对试剂流速如果较低,则需要较长的时间来平衡b.如果使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用纯水"过渡"即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡；分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子;2．色谱柱的再生长期使用的色谱柱,往往柱效会下降柱子的理论塔板数减低;可以对色谱柱进行再生,在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生;建议用来冲洗柱子的溶剂体积色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积125-4mm1.6ml30ml250-4 mm3.2ml60ml250-10mm20ml400ml选择再生方法：极性固定相如Si,NH2,DIOL基色谱填料的再生：正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水非极性固定相如反相色谱填料RP－18,RP－8,CN等的再生：水→乙腈→氯仿或异丙醇→乙腈→水注意：a.在对NH2改性的色谱柱进行再生时,由于NH2可能以铵根离子的形式存在,因此应该在水洗后用0.1M 的氨水冲洗,然后再用水冲洗至碱溶液完全流出;b.0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱,如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质,在水洗后加用0.05M稀硫酸冲洗非常有效;3.色谱柱的维护a．使用预柱保护分析柱硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度b．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围c．避免流动相组成及极性的剧烈变化d．流动相使用前必须经脱气和过滤处理e．如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,并保存于甲醇或乙腈中f．氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀;怎样选择色谱柱现代高效液相色谱中,分离效果好坏的一个重要指标是色谱填的选择;但是色谱填料的选择范围很宽,因此,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解;一.硅胶基质填料1·正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶Silica以及其他具有极性官能团胺基团,如NH2,APS和氰基团CN,CPS的键合相填料;由于硅胶表面的硅轻基SiOH或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组份的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱;正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如:正己烷Hexane、氯仿Choroform、二氯甲烷MethyleneCloride等;2,反相色谱反相色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相;反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲掖与甲醇、乙情等的混合物;样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组份最先被冲洗出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留;常用的反相填料有:C18ODS、C8MOS、C4Butyl、C6H,Phenyl等;二·聚合物填料聚合物填料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸醋等,其主要优点是在pH值为1一14均可使用;相对于硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效;现有的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低;三、其它无机填料其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