红细胞衰亡与红细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻机制研究进展论文
细胞受到氧化应激后损伤的检测方法
细胞受到氧化应激后损伤的检测方法杨丽娟;游育红【摘要】正常生理状态下,机体活性氧的产生与消除处于一个动态平衡中.而在某些病理生理状态下,细胞内的自由基产物超出其自身的抗氧化能力时,便会产生氧化应激.活性氧基团引起的氧化损伤在许多慢性疾病中起着重要作用,如糖尿病、动脉粥样硬化等.近年来,一些动物、细胞实验及临床试验对细胞氧化损伤的方法展开了研究.对目前国内外常用的检测细胞氧化损伤的方法予以综述,以期为检测细胞氧化受损提供更好的参考.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2010(016)006【总页数】4页(P924-927)【关键词】细胞损伤;活性氧;氧化应激;检测【作者】杨丽娟;游育红【作者单位】福建医科大学药学院药理系,福州,350004;福建医科大学药学院药理系,福州,350004【正文语种】中文【中图分类】R392氧化应激是机体或细胞内以氧自由基为代表的氧化性物质的产生与消除失衡,或外源性氧化物质的过量摄入,导致氧化性物质在细胞内蓄积而引发氧化反应的状态[1]。
血管内皮细胞正常生理活动过程都有氧化性物质参与,主要为氧自由基,统称为活性氧(reactive oxygen species,ROS)。
ROS是需氧生物在自身的新陈代谢过程中,由于受到内外环境的刺激而在其机体内持续产生的活性产物。
ROS因含有未成对电子,所以极不稳定,容易与其邻近分子反应,并可诱发产生新的自由基。
一般情况下可以参与机体的物质代谢和信号转导,对细胞的正常代谢起着重要作用。
它的产生会受到体内抗氧化防御系统的调节,从而保持在平衡的健康状态。
当其产生过量或机体清除能力下降时,则对组织细胞产生不可逆损伤,氧化应激即发生,造成蛋白质损伤、脂质过氧化、DNA改变、酶失活等,发生包括癌症、心血管疾病、风湿性关节炎、感染等多种疾患[2]。
1.1 电子自旋共振法电子顺磁共振又称电子自旋共振(electron spin resonance,ESR),是研究含有未成对电子的物质和材料(包括自由基)的得力工具。
成熟红细胞的衰老凋亡机制
成熟红细胞的衰老凋亡机制成熟红细胞的寿命只有大约120天，随着时间的推移，它们会逐渐衰老，最终凋亡。
这个过程是由多个生物化学机制组成的。
一、细胞膜的变化成熟的红细胞细胞膜主要由磷脂分子组成。
衰老过程中，细胞膜的含水量减少，膜脂质排布不规则。
细胞膜磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇含量减少，而磷脂酰肌酸和磷脂酰甘油等含量增加。
这些变化使细胞膜的弹性和稳定性下降，细胞膜的生理活性也会降低。
二、氧化损伤红细胞处于氧气环境下，在此过程中极易受到氧化损伤。
在衰老过程中，红细胞LCAT （酯化酶）活性下降，细胞膜上的抗氧化酶GPx（谷胱甘肽过氧化物酶）和CAT（过氧化氢酶）活性也减弱，这些酶正常情况下可以清除细胞内部的氧自由基，但是随着红细胞的衰老和死亡，氧自由基的数量逐渐增加，导致红细胞内部的氧化状态加剧，最终造成细胞膜的损伤。
三、细胞膜蛋白的磷酸化红细胞衰老过程中，细胞膜磷酸化状态的改变也是一个重要的标志。
磷酸化可以使蛋白质分子结构发生变化，影响它们的功能。
一些研究表明，在细胞膜磷酸化状态改变的同时，细胞膜上一些蛋白质的构象也发生了变化。
这可能导致细胞膜蛋白从原来的造血细胞系列转化为破坏或凋亡细胞系列的标志性蛋白质。
四、微管和微丝的改变红细胞的外部骨架主要由微丝和微管组成。
这些蛋白质质地柔软，可以使细胞形态保持在一个固定的形状。
随着红细胞的衰老，微管和微丝的蛋白骨架内的蛋白质质量也随之降低，并且逐渐发生断裂。
这导致细胞形态的变扁和畸变，进而引起细胞膜和内部结构的变化和损坏。
五、细胞色素的氧化血红蛋白是一种重要的细胞色素，可以使红细胞以高效能的方式运输氧气到全身组织。
然而，衰老红细胞中的血红蛋白会逐渐发生氧化改变，形成自由基，使血红蛋白失去了它的真正功能。
氧化血红蛋白可以在细胞膜上形成氧化产物，进一步导致膜破坏和氧自由基形成，最终加速红细胞的衰老和凋亡。
综上所述，成熟红细胞的衰老凋亡是由多个生物化学机制共同作用引起的。
钙网蛋白免疫调节的分子机制研究
钙网蛋白免疫调节的分子机制研究吴薇;刘朝奇【摘要】钙网蛋白(Calreticulin,CRT)是46 kD大小的Ca2+结合内质网常驻蛋白,具有调节细胞内钙浓度、增强抗原递呈及抑制血管生成等多种生物学功能.从机体凋亡细胞的清除、抗原提呈、信号转导及与体液免疫多方面阐述近来钙网蛋白在机体免疫调节分子机制的最新进展,以期为钙网蛋白的致病机制及免疫干预奠定理论和试验基础.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2013(000)003【总页数】4页(P44-47)【关键词】钙网蛋白;免疫调节;分子机制;抗原提呈【作者】吴薇;刘朝奇【作者单位】三峡大学分子研究所,宜昌443002【正文语种】中文钙网蛋白（Calreticulin，CRT）是一种在结构和功能上高度保守的钙结合蛋白，主要存在于内质网（endoplasmic reticulum，ER）［1] 。
大量研究发现，钙网蛋白具有多种功能，参与抗原提呈、分子伴侣、抑制血管生成及细胞黏附等生物学作用。
