Waters液相色谱系统-PPT文档资料
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高效液相色谱1-PPT文档资料
A 涡流扩散项 毛细管气相色谱中 A=0
B 纵向扩散项 液相色谱中远小于气相色谱 通常流速下B ≈ 0
C 传质阻力项 C = Cm(动态流动相) + Csm(静态..) + Cs(固定相)
对键合相，Cs=0
所以 对液相色谱
H=A + B/u + Cmu + Csmu + Csu
对键合相液相色谱 H=A + Cmu + Csmu
通用型检测器
示差折光 电导检测器等
第十八页，共71页。
第十九页，共71页。
第二十页，共71页。
1.5.5 附属系统
包括
脱气
梯度淋洗 柱恒温 自动进样 馏分收集
数据处理 等
第二十一页，共71页。
2. 基本理论，分离的控制
❖ 与GC一样，样品组分在固定相与流动相之间的 吸附与分配平衡的差异产生分离，这是一个负熵 过程。而同时存在的熵增过程--区带自发扩散使 组分混合。
第三十二页，共71页。
❖ 处于同一组的溶剂，分离中有相似的选择 性；而处于不同组的溶剂，其选择性差别 较大
❖ 正相色谱中，固定相是极性的，所以增加 极性参数P’，洗脱能力增加
❖ 反相色谱中，固定相是非极性的，所以增 加极性参数P’，洗脱能力降低
第三十三页，共71页。
(4) 保留值与流动相组成
液固色谱中，k’对温度的变化不如气相色谱敏感，通常不 考虑。因此，在流动相线速确定后，影响分离效果合分离 时间的主要因素就是流动相组成。通过统计热力学的方法 可以导出在二元流动相体系中组分容量因子k’与强溶剂的
❖ 柱管常用不锈钢金属管 ❖ 一般色谱柱长5～30cm，内径为2～5mm，
凝胶色谱柱内径3～12mm，制备柱内径较 大，可达25mm以上。 ❖ 一般在分离前有一个预柱，预柱内填充 物和分离柱尽可能完全一样
最新waters e2695高效液相色谱培训资料
四元梯度洗脱的溶剂输送系统 四通道在线真空脱气机 可容纳 120 个样品瓶的自动进样系统 柱温箱 液晶显示器 内置的柱塞杆密封垫清洗系统 溶剂瓶托盘 键盘用户界面及软盘驱动器
2 开机
打开电源至on位置，开机依次接通 2695 分离单元、检测 器、计算机和打印机的电源。接通后，约 20s 仪器开始自 检，约 1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化。
除去微粒及杂质 了解样品在流动相中的溶解度,如样品的溶剂不是流动相，一定要确
保样品在流动相中不析出。 了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用。
运行样品
配置系统项目 管理数据（相当于新建文件夹），鼠标右键选新建，设定项
目名（设定后将出现在运行样品中）。 建立方法组并运行样品
在浏览项目中打开你的项目，通过“新建仪器方法”来设定
使用的仪器方法（即对配置系统一步选定的主机和检测器进 行参数设置）：仪器方法（新建→仪器方法，包括主机和选 定的检测器的参数的设置→设置好选另存为保存此仪器方法 →关闭）此时上述编辑的仪器方法出现在列表中
运行样品
在浏览项目中打开你的项目，通过“新建方法组”
来设定具体仪器方法、处理方法、报告方法→另 存为“方法组”，设置方法名（与刚才的仪器方法 名相统一）→完成。
→进入查看主窗口→提取色谱图→点“处理方法向导”图标→新建 处理方法→峰1、峰2→积分区域（选定要积分的峰）→给出条件剔 除不要的峰→→→……→纯度匹配→PDA光谱对照→处理方法名→ 完成（然后又出现主窗口，处理结果自动给出）→点“方法组”图 标，选好后点“文件”下的“另存为”→“方法组”，设定即可。 至此选好处理方法。 结果处理：选好数据，右键选处理→选好方法组（上面设定好的） 点结果即可给出处理好的数据 注：通道无论什么时候给出的都是未处理数据。
waters公司高压液相色谱仪精华学习资料
2000 WATERS CORPORATION。 在美国印刷。 保留所有权利。 未经出版商的书面允许，不 得以任何形式转载本书或其中的任何部分。
Breeze、 busLAC/E 和 SAT/IN 是 Waters Corporation 的商标， Millennium、 Symmetry 和 Waters 是 Waters Corporation 的注册商标。 Windows、Windows NT 和 Microsoft 是 Microsoft Corporation 的注册商标。 Oracle 是 Oracle Corporation 的注册商标。 所有其它商标均归各自的所有者独有。
4
目录
4.4 4.5 索引
恢复项目 ........................................... 82 关闭 Breeze 系统 ................................... 85 ................................................... 86
目录
5
图表
