透射电镜标本制备方法
透射电镜生物样本制备流程及注意事项
透射电镜生物样本制备流程及注意事项透射电镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种使用电子束而不是光束进行成像的显微镜。
它可以提供高分辨率的图像，因此被广泛应用于生物样本的观察和研究。
然而，由于其特殊的工作原理和生物样本的复杂性，透射电镜生物样本的制备过程需要注意一些关键的步骤和细节。
下面将逐步介绍透射电镜生物样本制备流程及注意事项。
一、样品固定1.选择合适的固定剂：固定剂的选择应根据所研究的样本类型和要观察的细胞结构而定。
常用的固定剂包括戊二醛（glutaraldehyde）、乙酰化亚胺（acrolein）、纤维蛋白素（formaldehyde）等。
2.采取合适的固定时间和固定温度：固定时间和温度应根据固定剂的要求和样本的特性进行优化。
通常情况下，固定时间为数小时至数天，温度在4℃至25℃之间。
3.注意透射电镜样品的固定深度：样品应保持较小的厚度以便透射电子束的穿透。
二、样品剖解1.剖解细胞膜：通常采用超声波振荡或冷冻断裂等方法来剖解细胞膜。
超声波振荡可用于含有细胞膜的细胞或组织，而冷冻断裂则适用于脆弱细胞和膜脂体系。
2.剖解细胞核：利用离心裂解法可以将细胞核分离出来。
离心裂解可分为机械法和渗透法两种，机械法利用高速离心的作用将细胞核分离，而渗透法则是通过渗透剂将细胞核溶胀并破碎。
三、样品固化1.脱水：样品在固定后需要进行脱水处理，以便在后续的步骤中更好地渗透和浸透。
常用的脱水剂有乙醇、丙酮和乙醚等，脱水过程往往需要进行多次重复。
2.浸透：在脱水后，样品需要在树脂中进行浸透，使其固化为坚硬的样品。
通常采用环氧树脂或比较稳定的丙烯酸树脂来进行浸透。
这一步骤通常需要较长时间，如数小时甚至数天。
3.树脂填充：浸透后的样品需要在模具中进行树脂填充，并在适当的温度下进行固化。
树脂填充的过程需要注意排除气泡和避免过度填充。
四、样品切片1.选择合适的切割工具和方法：样品通常使用切片机和切片刀进行切割。
细菌透射电镜样品制备方法
细菌透射电镜样品制备方法
细菌透射电镜样品制备可参考以下步骤：
1. 将适量无菌水加入生长良好的细菌斜面内，用吸管轻轻拨动菌体制成菌悬液。
2. 用无菌滤纸过滤菌悬液，并调整滤液中的细胞浓度为10^8-10^9个/毫升。
3. 取等量的上述菌悬液与等量的2％的磷钨酸钠水溶液混合，制成混合菌悬液。
4. 用无菌毛细吸管吸取混合菌悬液滴在铜网膜上。
5. 经3-5分钟后，用滤纸吸去余水，待样品干燥后，置低倍光学显微镜下检查，挑选膜完整、菌体分布均匀的铜网。
细菌透射电镜样品制备的方法还有很多，具体步骤可能因细菌的种类和实验需求而有所不同。
透射电镜样本的制备
喷雾法： 将染色液和悬液样品等量混合，用特制的
喷雾器喷到有膜的铜网上，待干后可用于电镜观察。 喷雾法的优点是雾滴较小，分布均匀，不易凝结成块。 但操作较麻烦，溶液混合时易产生沉淀，并且需要耗 费较多的样品和染色液，尤其容易造成病毒扩散，故 此法不常用。
漂浮法 ：先将带有支持膜的铜网在悬液样品的液滴 上漂浮(有支持膜的那面向下)，然后再在负染色液的 液滴上漂浮。在漂浮期间，样品和染色液被吸附在铜 网的支持膜上，漂浮时间与悬滴法相近。
负染
阴性染色，是相对于普通染色（称正染色）而言。首 先由hall在1955年提出。 Hall在病毒研究中用磷钨酸 染色后，发现图像的背景很暗，而病毒象一个亮晶的 "空洞"被清楚地显示出来。在超薄切片的染色中，染 色后的样品电子密度因染色而被加强，在图像中呈现 黑色。而背景因未被染色而呈光亮，这种染色称为正 染色。而负染色则相反，由于染液中某些电子密度高 的物质(如重金属盐等)"包埋"低电子密度的样品，结 果在图像中背景是黑暗的，而样品像"透明"地光亮。 两者之间的反差正好相反，故称为负染色
H2O
90% 丙酮
15min
100% 丙酮
20min 20min
浸透和包埋
通过脱水剂稀释包埋剂，最终让包埋剂逐渐取代脱水剂， 使其渗透到组织细胞中去
以包埋剂完全浸透到组织内部，经加温逐渐聚合成坚硬的 固体，成为细胞结构的支架，能够承受切片时的各种力的 作用，有利于超薄切片。
丙酮：包埋剂 2：1 丙酮：包埋剂 1：1 纯包埋剂 包埋
5mL 10mL 20mL 30mL 40mL 50mL
2.495 0.62 1.885 0.085 2.57 0.31 2.12 0.085 2.425 0.925 1.65 0.085
透射电镜样品制备步骤
透射电镜样品制备步骤透射电镜是一种重要的材料表征技术，它利用电子的波动性和微粒性来观察材料的结构和性质。
为了能够使用透射电镜观察样品，首先需要对样品进行制备。
透射电镜样品制备步骤如下：1.选择合适的样品：透射电镜样品可以是固体、液体、薄膜或纳米颗粒等。
根据研究目的和样品性质选择合适的样品。
2.样品预处理：根据样品性质的不同，进行必要的预处理。
例如，对于固体样品，可以选择切割、抛光或电解抛光等方法来得到平滑的表面。