因此，与多种疾病的发生发展有一定的相关性。
但钙网蛋白免疫调节作用分子机制的研究甚少，因此本研究从钙网蛋白在免疫调节增强及免疫逃避方面对其分子机制进行综述，并期望能为这一领域的科研工作者提供一些参考。
1 CRT的免疫增强活性1.1 CRT与吞噬作用机体对凋亡细胞的清除是正常的基本的生理功能，这个过程对于维持机体的内环境稳定具有重要意义。
目前，比较明确的凋亡细胞膜上的受体识别配体是磷脂酰丝氨酸（phosPhatidylserine，PS），PS的外翻表明细胞凋亡的发生。
近几年的研究发现，CRT也参与巨噬细胞对凋亡细胞的清除过程［2] ，CRT与人精子蛋白（ERP57）共转位至膜表面会引起免疫原性的细胞死亡［3] ，主要是通过囊泡相关膜蛋白（SNARE）依赖的胞吐作用转位至膜表面，这个过程可能与囊泡相关的SNARE蛋白（如囊泡相关膜蛋白1）和膜相关SNARE蛋白（如突触小体相关蛋白23/25）的相关［4] 。
流式细胞仪检测细胞凋亡方法（AnnexinV法）
流式细胞仪检测细胞凋亡方法（AnnexinV法）实验概要Annexin V是一种检测细胞凋亡的试剂，本实验介绍了一个用流式细胞仪检测细胞凋亡的方法(Annexin V 法)。
实验原理Annexin V是检测细胞凋亡的灵敏指标之一。
它是一种磷脂结合蛋白，可以与早期凋亡细胞的胞膜结合，而细胞质膜的改变是细胞发生凋亡时最早的改变之一。
在细胞发生凋亡时，膜磷脂酰丝氨酸(PS)由质膜内侧翻向外侧。
Annexin V与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，因而与细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸结合。
由于在发生凋亡时，磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的改变，因此，与DNA碎片检测比较，使用Annexin V可以更早地检测到凋亡细胞。
因为细胞坏死时也会发生磷脂酰丝氨酸外翻，所以Annexin V常与鉴定细胞死活的核酸染料(如PI或7-AAD)合并使用，来区分凋亡细胞(Annexin V /核酸染料-)与死亡细胞(Annexin V /核酸染料 )。
主要试剂1. PBS缓冲液：含0.1%NaN3，过滤后2-8°C保存。
2. Annexin V Binding Buffer缓冲液(Cat. No. 66121E)：浓度为10×，使用时，用稀释为1×浓度的应用液。
3. Annexin V试剂与核酸染料：Annexin V 核酸染料Annexin V-Biotin(Cat. No. 65872X) PI(Cat. No. 66211E)或Streptavidin-FITC(Cat. No. 13024D) 7-AAD(Cat. No. 34321X)Annexin V-FITC(Cat. No. 65874X) PI(Cat. No. 66211E) Annexin V-PE(Cat. No. 65875X) 7-AAD(Cat. No. 34321X)1. 一次性12×75mm Falcon试管。
细胞凋亡测定_实验报告
一、实验目的本实验旨在通过观察细胞凋亡的形态学特征和检测凋亡相关蛋白表达，了解细胞凋亡的发生机制，为细胞凋亡相关疾病的研究提供理论依据。
二、实验材料1. 细胞：人肝癌细胞株HepG2，人正常肝细胞株LO2。
2. 试剂：Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒，Caspase-3活性检测试剂盒，DNA ladder检测试剂盒，荧光显微镜，流式细胞仪等。
3. 仪器：CO2培养箱，细胞培养瓶，移液器，离心机，荧光显微镜，流式细胞仪等。
三、实验方法1. 细胞培养：将HepG2和LO2细胞分别接种于培养瓶中，置于CO2培养箱中培养，待细胞生长至对数生长期时进行实验。
2. 细胞凋亡检测：（1）Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测：将细胞悬液离心后弃去上清，加入Annexin V-FITC/PI染液，室温避光孵育15分钟，流式细胞仪检测细胞凋亡率。
（2）Caspase-3活性检测：按照试剂盒说明书操作，检测细胞中Caspase-3活性。
（3）DNA ladder检测：按照试剂盒说明书操作，进行琼脂糖凝胶电泳，观察DNA ladder现象。
3. 数据分析：采用SPSS软件进行统计学分析，比较两组细胞凋亡率、Caspase-3活性和DNA ladder的差异。
四、实验结果1. Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测：HepG2细胞凋亡率为（30.2±2.5）%，LO2细胞凋亡率为（2.1±1.2）%，两组间差异具有统计学意义（P<0.05）。
2. Caspase-3活性检测：HepG2细胞Caspase-3活性为（2.58±0.21）U/mg，LO2细胞Caspase-3活性为（0.83±0.14）U/mg，两组间差异具有统计学意义（P<0.05）。
3. DNA ladder检测：HepG2细胞出现明显的DNA ladder现象，LO2细胞无DNA ladder现象。
细胞凋亡检测方法及其研究进展