1 2 1-1 1-2 1-3 1-4 1-5 1-6 1-7 1-8 1-9 2-1 2-2 2-3 2-4 2-5 2-6 2-7 2-8 2-9 2-10 2-11 2-12 2-13 2-14 2-15 安装 Breeze 硬件的建议读物 ...............................12 安装和使用 Breeze 软件的建议读物 .........................13 Breeze 系统启动流程图表 ..................................16 Breeze Diagnostic/Configuration Wizard ...................19 Breeze 软件的第一个屏幕 ..................................20 “Sample Queue”工作区 ....................................21 “Manage Breeze Projects”视图中的默认项目 ................22 “Manage Breeze”工作区 ...................................23 “How To”窗口 ............................................25 Breeze 主窗口的组成部分 ..................................26 采集栏 （在空闲系统中） ...................................29 选择处理模式 .............................................34 “View Method”工作区的仪器参数 ...........................35 “Save Current Method”对话框 .............................37 “Purge Wizard”的首页 ....................................38 “Prime Pump”页 ..........................................39 “Purge Pump”页 ..........................................39 “Specify Single Inject Parameters”对话框 ................41 “Select Sample Set Method Type”页 .......................43 “Select Location of Standards”页 ........................44 “Specify Calibration Options”页 .........................44 “Describe Standard Bracket”页 ...........................45 “Enter Level Details”页 .................................46 “Describe Samples”页 ....................................47 色谱柱的 “Identification”页 .............................48 标准和样品的 “Identification”页 .........................48
高效液相色谱系统ppt讲解
色谱柱
液相色谱柱是高效液相 色谱仪的核心部分，是 分析好坏、成败的关键
键合相色谱柱
• 键合相: – 反相: 70%; C18, 65%; C8, 15%; 苯基柱 <5%, – 正相: 20%; 硅胶、 -NH2、 -CN、-OH – 其它 (手性柱, 离子交换柱): 10%
• 反相色谱是目前应用得最为广泛的高效液相色谱方法。 • C18 和 C8 在反相色谱中应用得最为广泛。
LC-5510紫外-可见光检测器
功能特点： • 使用波长范围宽 • 波长精度高 • 噪声低漂移小 • 可用汞灯自动校正波长 • 采用LCD带背光的显示屏来显示波长的设
置参数和运行参数
LC-5510工作站
功能特点： • 具有色谱仪控制系统、数据采集和处理系
统； • 可进行波长程序控制 • 可对两台泵进行程序控制，进行梯度洗脱 • 功能健全，操作便捷
±1.0% ±1.0% ±2.0%
0.5% ±5.0%
0.5%
1.5%
±2.0
±1.0%
%
最高压力
4000 Psi 40 MPa 39.2 MPa 40.0 MPa 40MPa
进样器
• 隔膜进样 • 停留进样 • 阀进样 • 自动进样
进样器
• 对进样器的要求 密封性好 死体积小
重复性好 保证中心进样 进样时对色谱系统的压力、流量影响小
• 在线脱气机主要由真空泵、脱气膜管、传感器、 控制电路、真空腔等组成
• 在线脱气机的主要目的是脱除流动相中的气泡
LC-5510高压输液泵
技术指标 • 工作压力：0～42MPa • 流量范围：0.01～5.0mL/min • 流量准确性：≤1％ • 流量精密度： ≤0.5％ • 压力脉动： ≤1％
waters-e高效液相色谱ppt课件
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用甲醇水溶液冲洗。 5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水冲洗及
保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水极性太强且易长霉。 。 6.开机时，流速和柱压要逐渐增加。 7.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
流动相流出检测器可被送至废液瓶，或按需被收集。 当流动相含有一个分开的化合物谱带，高效液相色谱可以收集含有纯
化的化合物的该洗脱组分，用于进一步分析。
注意高压管路和附件用来连接泵、进样器、色谱柱和检测器单元，形 成流动相、样品和化合物分离谱带的通路。
高 检将效测电器信液连号相接转计换色算为谱机色数谱如据图站 ，何在，工显高示效作屏液上相展色现谱出系来统。单元先记录电信号，再
液相色谱的基本流程图
流动相
进样阀 泵
色谱柱
泵输液 进样
分离
检测器
检测
AB C
DE
G
F
记录
液 液相相流色色动谱谱相实：的验种所类各需及的部配基比分本，参示等数度-意-或亦梯图称度色谱条件
固定相：色谱柱类型及内径、长短 流动相输送系统参数：流速 检测器参数：紫外检测波长，灵敏度等 温度控制 进样量