3.样品固定：将样品固定到透射电镜样品架上。
不同的样品有不同的固定方法。
例如，对于固体样品，可以使用导电胶将其固定在样品架上。
4.薄层制备：对于厚度过大的样品，需要将其制备成透明的薄层以便透射电镜观察。
常用的方法有机械研磨、电子束刻蚀或离子束刻蚀等。
5.样品清洁：将样品放入超声波清洗机中进行清洗，以去除可能附着在样品表面的杂质或污染物。
6.特殊处理：如果需要对样品进行特殊处理，例如加热、冷冻处理或受到特定环境气氛的影响等，根据需要进行相应的处理。
7.样品干燥：将样品放入真空或氮气环境中，以确保样品干燥。
避免样品受到水汽的污染。
8.获得薄片：使用切片机将固态样品切割成适当厚度的薄片。
为了获得高质量的薄片，可以选择特殊的切片工具和技术，例如离子束切片或低速钻磨切片。
9.薄片形状整理：使用不同的研磨和抛光方法，将薄片的形状和表面进行调整，以确保样品的平滑度和一致性。
10.网格制备：将薄片粘贴在透射电镜网格上。
网格可以增强样品的稳定性和保护，同时提供用于定位和标识的标记。
11.后续处理：根据研究目的和透射电镜分析的要求，可以对样品进行进一步处理。
例如，可以进行染色、脱膜、溅射或腐蚀等处理。
以上是透射电镜样品制备的一般步骤。
不同样品和研究目的可能会有所不同。
因此，根据具体的研究需求和样品特点，制备过程可以做相应的调整和优化。
透射电镜生物样品制备步骤
透射电镜生物样品制备步骤
一．取材：
组织块小于1立方毫米
二．固定：
2.5%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗15分三次
1%锇酸固定液固定2-3小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗15分三次
三．脱水：
50%乙醇15-20分
70%乙醇15-20分
90%乙醇15-20分
90%乙醇90%丙酮（1：1）15-20分
90%丙酮15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮室温15-20分三次
四．包埋：
纯丙酮+包埋液（2：1）室温3-4小时
纯丙酮+包埋液（1：2）室温过夜
纯包埋液37度2-3小时
五．固化：
37度烘箱内过夜
45度烘箱内12小时
60度烘箱内48小时
六．超薄切片机切片70 nm
七．3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
八．透射电镜JEOL JEM-1230（80KV）观察。
拍片。
透射电镜制样方法
透射电镜制样方法
透射电镜制样方法主要包括以下步骤：
1. 样品制备：首先需要选择合适的样品，并进行必要的前处理。
根据需要，可以使用传统的金相方法，如切片、打磨和腐蚀等来制备样品；也可以使用更先进的方法，如离子切片、聚焦离子束等来制备样品。
2. 高真空处理：将样品置于高真空环境下进行处理，以去除气体和水分的影响。
这可以通过在真空槽中加热样品、通入惰性气体等方法来实现。
3. 制备薄片：将制备好的样品制备成足够薄的薄片，通常厚度要求在几十纳米至几百纳米之间。
这可以通过使用超薄切片机或聚焦离子束来实现。
4. 电导涂层：为了提高样品的导电性，可以在样品表面涂上金薄层或碳薄层。
这可以通过蒸镀、溅射、离子镀等方法来实现。
5. 透射电镜成像：将制备好的样品放入透射电镜中，调整仪器参数，如加速电压、透镜聚焦等，进行成像。
可以使用像差校正技术、电子衍射等方法来提高成像质量。
需要注意的是，不同样品的制备方法会有一定差异，制备薄片时要注意避免样品的破裂和变形，电导涂层要均匀且致密，成像时要注意样品与探针的相对位置等
细节问题。
此外，透射电镜制样方法还包括一些先进的技术，如原位制备、低温制备、离子减薄等，可以根据需要选择适合的方法进行制备。
透射电镜制样方法
透射电镜制样方法
透射电镜制样是实验室中极为重要的一项技术操作，它将不同结构和尺寸的样品细粒度地进行分离，使之适应望远镜进行观察。
目前实验室高等学校科研都广泛运用透射电镜进行材料研究。
透射电镜制样大致可分为以下步骤：
1.准备样品：将细分的材料（如金属、碳、化学物质等）放在石英板上，以保证材料表面光滑。
2.制备标本：用刮子将样品按一定密度均匀地刮到石英板上制备出一个标本，再在标本表面进行抛光，使标本表面光滑，并保证其大小和厚度圆滑兼容。
3.金相分析：将抛光的标本放在金相检测仪上，通过金相范式素材库，自动检测标本的组成成分，较快准确得出有关分析结果。
4.涂覆镜片：将样品夹在两个玻璃挡板间，倒入特殊的样品涂覆液，将两片玻璃挡板缓慢压缩，使涂覆液平稳均匀地涂覆到样品表面，以形成镜片。
5.放入电镜：将涂覆后的样品放入透射电镜，并用调节电源选择对应的廓线调节器，即可通过连续的廓线选择实现不同的形状的样品的聚焦。
6.观察分析：在放大可视屏上观察样品，然后拍照或录制，以便进一步分析。
以上就是透射电镜制样的大致步骤，制备一个完美样品需要仔细操作，技术人员必须熟悉此项技术操作，并结合实际材料和实验步骤多次实践，以达到良好的实验效果。