用 Ａ ｎ ｎ ｅ ｘ ｉ ｎ Ｖ法对 此进 行检测 ［ ８ ］ 。Ａ ｎ ｎ ｅ ｘ ｉ ｎ － Ｖ 是 一 种 分 子 量 为３ ５ ￣３ ６ ＫＤ 的 Ｃ ａ 抖 依 赖 性磷 脂结 合 蛋 白 ， 能与 Ｐ Ｓ高 亲 和 力 特 异 性 结 合 。将 Ａｎ ｎ ｅ ｘ ｉ ｎ － Ｖ用荧 光素如 Ｆ Ｉ Ｔ Ｃ或生物素标记 ， 用标 记 后 的 Ａ ｎ ｎ ｅ ｘ ｉ ｎ － Ｖ 作 为荧 光 探 针 ， 用 流式 细胞 仪 或 荧 光 显 微 镜 即可 检 测 ３ 磷 脂 酰 丝 氨 酸 的 外 翻 。碘 化 丙 啶 （ Ｐ Ｉ ） 是 一 种 核 酸 染料 ， 不能透过正 常活细胞 的细胞膜 ， 但 能 够 透 过 凋 亡 晚 期 的 细胞 以 及 死 细 胞 的 细 胞 膜 而 使 细 胞 核 染 色 ， 所 以将 Ａ ｎ — ｎ ｅ ｘ ｉ ｎ － Ｖ与 Ｐ Ｉ 联合 使 用 ， 就 可 以将 凋 亡 早 期 细 胞 与 凋 亡 晚期 细 胞 以 及 死 细胞 区分 开 来 。细 胞 膜 磷 脂 酰 丝 氨 酸 外 翻 在 细 胞 凋 亡 的 早 期 出 现并 且 持 续 的时 间较 短 ， 所 以 可作 为 早 期 细 胞 凋 亡 的一 个 判 断 指 标 ＿ ９ 。 该 方 法 是 目前 检 测 细 胞 凋 亡 较 为 常 用 的 方法 ， 使 用 时 必 须 注 意 检 测 时 机 的选 择 。
细胞凋亡 （ Ａ ｐ ｏ ｐ ｔ ｏ ｓ ｉ ｓ ） 是生 理 性 的细 胞 死 亡 ， 是 由基 因控 制 的有 序 的细 胞 自主 性 死 亡 ， 其意义 在于去 除不需 要、 衰 老 和 异 正 常 细 胞 的 磷 脂 酰 丝 氨 酸位 于细 胞 膜 内 侧 ， 在 细胞 凋 亡 的
早期 ， 磷 脂 酰 丝 氨 酸 从 细 胞 膜 的 内侧 转 移 到 细 胞 膜 的 表 面 ， 可
安徽省皖中名校2022-2023学年高一下学期期中联考生物试卷(含答案)
安徽省皖中名校2022-2023学年高一下学期期中联考生物试卷学校：___________姓名：___________班级：___________考号：___________一、单选题1、酶指的是一类由活细胞产生的、对其底物具有高度特异性和高度催化效能的有机物。
下列相关叙述正确的是( )A.各种酶都能与双缩脲试剂发生紫色反应B.低温会破坏酶的空间结构，使其变性失活C.人的成熟红细胞内有多种酶，但不能更新D.一种酶只能催化一种底物发生化学反应2、如图表示环化一磷酸腺苷（cAMP)的结构式，该物质是由ATP脱去两个磷酸基团后环化而成的一种细胞内信号分子。
ATP的结构简式为A-P～P～P，其中“~”代表一种特殊的化学键。
下列叙述错误的是( )A.cAMP解环化后，可得到腺嘌呤核糖核苷酸B.cAMP和ATP中分别有1个和2个特殊的化学键C.ATP在形成cAMP的过程中，初期会释放能量D.cAMP与磷脂所含的元素都是C、H、O、N和P3、如图表示酵母菌细胞内发生的部分生化反应。
下列叙述错误的是( )A.图中①过程涉及的酶在细胞质基质中B.图中③过程需要氧气的参与C.图中②过程没有腺苷三磷酸的形成D.图中③过程均发生于线粒体内膜上4、某生物兴趣小组利用葡萄糖溶液培养酵母菌并探究其无氧呼吸的类型(如图)。
下列叙述错误的是( )A.葡萄糖溶液的浓度是该实验的无关变量B.甲瓶与乙瓶连接前，需静置一段适宜时间C.若乙瓶内呈现出黄色，则说明甲瓶中有CO2产生D.甲瓶与乙瓶连接前，酵母菌的呼吸产物中无水5、在室温25℃，不同光照强度下，某植物吸收CO2速率的变化曲线如图所示。
据图分析，甲~丁4个点对应的光照强度中，该植物叶肉细胞的光合速率大于呼吸速率的有( )A.一点B.两点C.三点D.四点6、如图表示某植物细胞的有丝分裂过程中染色体和核DNA的数量变化曲线图。
据图分析，下列有关该植物细胞的有丝分裂过程的叙述，错误的是( )A.图中a点和b点，细胞内核DNA数是相同的B.图中d点，细胞内正在进行DNA分子的复制C.图中b点和e点，细胞内染色体数目均为4nD.图中f点，细胞赤道板处的细胞板正逐渐扩大7、如图表示人的骨髓造血干细胞通过增殖和分化，形成多种细胞的示意图。
肥胖儿童少年血脂、红细胞膜脂及PS外翻的研究
运动人体科学 ・
肥胖 儿 童少 年血 脂 、 细 胞 膜脂 及 Ｐ 红 Ｓ外 翻 的研 究
赖 爱 萍
（ 浙江体 育职业技术学院 体 育系 ， 浙江 杭 州 ３ ０ １ ） １０ ２ 摘要 ： 目的 ： 通过对肥胖 儿童 少年血脂及红 细胞膜脂及磷 脂酰 丝氨 酸（ Ｓ 外翻 的研 究 ， 讨肥胖 对儿 童少年脂代谢 Ｐ） 探
细胞凋亡磷脂酰丝氨酸外翻分析
细胞凋亡磷脂酰丝氨酸外翻分析关键词：磷脂酰丝氨酸磷脂化合物磷酸试剂细胞标准物质北京标准物质网磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，PS)又称丝氢酸磷脂，二酰甘油酰磷酸丝氨酸，是一类普遍存在的磷脂，磷脂化合物中的磷酸甘油酯类，是细胞膜组分之一，与一系列的膜功能有关。
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。
磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V法）是一种分子量为35～36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与PS有高度亲和力，它通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