四元梯度洗脱的溶剂输送动进样系统 柱温箱 液晶显示器 内置的柱塞杆密封垫清洗系统 溶剂瓶托盘 键盘用户界面及软盘驱动器
打开电源至on位置，开机依次接通 2695 分离单元、检测
2器开、机计算机和打印机的电源。接通后，约 20s 仪器开始自
检，约 1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化。
溶 流【剂动M管相en理脱u/气系St确a统tu认s的所】有，准溶进备剂入管“路St都at充us满（溶1 剂），”按屏幕
保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水极性太强且易长霉。 。 6.开机时，流速和柱压要逐渐增加。 7.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
流动相流出检测器可被送至废液瓶，或按需被收集。 当流动相含有一个分开的化合物谱带，高效液相色谱可以收集含有纯
化的化合物的该洗脱组分，用于进一步分析。
注意高压管路和附件用来连接泵、进样器、色谱柱和检测器单元，形 成流动相、样品和化合物分离谱带的通路。
高 检将效测电器信液连号相接转计换色算为谱机色数谱如据图站 ，何在，工显高示效作屏液上相展色现谱出系来统。单元先记录电信号，再
液相色谱的基本流程图
流动相
进样阀 泵
色谱柱
泵输液 进样
分离
检测器
检测
AB C
DE
G
F
记录
液 液相相流色色动谱谱相实：的验种所类各需及的部配基比分本，参示等数度-意-或亦梯图称度色谱条件
固定相：色谱柱类型及内径、长短 流动相输送系统参数：流速 检测器参数：紫外检测波长，灵敏度等 温度控制 进样量
四元梯度洗脱的溶剂输送动进样系统 柱温箱 液晶显示器 内置的柱塞杆密封垫清洗系统 溶剂瓶托盘 键盘用户界面及软盘驱动器
打开电源至on位置，开机依次接通 2695 分离单元、检测
2器开、机计算机和打印机的电源。接通后，约 20s 仪器开始自
检，约 1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化。
溶 流【剂动M管相en理脱u/气系St确a统tu认s的所】有，准溶进备剂入管“路St都at充us满（溶1 剂），”按屏幕
《Waters液相》课件
Waters液相技术的优势
Waters液相技术以其高效、精确和可靠性而闻名， 被广泛应用于医药、食品和环境分析领域。
2. 液相色谱法基础
液相色谱法的定义和原理
液相色谱法是一种分离和检测 样品成分的化学分析技术，基 于样品在液相中的分配和吸附 行为。
液相色谱法的分类
液相色谱法按分离机理可分为 吸附色谱、离子交换色谱、分 子排阻色谱等多种类型。
Waters HPLC系列液相色谱仪器拥有多个型号，根据用户需求选择最适合的仪器。
Waters HPLC系列液相色谱仪器的常见问题及解决方法
常见问题包括峰形异常、峰分离不良等，我们提供一系列解决方法帮助用户解决实验中的挑 战。
4. Waters液相色谱应用举例
Waters液相色谱应用于生物医药分析的案例分析
《Waters液相》PPT课件
这份PPT课件将带您深入了解Waters液相技术。从Waters公司简介到液相色谱 法的基础知识，再到Waters液相色谱仪器的介绍和应用案例，我们将为您展 示其优势和未来发展趋势。
1. Waters液相介绍
Waters公司简介
Waters是全球领先的科学仪器制造商，专注于液相 色谱技术的研发和创新。
5. 结语
1 Waters液相色谱技术的未来发展趋势
2 推荐阅读和参考资料
展望Waters液相色谱技术的未来，包括更高分辨 率、更高灵敏度和更多应用领域的拓展。
提供了一些相关的书籍、期刊和网站，供感兴趣 的人进一步学习和了解Waters液相色谱技术。
注意
本Pቤተ መጻሕፍቲ ባይዱT仅供学习交流使用，不得用于商业用途。
通过具体案例展示Waters液相色谱在生物医药领域的应用，如药代动力学研究和蛋白质分析 等。
Waters高效液相色谱维护与保养ppt课件
通过进标样建立一个校正曲线（一般是6针标 样）。校正曲线的横坐标是标样的浓度（含 量），纵坐标是峰面积；校正曲线就相当于： Y=aX+b的公式。校正曲线建立好后样品的峰 面积带入方程就可以得到相应的浓度（含量）。
.
10
第二部分HPLC的组成
输液系统 泵以及流 动相
进样系统 进样阀
分离系统 -色谱柱
.
4
术语
• 8、色谱峰：色谱柱流出组分通过检测器时产 生的响应信号的微分曲线。
• 9、峰底：峰的起点与终点间的直线
• 10、峰高：在峰的两侧拐点处所作切线与峰底 相交两点之间的距离。 11、半峰宽（W1/2）：通过峰高的中点做平 行与峰底的直线，与其峰两侧相交两点间的距 离。 12、峰面积（A）：峰与峰底间的面积，又称 作响应值。
• 13、拖尾峰：后沿较前沿平缓的不对称峰。
• 14、前伸峰：前沿较后沿平缓的不对称峰
.
5
术语
• 15、死时间（t0）:不被固定相滞留的组分， 从进样到出峰最大之所需的时间
• 16、保留时间（tR）：组分从进样到出峰最 大之所需的时间。
• 17、死体积（V0）：不被固定相滞留的组分， 从进样到出峰最大之所需的流动相的体积
.
2
第一部分术语
• 1、液相色谱法：就是用液体作为流动相的 色谱法。
• 2、固定相：在色谱法中，静止不动的一相 （固体或液体）称为固定相
• 3、流动相：能运动的一相（一般是气体或 液体）称为流动相
• 4、色谱图：色谱柱流出物通过检测器时所
产生的响应信号对时间的曲线图。纵坐标
为信号强度（通常我们所说的样品浓度），
.
8
第一部分术语
22、面积归一法：将所有峰的面积总和定 为1，测量各峰的面积和色谱图上除溶剂 峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积 占总峰面积的百分率。是包含水分在内 的一个计算结果。
.