化由于其特殊的性质,一般仅限于特殊的用途;如,石墨化碳黑正逐渐成为反向色谱柱填料;这种填料的分离不同于硅胶基质烷基键合相,石墨化碳的表面即是保留的基础,不再需其它的表面改性;该柱填料一般比烷基键合相硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强;石墨化碳可用于分离某些几何异构体,由于在HPLC流动相中不会被溶解,这类柱可在任何PH与温度下使用;氧化铝也可以用于HPLC;氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的色谱柱柱床,其优点是可以在PH高达12的流动相中使用;但由于氧化铝与碱性化合物的作用也很强,应用范围受到一定限制,所以未能广泛应用;新型色谱氧化锆基质填料也可用于HPLC;商品化的只有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱,应用PH1-14,温度可达100℃;由于氧化锆填料是最近几年才开始研究,加之面临的实验难度,其重要用途与优势尚在进行之中;怎样选择填料粒度目前,商品化的色谱填料粒度从1um到超过30um均有销售,而目前分析分离主要用3和5um填料进行;填料的粒度主要影响填充柱的两个参数,即柱效和背压;粒度越小,柱压越大,柱压的增加限制了粒度小于3um的填料应用;在相同选择性条件下,提高柱效可提高分离度,但不是唯一的因素;如果固定相选择是正确,但是分离度不够,那么选用更小的粒度的填料是很有用的;3um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%；然而,3um的色谱柱的背压却是5um的2倍;与此同时,柱效提高意味着在相同条件下可以选用更短的色谱柱,即相同的塔板数或分离能力,但是柱长更短,以缩短分析时间;另外,可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度,比如用乙腈代替甲醇,以降低色谱柱的压力;。
液相工作中的色谱柱选择
mAU
20
As 1.15
与其它C18s色谱柱保留相近
2 .0 2.5 M in u t e s 3 .0 3.5 4 .0 4.5 5 .0
10
0 0 .0 0.5 1 .0 1.5
40
Gemini C18
更好的对称性
所有色谱柱 150 x 4.6mm, 5µm 流动相: H2O/MeCN, 60/40 流速: 1.0mL/min 柱温: 25°C 检测器: UV@ 254nm 进样量: 5L 目标物: 1. 吡啶 2. 苯酚
• 工作类型
• 常规检测 • 新方法开发
• 仪器类型
• 色谱 • 色谱质谱 谱 谱
5
常规检测的色谱柱选择
——与柱效、分离度有关的关键色谱柱参数
常见问题
7
原因分析
• 表面含有大量硅醇基 • 金属离子含量高 • 通常没有封端
Si-OH -- X
•碱性化合物 Si-OH -- NH2-R（氢键） Si-O---+NH3-R （离子交换 离子交换 ） •酸性化合物 Si-OH Si OH -- O O=RCOH RCOH
5.0
ZORBAX Eclipse Plus C18
30 mAU 20
As 1.21
ห้องสมุดไป่ตู้10
0 0.0 0.5 1 .0 1 .5 2.0 2.5 M in u t e s 3 .0 3 .5 4.0 4.5 5 .0
11
常见问题
12
原因分析
柱 柱效
去甲替林 普萘洛尔 萘磺酸
质量过载(0.1~5μg)
液相工作中的色谱柱选择
2014 年 4 月
Thermo Scientific 色谱柱系列概览
常见液相色谱柱性能比较
常见液相色谱柱性能比较一、高性能色谱柱特点：柱效高，价格高，通用性好，使用寿命长，pH范围宽1、Waters公司Xbridge2005年waters公司推出，杂化颗粒柱。
优点：pH 1-12,在高pH状态下，没有能与此色谱柱匹敌的，目前市场的宽pH色谱柱在高pH的状态下（9-12）普遍寿命很短，如Gemini，资生堂公司Capcell，YMCPro-C18，包括waters的第一代杂化柱Xterra都是寿命不长，Zorbax Extend更是不堪。
柱效与一流的硅胶柱相当，甚至有过之无不及，杂化颗粒柱和聚合物色谱柱的问题在于柱效，Xterra和常见的PSDVB的色谱柱都有不错的pH范围，但是柱效低的问题无法解决，这是聚合物填料一般比较软且不耐压的原因造成。
在如此宽的pH范围，最大的好处是可以在化合物的保留平台区去开发方法（pH1-3,pH9-12），这样能得到更稳定更容易重现的方法，对酸性，中性，尤其是碱性化合物都能得到理想的峰形。
注：Waters UPLC色谱柱与Xbridge采用同类型填料，只是颗粒度是1.7um，所以不再重复。
