气象色谱分析

博士□兽医硕士专业学位□

硕士√农业推广硕士专业学位□

同等学力在职申请学位□中职教师攻读硕士学位□

工程硕士专业学位□高校教师攻读硕士学位□

风景园林硕士专业学位□

（课程名称：气相色谱分析）

学位课□选修课√补修课□

学院专业：生命学院微生物专业

任课教师：蒲鹏

年级姓名：08级刘小云

学号：S081100

1.气相色谱仪测定原理

色谱系统—采用固定相和流动相分离混合物的系统。

气相色谱能分析的物质分为3类：一是气体，比如氯气，二氧化碳，乙烯等；二是易挥发性的液体或者易升华的固体，例如实验室里常用的大部分溶剂；三是可以转化的物质，此类指的是在常温下虽然呈液态或者固态，不容易汽化，但是，经过一定的化学反应以后，可以形成在高温下比较稳定的气态物质。我们称此化学反应为衍生化。例如绝大多数的有机物质，在其碳原子数比较多的时候，一般都沸点比较高，不易挥发，就需要衍生化；甚至有些金属元素，例如部分碱金属，当它们与一定的螯合剂反应以后，产物可以形成高温下比较稳定的气态物质。

不能分析的物质：多肽(蛋白质)；多糖（纤维素，淀粉）；天然和人造大分子物质：橡胶，塑料；不能转化的高沸点物质或者元素。

2.操作步骤

（本实验采用FID检测器，所以操作过程以FID操作规程为例，FID检测器只能测定至少含有C、H两种元素的物质的测定，如甲烷，烃类等。）

1)选择色谱柱—>6～8％DEGS（聚二乙二醇丁二酸酯）2m×3mm。

选择色谱柱分为三种情况：一是查资料——借鉴别人已经发表的文章，前人发表的文章中不但提供了分离目标物质所采用的色谱柱的类型及相关参数，也提供了流动相及温度等参数，可以参考。二是查阅专业书籍，对于有的物质，文章可能查阅不到，在《分析化学手册》第五分册中提供了大量的参考数据和图谱，包括各种常用物质的GC分析参数及温度。三是按照极性对应原则选择色谱柱，即就是强极性物质选择强极性色谱柱，中等极性物质选择中等极性色谱柱，弱极性和非极性物质选择弱极性或者非极性色谱柱。

2)选择检测器—>FID（氢火焰电离检测器，破坏型选择性）

3)把选好的色谱柱接入正确通道—>用色谱柱（方向）把注射室和检测器连接起来，并检查进养口橡胶垫，及时更换。

4)检查气路气密性—>打开所有气体通道（从后往前开），查漏检堵，不漏不堵。

5)通气10～15min—>调节载气流速至适当，排除色谱柱中的空气等杂质气体。

6)检查检测器保护电路和信号输出连接是否正确—>

7)检查并开启电源，运行设置好的参数—>至仪器稳定，色谱柱柱箱门（毛细管柱，填充柱），对于FID还要开启氢气发生器和空气压缩机——点火，——随后进入稳定期（与灵敏度有关，灵敏度越高，稳定期所用时间就越长），具体时间是一个经验值。

8)上样分析

制样：样品处理越简单，系统误差就越小

认识两种微量进样器：（单柱芯微量进样器和双柱芯微量进样器）

润洗：每两个样品之间都要润洗，进样针用完后也要彻底润洗

取样：准确取样

手动进样。

9)识图：纵坐标代表信号的强弱，毫伏mv；横坐标代表时间，分钟min；每个物质都以峰的形式存在。理想状态下，一个色谱峰代表一种物质，但是由于分离条件的限制（检测器的分析范围，固定液的性质，温度等参数），也可能有的色谱峰代表好几个物质，因此，图谱上有多少色谱峰就至少含有多少种物质。溶剂峰——不是每个图谱都有。

定性：利用标准物质定性，碳数规律，双柱定性，保留指数定性等。利用标准物质定性分为单标定性和混标定性。

定量：方法有归一化，校正归一化，单点校正，多点校正（标准曲线法）。

10)关机—>原则：“先入后出”

关闭加热器；

关闭检测器及相关设备；

待注射室和检测器温度接近室温（毛细管，填充）；

关闭主机电源和气源（从前向后关）。

3.样品处理及测定

3.1实验名称:食用油中高级脂肪酸组分分析

3.2测定原理

归一化法：归一化法是把目标物质总量当成1（也就是100％），各个组分在总量中所占百分比的定量方法。归一化法的优点是对操作上的要求不严格，结果仍然比较可靠。特别适合于无法准确定量的物质分析。）

食用油：从动物组织中或植物种籽中提取的以甘油三羧酸酯为主（>97%）的油。另外小于3％的杂质包括：磷脂，脂蛋白，糖脂，甾醇类（胆固醇，谷甾醇），酚（棉酚，生育酚），色素（叶绿素，胡萝卜素），维生素（A,D,E），黄酮（大豆异黄酮），香味物质（芳香族，酯类，萜烯类），甙，游离脂肪酸

游离脂肪酸+甲醇脂肪酸甲酯+水（微量）

甘油三羧酸酯+水< KOH >游离脂肪酸+甘油

游离脂肪酸+甲醇< KOH >脂肪酸甲酯+水

反应达平衡以后，加入去离子水，起到两相萃取的作用，把剩余的底物甲醇、催化剂KOH和其它生成的能溶于水的物质萃取出来，反应就停止了。

3.3实验仪器：

日立663-30型色谱仪，FID（氢火焰电离检测器）

3.4样品处理过程

取1ml苯︰石油醚（1︰1），加入70μl食用油，混匀，加入1ml0.4MKOH－甲醇溶液，混匀，室温反应30min，加入去离子水1～8ml，静置分层，等待上层有机相变得澄清以后取1μl上机分析。

实验的代表性（特殊性）：

取粘稠样品：把吸入推杆推到一档，插入样品中吸入样品要非常缓慢，完全松开推杆，等待一至两分钟，再取出加样枪。移入溶剂中，推出样品操作也要非常缓慢，推至一档，等待一至两分钟，再推至第二档。主要特点是缓慢，保证枪头内壁的样品有充足的滑动时间。

用加样枪取挥发性试剂：先反复吸取几次样液，等枪头内部的挥发性试剂的蒸气压达到饱和，再开始取样，操作同一般操作。

3.5测定结果

苦杏仁高级脂肪酸组分分析报告

打印时间：2009年11月17日，16时49分

进样时间：2009年11月17日，15时40分

打开的谱图文件：D:\HW\training\20091117\20080327-KXR(00003,15;57;56).hw

结果分析：

根据测定结果可以分析出，苦杏仁含有的脂类有：6.62%的 C16:0，44.44%的C18:1，48.93%的C18:2，不饱和脂肪烃的含量高，对人体有利。