实验 黄连中小檗碱的提取、精制和鉴定

实验四黄连中小檗碱的提取、精制和鉴定

一、概述

黄连系毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eranch.）的干燥根茎。黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床。

主要化学成分的结构及理化性质：

小檗碱为黄色针状结晶，mp为154℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。

小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。

O

3

3

NH

CHO

O

OCH3

OCH3季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）

N+

O

OCH3

OCH3

小檗碱（黄连素）

二、实验部分

（一）实验目的

1、掌握小檗碱的结构特点和理化性质，以及一般的提取精制方法。

2、掌握旋转蒸发仪的使用。

3、熟悉盐酸小檗碱的色谱鉴定和定性鉴定方法。

（二）实验原理

1、提取原理：小檗碱为异喹啉类小檗碱，结构中的氮原子以季铵盐形式存在，显一定程度的亲水性，因此游离小檗碱能溶与水(1:20)及乙醇(1:100)，热水或热乙醇中易溶，不溶于乙醚、氯仿、苯等有机溶剂。盐酸小檗碱在沸水中溶解，在冷水中析出。

2、分离原理：小檗碱与酸所成的盐在水中的溶解度不尽相同，如硫酸小檗碱为(1:30)，酸性硫酸小檗碱为(1:100)，枸橼酸小檗碱为(1:125)，而盐酸小檗碱为(1:500)。本实验就是据游离小檗碱在水和乙醇中的溶解度较大，而其盐酸盐难溶于水的性质进行提取和精制的。

（三）实验药材、仪器与试剂

1、药材：黄连50g（每组）。

2、仪器：回流装置、水浴锅、冰箱、旋转蒸发仪、烧杯（250ml）、抽滤装置、滤纸、层析缸、滤纸、试管、电炉。

3、试剂：75%乙醇、95%乙醇、蒸馏水、10%盐酸、氯化钠、乙醇、氯仿-甲醇-1/10盐酸（1:1:1）、10%硫酸、漂白粉、10%氢氧化钠、丙酮。

（四）实验内容

1、小檗碱的提取

取黄连粗粉50g，加入400ml75%的乙醇回流1.5h，四层纱布过滤，药渣用95%乙醇300ml回流1h，四层纱布过滤，并用少量蒸馏水洗涤药渣，合并两次滤液和洗液，放于冰箱中。

2、小檗碱的浓缩

用旋转蒸发仪将小檗碱提取液浓缩至糖浆状（小于50ml，无醇味）。

3、盐酸小檗碱的制备

将浓缩液倒入100ml沸水中（换成250ml烧杯）煮沸至溶解（10min），趁热抽滤，在滤液中加10%盐酸，调制pH=2，加入氯化钠10g，放入冰箱析晶。

4、盐酸小檗碱的精制

（1）抽滤，得到盐酸小檗碱粗品。

（2）取粗品放入100ml沸水中，搅拌溶解，继续加热10min，趁热抽滤，滤液放置过夜。（滤取结晶，先用少量1%盐酸洗一次，再用少量蒸馏水洗数次，抽干，干燥后得到小檗碱精品。）

5、鉴定

（1）化学检识

①取盐酸小檗碱少许，加10%的H

2SO

4

2ml，溶解后加漂白粉少许，即显樱红

色。

②取盐酸小檗碱约50mg，加蒸馏水5ml，水浴加热，溶解后加10%氢氧化纳试液2滴，显橙色。溶液放冷过滤，取澄清滤液，加丙酮4滴，即发生浑浊。放置后，生成黄色的丙酮小檗碱沉淀。

（2）纸层析鉴定

样品：1%醇溶液。（每组0.1g溶于10ml乙醇）

标准品：1%盐酸小檗碱醇溶液

展开剂：氯仿—甲醇—1/10MHCL(1:1:1下行)

显色：自然光下观察

（五）实验注意事项

1、提取时两次乙醇浓度不等，提醒学生不要加错。

2、漂白粉加少许即可，否则影响结果

3、纸条要保持平整，不靠壁。

（六）思考题

1、小檗碱为哪类生物碱，可以用什么方法提取？

2、回流与蒸馏的区别是什么？

3、小檗碱精制的原理是什么？

4、旋转蒸发仪使用时需注意哪些问题？