缺点：价格高，平均每支￥7000多的，不是大多数中国客户可以接受的。
2、MerckChromolith整体化色谱柱Merck公司2001年推出。
优点：高流速、低压力，可以快速分析样品，因为压力低，所以可以串联色谱柱以获得更高的柱效而不用担心色谱柱耐压问题，低压力是因为硅胶棒的大量中孔的存在，中孔的存在也让这支色谱柱不怕堵，在处理比较脏的样品的时候会优势很大（如中药），实际的寿命也因此延长。
这个色谱柱最大的特点是柱效高出峰时间快，特别适合之前分析时间超长的实验条件，目前很好的例子就是人参的指纹图谱，因为成分复杂，之前出峰要2个小时，现在用整体化色谱柱30min就可以分析完了（已有报导），且不影响柱效，类似于UPLC，但不像UPLC那么容易堵。
缺点：规格单一，单价比较高，单价￥7000左右，所以通过串联获得更高柱效的方式显得比较奢侈。
液相不同粒径色谱柱最佳流速选择
液相不同粒径色谱柱最佳流速选择
液相色谱柱是液相色谱法中的重要组成部分，其中不同粒径的色谱柱对于流速的选择有着不同的最佳值。
本文将介绍液相色谱柱最佳流速的选择方法，以便更好地发挥色谱柱的性能，提高分离效果。
一、液相色谱柱粒径对流速的影响
液相色谱柱的粒径是影响流速的重要因素之一。
一般来说，粒径越小，色谱柱的塔板高度越低，传质效率越高，但是柱压降也会增加。
因此，选择合适的粒径对于液相色谱柱的流速选择至关重要。
二、最佳流速选择方法
1. 实验测定法
实验测定法是一种常用的确定液相色谱柱最佳流速的方法。
通过实验测定不同流速下的分离效果，可以找到最佳流速。
具体步骤如下：
（1）选择合适的色谱柱，确定色谱条件；
（2）改变流速，分别进行实验；
（3）记录每个流速下的分离效果，如峰形、分离度等；
（4）分析实验结果，找到最佳流速。
2. 经验公式法
经验公式法是根据液相色谱柱的粒径和其他因素，通过经验公式估算最佳流速的方法。
常用的经验公式如下：
V=d^2*1.5*10^4/t
其中，V为最佳流速（mL/min），d为粒径（cm），t为塔板高度（cm）。
可以根据色谱柱的粒径和塔板高度计算出最佳流速。
三、最佳流速选择注意事项
1. 考虑到实验条件和分离效果，选择合适的流速范围；
2. 对于不同粒径的色谱柱，最佳流速可能不同；
3. 在选择最佳流速时，需要考虑色谱柱的使用寿命和维护成本；
4. 在实际应用中，可以根据具体分离物质的特点和分离度要求，适当调整流速。
安捷伦的色谱柱的介绍及选择
8
Agilent LC colmns
4
Zorbax主要的键合相
Zorbax硅胶颗粒
StableBond
二异丙基 二异丁基键合
Rx-C18/Sil
二甲基十八烷基硅烷
EclipsePlus/XDB
二甲基键合 双封端
Bonus-RP
酰胺嵌入 三封端
Extend-C18
双齿键合 双封端
SB-C18 二异丁基-C18
行业领先的峰形 更好的专利技术处理硅 胶基质 改进的双封端技术：改 进的键合试剂及键合过程
更加严格的质控标准，批与批 之间更加好的重现性
不同粒径 – 1.8, 3.5, 5um
最高的分离效率 C18，C8，PAH, 苯基-己基
•致密键合 •双封端 •超纯坚固的ZORBAX硅胶 •宽的 pH使用范围2-9
ZORBAX Rx-Sil (1987) 由于金属含量低, 硅羟基pKa高, 碱性化合物不发生拖尾
二氧化硅 Zorbax Rx-SIL Zorbax SIL Nucleosil Hypersil nd = 未检出
金属浓度（ppm) Na K Mg Al Ca Ti Fe Zr Cu Cr Zn 10 < 3 4 1.5 2 nd 3 nd nd nd 1 17 nd nd 57 9 32 21 88 < 1 nd 88 56 N/A N/A nd 130 57 76 nd N/A N/A nd 2900 N/A 40 300 38 65 230 N/A N/A N/A N/A
Agilent 液相色谱柱
高通量和LC/MS柱
Zorbax 高通量柱，LC/MS 色谱柱 Zorbax 快速分离柱 Zorbax 快速分离高通量柱 Zorbax 溶剂节省色谱柱 Zorbax 微径色谱柱 Zorbax 毛细管柱和纳流柱
液相色谱柱选择
探讨液相分析色谱柱的选择很多人对色谱柱选择无从下手，本人根据多年经验写了个小结，可能不太全面或者某些有争议，在此申明仅供参考。
液相色谱柱是色谱心脏，决定最终的分离效果，所以在选择色谱柱时候有必要考虑清楚自己的需求。
首先液相色谱柱目前来说分为正反相色谱柱，正相有SI、CN、二醇基等；反相有C18、C8等；氨基可以用于正反相；目前还流行HILIC属于正相反用色谱柱。
正相主要分离极性物质，反相主要分离非极性、弱极性物质，氨基柱等主要分离二者之间的，hilic属于反相体系分离极性物质，解决样品溶解等问题。