透射电镜样品制备方法及优缺点
透射电镜样品制备方法及优缺点
透射电镜样品制备主要分为两步，即液体/固体样品处理和超薄切片制备。
1、液体/固体样品处理
第一种方法是基于普通电镜样品制备的双步处理法，即第一步用电子束处理样品表面，使其导电，再经过透射电子束进行处理。
在这种方法下，样品表面层只有几百到几千纳米厚，因此，只有比较薄的样品才能够得到满意的结果。
另一种方法是采用高真空下的固态电子涂覆，即将样品表面涂覆上薄层特殊金属。
例
如可以用铱、金、铂或其它金属的熔合物作为涂层，以获得特殊的涂层电导能力，从而保
证样品的电子图像分辨率和可视深度。
2、超薄切片制备
超薄切片制备分为超声切片和非超声切片两类。
超声切片通常是采用高能量超声波振
荡使容易被劈开的液体/固体样品形成自发非规则薄片，有时还可以加入一定量的碎薄片，从而使超声对样品的透射变的更容易，提高了结果的准确性。
非超声切片制备则采用比较稳定的技术来实现，如钻石刀片切割、钝型刀制备和原子
力显微镜焦点束来制备，具有薄层切片准确厚度的特点，且可以满足多层次数据获取。
优点：
1、透射电镜样品制备要求低，可以在常规实验室条件下完成，便于实验和分析；
2、采用精确远离样品表面的电子束，使放大比例高，且能够获得更高的分辨率和更
深的可视深度；
3、三维结构复杂的物质可以藉由采用不同的金属包覆来进行分析；
1、制备过程繁琐复杂，容易出现样品分析结果不精确的情况；
2、物质表面多层次结构信息分析难度大，可能会影响分析结果准确性；
3、结构深度较大时，获取信息较困难，分析效果受到影响。
简述透射电镜中样品制备的常用方法
简述透射电镜中样品制备的常用方法一、引言透射电镜是一种非常重要的材料表征工具，可以用来观察材料的微观结构和成分。
在进行透射电镜实验时，样品制备是非常关键的一步。
本文将介绍透射电镜中样品制备的常用方法。
二、样品制备前的准备工作在进行透射电镜实验之前，需要进行一些准备工作。
首先，需要选择合适的样品，通常需要具有高度纯度、均匀性和结晶度。
其次，需要选择合适的切片方法和切片仪器。
最后，在进行样品制备之前，需要对仪器进行检查和校准。
三、传统切片法传统切片法是最常见的一种样品制备方法。
该方法主要包括以下步骤：1.将样品固定在金属网格上。
2.使用超声波清洗器将金属网格浸泡在去离子水中清洗干净。
3.使用细针将金属网格放置在相应位置。
4.使用玻璃棒将金属网格压入薄膜中，并使其平整。
5.使用细针或玻璃棒将薄膜剪成小块。
6.使用切片机将薄膜切成适当大小的样品。
7.将样品放置在透射电镜上进行观察。
四、离子切割法离子切割法是一种比传统切片法更先进的样品制备方法。
该方法主要包括以下步骤：1.将样品固定在金属网格上。
2.使用超声波清洗器将金属网格浸泡在去离子水中清洗干净。
3.使用离子束磨削仪对样品进行加工处理，得到一块平整的样品表面。
4.使用离子束切割仪对样品进行切割，得到纳米级别的薄片。
5.将薄片放置在透射电镜上进行观察。
五、焦电流加工法焦电流加工法是一种新型的样品制备方法。
该方法主要包括以下步骤：1.将样品固定在金属网格上。
2.使用超声波清洗器将金属网格浸泡在去离子水中清洗干净。
3.使用焦电流加工仪对样品进行加工处理，得到高质量的薄片。
4.将薄片放置在透射电镜上进行观察。
六、结论样品制备是透射电镜实验中非常关键的一步。
传统切片法、离子切割法和焦电流加工法是常用的样品制备方法。
在进行样品制备之前，需要进行充分的准备工作，选择合适的样品和切片仪器，并对仪器进行检查和校准。
通过合理选择样品制备方法，可以得到高质量的样品，并为后续实验提供可靠的数据支持。
实验十二、透射电镜标本制备方法
多用双固定：戊二醛+四氧化锇(两步或一步)
块不能太大〈1mm立方
固定液=固定剂+缓冲液 缓冲液：维持pH, 渗透压
0.1M磷酸缓冲液（PB）
固定剂浓度： 戊二醛（GA）：3%（ 0.1M PB ） 四氧化锇(锇酸):1% （ 0.1M PB ） 多聚甲醛（FA）:4% （ 0.1M PB ） 2.5%戊二醛+2%多聚甲醛（ 0.1M PB ） 1%戊二醛+1%四氧化锇（ 0.08M PB ）
固定方法（迅速）：
原位固定 （一些不便于迅速摘取的组织）
灌流固定后取材（通过血液循环的途径将固 定液引入到要固定的组织中，适用于离体后 会变形变性的组织，例如肺泡，对缺氧比较 敏感的脑组织等，注意选择最短的循环途径）
取材后固定
• [小]，[冷]， [快]
• 将动物麻醉或急性处死，暴露所需器官 • 剪取小块组织，放在预先冷却的固定液中 • 在洁净纸片上滴一滴冷却的固定液，取出组
• dd水中冲洗
• *在冲洗液中可存放1~2周，但每周至少换一次 液（在固定液中长放易脆）
• *经GA固定后膜还有一定的渗透作用，在经锇 酸固定后就没有了
• *清洗要充分（GA与锇酸会产生微细沉淀，一 般两个固定液间更换两次冲洗液后第三次过夜； 锇酸与乙醇会产生微细沉淀）
2 脱水