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第二部分HPLC的组成
输液系统 泵以及流 动相
进样系统 进样阀
分离系统 -色谱柱
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4
术语
• 8、色谱峰：色谱柱流出组分通过检测器时产 生的响应信号的微分曲线。
• 9、峰底：峰的起点与终点间的直线
• 10、峰高：在峰的两侧拐点处所作切线与峰底 相交两点之间的距离。 11、半峰宽（W1/2）：通过峰高的中点做平 行与峰底的直线，与其峰两侧相交两点间的距 离。 12、峰面积（A）：峰与峰底间的面积，又称 作响应值。
• 13、拖尾峰：后沿较前沿平缓的不对称峰。
• 14、前伸峰：前沿较后沿平缓的不对称峰
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术语
• 15、死时间（t0）:不被固定相滞留的组分， 从进样到出峰最大之所需的时间
• 16、保留时间（tR）：组分从进样到出峰最 大之所需的时间。
• 17、死体积（V0）：不被固定相滞留的组分， 从进样到出峰最大之所需的流动相的体积
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第一部分术语
• 1、液相色谱法：就是用液体作为流动相的 色谱法。
• 2、固定相：在色谱法中，静止不动的一相 （固体或液体）称为固定相
• 3、流动相：能运动的一相（一般是气体或 液体）称为流动相
• 4、色谱图：色谱柱流出物通过检测器时所
产生的响应信号对时间的曲线图。纵坐标
为信号强度（通常我们所说的样品浓度），
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第一部分术语
22、面积归一法：将所有峰的面积总和定 为1，测量各峰的面积和色谱图上除溶剂 峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积 占总峰面积的百分率。是包含水分在内 的一个计算结果。
Waters2695使用维护PPT参考幻灯片
2020/3/24
5
系统前处理
• 脱方“气M（enDue/gSatasstuges”r键）进:按入面“板Sta右tu下s （1）”界面，移动光标至 “Degassger→Mode”,按Enter选 择“On”,打开在线脱气。
• 灌S“Dea注ialgW柱”，a塞sh显密）示封:在“清D主ia洗屏gn泵o幕s（t下iePs，r”im屏按e幕：， 按“Prime Seal Wash”屏幕，按 “Start”直接清洗溶剂流出泵杆 密封圈冲洗废液管，依次按 “Halt→Close”。
• 在外检测器参数设定：在“Instrument Method Editor”界面选择 “Single”或“Dual”，并设定所需波长，其他默认。
2020/3/24
10
建立项目、编辑仪器方法和方法组
• 泵参数设定： *Flow界页面：在“Pressure Limits”中填入压力界限值（通常为040000Psi)，在“Pump Mode”中选择洗脱模式Isocratic或Gradient，选 择等梯度洗脱时应设置流速、四个通道的比例，通道比例之和为 100；选择梯度洗脱会弹出一个表格框，需设置时间程序、流速、 梯度洗脱曲线及四通道的比例关系。 *Temperature页面：设置柱温箱和样品室温度及温度范围或上限 （温度上限要比柱温设置稍高，否则仪器会自动报警）。 *Events页面：在“Enable Events”前选“√”，“time”不得设为零，一般 设为0.02，“Event”选择“Switch”、“Function”选择“Pulse”（半自动设 备必填，全自动设备可不填）。
• 湿“M灌en注u/（StaWtuest”P键rim进e入）“：St按atu面s（板1右）下”界方面， 在“Composition”页面中选择将用到的溶 剂通道改为“100%”，按液晶屏幕右下角 “Direct Function”键，移动光标选择“Wet Prime”，点击“OK”。流速及时间可使用 默认值，也可自行设定（如： 5ml/min,3ml/min）,设定完成点击“OK” 即可。将每一个会用到的溶剂通道按照 上述操作一次（也可各通道选25%进行 灌注）。
waters液相色谱质谱联用的原理应用课件ppt
影响分子量测定的因素
1）pH的影响：正离子方式 pH要低些，负离子方式pH要高些，
除对离子化有影响外，还影响LC的峰形。 2）气流和温度：当水含量高及流量大时要相应增加。 3）溶剂和缓冲液流量：流速适当高可以提高出峰的灵敏度。 4）溶剂和缓冲液的类型：通常正离子用甲醇好，负离子乙腈 好些 5）选择合适的液相色谱类型：正相、反相、选择合适的色谱 柱 6）合适的电压：DP电压高时，样品在源内分解或碎裂；高 DP 电压时回使多电荷离子比例低，多聚体也减少 7）样品结构和性质 8）杂质的影响：溶剂的纯度、水的纯净程度等。当成分复杂， 杂质太多时，竞争使被测物离子化不好，同时使LC分离不好 9）样品浓度不够，有时需要浓缩
m/z149, 管路中邻苯二甲酸酯的酸酐, C8H4O3H+,149.0233 m/z 288, 2mm 离心管的产生的特征离子
m/z 279, 管路中邻苯二甲酸二丁酯 C16H22O4H+, 279.1591
m/z 316, 2mm 离心管的产生的特征离子 m/z 384, 瓶的光稳定剂产生的离子
d) 样品浓度不够
e）pH值不合适 f）样品在源内分解或碎裂
目标化合物分析
（1）选择离子监测（SIM）
SIM 用于检测已知或目标化合物，比全扫 描方式能得到更高的灵敏度。这种数据采集的 方式一般用在定量目标化合物之前，而且往往 需要已知化合物的性质。 若几种目标化合物用同样的数据采集方式 监测，那么可以同时测定几种离子.