因此Annexin-V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。
将Annexin-V进行荧光素(FITC、PE)或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。
碘化丙啶(PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。
因此将Annexin-V与PI 匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。
凋亡细胞对所有用于细胞活性鉴定的染料如PI有抗染性，坏死细胞则不能。
细胞膜有损伤的细胞的DNA可被PI着染产生红色荧光，而细胞膜保持完好的细胞则不会有红色荧光产生。
因此，在细胞凋亡的早期PI不会着染而没有红色荧光信号。
正常活细胞与此相似。
在双变量流式细胞仪的散点图上，左下象限显示活细胞，为(FITC-／PI-)；右上象限是非活细胞，即坏死细胞，为(FITC+／PH+)：而右下象限为凋亡细胞，显现(FITC+／PI-)。
Annexin-V可作为FACS(流式细胞分选)方法筛选凋亡细胞的基础。
由于融合蛋白Annexin-V-EGFP，EGFP与PS的结合比例为1：1，还可进行定量检测。
除此之外，还提供生物素偶联的Annexin V，可通过常用的酶联显色反应来检测。
磷脂酰丝氨酸的应用研究
食品研究与开发２００６．Ｖｏｌ．２７．ＮＯ．９然而人的胎盘来源短缺，满足不了医药、食品等多方面的需求。
因此充分利用牛胎盘、猪胎盘、羊胎盘等丰富的动物胎盘，做好动物胎盘与人胎盘在形态、成分、功能、检测、鉴别等方面的研究工作，就能使数量大、成本低、供货时间长的动物胎盘具有极大的开发利用价值，为胎盘类产品的开发提供坚实的物质基础［７￣８］。
由于胎盘蕴藏着巨大的市场价值，借助于先进的科学技术将哺乳类动物胎盘加工成附加值和效用更高的产品成为发展的趋势。
以药剂、食品、化妆品等多种形式出现的胎盘类产品将为人类的生活做出巨大的贡献。
参考文献：［１］孙刚．《胎盘内分泌的基础与临床》［Ｍ］．第二军医大学出版社．２００１．［２］朱梅，许梓荣．牛胎盘催乳素（ｂＰＬ）的研究进展［Ｊ］．饲料研究，２０００，１０：１９￣２２．［３］陈晓萍．酶水解法加工牛胎盘的工艺研究［Ｊ］．科技通报，２００１，１７（６）：６７￣７０．［４］苏晔，魏泓．胎盘免疫调节因子的生物功能及临床应用进展［Ｊ］．免疫学杂志，２００２，１８（３）：１１７￣１１９．［５］黄楚华，殷学伦．胎盘肽制剂的理化性质及免疫活性研究［Ｊ］．药物生物技术，１９９５，２（２）：４０￣４２［６］程雅琴，杨鹏云．人胎盘组织液ＨＰＬＣ指纹图分析［Ｊ］．中国生物制品学杂志，２００１，１４（４）：２３８￣２４０．［７］张丽君，乔传卓，余慕婉．紫河车和几种动物胎盘及其加工品的放射免疫分析评价［Ｊ］．中药材，１９９５，１８（１２）：６２２￣６２４．［８］吴凌，李金香，王国良，等．人和动物胎盘药理作用和临床应用的研究进展［Ｊ］．黑龙江八一农垦大学学报，２００１，１３（２）：６８￣７１．收稿日期：２００６－０７－２４冯雷刚，周红梅，胡光祥，高昱颖，王朋书（天津尖峰天然产物研究开发有限公司，天津３００４５７）磷脂酰丝氨酸的应用研究摘要：综述了磷脂酰丝氨酸（ＰＳ）近２０年来国内外的动物试验及临床应用，表明ＰＳ对改善记忆和认知能力、防治老年痴呆症、抑郁症及缓解精神压力都有显著疗效，是一种极具开发潜力的功能性保健原料，特别是大脑机能的提高方面。
微颗粒研究进展
膜外表面，导致细胞膜磷脂的不对称分布消失，从而微颗粒 从细胞膜上释放出来［５，２０］。（二）细胞骨架的重组：细胞骨架 对维持细胞膜的稳定有重要作用，细胞骨架的重组可导致微 颗粒的形成［５］。细胞内钙浓度增加，钙蛋白酶激活，引起细 胞骨架蛋白中部分蛋白溶解，细胞膜骨架重组，产生微颗 粒［２１］。研究表明，在静息血小板中，αⅡｂβ３ 介导的肌动蛋 白骨架的不稳定化促进微颗粒的释放［２２］。在肿瘤细胞中， ＧＴＰ 结合蛋白（如 、 ）作 Ｒａｂ２２Ａ ＡＲＦ６ 用于细胞骨架，使细胞 骨架重组，释放微颗粒 。在 ［２３］ 中性粒细胞中，ＮＡＤＰＨ 氧化 酶等酶的作用使细胞骨架不稳定化，最终产生中性粒细胞微 颗粒 。 ［２４］
ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ ＰＳ ［７］
（ ， ） 、蛋白质 和 等物质。健康人 ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ＴＦ ［１１］
［１２］ ＲＮＡ［１３］
体内存在少量微颗粒，但微颗粒广泛地参与病理生理过程，
在一些疾病中会增高［１］。目前有多种技术检测微颗粒的大
小、浓度及功能。但目前微颗粒的制备尚未标准化，仍需更
ｒｅｄ ｃｅｌｌ ｍｉｃｏｒｐａｒｔｉｃｌｅ
） 、单 核 细 胞 微 颗 粒 （ ， ＲＭＰ ［５６］
ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
） 、内 皮 细 胞 微 颗 粒 （ ， ＭＭＰ ［５，７］
ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
） 、粒细胞微颗粒（ ， ） 、 ＥＭＰ ［５］
临床检验杂志 年 月第 卷第 期 ， ， ， ２０１９ ９ ３７ ９ Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ｓｃｉ Ｓｅｐ． ２０１９ Ｖｏｌ．３７ Ｎｏ．９
·６９１·
： ＤＯＩ １０．１３６０２ ／ ｊ．ｃｎｋｉ．ｊ玉莹，吴俊（北京积水潭医院检验科，北京 ） １０００４４
肾性贫血药物治疗现状及前景
中国科技期刊数据库 医药2015年19期 173肾性贫血药物治疗现状及前景蓝 珍 彭 文上海中医药大学附属普陀医院，上海 200062摘要：肾性贫血普遍发生于慢性肾脏疾病及终末期肾病患者，严重影响患者生活质量，增加患者死亡风险。
本文主要介绍现代中医药学者对于肾性贫血的认识，并对目前现有发表的方剂去重后进行药物使用次数统计，得出以补益气血、泄浊为目前中医主流治疗方法。
介绍目前西医对肾性贫血研究涉及的机制，以及干预措施进行总结。
以期能去取其精华对临床治疗肾性贫血提供一定的便利。
关键词：肾性贫血；中医；西医 中图分类号：R95 文献标识码：A 文章编号：1671-5837（2015）19-0173-021 中医治疗肾性贫血1.1 中医病因病机肾性贫血中医的“虚劳”、“肾劳”、“血劳”、“眩晕”范畴。
现代中医理论认为其病机：脏腑功能衰惫气血生化乏源的基础上，出现水湿、浊毒、淤血、痰浊内停后耗伤气血，后形成的气血双亏的错综复杂证候。
病位在脾肾、涉及心、肝。
典型病机特点是：“因虚致实，虚实夹杂”。
中医依据病情所在的阶段，针对主要矛盾来辩证施治，仔细的辨证分型来遣方用药。
1.2 治疗现状现代医家在治疗经验上各有侧重。
董志刚教授[5]：补脾益肾、化湿泄浊，气血同治贯始终。
化浊祛瘀并生血，扶正祛邪有偏重。
配合中药食疗。
何学红、李莹教授、吴金玉教授[6-8]：补肾精以生血、益脾胃滋后天之本，活血化瘀，祛湿化瘀，整体调理，标本兼顾。
叶景华教授[9]：特别提出了降氮泄浊祛邪。
使用中药浓煎保留灌肠，肾衰膏脐疗，以激发经络之气，疏通气血，活血化瘀。
詹继红教授[10]：还当清热解毒法。
久病入络，可适当配伍虫类药品搜剔经络淤毒。
叶传蕙教授[11]：当注重排出多余的水液、毒素，同理三焦。
现代中医药实验研究主要是中药名方、成药、西药+名方、自拟方。
文章分析了2005年1月-2015年6月年CNKI 收录的关于复方治疗肾性贫血的110篇文献，得到了成方和自拟方共94个，汤剂38个，成药75个，涉及中药95味（方剂成药公开成分以及加减用药均统计），使用次数超过10次的27味药见于表1，由表1可以看出，补益气血的黄芪、当归使用居于首位；泄浊的大黄亦位居第二；白术、党参、茯苓、山药健脾、补脾益气利水；熟地、枸杞、阿胶、黄精补肝肾益精血；淫羊藿、鹿角胶温补肾阳；丹参、川芎、赤芍、陈皮、去滞生新，调经顺脉。
样本细胞凋亡实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景细胞凋亡是细胞程序性死亡的过程，是生物体内重要的细胞生物学现象之一。
细胞凋亡在维持生物体内细胞数量的动态平衡、清除异常细胞以及抵御病原体入侵等方面发挥着至关重要的作用。
本研究旨在通过实验方法检测细胞凋亡的发生，探讨细胞凋亡在特定条件下的生物学意义。
二、实验目的1. 探讨细胞凋亡在特定条件下的发生机制。
2. 检测细胞凋亡的发生，并分析其与细胞增殖的关系。
3. 研究细胞凋亡在生物体内的生理和病理作用。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：细胞培养液、细胞裂解液、Annexin V-FITC/PI染色试剂盒、流式细胞仪等。
2. 实验仪器：细胞培养箱、显微镜、离心机、流式细胞仪等。
四、实验方法1. 细胞培养：将细胞接种于细胞培养瓶中，置于细胞培养箱中培养至对数生长期。
2. 处理细胞：将细胞分为实验组和对照组，实验组给予特定处理，对照组不做处理。
3. 细胞裂解：将细胞用细胞裂解液裂解，收集细胞裂解液。
4. Annexin V-FITC/PI染色：将细胞裂解液与Annexin V-FITC/PI染色试剂盒混合，室温避光孵育。
5. 流式细胞术检测：将染色后的细胞用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。
五、实验结果1. 实验组细胞凋亡率显著高于对照组（P<0.05），表明特定处理可以诱导细胞凋亡。
2. Annexin V-FITC染色结果显示，实验组细胞膜上磷脂酰丝氨酸（PS）外翻，表明细胞凋亡早期发生。
3. PI染色结果显示，实验组细胞核DNA降解，形成DNA ladder，表明细胞凋亡晚期发生。
六、实验讨论1. 本实验结果表明，特定处理可以诱导细胞凋亡，提示细胞凋亡在特定条件下受到严格调控。
2. Annexin V-FITC染色和PI染色结果显示，细胞凋亡过程分为早期和晚期两个阶段。
早期阶段，细胞膜上PS外翻，细胞膜完整；晚期阶段，细胞核DNA降解，细胞膜通透性增加。
3. 细胞凋亡在生物体内具有重要作用。
生物学视角下细胞膜局部翻转机制的研究进展
生物学视角下细胞膜局部翻转机制的研究进
展
细胞膜是细胞的外部边界，其功能不仅是保护细胞，而且涉及到信号传递和物
质交换等多种生命活动。
呈现扁平圆形的细胞膜表面，是由两层磷脂分子排列而成。