• [目的]去除样品中的水，为包埋剂（非水 溶性）的均匀浸透做准备
胶囊中
包埋剂
1C 胶囊中
*不要加盖 *R.T.下干燥器中可保存相当长时间
4 修块与切片
0.1*0.1mm 90度 梯形
• 玻璃刀（现做现用，20-30片） • 钻石刀 • 切片机的工作原理：
金属膨胀杆 • 切片厚度与颜色
透射电镜标本制备方法
透射电镜样品制备方法透射电镜的样品制备方法，需要经过取材、固定、脱水、渗透、包埋聚合、切片及染色等步骤。
一．取材的基本要求组织从生物活体取下后，如果不立即进行适当处理，会由于细胞内部的各种酶作用，出现细胞器自溶现象。
因此，为了细胞结构尽可能保持天然状态，必须做到快、小、准、冷。
（1）动作迅速，组织从活体取下后应在最短的时间内（1分钟内）投入2.5%戊二醛固定液。
（2）所取组织的体积要小，一般不超过1mm*1mm，取样形状为牙签状。
也可将组织修成1mm*1mm*2-5mm大小长条形。
因为固定剂的渗透能力较弱，组织块如果太大，块的内部将不能得到良好的固定。
（3）机械损伤要小，解剖器械应锋利，操作宜轻，避免牵拉、挫伤与挤压。
推荐使用手术刀或双面刀片。
（4）操作最好在低温（0℃—4℃）下进行，以降低酶的活性，防止细胞自溶。
（5）取材部位要准确。
切片窗小于1mm*1mm，如取样带有太多的多余组织，可能造成你需要的部分刚好被修掉。
二．取材方法（按照自己的样品类型检索）1.动物及人体组织的取材（在冰浴上进行）动物组织的取材，应麻醉（1%戊巴比铵5 ml/kg体重腹腔注射）或断头急性处死，解剖出所需器官。
用手术刀切割取一小块组织，放在干净的硬质板上（例如培养皿底部），滴一滴冷却的固定液。
用新的、无油污的锋利双面刀片将材料切成大约1 mm宽，3~5 mm长的小块并从中选出受损伤较小的小条（牵拉损伤将直接破坏组织，切取时刀片下压，不要来回拉锯），用牙签将这些小块逐一放入盛有预冷的、新鲜固定液的1.5 ml管内，放入冰箱冷藏室低温固定（0~4℃）4小时或以上。
*固定结束后，将固定液用磷酸盐缓冲液稀释三倍，样品于该溶液中在4℃冰箱保存。
送样前请用磷酸盐缓冲液于4度冰箱浸泡清洗15 min，共3次，做好标记送至电镜室。
送样请使用2 ml离心管，用记号笔在离心管管壁上写好编号，用透明胶带缠绕。
后续管子会接触丙酮和乙醇，一定要用透明胶带缠绕，以防记号被洗掉。
简述透射电镜中样品制备的常用方法
透射电镜中样品制备的常用方法透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，TEM）是一种重要的高分辨率显微镜，常用于研究物质的微观结构和性质。
在使用透射电镜观察样品之前，需要对样品进行制备，以确保样品的质量和形貌。
本文将介绍透射电镜中常用的样品制备方法，包括样品的选择、切片制备、薄膜制备等。
1. 样品的选择在进行透射电镜观察之前，样品的选择非常重要。
通常，样品需要满足以下要求：•样品具有一定的透明度，能够让电子束穿透。
•样品存在较为稳定的晶体结构，以便进行晶体学分析。
•样品的尺寸合适，不过大以免超出透射电镜的观察范围。
•样品的形状和厚度需适合观察操作。
常见的样品包括金属、有机物、无机晶体、陶瓷和生物样品等。
2. 切片制备透射电镜观察样品的常用方法之一是制备薄片，即切片制备。
切片制备的目的是将样品制备成适合透射电镜观察的薄片，通常要求薄片的厚度在几百纳米到几微米之间。
切片制备的步骤如下：步骤1：固定样品对于生物样品，首先需要将样品固定。
常用的固定方法包括冷冻固定、化学固定和凝胶固定等。
这些方法可以保持样品原有的结构和形态。
步骤2：取样从固定的样品中取出小块样品，通常使用显微针或者显微刀进行操作。
步骤3：去脂处理（可选）对于脂肪含量较高的样品，需要进行去脂处理。
常见的方法包括冷冻去脂、溶液去脂等。
步骤4：嵌培将取样得到的样品嵌入切片中，嵌培有多种方法。
常用的方法包括：冷冻嵌培、树脂嵌培等。
步骤5：切割将嵌培好的样品进行切割。
切割时需要使用马来酸酐刀或者超薄刀，在适当的位置进行切割，得到适合的样品。
步骤6：收集和保护薄片将切割好的薄片收集并放置在适当的载玻片或网格中，然后进行保护。
保护可以使用丙酮或乙醇进行漂洗、涂层等方法。
3. 薄膜制备除了切片制备外，透射电镜观察样品的另一种常用方法是薄膜制备。
相对于切片制备，薄膜制备更加灵活，可以制备更薄的样品。
薄膜制备的步骤如下：步骤1：样品制备制备需要制备的样品，并确保样品的表面较为光滑。
纳米材料透射电镜样品制备方法
纳米材料透射电镜样品制备方法
制备纳米材料透射电镜样品是一项复杂的过程，需要精密的操
作和合适的设备。
以下是一种常见的制备方法：
1. 样品准备，首先，需要选择合适的纳米材料，例如金属纳米
颗粒或纳米结构的半导体材料。
然后，将样品分散在适当的溶剂中，如乙醇或丙酮，以获得均匀的分散液。
2. 标本制备，将分散的纳米材料溶液滴在碳膜覆盖的透射电镜
网格上。
通过自然干燥或者较低温度的热处理，使样品均匀地分布
在网格上，并且避免聚集和团聚。
3. 真空干燥，将样品置于真空中进行干燥，以去除溶剂和任何