明确了色谱柱大概功能之后，确认下自己样品信息，基本就有点眉目了。
大方向对了，剩下的事情就是细节确认了，如：键合相、粒径、孔径、碳载量等1、键合相：确定了正反相后基本就简单了，正相很简单，我们重点讨论下反相，C18主要分离非极性和弱极性物质，因为是键合硅胶，所以C18也分好几种有常规的如C18-A，耐纯水的OL Apple C18-AQ、耐酸碱的OL Apple C18-EX等，如果发现C18保留很弱，调整流动相也不行，这个时候可以考虑C8甚至C4等。
2、粒径：色谱法追求的是高效、高分辨、高速等。
目前来说亚2um 填料或者2UM核壳填料是很理想的模型，基本具备“三高”特征尤其是高速，线速度不在影响分离度，不过附带的缺点就是高压，要升级相应的硬件，成本高昂，需要谨慎考虑。
5um填料最普遍，目前来说完全可以胜任各种日常检测，即使有特殊要求，3um色谱填料基本上也能全覆盖，不过该模型下线速度和分离度是成反比的。
3、孔径：目前很多60~300A都有，甚至更高或者更低的。
开孔的填料多了个类似分子筛功能，所以选择孔径一定要关注分子量，蛋白（分子量5000以上）一般都需要在160A以上，多肽（分子量上限在3000左右）在120A左右，一般快速柱孔径都很小，可以缩短样品路径。
所以国际上还有无孔硅胶柱子，也很适合蛋白分离，彻底解决蛋白分子量大和太粘稠堵住孔径问题。
液相色谱柱选择方法
液相色谱柱选择方法一、液相色谱柱选择方法|液相色谱柱选择的简单思路1.确定分离目的确定你的应用是否要求高分离度、短分析时间、高灵敏度、长柱寿命，低的操纵本钱等等。
2.评估分析物的化学性质评估分析物的化学性质..诸如化学结构、溶解性、稳定性等等。
3.选择合适的色谱柱了解色谱填料的物理和化学性质。
二、液相色谱柱选择方法|液相色谱柱选择的条件A填料基质1.硅胶基质：纯度高本钱低，强度大，化学修饰轻易，但pH值范围有限。
大多硅胶基质填料在pH2-8之间稳定，但经过特殊修饰的硅胶键合相可以稳定在pH1.5-10。
2.聚合物基质：应用pH值范围宽，温度稳定(高温可以达到80度以上)，机械强度小。
B颗粒外形大多现代HPLC填料都是球形颗粒，但有时是不规则的颗粒。
球形颗粒提供较低的柱压、较高的柱效和稳定性以及较长的柱寿命在使用高粘度的活动相时;不规则颗粒有较大比表面积和相对低廉的价格。
C颗粒粒径粒径越小柱效越高、分离度越高，但同时会导致较高柱压降。
选择1.5-3μm的填料以解决一些复杂样品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒径的填料用作半制备或制备柱。
D含碳量含碳量指的是硅胶表面键合相的比例，与比表面积和键合覆盖度等有关。
高含碳量进步柱容量、分辨率及分析时间，用于要求高分离度的复杂样品;低含碳量分析时间短、展现不同的选择性，用于快速分析简单样品及需要高含水活动相条件的样品。
一般C18的含碳量在7-19%不等。
E孔径和比表面积HPLC吸附介质是多孔的颗粒，尽大多数的反应表面于孔内。
因此，分子必须进进孔内才能被吸附和分离。
孔径和比表面积是相辅相成的两个概念。
孔径小比表面积大，反之亦然。
比表面积大，增加样品与键合相之间的反应，增加保存,上样量和复杂成分的分离度;比表面积小，平衡时间快，适合梯度分析。
F孔容和机械强度孔容，又称“孔体积”。
指单位颗粒的空隙体积大小。
它能很好的反应填料的机械强度。
孔体积大的填料相对孔体积小的填料机械强度要略弱。
各种型号Waters色谱柱使用指南
各种型号Waters色谱柱使用指南Waters是一家知名的科学仪器制造公司，其色谱柱广泛应用于化学、生物、环境等领域的分析研究。
Waters色谱柱根据不同的分析需求，有多种型号和规格可供选择。
本文将对各种型号Waters色谱柱的使用进行指南，以帮助用户更好地理解和应用这些色谱柱。
1. XBridge 色谱柱系列XBridge色谱柱系列是Waters公司最受欢迎和广泛使用的色谱柱系列之一、它具有优异的耐久性和高效分离能力，适用于各种样品类型的分离和分析。
根据不同的分离模式和分析目标，可以选择不同孔径（1.7、3.5、5、7、10 um）和不同化学改性（C18、C8、Phenyl）的XBridge色谱柱。
使用XBridge色谱柱时，应注意以下几点：-尽量避免使用过高的流速和压力，以免损坏色谱柱。
-在使用之前，应根据样品类型和分析目标选择最适合的色谱柱类型和规格。
-在样品进样之前，应先进行柱平衡，以确保色谱柱的稳定性和重复性。
-根据需要，可以选择柱温控制器进行加热或冷却，以提高分离效果。
2. Acquity UPLC 色谱柱系列Acquity UPLC（超高效液相色谱）色谱柱系列是一种应用于更高效液相色谱系统的色谱柱。
