液相色谱串联质谱的小知识

一、开机

water 2695/micromass zq4000:

开机步骤

1. 分别打开质谱、液相色谱和计算机电源，此时质谱主机内置的CPU会通过网线与计算机主机建立通讯联系，这个时间大约需要1至2分钟。

2. 等液相色谱通过自检后，进入Idle状态，依照液相色谱操作程序，依次进行操作。（具体根据液相色谱不同型号来执行，下面以2695为例）。

a.打开脱气机 (Degasser On)。

b.湿灌注(Wet Prime)。

c.Purge Injector。

d.平衡色谱柱。

3.双击桌面上的 MassLynx

4.0图标进入质谱软件。

4.检查机械泵的油的状态（每星期），如果发现浑浊、缺油等状况，或者已经累积运行超过3000小时，请及时更换机械泵油。

5.点击质谱调谐图标（MS Tune）进入质谱调谐窗口。

6.选择菜单“Options –Pump”，这时机械泵将开始工作，同时分子涡轮泵会开始抽真空。几分钟后，ZQ就会达到真空要求，ZQ前面板右上角的状态灯“Vacuum”将变绿。

7.点击真空状态图标，检查真空规的状态，以确认真空达到要求。

8. 确认氮气气源输出已经打开，气体输出压力为90 psi。

9.设置源温度（Source Temp）到目标温度。

关机

1．点击质谱调谐图标进入调谐窗口。

2.点击Standby 让MS 进入待机状态时，这时状态灯会由绿变红，这一过程是关质谱高电压的过程。

3．停止液相色谱流速，如果还需要冲洗色谱柱，可以将液相色谱管路从质谱移开到废液瓶。4．等脱溶剂气温度（ESI）或APCI探头温度降到常温，点击气体图标关闭氮气。

5．逆时针方向拧开机械泵上的Gas Ballast 阀，运行20分钟后关闭（镇气）。

a) 对于ESI源，至少每星期做一次。

b) 对于APCI源，每天做一次。

6．再次确认机械泵的Ballast阀是否已经关闭。

7．选择Option / Vent，这时质谱开始泄真空，ZQ 前面板的状态灯“Vacuum”开始闪烁，几分钟后机械泵会停止运行，这时可以关闭质谱电源。

FINNIGEN DECA 开关机及校正流程——

1开机前准备事项

（1）确保质谱总电源开关（白色开关）及主板电源开关（黑色开关）处于关闭状态（O）；

（2）检查真空泵油液面，确保泵内油页面处于标定的上下两线之间；

（3）查看离子源洁净程度，ESI源查看喷口是否有固体析出，毛细管口是否完好；APCI喷口是否有积液；

（4）气体压力，打开高纯氮气钢瓶总阀，调节出口压力调至0.65MPa，打开高纯氦气钢瓶总阀,调节出口压力调至0.25Mpa;

（5）检查壳气及辅助气接口连接紧固，松开液相管路与离子源的接口；

（6）开启动力电源，电压稳定，正常；

（7）确保室内温度在18～25度。

二找方法

a、其实做方法不是很难的，先找ＭＳ的条件，然后建立ＭＲＭ连上液相找液质方法就可以了，然后在优化离子源气体流量，以及温度就可以了。

b、首先，我们应该知道被测化合物的结构式，pKa，溶解度等理化性质。

1，根据化合物极性和分子量大小选择离子源，非极性强的化合物可用APCI源，非极性弱的用ESI，此外ESI可形成多电荷离子，适合检测多肽等分子量大的化合物（APCI则不行）。2，根据化合物的酸碱性选择用正离子或负离子：一般碱性化合物用正离子，酸性或中性化合物选择负离子。

正离子条件下：流动相一般加0.01－0.1％的甲酸，

负离子条件下：流动相一般加0.01－0.1％的甲酸铵。

3，离子源和正负条件确定好后即可优化化合物的质谱参数：

建议先搞清楚各个参数是与流速相关还是与分子量相关，与TSQ Quantumn为例：

与流速相关的参数有：Spray voltage，Sheath gas， Aux gas，Capillary temperature 等参数，如果流速在较低范围内变动，这些参数就不用优化，使用厂家的推荐值即可。

与分子量相关的参数有Tube lens offset等参数，这个一般也不建议优化。使用校正表上的值即可。

所以这一步最关键的是找到母离子，如有加合离子建议加大Source CID试试，给一定能量，看看打碎的主要子离子。

注意：如让仪器自动找子离子也能找到，但其优化的碰撞能量一般偏高，一般需要在其基础上减去Source CID的值大小即可

C、如果是简单的定性，对于锥孔电压没什么太苛刻的要求。但是如果是要对样品进行定量，特别是低含量的，要讲究灵敏度，那就我对单个样品直接进样，分别优化毛细管电压和锥孔电压。

三质谱仪

按质量分析器(或者磁场种类)可分为静态仪器和动态仪器，即稳定磁场（单聚焦及双聚焦质谱仪）和变化磁场（飞行时间和四极杆质谱仪）。

MS仪器一般由进样系统、电离源、质量分析器、真空系统和检测系统构成。

1、真空系统

质谱仪中所有部分均要处高度真空的条件下(10-4-10-6Torr或mmHg), 其作用是减少离子碰撞损失。真空度过低，将会引起：

a) 大量氧会烧坏离子源灯丝；

b) 引起其它分子离子反应，使质谱图复杂化；

c) 干扰离子源正常调节；

d) 用作加速离子的几千伏高压会引起放电。

2、进样系统

对进样系统的要求：重复性、不引起真空度降低。

进样方式：

a) 间歇式进样：适于气体、沸点低且易挥发的液体、中等蒸汽压固体。如图所示注入样品(10-100g)---贮样器(0.5L-3L)---抽真空(10-2 Torr)并加热---样品蒸分子(压力陡度)---漏隙---高真空离子源。