可能的残留物，确保样品的纯净度和稳定性。
4. 透射电镜观察，将制备好的样品放入透射电镜中进行观察。
在观察之前，通常需要使用离子束或者溅射技术制备悬臂梁样品，
以确保样品的薄度和透明度。
此外，还有一些其他的制备方法，如冷冻切片法、离子磨薄法
等，可以根据具体的样品特性和研究需求选择合适的方法。
在制备过程中，需要注意样品的稳定性和纯净度，避免杂质的引入和样品的变形。
同时，也需要根据透射电镜的要求，调整样品的厚度和形貌，以获得清晰的观察结果。
总的来说，纳米材料透射电镜样品的制备是一个细致而关键的步骤，对于后续的观察和分析具有重要意义。
透射电镜的制样方法
形貌的细节特征。 • 常用的复型材料是对电子束透明的薄膜——非晶碳膜、各种塑料薄膜和氧化物薄
膜）。
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三、间接样品(复型)的制备
• 在电镜中易起变化的样品和难以制成薄膜的试样采用此方法. • 表面显微组织浮雕的复型膜，只能进行形貌观察和研究，不能研究试样的成分
分布和内部结构。
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复型的种类
• 按复型的制备方法，复型主要分为：
•
一级复型
•
二级复型
•
萃取复型（半直接样品）
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电解双喷 1 。 电 解 双 喷 时 ， 一 般 要 进 行 冷 却 ， 常 用 液 氮 加 酒 精 的 方 法 来 冷 却 ， 尤 其 是 钢 铁 材 料 ， 必 须 冷 却 ， 而 且
最好用液氮。 2。电解双喷时，要调好电流和电压的值，只有电流和电压的值处于电解抛光的平台时，才能制造出好
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粉末（纤维）样品的断面
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2. 晶体薄膜样品
• 块状材料多采用此方法。 • 通过减薄制成对电子束透明的薄膜样品。 • 薄膜样品制备方法要求： ①薄膜样品的组织结构必须和大块样品相同，且制备过程中不引起材料组织的变
化。 ② 薄，相对电子束而言必须有足够的“透明度”，且避免薄膜内不同层次图像的
重叠，干扰分析。 ③ 具有一定的强度。
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晶体薄膜法
• 薄膜样品制备步骤： ① 切取：切取薄块（厚度<0.5mm） ② 预减薄：用机械研磨、 Dimpling、化学抛光等减薄成“薄片”（0.1mm） ③ 终减薄：用电解抛光、离子轰击减薄成“薄膜”（<500nm）（视材料而
透射电镜的制样方法
透射电镜的制样方法一、超薄切片法。
1.1 取材。
这可是制样的头一遭，就像盖房子打地基一样重要。
取材的时候得特别小心，要选取咱们感兴趣的部位。
这部位得有代表性啊，不能瞎取。
比如说研究细胞结构的，就得找到细胞长得好、特征明显的那块组织。
而且动作要快，就像抢红包似的，手慢无。
为啥呢？因为组织一旦离开生物体，就开始发生变化了。
1.2 固定。
固定这一步可不能含糊。
就像给组织“定个型”，让它保持生前的状态。
通常会用到化学固定剂，像戊二醛啥的。
把组织泡在里面，就像把东西放在保险柜里一样，稳稳当当的。
这一步要是没做好，后面的观察就全乱套了，那可就是“一着不慎，满盘皆输”。
1.3 脱水。
脱水就像给组织“脱衣服”，把水分一点一点去掉。
用的是一系列不同浓度的乙醇或者丙酮。
这个过程得循序渐进，不能操之过急，不然组织就会被破坏。
这就好比爬山，得一步一个脚印，急不得。
1.4 浸透与包埋。
浸透呢，就是让包埋剂慢慢渗到组织里。
包埋就像给组织做个“小房子”，把它保护起来。
常用的包埋剂有环氧树脂之类的。
这一步就像给宝贝裹上一层保护膜，得仔仔细细的。
1.5 超薄切片。
这可是个精细活，切片要薄得像蝉翼一样。
用超薄切片机来切，切的时候得全神贯注，稍有不慎就会前功尽弃。
切出来的片子就像一片片小雪花，又薄又脆弱。
二、负染法。
2.1 样品准备。
先把要观察的样品处理好，比如说提纯之类的。
这就像把菜洗干净，准备下锅一样。
得把杂质去掉，让咱们想看的东西“干干净净”地呈现出来。
2.2 负染。
用重金属盐溶液来进行负染。
这就像给样品穿上一件深色的“衣服”，让它在电镜下更明显。
染的时候要控制好量，多了少了都不行，就像炒菜放盐，得恰到好处。
三、冷冻制样法。
3.1 冷冻固定。
直接把样品快速冷冻，让它瞬间定格。
这就像给样品来了个“急冻魔法”。
这样能最大程度地保持样品的原始状态，避免化学固定带来的一些变化。
3.2 冷冻超薄切片。
在冷冻的状态下进行超薄切片。
这可不容易，就像在冰上雕刻一样，需要特殊的设备和技术。
透射电镜样品制备