它具有更小的粒径（1.7、2.5 um）和更大的表面积，可以提供更高的分析速度和分离效果。
Acquity UPLC色谱柱适用于对分离效果要求较高、分析时间较短的应用。
在使用Acquity UPLC色谱柱时，应注意以下几点：-使用之前，应确保所使用的色谱柱与液相色谱系统兼容，并进行适当的柱平衡。
-尽量避免在超高压下使用过高的流速，以免损坏色谱柱。
-在样品进样之前，应先进行柱平衡和条件优化，以提高色谱分离效果。
3. SunFire 色谱柱系列SunFire色谱柱系列是一种高性能液相色谱柱，适用于多种样品类型的分离和分析。
它具有优异的化学稳定性和机械强度，适用于各种环境和温度条件下的分析。
在使用SunFire色谱柱时，应注意以下几点：-使用之前，应根据样品类型和分析目标选择适当的色谱柱类型和规格。
液相色谱柱的选择原则
液相色谱柱的选择原则
1. 目标分析物性质：液相色谱柱的选择应考虑目标分析物的性质，比如分子大小、极性、酸碱性等。
一般来说，较小的分子更适合使用短柱，而较大的分子则需要使用较长的柱子。
同时，柱子的化学性质也应与目标分析物的性质相匹配。
2. 样品基质特性：柱子的选择还要考虑样品基质的性质，比如是否含有杂质、是否具有极性等。
柱子的选择应能够有效分离目标分析物和基质之间的干扰物。
3. 分析目标：液相色谱柱的选择还应考虑分析目标，如分析目的、检测灵敏度要求等。
不同的柱子可能对于不同的目标分析物具有不同的分离效果和灵敏度。
4. 柱子的使用寿命和稳定性：选择具有较长使用寿命和良好稳定性的色谱柱，可以提高分析结果的稳定性和可靠性。
5. 厂家供应和技术支持：选择有可靠供应和良好技术支持的厂家的色谱柱，能够确保柱子的质量和性能，并且在实验中出现问题时能够及时得到技术支持。
需要根据具体分析要求和条件综合考虑上述因素，选择最适合的液相色谱柱。
液相色谱柱选择方法及保存 液相色谱常见问题解决方法
液相色谱柱选择方法及保存液相色谱常见问题解决方法液相色谱柱选择方法及保存一、液相色谱柱选择方法液相色谱柱选择的简单思路1.确定分别目的确定你的应用是否要求高分别度、短分析时间、高灵敏度、长柱寿命，低的操纵本钱等等。
2.评估分析物的化学性质评估分析物的化学性质.诸如化学结构、溶解性、稳定性等等。
3.选择合适的色谱柱了解色谱填料的物理和化学性质。
液相色谱柱的保存1.反相色谱柱每天试验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应当在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
2.长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必需存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度*好是室温。
一）压力异常操作压力的变化往往是故障的征兆。
A、没有压力显示，没有流动相流动：原因解决方法1、电源问题接通电源，开机2、保险丝被烧坏更换保险丝3、掌控器设定不正确或设定失败实行恰当的设定、修理或更换掌控器4、柱塞杆折断更换柱塞杆5、泵头内有空气溶剂脱气、启动泵抽出空气6、流动相不足补充流动相、更换入口滤头7、单向阀损坏更换单向阀8、漏液拧紧或更换手紧接头B、流动相流动正常，但没有压力显示：原因解决方法1、仪表损坏更换仪表2、压力传感器损坏更换压力传感器C、压力持续偏高原因解决方法1、流速设定过高调整流速设定2、柱前筛板堵塞反冲色谱柱、更换筛板、更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀使用恰当的流动相、冲洗柱塞杆。
4、色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱5、进样阀损坏清洗或更换进样阀6、柱温过低提高温度7、掌控器失常修理或更换掌控器8、保护柱堵塞清洗或更换保护柱9、在线过滤器堵塞清洗或更换在线过滤器D、压力持续偏低：原因解决方法1、流速设定过低调整流速2、系统漏液确定漏液位置并维护和修理3、色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱4、柱温过高降低温度5、掌控器失常维护和修理或更换掌控器E、压力波动：原因解决方法1、泵中有气体溶剂脱气、从泵中除去气体2、单向阀损坏更换单向阀3、泵密封损坏更换泵密封4、脱气不充分重新过滤一遍、溶剂脱气5、系统漏液确定漏液位置并维护和修理6、使用梯度洗脱由于流动相粘度的变化引起的压力波动二）漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。
安捷伦的色谱柱的介绍及选择
