细胞工程学复习资料迟长凤
细胞工程复习提纲2
《细胞工程》复习提纲2绪论第一节细胞工程在生物技术领域中的地位1.生物技术的概念2.细胞工程的概念及研究范畴3.细胞工程在现代生物技术中的地位及实践意义第二节植物细胞工程的发展1.植物细胞工程的发展（3个阶段，重点掌握重要事件及人物）2.我国植物细胞工程的研究进展（了解）第三节植物细胞工程技术的类别及其应用1.植物细胞工程的类别（培养层次，技术策略）2.植物细胞工程的应用第二章细胞全能性与形态发生第一节细胞全能性及其表达1.细胞全能性的概念及提出2.植物细胞的分类（3种类型及特征）及对取材的指导3.植物细胞实现全能性的条件4.脱分化的概念5.细胞脱分化过程中生理与结构的变化（脱分化前、脱分化后及脱分化的3个阶段）6.细胞周期对脱分化的调控（细胞周期及相关调控蛋白）7.激素诱导表达基因与细胞脱分化（了解常见的激素诱导表达基因及其作用）8.PSK对细胞脱分化的影响（了解）9.细胞脱分化过程中的染色体解凝聚及其作用10.细胞分裂（细胞脱分化）与愈伤组织形成的关系11.细胞分化的概念12.再分化的概念13.细胞分化中的基因组变化（了解）14.极性（概念）及其与细胞分化的关系15.TE细胞16.激素在细胞分化中的调控作用（重点了解生长素和细胞分裂素的作用）第二节器官发生1.离体培养中植株再生的两条途径2.器官发生的概念3.通过器官发生形成再生植株的方式4.经过愈伤组织再分化器官的3个阶段5.外植体不经过愈伤组织形成器官的两种情况6.了解起始材料对器官分化的影响7.激素对器官分化的调控（生长素与细胞分裂素的作用方式以及它们在植物体内的活性与钝化形式）8.了解器官发生过程中相关基因的调控作用第三节体细胞胚胎发生1.体细胞胚的概念2.体细胞胚胎发生的途径3.直接发生途径的阶段4.经过愈伤组织的体细胞胚胎发生（培养阶段及激素的变化）5.细胞悬浮培养的体细胞胚发生（培养物的细胞类型，胚性细胞团的细胞类型）6.体细胞胚与合子胚的异同7.体细胞胚再生植株与器官发生途径再生植株的区别8.外源激素对体细胞胚发生的调控（生长素特别是2,4-D的使用规律）9.培养基及培养条件对体细胞胚形成的影响（结合具体实例）10.体细胞胚发生的生化与分子基础（了解）第二章离体培养下的遗传与变异第一节离体培养中的遗传与变异特点1.体细胞无性系及体细胞无性系变异（体细胞变异）的概念2.离体培养条件下遗传变异的特点（普遍性、局限性、嵌合性）3.影响体细胞遗传与变异的因素（了解）第二节体细胞变异的细胞遗传学基础1.体细胞变异的细胞学现象（DNA核内重复复制、染色体断裂与重组、非正常有丝分裂）第三节体细胞变异的分子遗传学基础1.了解（知道几种重要的导致体细胞变异的分子机理：碱基突变、DNA序列的选择性扩增与丢失、转座子活化、DNA甲基化）第四节体细胞无性系变异的诱导与选择1.离体条件下体细胞无性系变异筛选的明显优点2.体细胞无性系诱变起始材料的选择原则3.离体培养细胞的自发变异（较容易发生自发变异的情况）4.离体培养细胞的诱变常用方法（物理方法、化学方法、复合因子诱变、转座子插入）5.体细胞无性系突变体的筛选（了解）6.体细胞无性系变异的应用（掌握几个应用，具体内容了解）第三章细胞工程技术原理（较详细的内容参照课件）第一节实验室设置1.细胞工程实验室的组成及要求2.常用仪器设备3.常用培养容器与用具第二节细胞工程的基本技术1.常用的洗涤剂2.常用器材的洗涤方法3.常用灭菌方法及原理4.常用物品、器材等的灭菌方法第三节培养基的组成及配制1.培养基的成分及作用（详细）2.大量元素及微量元素分别主要包括哪些元素3.基本培养基的概念4.组织培养中常使用的糖类及其作用5.了解常用的维生素种类6.其它有机成分及其作用（肌醇、腺嘌呤、氨基酸）7. 常用的天然提取物或复合有机成分8.生长调剂的种类及其作用（熟悉常见植物激素的名称及代号，并能知道其属于哪一类，其作用及特点）9.