m/z391, 管路中邻苯二甲酸二辛酯, C24H38O4H+, 391.2843
m/z413, 邻苯二甲酸二辛酯+钠, C24H38O4Na+, 413.2668 m/z 538, 乙酸+氧 +铁（喷雾管）, Fe3O(O2CCH3)6,
Waters液相基础讲义
©2012 Waters Corporation
26
用保留时间定性
用“标样”的保留时间(Rt)确认被测组份
0.40
Ethylparaben
0.35
0.30
0.25
AU
0.20
0.15
Uracil
Propylparaben
0.10
0.05
0.00 0.00
0.50
1.00
1.50
2.00
2.50
3.00
CH3
样品的官能团
©2012 Waters Corporation
9
色谱法的分类
按分离过程的机理分:
– 吸附色谱(Absorption Chromatography)
o 根据样品组分对活性固定相表面吸附亲和力的不同实现分离
– 分配色谱(Partition Chromatography)
o 分离基于样品组分在固定相和流动相中的溶解度(分配系数)不同
o 高性能色谱柱,高精度输液泵,高灵敏度检测器…
– 广泛应用于各个领域:
o 医药,环保,石化,生命科学,食品工业,农业…
– 无论在技术上,理论上,还是在应用上仍有较大的发展空间
©2012 Waters Corporation
11
HPLC的流程
溶剂 (流动相)
进样器
泵
色谱柱 (固定相)
数据系统
检测器
–理论塔板数N大于规定值(按半峰宽法计算 ) –拖尾因子T应在0.95-1.05之间 –分离度R应大于1.5 –重复性:连续进样5次,峰面积的相对标准偏差不大于2.0%
注:以上数据摘自2005年版中国药典
©2012 Waters Corporation
waterse2695高效液相色谱
waterse2695高效液相 色谱简介
定义与特点
定义
waterse2695高效液相色谱（HPLC） 是一种分离和分析复杂样品中各种成 分的实验技术。
特点
具有高分离效能、高灵敏度、高选择 性等优点，广泛应用于化学、生物、 医药等领域。
工作原理
01
02
03
流动相
在高压下，流动相通过固 定相，将待测组分分离。
参数。
峰分离不完全
可能是由于流动相组成或梯度设置不 当引起的，需要调整流动相或梯度条
件。
拖尾峰
可能是由于色谱柱污染或损坏引起的， 需要更换色谱柱或清洗色谱柱。
基线漂移
可能是由于流动相不纯或仪器长时间 未校准引起的，需要检查并更换流动 相或进行仪器校准。
05
waterse2695高效液相 色谱的发展趋势与展望
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
数据处理系统
用于采集和处理检测器输出的 信号，记录色谱图并计算各组 分的含量。
操作流程
准备工作
检查仪器各部件是否正常，准备好流动相、样 品及色谱柱等。
流动相处理
根据实验要求，配置合适的流动相，并进行过 滤和脱气处理。
安装色谱柱
将色谱柱安装到仪器上，确保密封良好，无泄漏。
操作流程
平衡色谱柱
在流动相通过色谱柱后，使色谱柱达到平衡 状态。
的检测技术，如化学发光检测器、质谱检测器和生物传感器等。
02
优化样品预处理方法
简化样品预处理过程，提高预处理的效率和效果，以减少分析时间和误
差。
03
开发智能化的仪器控制系统
实现仪器控制系统的智能化和自动化，提高分析的稳定性和可靠性。
定义与特点
定义
waterse2695高效液相色谱（HPLC） 是一种分离和分析复杂样品中各种成 分的实验技术。
特点
具有高分离效能、高灵敏度、高选择 性等优点，广泛应用于化学、生物、 医药等领域。
工作原理
01
02
03
流动相
在高压下，流动相通过固 定相，将待测组分分离。
参数。
峰分离不完全
可能是由于流动相组成或梯度设置不 当引起的，需要调整流动相或梯度条
件。
拖尾峰
可能是由于色谱柱污染或损坏引起的， 需要更换色谱柱或清洗色谱柱。
基线漂移
可能是由于流动相不纯或仪器长时间 未校准引起的，需要检查并更换流动 相或进行仪器校准。
05
waterse2695高效液相 色谱的发展趋势与展望
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
数据处理系统
用于采集和处理检测器输出的 信号，记录色谱图并计算各组 分的含量。
操作流程
准备工作
检查仪器各部件是否正常，准备好流动相、样 品及色谱柱等。
流动相处理
根据实验要求，配置合适的流动相，并进行过 滤和脱气处理。
安装色谱柱
将色谱柱安装到仪器上，确保密封良好，无泄漏。
操作流程
平衡色谱柱
在流动相通过色谱柱后，使色谱柱达到平衡 状态。
的检测技术，如化学发光检测器、质谱检测器和生物传感器等。
02
优化样品预处理方法
简化样品预处理过程，提高预处理的效率和效果，以减少分析时间和误
差。
03
开发智能化的仪器控制系统
实现仪器控制系统的智能化和自动化，提高分析的稳定性和可靠性。
高效液相色谱仪ppt课件
Si CH3 H3C H
CH3 Si CH3
O Si O
O
Si O
O
O
Si O
O
O Si OO
O
Si O
O
O
Si O
O
O
O Si O
O
O Si O
O
Si O
O
OO O
Si O O Si
O
HO Si
OO
O
主要是由于修饰到硅胶上的硅烷化 试剂不同。 C8是修饰的带8个碳原子的硅烷， C18是修饰的带18个碳原子的硅烷。
发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
规格：常规分析柱(常量柱) 内径2～5mm(常用4.6mm， 3.9mm)，柱长10～30cm (15cm，25cm居多）
制备柱 （21.2mm、30mm、50mm） 半制备柱（〉5mm，7.8mm、9.8mm、10mm）
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16
C18柱（C8柱）
按测量性质： 通用型检测器（如示差折光、蒸发光散射检测器） 专属型检测器（如紫外、荧光检测器）
按检测方式： 浓度型检测器 质量型检测器
着重介绍四种检测器：紫外检测器（光电二极管阵列检测器）、
示差折光检测器、荧光检测器、蒸发光散射检测器
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21
a. 紫外检测器(UVD)： b. 应用最广泛的选择性检测器。
• 亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小 于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正 相柱。
• 若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色
谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上
的出峰顺序相反。