Agilent LC colmns 1提高分离速度，节约分析成本安捷伦液相色谱柱介绍与选择OUTLINE安捷伦液相色谱柱介绍及选择建议如何提高液相色谱分离效率安捷伦新一代常规分析柱Agilent LC colmns2Agilent LC colmns 3常规分析柱Zorbax Eclipse Plus 柱Zorbax Eclipse XDB Zorbax Stable Bond 柱Zorbax Extend C18柱Zorbax Bonus-RP 柱Zorbax SB-Aq 柱Zorbax RX HPLC 柱原先的Zorbax ODS 柱Zorbax 正相柱其他Zorbax 柱生化分析柱Zorbax 300 SB 柱Zorbax 300Extend 柱Zorbax Poroshell 柱Zorbax Eclipse AAA 柱Zorbax GF-250/450 凝胶柱Zorbax Oligo HPLC 柱Zorbax SAX 和SCX 柱MARSmRP column高通量和LC/MS 柱Zorbax 高通量柱，LC/MS 色谱柱Zorbax 快速分离柱Zorbax 快速分离高通量柱Zorbax 溶剂节省色谱柱Zorbax 微径色谱柱Zorbax 毛细管柱和纳流柱制备柱Zorbax PrepHT 制备柱Zorbax ®液相色谱柱常规分析柱Agilent TC /HCAgilent TC/HC (2)Agilent ®液相色谱柱制备柱Agilent prep 制备柱Agilent LC colmns4安捷伦Zorbax ®HPLC 色谱柱严格的质量控制产品研究与开发硅胶生产键合柱装填•具可追溯性•可定购生产批号不同的色谱柱•特殊规格定制StableBondEclipseBonus RP ExtendAgilent LC colmns 5二氧化硅Na K Mg Al Ca Ti Fe Zr Cu Cr ZnZorbax Rx-SIL 10< 34 1.52nd 3nd nd nd 1Zorbax SIL 17nd nd 579322188< 1nd 88Nucleosil 56N/A N/A nd 1305776nd N/A N/A ndHypersil 2900N/A 403003865230N/A N/A N/A N/And = 未检出金属浓度（ppm)A 类硅胶Original ZORBAX SIL (1970s)由于带负电荷的残留硅羟基和酸性表面上金属含量高(硅羟基的pKa 低), 导致碱性化合物发生拖尾B 类硅胶(高纯)ZORBAX Rx-Sil (1987)由于金属含量低, 硅羟基pKa 高,碱性化合物不发生拖尾Zorbax Rx-SIL: 11种金属< 35 ppm (未检出其他杂质, <1ppm); 99.995% 纯度的二氧化硅ZORBAX ®硅胶类型Agilent LC colmns6选择适用于pH7.5流动相的色谱柱流动相:乙腈: 50 mMK 2HPO 4: 55: 45, pH 7.5UV: 224 nm 23°C进样量: 20 µL (0.5 µg / µL)Zorbax Eclipse XDB-C18 (B 类硅胶)ZORBAX SB-C18(B 类硅胶)ODS (A 类硅胶)封端ODS (A 类硅胶)不封端普通硅胶（A 类）由于带负电荷的残留硅羟基和酸性表面上金属含量高(硅羟基的pKa 低), 导致碱性化合物发生拖尾高纯硅胶(B 类)由于金属含量低, 硅羟基pKa 高,碱性化合物不发生拖尾Agilent LC colmns7硅胶填料－液相色谱柱的基础……Zorbax 液相色谱柱硅胶特点Zorbax 硅胶的制备方法由液相色谱柱著名创始人J.J. Kirkland 发明，属于安捷伦公司的专利技术。
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常用色谱柱简介气相色谱毛细柱（键合，聚二甲基硅氧烷）HP-1，DB-1，P-1，CP-SIL5CB，Ultra-1,007-1,RTx-1,AT-1类似固定相：SE-30，SP-2100，OV-1，OV-101,使用温度：-60℃-320℃应用范围：烷烃，芳烃，多环芳烃，醇，酚，酮，酯，醛，胺，卤代烃，吡啶，糖衍生物，氨基酸衍生物，维生素衍生物，镇痛药，农药，溶剂，胆固SPB-50型中等极性柱醇，香料，咖啡，食品添加剂等。
(键合, 50%二苯基,50%二甲基聚硅氧烷)对照品牌：HP-50，HP-17，DB-17，RTx-50，AT-50 SPB-5型弱极性柱类似固定相：OV-17, SP-2250,使用温度：30℃-310℃（键合，5%苯基，95%甲基聚硅氧烷）应用范围：烷烃，低沸点芳烃，多环芳烃，醇，甘对照品牌：HP-5，DB-5，BP-5，CP-SIL 8CB，油三酸酯，喹啉，卤素化合物，香料，农药，酯，Ultra-2, ,RTx-5,AT-5镇痛药，除草剂等。