这两层磷脂分子的排列方式，维持了细胞膜的双层结构。
膜翻转是指细胞膜内外磷脂分子性质不同或数量不同，引起局部细胞膜翻转的
一种现象。
在某些细胞中，细胞膜的局部翻转现象的出现，是为了维持细胞膜结构的平衡而产生的。
近年来，研究者对细胞膜局部翻转机制进行了深入探究，寻求一种更系统的解释。
众所周知，细胞膜的骨架支持是由细胞骨架下的蛋白质网络完成的。
对于马铃
薯淀粉体生产细胞，有研究表明该类细胞中，基因指导的内膜物质在细胞表面形成了一个三维网状结构，网状结构由细胞骨架组成。
此外，研究人员发现，发生细胞膜局部翻转时，骨架中与膜蛋白相互作用的离子担当了重要作用。
细胞膜翻转的过程是由微管运输系统和微管相关蛋白调节的。
研究表明微管运
输系统的运作调节了细胞膜性质和形态的变化。
因此，在细胞膜比例和组成不变的情况下，微管运输系统因外部刺激而异常运转，从而引起膜翻转的可能性较大。
通过对细胞液泡膜拓扑结构的研究，研究人员认为，单一蛋白质能够形成局部
翻转，具有很强的可塑性。
此类研究的基础是对单层膜的双机构场理论分析，研究人员认为，当蛋白质插入细胞膜时，会形成强分子间力，导致细胞膜的局部翻转，进而影响细胞的结构和功能。
细胞膜局部翻转机制的研究还需要进一步深入。
预计这一领域的发展将极大地
推动细胞学领域的前沿突破，为生命科学的进一步发展提供重要的理论基础。
凋亡细胞清除过程中相关信号及机制的研究进展
凋亡细胞清除过程中相关信号及机制的研究进展张少龙;樊竑冶【期刊名称】《中国免疫学杂志》【年(卷),期】2018(034)006【摘要】机体中每时每刻都有大量的凋亡细胞产生,及时清除这些凋亡细胞对于维持机体的免疫平衡至关重要.在凋亡细胞的清除中,巨噬细胞发挥主要作用,其清除过程分为3 个阶段:招募,识别,吞噬.招募阶段,凋亡细胞会分泌" find me"信号,吞噬细胞则会做出响应然后被招募到凋亡细胞处.识别阶段,凋亡细胞表面的" eat-me"信号与吞噬细胞表面的吞噬受体相互识别结合.吞噬阶段,"eat-me"信号向吞噬细胞内传导信号,例如激活GTPase Rac1,引起肌动蛋白聚合和细胞骨架的重排,促进对凋亡细胞的吞噬.若凋亡细胞的清除机制出现障碍,未被及时清除的凋亡细胞将进入次级坏死状态而释放胞内的自身抗原.这些自身抗原可能刺激机体免疫活化而产生自身抗体,进而引发自身免疫性疾病如SLE.本文就吞噬细胞对凋亡细胞清除机制的研究进展作详细综述.【总页数】6页(P944-948,952)【作者】张少龙;樊竑冶【作者单位】中国药科大学生命科学与技术学院,南京 210009;中国药科大学生命科学与技术学院,南京 210009【正文语种】中文【中图分类】Q291【相关文献】1.凋亡细胞清除的研究进展 [J], 战梅;韩忠朝2.局灶性脑缺血再灌流过程中凋亡细胞rn相关基因的研究 [J], 吕晓红;张淑琴;王岩;崔俐3.磷脂酰丝氨酸外翻和磷脂氧化在凋亡细胞被吞噬细胞清除过程中的协作效应 [J], 王燕群;刘尚喜;侯凡凡;李忠海4.凋亡细胞的清除及组织稳态维持的研究进展 [J],5.凋亡细胞清除机制研究取得重要突破 [J],因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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ｎｅｓｔｈｅｓｉａ ａｎｄ Ｏｒｇａｎ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｚｕｎｙｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｚｕｎｙｉ ５６３０００，Ｃｈｉｎａ
ｆｍｉ
ｘｙ鼻Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｏｆ
ｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ，Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ
ｏｆＺｕｎｙｉ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｚｕｎｙｉ
５６３００３，Ｃｈｉｎｏ［Ｇｏｕ ＤＭ）
通信作者：苟大明，Ｅｍａｉｌ：ｇｄｍｚｙ＠ｙｅａｈ．ｎｅｔ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｅｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３４３７８．２０１６．０５．０１８
【摘要】背景因成熟红细胞的死亡方式不同于有核细胞，故提出红细胞衰亡概念，描述红细胞的自发性程序性死亡。
目的了解红细胞最终衰亡是否主要通过红细胞膜磷脂酰丝氨酸（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｄｎｅ，Ｐｓ）外翻暴露，进而被吞噬细胞表面ＰＳ 受体识别、吞噬和降解清除实现。 内容综述红细胞衰亡的多种途径，以及这些途径是如何导致红细胞膜Ｐｓ外翻暴露，进 趋向 明确两者之间关系可对预防红细胞破坏提供新的思路和方法。
３红细胞衰亡与ＰＳ外翻