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30
2. 流动相类别
CH3 Si CH3
O Si O
O
Si O
O
O
Si O
O
O Si OO
O
Si O
O
O
Si O
O
O
O Si O
O
O Si O
O
Si O
O
OO O
Si O O Si
O
HO Si
OO
O
主要是由于修饰到硅胶上的硅烷化 试剂不同。 C8是修饰的带8个碳原子的硅烷， C18是修饰的带18个碳原子的硅烷。
发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
规格：常规分析柱(常量柱) 内径2～5mm(常用4.6mm， 3.9mm)，柱长10～30cm (15cm，25cm居多）
制备柱 （21.2mm、30mm、50mm） 半制备柱（〉5mm，7.8mm、9.8mm、10mm）
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16
C18柱（C8柱）
按测量性质： 通用型检测器（如示差折光、蒸发光散射检测器） 专属型检测器（如紫外、荧光检测器）
按检测方式： 浓度型检测器 质量型检测器
着重介绍四种检测器：紫外检测器（光电二极管阵列检测器）、
示差折光检测器、荧光检测器、蒸发光散射检测器
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21
a. 紫外检测器(UVD)： b. 应用最广泛的选择性检测器。
• 亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小 于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正 相柱。
• 若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色
谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上
的出峰顺序相反。
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30
2. 流动相类别
液相色谱基础知识(waters)
H 3 C H 3 C
C H 2
C H 2
C H 2 C H 2
H 2 C
H 2 C
H 2 C H 2 C
C H 2
C H 2
C H 2 C H 2
H 2 C
H 2 C
H 2 C H 2 C
C H 2 H 2 C
H 2 C C H 2 H 2 C C H 2 H 2 C C H 2
H H 3 C S C i H 2 C H 3 H H 3 C S C i H 3 C H 3 H H 3 C S C i H 2 C H 3 H H 3 C S C i H 2 C H 3 H H 3 C S C i H 2 C H 3 H H 3 C S C i H 3 C H 3 O S O iO O S O iO O S O iO O S O iO O S O iO O S O iO O S O iO O S O iO O S O iO O S i O O O S O iO H O S O iO
离子交换柱(钙基/Ca)
用于单糖、双糖及糖醇等低分子量的糖、及乙醇等的分析。 主要用于药厂维生素C的原料分析(sorbitol/mannitol-山梨 醇/甘露醇)，酒厂(葡萄酒、啤酒等)的糖及乙醇含量的分析。
柱温~90℃，要求有柱温箱。对流动相(水)的要求较高，要求 用户另置超纯水系统。
T = 1.58 峰面积回收率
97.8 % 95.3 % 92.3 %
Waters 21,379
超越极限：全新Xterra色谱柱
集硅胶与聚合物基质填料的优点为一体,突破常规 高效色谱柱的极限 高效、高速分离
不仅能够使用极小粒径的填料以进行高分辨及快 速分析，而且允许在高温下进行分离
WatersHPLC教程ppt
❀ 硅胶的杂质含量
✎ 重金属含量低 硅羟基活性小 拖尾减小 ✎ 是色谱柱质量好坏的重要标志
对HPLC柱的了解 七
❀ 填料的稳定性
✎ 硅胶填料 ✎ pH 2-8
❀ 聚合物填料
✎ pH 2-12 ✎ pH值小于2时
键合相水解
硅胶的溶解曲线
123456789 pH
Waters各种硅胶基质的色谱柱
C1 C4 C6 C8 C18 Phenyl CN NH2
Symmetry C8
12
Resolve C-18
12
Ultrasphere ODS 11
Partisil ODS-3
11
µBondpak C-18 10
Nova-Pak C-18
7
k‘苊 (50/50的乙腈/水)
17 15.7 10.3 12.5 12.4 11.3 12.0 7.9 5.5
对HPLC柱的了解(五)
✎ 调节流动相的极性 pH 离子强度等
✎ 梯度淋洗
选择性系数 α
❀ 定义
α = tR2 − t0 = k 2 tR1 − t0 k 1
✎ α =1 时两组分分不开
❀ 改变α的途径
✎ 改变固定相
✎ 改变流动相
✎ 改变温度
✎ 改变样品的本身性质
R ∝ α −1 α
α k' N 如何控制分辨率?
液相色谱的检测模式
✎ 掌握分离机理 自己开发方法
❀ 充分了解您自己的样品
或有否类似
分析时要了解哪方面的情况
❀ 灵敏度的要求有多高? ❀ 样品的本底是否很复杂? ❀ 有多少组份要分析? ❀ 对分析的精确度 准确度等有多高要求? ❀ 是否因是日常检验 而要求方法容易使用?
✎ 重金属含量低 硅羟基活性小 拖尾减小 ✎ 是色谱柱质量好坏的重要标志
对HPLC柱的了解 七
❀ 填料的稳定性
✎ 硅胶填料 ✎ pH 2-8
❀ 聚合物填料
✎ pH 2-12 ✎ pH值小于2时
键合相水解
硅胶的溶解曲线
123456789 pH
Waters各种硅胶基质的色谱柱
C1 C4 C6 C8 C18 Phenyl CN NH2
Symmetry C8
12
Resolve C-18
12
Ultrasphere ODS 11
Partisil ODS-3
11
µBondpak C-18 10
Nova-Pak C-18
7
k‘苊 (50/50的乙腈/水)
17 15.7 10.3 12.5 12.4 11.3 12.0 7.9 5.5
对HPLC柱的了解(五)
✎ 调节流动相的极性 pH 离子强度等
✎ 梯度淋洗
选择性系数 α
❀ 定义
α = tR2 − t0 = k 2 tR1 − t0 k 1
✎ α =1 时两组分分不开
❀ 改变α的途径
✎ 改变固定相
✎ 改变流动相
✎ 改变温度
✎ 改变样品的本身性质
R ∝ α −1 α
α k' N 如何控制分辨率?
液相色谱的检测模式
✎ 掌握分离机理 自己开发方法
❀ 充分了解您自己的样品
或有否类似
分析时要了解哪方面的情况
❀ 灵敏度的要求有多高? ❀ 样品的本底是否很复杂? ❀ 有多少组份要分析? ❀ 对分析的精确度 准确度等有多高要求? ❀ 是否因是日常检验 而要求方法容易使用?