类似固定相：SE-54，SE-52，OV-73 使用温度：-60℃-320℃PTE-5，PTE-5QTM型弱极性柱应用范围：烷基苯，多环芳烃，醇，酚，酮，脂肪(MS专用柱,键合,5%苯基,95%甲基聚硅氧烷)酸酯，苯二甲酸酯，硝基芳烃，芳胺，烷基胺，联对照品牌：HP-5 MS，DB-5 MS, DB-5.625，XTI-5，苯胺，卤代烃，多氯联苯，，糖类衍生物，维生素衍BPX625，半挥发污染物分析柱（US EPA方法525，生物，有机酸，镇痛药，农药，抗组胺药，溶剂，625.5，625）生物碱，防腐剂，香料等。
类似固定相：SE-54,SE-52 使用温度：-60℃-320℃应用范围：多氯联苯，胺，有机磷，有机氯农药，SUPELCOWAX 10型极性柱含氯除草剂，酚，苯胺，香料等。
(键合,聚乙二醇二万)对照品牌：HP-Wax，DB-Wax，BP-20，CP-Wax 52CB，SPB-1701型中等极性柱HP-INNO Wax,AT-Wax(键合, 14%氰丙基,86%二甲基聚硅氧烷)类似固定相：PEG-20M, CARBOWAX-20M,使用温对照品牌：HP-1701，DB-1701，RTx-1701，AT-1701，度：35℃-280℃BP-10，CPSil19CB应用范围：低沸点芳烃，醇，酮，酸，酯，醛，醚，类似固定相：OV-1701,SP-2250 使用温度：室温-280乙二醇，丙二醇，甘油，吡啶，胺，亚硝胺，卤代℃烃，胆汁酸衍生物，冰片，薄荷，精油，香料，酒，应用范围：醇，卤素化合物，有机氯农药，酸性药苯乙烯，茶，溶剂等。
物，有机磷，除草剂等。
Nukol型极性柱SPB-608型柱(键合, 改性聚乙二醇)(农残/除草剂分析专用柱)对照品牌：HP-FFAP，DB-FFAP，AT-1000，BP-21对照品牌：HP-608，DB608，BP608类似固定相：FFAP，SP-1000，OV-351使用温度：使用温度：室温-300℃60℃-200℃应用范围：多氯联苯，有机磷农药，有机氯农药，应用范围：脂肪酸，低沸点芳烃，醇，酯，酚，腈，除草剂，拟除虫菊酯等。
固体固定相及分类，什么是固定液，对固定液有哪些要求指直接装填到色谱柱中作为固定相的具有活性的多孔性固体物质。
固体固定相大体可分为三类：第一类是吸附剂。
如：分子筛、硅胶、活性炭、氧化铝等；第二类是高分子聚合物。
如国内的ＧＤＸ型高分子多孔微球，国外Ｐorapak系列等；第三类是化学键合固定相。
在气相色谱中，通常是将固定液涂敷在载体表面上。
采用化学键合固定相分析极性或非极性物质通常都能够得到对称峰，柱效很高，固定相的热稳定性也有所改善。
一般是一种高沸点的有机物的液膜，通过对不同组份的不同分子间的作用，使组份在色谱柱中得到分离。
对气相色谱用的固定液，一般有如下几点要求：１、在操作温度下蒸气压低，热稳定性好，与被分析物理或载气不产生不可逆反应；２、在操作温度下呈液态，而且粘度愈低愈好。
物质在高粘度的固定液中传质速度慢，柱效率因而降低。
这决定固定液的最低使用温度；３、能牢固地附着在载体上，并形成均匀和结构稳定的薄层；４、被分离的物质必须在其中有一定的溶解度，不然就会很快地被载气带走而不能在两相之间进行分配；５、对沸点相近而类型不同的物质有分离能力，即保留一种类型化合物的能力大于另一种类型。
这种分离能力即是固定液的选择性。
使用担体为何要进行处理？一般处理的方法有哪些以及担体的选择常用的担体表面并非惰性，它具有不同程度的催化作用和吸附性（特别是固定液含量低时和分离极性物质时）造成峰拖尾和柱效下降，保留值改变等影响，因而需要预处理。
现将一般处理方法简述如下：１、酸洗法：用浓盐酸加热处理担体２０－３０分钟，然后用自来水冲洗至中性，再用甲醇漂洗，烘干备用。
此法主要除去担体表面的铁等无机物杂质。
２、碱洗法：用１０％的氢氧化钠或５％的氢氧化钾－甲醇溶液浸泡或回流担体，然后用水冲洗至中性，再用甲醇漂洗，烘干备用。
碱洗的目的是除去表面的三氧化二铝等酸性作用点，但往往在表面上残留微量的游离碱，它能分解或吸附一些非碱性物质，使用时要注意。
３、硅烷化：用硅烷化试剂和担体表面的硅醇、硅醚基团起反应，除去表面的氢键结合能力，可以改进担体的性能。
常用的硅烷化试剂有二甲基二氯硅烷和六甲基二硅胺。
４、釉化：把欲处理的担体在２、３％的碳酸钠－碳酸钾（１：１）水溶液中浸泡一天，烘干后先在８７０度下煅烧３、５小时，然后升温到９８０度煅烧约４０分钟。
经过这样处理，担体表面形成一层玻璃化的釉质，故称“釉化担体”。
这种担体的吸附性能小，强度大，当固定液中加入少量的去尾剂后，能分析如醇、酸等极性较强的物质。
但对非极性物质柱效能则稍有下降。
此外甲醇和甲酸等物质在釉化担体上有一定的不可逆化学吸附，在定量分析时应予以注意。