透射电镜样品制备引言透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope, 简称TEM)是一种非常强大的高分辨率成像技术，可以用于观察材料的结构和组织，以及研究纳米级别的材料特性。
在使用TEM进行实验之前，必须制备一种称为透射电镜样品的特殊样品。
透射电镜样品制备的关键是制备出足够薄的样品，以便电子可以通过样品而不会被散射或吸收。
本文将介绍透射电镜样品制备的常用方法和步骤。
方法1. 切割样品透射电镜样品通常需要从大块的材料或器件中切割出来。
首先，选择合适的切割工具，如金刚石刀片或钨丝刀，以确保能够切割出薄片。
然后，将待切割的材料固定在切割台上，并将其固定好。
使用切割工具沿着所需的方向切割材料，控制切割角度和速度，制备出较薄的样品。
2. 技术腐蚀技术腐蚀是一种常用的透射电镜样品制备方法，可以在保持样品形状和结构的情况下，去除样品表面的杂质。
首先，将样品放置在腐蚀液中，如酸性或碱性溶液中。
然后，根据所需的腐蚀速率和选择的溶液，控制腐蚀时间，使材料的表面逐渐溶解。
腐蚀完成后，取出样品并用纯水冲洗，最后用热空气干燥。
3. 离心旋涂法离心旋涂法是一种常用的制备透射电镜样品的方法，适用于制备薄膜和纤维样品。
首先，将待制备的样品溶液或悬浮液滴在旋涂机的旋盘中心。
然后，启动旋涂机，使旋盘高速旋转。
在旋涂过程中，液体会在旋盘边缘形成薄膜或纤维，而溶剂则会挥发掉。
当样品完全干燥后，取出样品即可。
4. 离子磨蚀离子磨蚀是一种制备透射电镜样品的高级方法。
它可以控制样品的厚度和形状，并在其表面形成平坦的区域。
首先，将样品放置在磨蚀仪中，并选择合适的离子束参数。
然后，启动磨蚀仪，使离子束磨蚀样品表面。
通过控制磨蚀时间和离子束能量，可以获得所需的样品厚度和表面平整度。
结论透射电镜样品制备是进行TEM实验的关键步骤之一。
通过选择合适的方法和技术，可以制备出足够薄的样品，以便电子能够透射而不被散射或吸收。
透射电镜常规样品制备流程
透射电镜常规样品制备流程
透射电镜是电子显微镜技术中最重要的一种技术，普通晶体样品的常
规样品制备流程如下：
1、样品的准备：将样品、水、石蜡、助融剂(如NaCl)、磷酸盐、石墨、甲醛和电子源材料(碳粉)准备好备用，并配合温度控制装置使用。
2、样品处理：将样品用接近样品发热点的温度处理，一般为200?C，把样品放入室温保温的石蜡，再将该石蜡分别放入不同的温度槽，如助融
剂的温度可以高于样品放置温度。
3、镀膜：将样品放置在硝酸银或碳材料的固体膜下，镀膜时，将碳
气体经过电子枪加热，形成形状与原子相同的表面。
4、结晶：首先需要将样品放置在一定温度和压力下，进行结晶，再
将研磨剂如磷酸盐、石墨和水添加到样品中，使样品迅速结晶，并在腔内
升温至合适温度，加快结晶过程。
5、夹具的清洗：在滴定液中加入抗蚀剂，夹具进行清洗，确保样品
无几何不良影响。
6、取晶体：用软金属夹具取出晶体，放在清洗过的滴定液中浸泡，
以使样品重新渗透，然后将样品放入滴定液腔中，进行滴定，使样品表面
无污染物。
7、安装样品：用金刚石夹具将样品安装在金刚石台子上，并将其固定，以保证样品的准确安装。
tem透射电镜的样品制备方法
tem透射电镜的样品制备方法TEM（透射电子显微镜）是一种高分辨率的显微镜，可以观察到物质的微观结构和原子级的细节。
TEM样品的制备是获取高质量TEM图像的关键步骤之一、下面将介绍一些常用的TEM样品制备方法。
1.机械切片法:通过将所研究物质切片成非常薄的片，以便电子束能够透过样品。
这种方法适用于硬材料或质地坚硬的样品。
首先，使用机械工具（如剪刀）或精密切割仪来制备尺寸较小的薄片。
随后，使用刮刀等工具，将薄片轻轻地转移到透明的TEM样品网格上。
最后，用气吹干净样品，并使用显微镜检查成果。
2.离心沉淀法:使用这种方法，可以制备到具有较大颗粒的样品。
首先，将所研究的材料分散在适当的溶剂中，并用超声波处理来消除聚集物。
然后，使用离心机将样品离心，使颗粒沉淀在薄网格上。
最后，将样品干燥，并用透明胶带密封以保持样品稳定。
3.冻脱水法:这种方法适用于液态或可溶性样品。
首先，将样品溶解在适当的溶剂中，然后将溶液滴到一片透明的TEM样品网格上。
接下来，将样品迅速冷冻，使其形成冻结状态，并使用真空甚至液氮将水从样品中去除。
最后，将样品干燥，并用透明胶带密封以保持样品稳定。
4.薄膜制备法:对于一些材料，可以通过溅射、蒸镀、离子束制备等方法制备薄膜样品。
这种方法适用于需要研究材料的表面结构和形貌的情况。
通过这些技术，可以在TEM样品网格上制备出具有亚纳米尺寸的薄膜。
无论使用哪种方法，请确保样品制备过程中防止氧化或其他污染物的入侵，以保持样品的原始状态。
此外，制备过程中的轻柔操作以及对透明度的注意，也是获得高质量TEM样品的关键。
最后，使用TEM显微镜观察样品前，确保样品在真空或干燥的环境中，以避免图像的模糊或扭曲。
透射电镜样品制备方法
透射电镜样品制备方法透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种利用电子束穿透样品而观察样品结构的高分辨率显微镜。
