4.小鼠骨髓细胞染色体畸变实验
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验四 小鼠骨髓细胞染色体畸变实验
重庆医科大学实验教学管理中心 公共卫生实验教学中心 汪洋
一、实验目的
1.学习骨髓细胞制片技术
2.学习和掌握骨髓细胞染色体畸变测定方法
二、实验原理
同微核
微核在有丝分裂后期滞留在细胞核外的遗传物质 染色源自文库畸变只能在细胞分裂中期相进行观察
三、实验步骤
1.染毒：CP腹腔注射（100mg/kg）一次
2.细胞周期同步化：处死前2-3小时腹腔注射秋水仙碱 400mg/L，4mg/kg 3.取样：双侧股骨→PBS（pH6.8）5ml冲洗骨髓腔→离心 1500rpm/min→弃上清
4.低渗：0.075M KCl6ml,37°c孵育15分钟→加入固定液 1ml预固定1分钟→离心1000rpm/min十分钟，弃上清 5.固定：固定液4ml，37°c孵育20分钟→离心十分钟 （1000rpm/min），弃上清。重复一次步骤5. 6.制片：试管内余下约0.5ml，冰冻玻片滴片，干燥。
7.染色：Giemsa染液染色3分钟。
8.阅片：油镜下计数100个中期相细胞，畸变细胞率
四.注意事项
1.骨骺端
2.滴片：距玻片5-8cm。过低染色体分散不开，过高细胞 破裂 3.低渗：时间过长染色体短胖，不清楚；时间过短染色体 不分开。
Thank You for Your Attention
重庆医科大学实验教学管理中心 公共卫生实验教学中心 汪洋
一、实验目的
1.学习骨髓细胞制片技术
2.学习和掌握骨髓细胞染色体畸变测定方法
二、实验原理
同微核
微核在有丝分裂后期滞留在细胞核外的遗传物质 染色源自文库畸变只能在细胞分裂中期相进行观察
三、实验步骤
1.染毒：CP腹腔注射（100mg/kg）一次
2.细胞周期同步化：处死前2-3小时腹腔注射秋水仙碱 400mg/L，4mg/kg 3.取样：双侧股骨→PBS（pH6.8）5ml冲洗骨髓腔→离心 1500rpm/min→弃上清
4.低渗：0.075M KCl6ml,37°c孵育15分钟→加入固定液 1ml预固定1分钟→离心1000rpm/min十分钟，弃上清 5.固定：固定液4ml，37°c孵育20分钟→离心十分钟 （1000rpm/min），弃上清。重复一次步骤5. 6.制片：试管内余下约0.5ml，冰冻玻片滴片，干燥。
7.染色：Giemsa染液染色3分钟。
8.阅片：油镜下计数100个中期相细胞，畸变细胞率
四.注意事项
1.骨骺端
2.滴片：距玻片5-8cm。过低染色体分散不开，过高细胞 破裂 3.低渗：时间过长染色体短胖，不清楚；时间过短染色体 不分开。
Thank You for Your Attention