其他纯化方法：凡是用化学反应来除去活性作用点或用物理复盖以达到纯化担体表面性质的方法都可以使用。
十六、常用的担体目数为多少？答：常用的４－６毫米内径的色谱柱：对于较长色谱柱，选用担体目数一般为４０－８０目；对于较短色谱柱选用担体目数一般为８０－１００目(每英寸内的筛孔数目为目）各种担体，名目繁多。
在常用硅藻土担体中: 红色担体（如６２０１、２０１），可用于非极性或弱极性物质的分离。
白色担体（如１０１）可用于极性物质或碱性物质。
釉化红色担体（如３０１）可用于中等极性物质。
硅烷化白色担体可用于强极性氢键型物质如废水测定。
分离酸性物质，如酚类，要用酸洗处理的担体。
分离碱性物质，如乙醇胺，要用碱洗处理的担体。
微量分析要用硅烷化的担体。
有些特殊的情况下要用特殊的担体，如氟担体分离异氰酸酯类。
但是在普通的常量分析中，对担体可以不必过份讲究，甚至如耐火砖粉粒，玻璃珠砂和海沙也可以使用气相色谱中什么叫担体？对担体有哪些要求以及分类担体是一种多孔性化学惰性固体，在气相色谱中用来支撑固定液。
对担体有如下几点要求：１、表面积较大，一般应在０、５－２米／克之间；２、具有化学惰性和热稳定性；３、有一定的机械强度，使涂渍和填充过程不引起粉碎；４、有适当的孔隙结构，利于两相间快速传质；５、能制成均匀的球状颗粒，利于气相渗透和填充均匀性好；６、有很好的浸润性，便于固定液的均匀分布。
完全满足上述要求的担体是困难的，人们在实践中只能找出性能比较优良的担体。
担体通常分为硅藻土和非硅藻土两大类，每一类又有种种小类。
１、硅藻土类型：（１）白色的：表面积小，疏松，质脆，吸附性能小，经适当处理，可分析强极性组分；（２）红色的：有较大的表面积和较好的机械强度，但吸附性较大。
２、非硅藻土类型：（１）氟担体：表面惰性好，可用来分析高极性和腐蚀性物质，但装柱不易，柱效率低些。
（２）玻璃微球：表面积小，用它做担体柱温可以大大降低，而分离完全且快速。
但涂渍困难，柱效低。
（３）多孔性高聚物小球：机械强度高，热稳定性好，吸附性低，耐腐蚀，分离效率高，是一种性能优良的新型色谱固定相。
（４）炭分子筛：中性，表面积大，强度高，祛寿命长，在微量分析上有无比的优越性。
（５）活性炭：可以单独做为固定相。
（６）沙：主要用于分离金属。
常用担体有：１０１担体：为白色硅藻土担体；１０２担体：为白色硅藻土担体；celite545：为白色硅藻土担体；２０１担体：为红色硅藻土担体；６２０１担体：为红色硅藻土担体；Ｃ－２２保温砖：为红色硅藻土担体；chromosorb：为红色硅藻土担体。
色谱柱管材料应根据什么原则选择？常用的柱管是由什么材质制成的对色谱柱管材质，应按如下要求选择：１、应与固定相、试样、载气不起化学反应。
２、要易于加工成型。
管内壁应光滑，横截面应均匀呈圆形。
一般色谱柱管形状呈Ｕ型或螺旋形，大多由铜、不锈钢，玻璃等材质制成新柱管应先用稀酸或稀碱（１：１盐酸或氢氧化钠）洗涤，以除去油污等脏垢，而后用自来水冲洗,继而用蒸馏水冲洗至中性，再用干净的空气吹洗并烘干后，即可使用了。
气相色谱分析中柱长、柱内径、柱温、载气流速、固定相、进样等操作条件对分离的影响？操作条件对于色谱分离有很大影响。
１、柱长，柱内径：一般讲，柱管增长，可改善分离能力，短则组分馏出的快些；柱内径小分离效果好，柱内径大处理量大，但柱内径过大，将导致担体不能均匀地分布在色谱柱中。
分析用柱管一般内径为３－６毫米，柱长为１－４米。
２、柱温：是一个重要的操作变数，直接影响分离效能和分析速度。
选择柱温的根据是混合物的沸点范围，固定液的配比和鉴定器的灵敏度。
提高柱温可缩短分析时间；降低柱温可使色谱柱选择性增大，有利于组分的分离和色谱柱稳定性提高，柱寿命延长。
一般采用等于或高于数十度于样品的平均沸点的柱温为较合适，对易挥发样用低柱温，不易挥发的样品采用高柱温。
３、载气流速：载气流速是决定色谱分离的重要原因之一。
一般讲流速高色谱峰狭，反之则宽些，但流速过高或过低对分离都有不利的影响。
流速要求要平稳，常用的流速范围每分钟在１０－１００亳升之间。
４、固定相：固定相是由固体吸附剂或涂有固定液的担体构成。
（１）固体吸附剂或担体粗细：一般采用４０－６０目、６０－８０目、８０－１００目。
当用同等长度的柱子，颗粒细的分离效率就要比粗的好些。
（２）固定液含量：固定液含量对分离效率的影响很大，它与担体的重量比一般用１５％－２５％。
比例过大有损于分离，比例过小会使色谱峰拖尾。
５、进样：一般讲进样快，进样量小，进样温度高其分离效果好。
对进液体样，速度要快，汽化温度要高于样品中高沸点组分的沸点值，一次汽化，保证色谱峰形不致展宽、使柱效高。
当进样量在一定限度时，色谱峰的半峰宽是不变的。
若进样量过多就会造成色谱柱超载。
一般讲柱长增加四倍，样品的许可量增加一倍。