为了获得高质量的透射电子显微镜图像，样品制备是非常重要的一步。
下面将介绍几种常见的透射电镜样品制备方法。
1.薄片制备法：薄片制备法是最常用的透射电镜样品制备方法之一、首先，将待观察的材料切割成薄片，通常使用切片机或者离心切片机进行切割。
然后，将薄片放置在网格上，并用显微镊夹持住。
接下来，使用离心机将网格和薄片一起离心，以去除多余的液体。
最后，将网格放入透射电镜中进行观察。
2.离解法：离解法适用于那些不易制备成薄片的样品。
首先，将待观察的样品制备成溶液或者悬浮液。
然后，将溶液滴在碳膜覆盖的网格上。
接下来，使用离心机将网格和溶液一起离心，使溶液在网格上均匀分布。
最后，将网格放入透射电镜中进行观察。
3.冻结法：冻结法适用于那些需要观察生物样品或者水溶液的样品。
首先，将待观察的样品制备成溶液或者悬浮液。
然后，在液氮中冷冻样品，使其迅速冻结成冰。
接下来，使用离心机将冰冻样品离心，以去除多余的液体。
最后，将网格放入透射电镜中进行观察。
4.脂溶法：脂溶法适用于那些不溶于水的样品。
首先，将待观察的样品制备成脂溶液。
然后，将脂溶液滴在碳膜覆盖的网格上。
接下来，使用离心机将网格和脂溶液一起离心，使脂溶液在网格上均匀分布。
最后，将网格放入透射电镜中进行观察。
除了以上几种常见的透射电镜样品制备方法，还有一些特殊的方法，如原位制备法、离子切割法等。
这些方法可以根据实际需求选择使用。
总结起来，透射电镜样品制备是透射电子显微镜观察样品结构的关键步骤。
合适的样品制备方法可以保证获得高质量的透射电镜图像。
不同的样品制备方法适用于不同类型的样品，研究人员可以根据实际情况选择合适的方法进行样品制备。
透射电镜样品制备方法
透射电镜样品制备方法透射电镜（Transmission Electron Microscope，TEM）是一种能够观察物质内部微观结构的高分辨率显微镜，广泛应用于材料科学、生物学、纳米技术等领域。
而透射电镜样品的制备质量直接影响到后续的观察结果。
因此，制备高质量的透射电镜样品至关重要。
下面将介绍一些常用的透射电镜样品制备方法。
首先，对于生物样品的制备，常用的方法是冷冻切片技术。
这种方法能够保持生物样品的原始结构，避免了传统化学固定和脱水过程中可能引起的伪形态。
在冷冻切片过程中，样品被快速冷冻，并在低温下切割成极薄的切片，然后通过透射电镜观察。
这种方法适用于观察生物细胞、组织等样品。
其次，对于材料样品的制备，常用的方法是机械切割和离子蚀刻。
机械切割是指利用超薄切片机或离心切片机将材料切割成极薄的切片，然后通过透射电镜观察。
而离子蚀刻则是利用离子束对材料进行加工，形成极薄的样品。
这两种方法适用于观察金属、陶瓷、半导体等材料样品。
另外，对于纳米材料的制备，常用的方法是原位制备技术。
这种方法通过在透射电镜下直接在样品表面进行原位制备，如原位成膜、原位合成等，可以观察到纳米材料的生长过程和结构特征。
这种方法适用于观察纳米颗粒、纳米线、纳米片等样品。
总的来说，透射电镜样品的制备方法多种多样，选择合适的制备方法需要根据具体样品的性质和要求来确定。
在制备过程中，需要注意样品的预处理、切割、薄化等步骤，确保样品的质量和结构完整。
通过精心制备的透射电镜样品，可以获得清晰、准确的观察结果，为后续的科研工作提供可靠的数据支持。
在透射电镜样品制备过程中，还需要注意操作规范、安全防护等问题，确保实验过程安全可靠。
同时，不同样品的制备方法可能存在差异，需要根据具体情况进行调整和改进。
希望本文介绍的透射电镜样品制备方法能够为相关科研工作者提供一些参考和帮助，促进透射电镜技术的应用和发展。
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透射电镜样品制备方法
透射电镜的样品制备方法，需要经过取材、固定、脱水、渗透、包埋聚合、切片及染色等步骤。
一．取材的基本要求
组织从生物活体取下后，如果不立即进行适当处理，会由于细胞内部的各种酶作用，出现细胞器自溶现象。
因此，为了细胞结构尽可能保持天然状态，必须做到快、小、准、冷。
（1）动作迅速，组织从活体取下后应在最短的时间内（1分钟内）投入2.5%戊二醛固定液。
（2）所取组织的体积要小，一般不超过1mm*1mm，取样形状为牙签状。
也可将组织修成1mm*1mm*2-5mm大小长条形。
因为固定剂的渗透能力较弱，组织块如果太大，块的内部将
不能得到良好的固定。
（3）机械损伤要小，解剖器械应锋利，操作宜轻，避免牵拉、挫伤与挤压。
推荐使用手术刀或双面刀片。
（4）操作最好在低温（0℃—4℃）下进行，以降低酶的活性，防止细胞自溶。
（5）取材部位要准确。
切片窗小于1mm*1mm，如取样带有太多的多余组织，可能造成你需要的部分刚好被修掉。
二．取材方法（按照自己的样品类型检索）
1.动物及人体组织的取材（在冰浴上进行）
动物组织的取材，应麻醉（1%戊巴比铵5 ml/kg体重腹腔注射）或断头急性处死，解剖出所需器官。
