细胞工程学复习资料迟长凤

细胞工程学

1. 细胞工程指以细胞为研究对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目地利用或改造生物遗传性状，以获得特定细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术

2. 显微操作术借助显微操作仪和微针。微吸管等工具实现细胞操作和研究的一种技术

3. 细胞培养指从组织分离细胞，模拟体内环境，在无菌，适当条件下使其生长繁殖的一种技术

4. 原代培养直接取材于有机体组织的细胞进行培养

传代培养把原代培养的细胞从培养瓶中取出进行培养

5. 细胞工程的研究对象：动物、植物、微生物

6. 发现鸡神经元在生理盐水中可以存活，并使用了“组织培养”一词——Roux 卢克斯分离蝌蚪神经组织，开创动物组织培养先河——Harrison 哈里森

7. 植物组培奠基人：Went,Gautheret,Nobercount

8. 第一个体外受精动物——试管兔——张明觉仓鼠肾细胞的悬浮培养，为动物细胞大规模培养技

术的建立提供了基础——Capstick

9. Carlson -- 用NaN03作为融合诱导剂进行烟草原生质体融合，获得世界第一个体细胞杂种

植株

10. 成功利用胚胎细胞克隆出一只绵羊，首次证实的通过核移植技术克隆的哺乳动物——

Villadsen 多莉羊——证明高等动物体细胞细胞核的全能性

11. 血细胞计数板使用方法

12. 单细胞的获得：有限稀释法、显微操作分离法、流式细胞仪分离法、激光捕获纤维切割、免

疫磁珠分离

13. 细胞保存方法：

传代培养保存法

低温冷冻保存法：a低温保存（-20C左右）b超低温保存（液氮-196C）

14. 细胞培养方式：分批式、流加式、半连续式、连续式、灌流式

15. 分批培养的5 个时期：

适应期：cell很少分裂，营养不消耗平台期：cell浓度max，生长静止

指数生长期：max-V生长，细胞浓度指数增长衰退期：cell开始自溶，死亡

减速期：cell 生长受抑制，V 生下降

16. 外植体指用于离体培养的植物或组织切段

17. 人工种子指将植物离体培养中产生的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中形成的类似种子的颗粒

18. 植物组织培养的应用：快速繁殖、种苗脱毒、突变育种、基因工程育种、远缘杂交

19. 常用生长素（根）：吲哚乙酸（IAA）、2,4-二氯苯氧乙酸（2, 4-D）、萘乙酸（NAA）、吲哚

丁酸（IBA）

常用细胞分裂素（芽）：6-芐氨基嘌呤（BA）、6-呋喃氨基嘌呤（激动素KT）

生长素/ 细胞分裂素：高（根的形成，愈伤组织的形成）中（根芽分化）低（芽的分化）

2 0 .人工种子三大结构：人工种皮外层、人工胚乳、胚状体或芽

2 1 .胚状体同步发育的调节方法（5 种）：抑制剂法、低温法、渗透压法、通气法、分离筛选法

22. 细胞工程的应用领域及各领域的技术细胞工程的应用领域非常广泛，涉及农业、食品、医药、化工与能源等许多方面。主要可分为四块，如下：

1）动植物快速繁殖指采用细胞工程技术实现优良动植物快速繁殖以及濒危物种的保

护。主要技术：组织培养植物、人工种子、试管动物、克隆动物等

2) 新品种的培育与细胞重组指通过细胞工程技术对现有生物的遗传性状进行改良和培育新型物种。主要技术：原生质体诱变、细胞融合技术、细胞器水平上的细胞重组、染色体水平上的多倍体、单倍体育种、雌(雄)核发育、胚胎嵌合等

3) 细胞工程生物制品指利用动植物细胞、组织培养或转基因动植物反应器生产生物制品。

主要技术：杂交瘤细胞培养大量制备单克隆抗体、动物细胞培养技术生产疫苗、生长

因子等

4) 细胞疗法与组织修复指利用培养的细胞或离体再造的组织修复受损细胞与组织或器官的技术。主要技术：干细胞与组织工程为核心的细胞工程技术

23. 体外受精指使哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术

24. 细胞核移植一种利用显微操作技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成熟卵细胞内的技术

25. 显微受精技术( 3 种)：透明带下注射法、卵浆内精子注射法、透明带修饰法

26. 试管婴儿之父——罗伯特.爱德华兹

世界首例试管婴儿——路易斯. 布朗国内首列——郑萌珠

27. 控制X、Y 精子方法：

(1 )酸碱法：X-酸, Y•碱(3)流式细胞仪分离法：X上的DNA量＞Y

(2)电泳法：Y的负电荷＜X的负电荷 (4)离心分离法：Y的质量＜X

(5 )免疫学分离法：Y上存在H-Y抗原

28. 体外受精动物与核移植动物的比较：

体外受精动物：即试管动物，指供体的精子和卵子在体外受精，在胚胎发育到一定阶段时，通过胚胎移植移入受体完成发育出生的动物。

培育过程分 5 步：精子采集与体外获能、卵子采集与成熟培养，体外受精，重组胚激活与体外培养，胚胎移植，体内发育、出生优点：发挥优良母畜的繁殖能力，促进家畜改良速度，保存遗传资源，作为辅助技术缺点：胚胎体外发育阻滞，胚胎细胞数量少

核移植动物：即核质杂种，利用显微操作术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成熟卵细胞内构建组胚，再通过胚胎移植移入受体完成发育出生过程的动物。

培育方法分 6 步：核供体细胞获得与取核，受体细胞去核，细胞核移植，重组胚激活，重组胚培养和移植，核移植后代的鉴定

优点：加快珍惜动物繁殖，保存濒危动物，能克服远缘杂交、培育出优良品种，保持优良物种

缺点：技术复杂，对生物多样性提出挑战导致生物品系减少，个体生活力差

29. 核供体细胞：1-5天的缺血饥饿培养，诱使细胞处于“静止”状态，进入GO期

30. 细胞融合指使用人工方法使2 个或2 个以上的细胞合并形成1 个细胞的技术

31. 原生质体去除细胞壁后裸露的球形细胞原生质体融合

32 .细胞融合过程：亲本选择，粘附，形成细胞桥，胞质渗透、细胞核融合，融合细胞筛选

33. 细胞融合方法：

( 1 )生物法：病毒诱导细胞融合，如仙台病毒，不常用

(2 )化学法：NaNO3诱导融合，高pH的高浓度C尹诱导融合，PEG诱导融合

现在主要用高Ca高pH和PEG结合诱导融合，融合成本低，无需特殊设备，任何细胞都能融合