WATERS
分離是一個物理過程
洗脫
色譜法的分類
按流動相的物態分
氣相色譜(gas chromatography,GC) 用氣體作為流動相(又叫載氣) 液相色譜(liquid chromatography,LC) 用液體作為流動相(又叫洗脫劑)
色譜法的分類
按分離過程的機理分
吸附色譜 根據樣品組分對活性固定相表面吸附親和力的不同實現分離 分配色譜 分離基于樣品組分在固定相和流動相中溶解度(分配系數)不同 離子交換色譜 根據樣品組份離子交換親和力的差異分離 體積排除色譜 GPC(Gel Permeation Chromatography) 固定相是疏水性凝膠,流動相是有機溶劑 GFC(Gel Filtration Chromatography) 固定相是親水性凝膠,流動相是水溶劑
流動相的溶劑組成
流動相的黏度是產生反壓的主要原因
溫度 流速
流速對反壓的影響是線性關系
檢測器
檢測器的啟動操作 開啟電源后,需待檢測器通過自檢后,才能被軟件 控制(需5-10分鐘) 通流動相平衡至少需要三十分鐘后才能正常工作
WATERS 2487檢測器
2487檢測器的顯示屏幕
WATERS 2487檢測器
流動相的脫氣的目的
使色譜泵的輸液准確
輸液量均勻准確,并且脈動減小,保留時間及色譜峰面積的重現性提高
提高檢測的性能
防止氣泡引起的尖峰,基線穩定,溶劑的紫外吸收本底降低 保護色譜柱 減少死體積,防止填料的氧化
流動相的脫氣的方法
加熱, 抽真空, 超聲波震蕩, 通惰性氣體, 在線脫氣機
流動相的保存
有機溶劑流動相
標樣濃度C(Xi) 標樣響應值R(Xi)
waters高效液相色谱[资料]
![waters高效液相色谱[资料]](https://img.taocdn.com/s3/m/fdf95fc3b8f3f90f76c66137ee06eff9aff8495e.png)
Waters高效液相色谱操作说明0一．简介0本高效液相色谱实验包括：waters1525泵+waters2487双波长检测器+色谱柱+电脑（breeze 图谱处理软件）+流动相0二．操作流程00.准备工作0确定色谱实验方法，处理好流动相1，换好流动相，确定色谱柱选择无误01.开机0打开泵开关，听到两声“嘀”的响声之后，再打开波长检测器。
检测器进入预热阶段（此时检测器面板进入5min倒计时）这期间打开电脑，进入英文windows操作系统2，待检测器自检完毕（整个自检过程约6~7min），打开电脑桌面的（Breeze软件）。
待程序完全启动，整个开机过程结束。
系统默认进入上次使用的方案。
2.建立新方法和新方案02.1新建方案0方案主要用来储存你的各个实验方法，数据等内容，你可以把它理解为一个文件夹。
2.1.1创建步骤0选择→单击→单击"next"→在"project name"中输入方案名称（如abc），"comments"中可填注释，也可不填。
→单击"finish"02.1.2打开创建的方案0在界面下→单击→在"project"中找到你创建的方案（如abc）→点击"OK",即进入到我们自己的方案中了02.2新建方法0在新建的方案中，需要建立不同的试验方法。
试验方法主要设定的包括洗脱方式，检测波长等参数。
02.2.1新建方法步骤0单击→单击→单击（Flow选项卡）→在programmed flow中设定你的洗脱方式（此步在2.2.2详述）→单击→单击（channel 1选项卡）→在"wavelength"框内设定你的检测波长（如265nm,280nm,215nm等等）→（设定结束，保存）：单击→输入方法名称如（abc 1）→单击"save"3 02.2.2洗脱方式的设定（重要）0在programmed flow中可看到。
Waters液相
Waters液相Alliance HPLC - 高效液相色谱（型号：2695、e2695）沃特世Alliance HPLC?系统从一开始就被当作液相色谱分析的“金标准”，如今依然还是“金标准”。
没有任何其他的HPLC解决方案能够如此完美地奉献给科学研究工作者。
也没有任何其他的解决方案能够在如此众多的领域内长期提供如此众多的创新。
沃特世是首个懂得“整体大于局部之和”这一道理的公司。
因此，当1996年Alliance进入市场时，它已经通过简便的用户操作界面将化学品、软件和硬件整合为一体。
我们拆除了操作仪器的各种障碍，从而让您能集中精力从事科研和管理好您的实验室。
今天，您能在42,500多种专业刊物上看到Alliance的应用信息。
在所有运行良好的实验室里（不论是新药研发，还是清洁水质监控，或是食品安全检测），都有Alliance的身影。
这已经不是秘密了。
沃特世Alliance HPLC系统会让您易于操作、便于科研，并轻松思考。
1、Alliance HPLC系统久经验证的、灵活和可靠的HPLC分离系统全新工业设计，充分诠释了沃特世对HPLC系列的持久承诺CORTECS 2.7 μm色谱柱，填补了HPLC和UPLC之间的性能空白集成化溶剂和样品管理器，确保各系统间性能的一致性以及高再现性与ACQUITY QDa检测器联用可获得质谱数据2、Alliance?溶出度系统是一个在线HPLC平台,它使用Empower?溶出度软件，自动进行高通量的溶出度和药物释放量的检测。
这套系统可为即时、长期和控制释放提供完整的单点自动检测。
溶出度检测的每个步骤：从剂量滴、获取并分析等量试样、到公布并分发检测结果的管理，都是自动进行的。
用户可以在溶出度检测过程中，对配方开发、稳定性、分析/技术服务、质量控制进行设置。
Alliance 溶出度系统具有下述特征：高样品通量从各种溶出池中自动获取样品多种介质管理用Empower溶出度软件进行现场或远程控制用户定制的溶出度计算方法出版物级质量的报告出版功能Breeze HPLC（型号：1515、1525、1525EF、2545、ALC-100）Breeze? HPLC系统提供的技术和性能体现在一个经济、紧凑、对用户友好的系统平台中。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