环氧化酶（ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ，ｃｏｘ）活化引起前列腺素 Ｅ２（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２，ＰＧＥ２）ｇｚ成和释放∞１，血小板活
化因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ，ＰＡＦ）形成及神经
观察大量红细胞衰亡增强的病理状态或疾病， 可发现其红细胞表面ＰＳ外翻增加。ＰＳ外翻导致红 细胞衰亡敏感性增加、寿命缩短、在血循环中被吞 噬降解，出现溶血或贫血。研究证实，存在棘形红细
而介导红细胞凋亡及被吞噬降解过程。
【关键词】红细胞衰亡；磷脂酰丝氨酸；凋亡
Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
ｏｆ ｅｒｙｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｐｈｏｓｐｈａｆｉｄｙｉｓｅｒｉｎｅ ｅｘｐｏｓｉｎｇ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ
Ｌｉ Ｘｉａｏｙｉｎｇ，Ｇｏｕ Ｄａｒｎｉｎｇ
Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒｔａｒｙ Ａ
ｏｆ Ａ
ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｓｕｒ＿ｆ：ａｅｅ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ，ｅｎｇｕｌｆｅｄ ａｎｄ ｄｅｇｒａｄｅｄ ｂｙ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｃｏｎｔｅｎｔ ｔｈｅ ｗａｙｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ＰＳ
ｅｘｐｏｓｕｒｅ
Ｒｅｖｉｅｗ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ
ｅｒｙｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ
理反应。
２
海贫血和蚕豆病等；镰细胞贫血和缺铁性贫血患者 红细胞膜ＰＳ外翻暴露增加，且其程度与寿命缩短 程度一致ｍ。８｜。Ｂｏｎｏｍｉｎｉ等¨列也在他们的研究中发 现，无论是透析前、正在进行血液或腹膜透析的尿 毒症患者，其红细胞膜Ｐｓ外翻增加。Ｂｉ等幢圳也证实 了红细胞膜Ｐｓ外翻增加是腹膜透析患者贫血发生的 危险因素；红细胞膜Ｐｓ外翻水平越高，越容易出现贫 血。此外，肥胖和糖尿病患者可因红细胞膜氧化应激
３．１
状态下，磷脂双分子层呈不对称分布，鞘磷脂
（ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎ， ＳＭ）
和磷脂酰胆碱
（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ，ＰＣ）主要分布在胞膜外层，ＰＳ 和磷脂酰乙醇胺（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ，ＰＥ）主要 在内层¨２｜。人类红细胞的膜不对称性由３种酶（混 杂酶、翻转酶和转出酶）共同控制，共同维持红细胞 膜的完整性，并保证其功能正常进行。其中，ＰＳ又 称丝氨酸磷脂、二酰甘油酰磷酸丝氨酸，通常仅位 于膜的内层，具有净负电荷，有助于膜的不对称性， 对细胞生长和存活有重要作用¨“。 众所周知，细胞膜Ｐｓ外翻暴露是一种凋亡信 号，可被吞噬细胞表面的Ｐｓ受体识别后吞噬降解凋 亡细胞。红细胞受到各种病理性刺激和损伤因素作 用后，可激活胞膜混杂酶，抑制翻转酶，在翻转酶作 用下使位于红细胞膜内层的ＰＳ外翻暴露到膜外层， 破坏膜不对称分布。膜磷脂分布不对称性的破坏不 仅为巨噬细胞提供了识别信号，在机体循环中被吞 噬消灭；而且改变了膜电位，使胞膜阴性增强¨…，增 加细胞之间相互作用。研究已经证实，ＰＳ外翻暴露 对红细胞相互之间黏附¨弘１６１，红细胞与血管内皮之 间黏附及血栓形成¨纠均有很重要的作用。由此可见 红细胞ＰＳ外翻暴露在其生命周期、病理生理调控
ｐｏｔｅｎｔｉａｌ
ｒｅｃｅｐｔｏｒ
ｃｈａｎｎｅｌｓ，ＴＲＰＣ）６有关‘川。
此外，研究表明红细胞外Ｃ１一缺乏时，也可激活 ＴＲＰＣ６通道，引起胞内Ｃａ２＋浓度增加致ＰＳ外翻暴 露，只是此途径中ＴＲＰＣ６的激活与ＰＧＥ：有关。当红 细胞外Ｃｌ一缺乏和细胞萎缩时，活化ＣＯＸ和磷脂酶
万方数据
４６６
国匾盎醛堂皇复菱盘查！Ｑ！鱼生！旦箜≥！鲞筮』塑！！！』△！！！尘珏！！！生些业垫竖■堕』Ｌ丛尘
Ａ２引起ＰＧＥ：生成和释放，进而激活胞膜上ＴＲＰＣ６
激活膜混杂酶致Ｐｓ外翻，还是通过介导胞内Ｃａ２＋浓度
通道致Ｃａ２＋内流，随后活化混杂酶使ＰＳ外翻暴露。 而应用ＣＯＸ抑制剂和磷脂酶Ａ２抑制剂可抑制和 减弱此途径引起的ＰＳ外翻∞。。
３．２
增加激活膜混杂酶致ＰＳ外翻的机制还有待研究Ｈ１。虽 不同个体之间对ＰＫＣ介导致Ｐｓ外翻暴露的敏感性 不同，但已明确，ＰＫＣ在红细胞ＰＳ外翻暴露致衰亡 中起着重要作用。
外，在鼠ＰＡＦ受体基因敲除和应用ＰＡＦ受体拮抗
半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶，也是细胞凋亡过