用手术刀切割取一小块组织，放在干净的硬质板上（例如培养皿底部），滴一滴冷却的固定液。
用新的、无油污的锋利双面刀片将材料切成大约1 mm宽，3~5 mm长的小块并从中选出受损伤较小的小条（牵拉损伤将直接破坏组织，切取时刀片下压，不要来回拉锯），用牙签将这些小块逐一放入盛有预冷的、新鲜固定液的
1.5 ml管内，放入冰箱冷藏室低温固定（0~4℃）4小时或以上。
*固定结束后，将固定液用磷酸盐缓冲液稀释三倍，样品于该溶液中在4℃冰箱保存。
送样前请用磷酸盐缓冲液于4度冰箱浸泡清洗15 min，共3次，做好标记送至电镜室。
送样请使用2 ml离心管，用记号笔在离心管管壁上写好编号，用透明胶带缠绕。
后续管子会接触丙酮和乙醇，一定要用透明胶带缠绕，以防记号被洗掉。
2.体外培养细胞的取材（在冰浴上进行）
培养在培养瓶中的细胞取材时，先倒出培养液，用磷酸盐缓冲液清洗培养皿后使用胰酶消化（注意消化程度不可太过），轻轻收集细胞，将悬液转移到离心管中，离心机4℃低速离心（2000转/分）10分钟，使细胞聚成团块，弃去上清，沿壁小心加入新鲜的固定液。
保持细胞成团状态，于4℃冰箱中固定，如细胞团体积大于15 ul，固定30 min后用注射器针头将细胞团挑离管壁，可将大团细胞划开成小团，因为团块太大会影响
内部固定效果，但是不可挑成弥散状。
原则是必须保证有数个不小于芝麻大小的固体团块，才可以后续操作。
冰箱内固定2-3小时。
*固定结束后，将固定液用磷酸盐缓冲液稀释三倍，样品于该溶液中在4℃冰箱保存。
送样前请用磷酸盐缓冲液于4度冰箱浸泡清洗15 min，共3次，做好标记送至电镜室。
送样请使用2 ml离心管，用记号笔在离心管管壁上写好编号，用透明胶带缠绕。
后续管子会接触丙酮和乙醇，一定要用透明胶带缠绕，以防记号被洗掉。
3.植物组织取材
植物组织的取材比较容易，它的细胞离体后变化不像动物细胞那么迅速，但植物细胞的细胞壁阻碍着固定液的迅速渗透，因此，植物材料的取材宜切成薄片状或牙签状，推荐使用配方为：（多聚甲醛4%和戊二醛2.5%）的固定液，固定过夜。
*固定结束后，将固定液用磷酸盐缓冲液稀释三倍，样品于该溶液中在4℃冰箱保存。
送样前请用磷酸盐缓冲液于4度冰箱浸泡清洗15 min，共3次，做好标记送至电镜室。
送样请使用2 ml离心管，用记号笔在离心管管壁上写好编号，用透明胶带缠绕。
后续管子会接触丙酮和乙醇，一定要用透明胶带缠绕，以防记号被洗掉。
4.细菌及藻类等样品取材
对于不易成团的样品，需先清洗，加入固定液后吹散，于4℃冰箱中固定2-3小时或者过夜，固定结束后，磷酸盐缓冲
液清洗3次，继续按照文献《琼脂铸模法制备透射电镜样品》（白焕红）内描述方法进行琼脂预固定。
再将琼脂预包埋后的
样品于4℃冰箱中固定过夜。
*固定结束后，将固定液用磷酸盐缓冲液稀释三倍，样品于该溶液中在4℃冰箱保存。
送样前请用磷酸盐缓冲液于4度
冰箱浸泡清洗15 min，共3次，做好标记送至电镜室。
送样请使用2 ml离心管，用记号笔在离心管管壁上写好编号，用透明胶带缠绕。
后续管子会接触丙酮和乙醇，一定要用
透明胶带缠绕，以防记号被洗掉。
磷酸盐缓冲液（三个步骤）
1.磷酸盐缓冲液（0.2M）
甲液：0.2M的磷酸氢二钠溶液乙液：0.2M的磷酸二氢钠溶液
Na2HPO42H2O 35.61g (Na2HPO47H2O) 53.65g (Na2HPO412H2O) 71.64g NaH2PO4H2O 27.60g ( NaH2PO42H2O) 31.21g
加蒸馏水溶解成1000ml 加蒸馏水溶解成1000ml
2. 按下表混合甲、乙两液既得所需pH的0.2M缓冲液（pH值一般为7.4）
0.2M磷酸盐缓冲液的配制
2.将溶液用蒸馏水1：1稀释，则配得0.1M的缓冲液。
改良版琼脂铸膜法：
1．参照之前方法收取藻或细菌，固定清洗后制成高浓度样品悬液备用（一般10 ul固体加入10 ul磷酸盐缓冲液）
2．1.5 ml的EP管，剪下管盖，用剪刀或者烧热的镊子在正中间钻一个圆形小孔，将20ul的枪头插在小孔内，再盖回EP管时，可见枪头在EP管内部悬空，不碰到管壁。
3．向EP管内注入1ml浓度1.5%—2%的热琼脂，盖上第2步做好的管盖，以枪头没入液面下0.5cm为准——如果灌的琼脂少于1ml或者枪头没入太深，会造成后面的操作困难。
完成后放在四度或者室温等待充分凝固。
4．凝固后先小心拔出枪头，可见形成一个小孔，即可开盖使用。
5．用黄枪头把第一步做好的悬液加入小孔内，5000转离心5分钟左右，取出后可见样品沉积在小孔底部，一般有2-3mm深，上方的上清液用剪细的滤纸条吸干，但是尽量不要把纸条插进样品里。
注意，未吸干会造成下一步封口不严。
6．吸干后，用黄枪头吸取100ul热琼脂灌注封口，一次性注入，溢出也没关系，等待冷却。
这个步骤尽量避免在小孔内产生气泡，需要多练习。
7．全部聚合后，取出琼脂块，修切成截面为1.5mm*1.5mm的立方柱。
8．每组样品做2-3个包埋块，做好后4度冰箱内戊二醛固定过夜。
9．按照常规样品进行保存和清洗。