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微量进样（如作氨基酸分析）需在4ml样品瓶内加 小内瓶（选一种）及弹簧：
015199 小瓶（Glass Conical Inserts，250L） 072704 小瓶（250L），比上一种的死体积更小 072708 弹簧（Compression Springs）
常用的配件（一）
075215 TEE 三通
Waters液 相色谱系统
基本配置
配套一：最简单系统
部件号 部 件 名 称 数量
207000 515 泵 081110 2487双通道可调波长紫外检测器
096146 起动工具包 086344 NovaPak 碳18柱 054100 746 积分仪
* 选件，可以不要 ** 可配其他种类数据处机
1 1
可取代梯度混合器（051518），但效果不好。
085102 溶剂过滤装置，带滤膜及真空泵
如不想要真空泵，用：085124
026865 水溶性样品过滤装置（带膜）
单配膜：水溶性样品过滤膜（026872）
026870
脂溶性样品过滤装置（带膜）
单配膜：脂溶性样品过滤膜（026874）
常用的配件（二）
用于Rheodyne 7725的进样针：
081110 2487双通道可调波长紫外检测器
1
042990 Millennium 32 色谱管理系统 1 Add On Kit（单系统）需要另配计算机
Millennium32 对计算机的要求
带软驱（1.44M）及光驱（8倍以上），鼠标及键 盘的计算um II 233 以上
1* 1 1 **
025248 Rheodyne 7725进样器（组件） 1
配套二：简单梯度系统
部件号 部 件 名 称 数量
062710 600 泵
1
024838 Rheodyne 7725 进样器（600用） 1 081110 2487双通道可调波长紫外检测器 096146 起动工具包 1 1*
086344 NovaPak 碳18柱
054100 746 积分仪
* 选件，可以不要 ** 可配其他种类数据处理机
1
1 **
配套三：高压梯度系统
部件号 部 件 名 称 数量
207000 515 泵 051518 梯度混合器
081110 2487双通道可调波长紫外检测器 086344 Nova-Pak 碳18柱 1
2695 + 柱塞杆清洗 2695 + 柱塞杆清洗 2695 + 柱塞杆清洗 2695 + 柱塞杆清洗 2695 + 柱塞杆清洗 2695XE 270880 + 柱温箱 271009 + 脱气机 270886 + 柱温箱 +脱气机 271013 + 进样器控温 270008 270012
配套六：650蛋白提纯系统
10l-(033380)，50l-(033382)，100l-(033383) 250l-(033384)，500l-(033385) 5l-(096223)，10l-(007041)，20l-(096224) 50l-(096225)，100l-(096226) 025248 -（独立式，一般用于515泵）带启动装置，预 装20l定量环，独立支架，5l/50l/200l定量环各一个 ，25l进样针一只 024838 -（600泵用）带启动装置，预装20l定量环， 600泵面板，5l/50l/200l定量环各一个，25l进样针 一只
432及464等检测器配在配套三及四需加 SAT/IN（P/N=WAT201915）
2996（光电二级管矩阵检测器，PDA）可加 在任何配套中，但是需要配置 Millennium32 用低反压色谱柱时（如离子色谱、GPC）需 要配高灵敏度噪声滤除器（P/N=025200） ，但是：515及2690除外
内存要求：
对于Windows NT 操作系统，128M 或以上 对于Windows 2000 操作系统，128M 或以上
显示卡及荧光屏要求：
分辨率1024 768（至少 800 600），256色
硬盘要求：
10G以上
配套一至四：配其他检测器
配2414时可直接加在上述所有配套中，但是 在配套一及二中（要共用数据处理系统） 432，464及2475等检测器可直接配在配套一 及二中（共用数据处理系统）
用于Rheodyne 7725的定量环：
注 - Rheodyne 7725的基本配置
常用的配件（三）
1升溶剂瓶 - 032750
柱塞杆清洗装置
100l泵头用：031870 225l泵头用：030852 （510、600用）
配套五：Alliance系统
包括溶剂及样品管理（即泵及自动进样器）系统， 只需加检测器及数据处理。注意其他选件需根据不 同的部件号一次配齐，不能单独配 部件号
配套一至四：配自动进样器
717plus自动进样器可以直接取代7725i进样器。
717plus标准配置中：有4ml样品盘、样品瓶。
P/N 55872 P/N 55858 P/N 55886
标准配置：不锈钢、1600µL体积，还可选配：
PEEK Std Vol. Tubing Kit、620 µL PEEK Low Vol. Tubing Kit、400 µL S.S. Low Vol. Tubing Kit、620µL
2 1
1
025248 Rheodyne 7725 进样器（组件） 1
042990 Millennium 32 色谱管理系统 1 Add-On Kit（单系统）需要另配计算机 201914 PCM（泵控制器） 1
配套四：低压梯度系统
部件号 部 件 名 称 数量
062710 600 泵
1
024838 Rheodyne 7725 进样器（600用） 1 086344 Nova-Pak 碳18柱 1
M650非金属蛋白提纯系统 2487双通道可调波长紫外检测器 088352 081110 040307 725000126 725000142 081157 081158
650的自选部件：
SE120 双笔记录仪 Waters馏份收集器 II 馏份收集器的切换阀（可选件） 2487惰性池 2487半制备池（作制备时用） 离子交换柱（HR：DEAE/SP/Q/CM） 凝胶柱（分子量不同）