最新院感细菌培养操作教学教材

1.目的: 医院是病原微生物较集中,抵抗力低

的人群密集的地方,加之化疗、放疗等手

段的采用，影响病人免疫机能下降，大量

使用抗生素，引起耐药菌株增多，菌群失

调，以及先进医疗仪器广泛应用等原因，增加消毒灭菌的难度，致使院内感染已成

为当前医疗实践的严重障碍，直接影响医

疗效果。进一步规范院内感染监测标本的

程序，更好、更快检测病原微生物的生长

情况，预防医院感染的发生。

2.设备、试剂与材料

2.1 VITEK 2 compact鉴定药敏分析系统

2.2 VITEK 32鉴定药敏分析系统

2.3美国FORMAⅡ级生物安全柜

2.4显微镜

1编写谭南

审核袁春雷

批准王冬娥

2.5酒精灯

2.6接种环

2.7恒温培养箱

2.8各种培养基

2.9 革兰氏染色液

2.10触酶试剂

2.11氧化酶试剂

2.12移液器

2.13无菌吸嘴

3.院感标本采集

3．1空气的采样

3．1．1采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。

2编写谭南

审核袁春雷

批准王冬娥

3．1．2采样高度与地面垂直高度80-150CM。

3．1．3布点方法室内面积＜30m2，设一条对角线上取三点，即中心一点，两端各距

墙1m处各取一点；室内面积＞30m2，设东、西、南、北、中5点，其中东、西、南、

北点均距墙1m。

3．1．4采样方法用9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后送检。

3．2物体表面采样

3．2．1采样时间选择消毒处理后4小时内进行采样。

3．2．2采样面积被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面＞100cm2，则取100cm2。

3．2．3采样方法用5×5 cm2的标准来灭菌规格板，放在被检物体表面，用无菌规格

3编写谭南

审核袁春雷

批准王冬娥

板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理

盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横

竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样1-4个规格板面积，剪支手接触

部位，将棉拭子放入装10ml采样液的试

管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭

子直接涂抹物体的方法采样。

3．3医护人员手采样

3．3．1采样时间在接触病人、从事医疗活动前进行采样。

3．3．2采样面积及方法被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子一

枝在双手指曲面从指跟到指端来回涂擦

各两次（一只手涂擦面积30 cm2），并随

之转动采样棉拭子，剪去手接触部位，将

棉拭子放入装有10ml采样液的试管内送

4编写谭南

审核袁春雷

批准王冬娥

检。采样面积按平方厘米（cm2）计算。

3．4医疗用品采样

3．4．1采样时间在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。

3．4．2采样方法右用破坏性方法取样的医疗用品，如输液（血）器、注射器和注射

针等，取其中的一部分放培养液中培养。

对不能用破坏性方法取样的特殊医疗用

品，可用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭

子在被检物体表面涂抹采样，被采表面＜

100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。

3．5使用中消毒剂的采集

3．5．1采样时间采取使用中的消毒剂。

3．5．2采样方法在无菌条件下，用无菌注

5编写谭南

审核袁春雷

批准王冬娥

射器抽取1ml被检样品，加入10ml稀释

液混匀。（对于醇类与酚类消毒剂稀释液

用灭菌生长盐水；对于含氯消毒剂、含碘

消毒剂、过氧化物消毒剂，需在灭菌生理

盐水中加入0.1%硫代硫酸钠；对于洗必

泰、季铵盐类消毒剂，需在灭菌生理盐水

中加入3%（w/v）吐温80和0.3%卵磷脂；

对于醛类消毒剂，需在灭菌生理盐水中加

入0.3%甘氨酸；对于含有表面活性剂的各

种消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入3%

（w/v）吐温80，以中和被检样液的残效

作用。）

3．6内镜的采样

3．6．1咽喉镜、支纤镜用10ml戊二醛中和液冲洗内镜后，送检实验室。

3．6．2胃镜、消化镜、宫腔镜用10ml0.1%

6编写谭南

审核袁春雷

批准王冬娥

硫代硫酸钠中和液冲洗内镜后，送检实验

室。

3．6．3鼻咽镜、过氧化氢消毒的腔镜类用10ml生理盐水中和液冲洗内镜后，送检实

验室。

3．7透析液的采样用灭菌的空试管取透析液10ml送检。

4.院感标本的运送及交接签收

4．1标本的采集

4．1．1空气标本的采集由临床科室负责完成，标本采集完毕，由临床各科在规定的时间

内将标本安全送回实验室。

4．1．2物体表面、医务人员手、消毒剂、内镜等由院感科负责组织采样，在规定时间

内将标本安全送达实验室。

7编写谭南

审核袁春雷

批准王冬娥

4．2采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6小时，若样品保

存于0-4℃条件时，送检时间不得超过24

小时。

4．3标本收回实验室后,将标本的信息登记在“院感监测登记本”上。

4．4微生物室工作人员的验收根据微生物室院感标本拒收标准进行检查，对不符合要

求的，将拒收，立即退回给送检人员，指

出问题，告知标本重取，所有拒收标本均

需在《标本拒收记录本》上登记。拒收情

况如下：

4．4．1空气培养平板数目击者不正确（房间小于30平方米做3个平板培养，房间大

于30平方米做5个平板培养）。

4．4．2未注明标本采集科别、来源和培养目

8编写谭南

审核袁春雷

批准王冬娥