程中的主要调控蛋白。在人类成熟红细胞中已发现 含有ｃａｓｐａｓｅ－３与ｃａｓｐａｓｅ－８，且研究表明ｃａｓｐａｓｅ－３ 在体外可酶解带３蛋白，引起红细胞衰亡；ｃａｓｐａｓｅ－３ 亦可直接调控促进受氧化应激损伤红细胞的ＰＳ暴
凋亡基因通过细胞内信号通路精确调控，其过程涉 及细胞形态学变化和生化改变；成熟红细胞无细胞 核和细胞器，故不存在有核细胞相对特有的凋亡特 征，如核固缩、凋亡小体形成和ＤＮＡ片段化等；但 其存有两者共同的凋亡特征，如细胞萎缩、胞膜空 泡化等，被称之为红细胞衰亡…。虽然有关红细胞衰 亡的研究较早，但其机制错综复杂导致衰亡具体通
膜空泡化、ＰＳ外翻暴露等具有凋亡特征的变化，随
难。本文就红细胞衰亡与红细胞膜磷脂酰丝氨酸 （ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ，Ｐｓ）外翻机制的研究进行综述， 试揭示红细胞衰亡与其膜Ｐｓ外翻暴露之间关系， 为红细胞保护提供新的思路。
１红细胞衰亡及途径
后在血循环中，被单核．巨噬细胞识别、吞噬和降解
清除。
ａｎｄ ｅｒｙｔｈｒｏｅｙｔｅ
ｄｅｇｒａｔｉｏｎ．Ｔｒｅｎｄ
Ｔｏｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＰＳ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ａｎｄ ｅｒｙｐｔｏｓｉｓ ｍａｙ ｐｒｏｖｉｄｅ ｎｅｗ ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｅｒｙｐｔｏｓｉｓ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ．
红细胞是人体血液的主要有形成分和机体氧 万方数据
国匪盛醛堂皇复菱盘查垫！ｉ生！旦筮！！鲞筮』塑！坐』△！鲤！垦塑！！：丛业！Ｑ！！：ｙ！！：！！：盟！：§
红细胞直接暴露在血循环内，其衰亡的诱发因 素复杂多样Ｈ１。目前关于红细胞衰亡的机制研究相 当复杂，主要包括：细胞内Ｃａｚ＋浓度及活性改变ｂ
Ｊ，
及参与体内反应中有着重要作用。
胞性贫血的患者，其红细胞膜Ｐｓ外翻增加，如地中
酰胺产生…，蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎ
ｋｉｎａｓｅ
Ｃ，ＰＫＣ）激
活［８－９］、半胱天冬酶（ｃａｓｐａｓｅ）活化¨叫和能量耗竭随川 等，且各种通路并非单独作用，而是相互联系促进， 共同作用于红细胞衰亡”。。由此可见，红细胞衰亡受 到多种途径的控制；且这些途径的最终通路似乎主 要集中在红细胞膜Ｐｓ外翻暴露，进而被吞噬细胞 表面存在的ＰＳ受体识别、吞噬和降解清除。通过这 种方式，机体清除受损红细胞而不释放细胞内血红 蛋白，避免引起炎症反应和次级损伤，符合正常生
露。２ ６｜，并抑制翻转酶活性，增强巨噬细胞吞噬，引起 红细胞衰亡。 ３．５其他因素
溶血磷脂酸不仅是生物膜的组成成分，还是一 种细胞间的磷脂信使，可以激活Ｇ蛋白耦联受体，产 生广泛的生物学效应；研究观察到溶血磷脂酸可诱 导红细胞ＰＳ外翻暴露旧１，并同时诱导红细胞聚集粘 附，其机制可能是通过激活ＰＫＣ和增强Ｃａ“内摄介
Ｃａ２＋介导途径 红细胞受到渗透休克和氧化应激时，可使对细
胞容积和氧化敏感的一种非选择性阳离子通道激
活，引起Ｃａ２＋内流，致胞内Ｃａ２＋浓度增加及活性增
强。这不仅可活化胞膜混杂酶，使ＰＳ外翻暴露；同
时可激活Ｃａｚ＋依赖的半胱氨酸内肽酶钙蛋白酶，降
解细胞骨架蛋白，促进细胞空泡化。此外，Ｃａ２＋敏感 性Ｋ＋通道也可因胞内Ｃａ２＋浓度增加被活化，致氯化 钾外流和胞膜超极化，进而胞质内水外渗，引起细 胞萎缩。目前，研究证明这种非选择性阳离子通道 可能与瞬时受体电位通道（ｔｒａｎｓｉｅｎｔ
路难以确定，这对预防和减轻红细胞破坏有一定困
先于正常衰老程序而启动自杀陛死亡程序，即红细
胞衰亡旧。。２００５年，Ｌａｎｇ等旧。首次提出红细胞衰亡 这一概念，用来描述红细胞的程序化自杀性死亡：当 红细胞受到一系列内／＃ｂ环境因素损害（诸如渗透性 休克、氧化应激、能量耗竭、高温和大量小分子物质 作用）时，便可诱发启动此程序，出现细胞萎缩、细胞
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｅｒｙｐｔｏｓｉｓ；Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ；Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
细胞凋亡是有核细胞死亡的主要方式之一，由
供的主要执行者，其生成和衰亡的调控与机体所需 程度及血液运氧能力相适应。当红细胞出现体积缩 小、变形性下降、胞膜自身抗原产生和分子丢失等衰 老特征，可在血液循环中被单核一巨噬细胞清除，结 束生命周期。此过程为正常衰老的程序性死亡。然 而，当正常成熟红细胞受到病理性刺激和损害时，可
垦区鏖醛堂皇复菱盘查！Ｑ！§生§旦筮≥！鲞筮§翅！皿』△！！§尘Ｂ！！坚：丛型垫！鱼：Ｙ！！：！！ｚ型！：』
・综述・
红细胞衰亡与红细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻机制研究进展
李晓英萄大明
５６３０００，遵义医学院，贵州省麻醉与器官保护基础研究重点实验室（李晓英）；５６３００３，遵义医学院附属医院 麻醉科（萄大明）