植物激素和植物生长调节剂的概念10.培养基其它附加成分（如琼脂、活性炭等的作用）11.培养基的种类及特点（根据培养基的无机盐成分和元素的浓度）（常用的培养基能知道其属于哪一类）12.母液的配制（为什么要配制母液、母液的种类、配制方法及注意事项、清楚中间的换算）13.常用激素母液的配制方法14.培养基的配制流程15.培养基配制过程中的计算问题（各种母液或成分所需量的计算）第四节外植体的取材与培养1.外植体的概念2.外植体的选择原则3.常用消毒剂及其特性、消毒效果等的比较（P84表3.6）4.外植体灭菌的基本程序5.外植体接种程序6.植物组织培养（广义）的类型（根据培养层次）7.培养的基本程序8.培养条件的控制（常用的光照、温度、pH等条件）9.组织培养中常见问题产生原因及对策（污染、褐化、玻璃化）第四章植物组织和器官培养第一节植物脱毒与快速繁殖1.植物脱毒的概念（植物脱毒：利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中侵染的病毒，从而生产无病毒健康植物材料的过程）2.植物脱毒与快速繁殖的意义3.茎尖培养脱毒的原理4.几种关于病毒在植物体内分布不均匀的假说5.植物脱毒的技术规程6.外植体预处理的方法7.常用脱毒效果检测的方法及原理8.指示植物9.影响脱毒效果的因素10.离体无性繁殖（微繁）的概念11.离体繁殖的基本程序12.培养物的增殖方式及特点第二节花药及花粉培养1.花药培养和花粉培养的概念2.单倍体的概念3.花药培养及花粉培养的异同4.花粉的发育时期5.花药培养取材的适宜时期（单核中晚期至双核早期）6.花药预处理的方法（特别是低温处理的作用）7.花药培养的培养基、培养条件等（如糖类、激素种类、温度、光照等）8.花粉培养取材的适宜时期（四分体到单核早期）9.花粉的分离方法10.花粉培养的常用方法11.花药和花粉培养中雄核发育的途径12.了解白化苗的形成13.单倍体的应用第三节植物胚胎培养1.植物胚胎培养的类型2.胚培养在实践中的意义3.幼胚培养的一般取材时期4.幼胚离体培养的生长发育方式5.早熟萌发的概念6.了解幼胚培养条件（重点蔗糖浓度，激素的使用）7.未授粉子房培养的取材时期8.未授粉子房培养过程中单倍体的来源和发育途径9.胚乳培养的主要研究内容10.植物胚乳的发育特性（被子植物的胚乳与裸子植物胚乳的来源及差异）11.被子植物胚乳的类型（3种）及其特点12.了解影响胚乳培养的的因素。
细胞工程复习资料
细胞工程复习资料细胞工程复习资料细胞工程是一门研究利用生物技术手段改造和利用细胞的学科，是生物工程领域的重要分支之一。
它涉及到细胞的培养、分离、操纵和应用等方面，对于生物医学、药物研发、农业和环境保护等领域都具有重要意义。
本文将从细胞工程的基本原理、技术方法和应用领域等方面进行综述。
一、细胞工程的基本原理细胞工程的基本原理是通过改变细胞的遗传物质和表达谱，使其具备特定的功能或性状。
其中，基因工程技术是细胞工程中最常用的手段之一。
通过基因工程技术，可以将外源基因导入到目标细胞中，使其产生特定的蛋白质或表现出特定的性状。
例如，利用基因工程技术，可以将人类生长激素基因导入到大肠杆菌中，使其产生人类生长激素。
除了基因工程技术外，细胞工程还包括细胞培养、细胞分离和细胞操纵等技术。
细胞培养是指将细胞放置在适宜的培养基中，提供适当的营养物质和环境条件，使其在体外继续生长和繁殖。
细胞分离是指将混合的细胞群体分离成单个的细胞或纯化的细胞群体。
细胞操纵是指通过物理或化学手段对细胞进行操作，如细胞融合、细胞转染等。
二、细胞工程的技术方法细胞工程的技术方法主要包括基因工程技术、细胞培养技术和细胞操纵技术等。
基因工程技术是细胞工程中最重要的技术之一，它包括基因克隆、基因转染、基因敲除等多种方法。
基因克隆是指将特定的基因从一个生物体中复制出来，并导入到另一个生物体中。
基因转染是指将外源基因导入到目标细胞中，使其产生特定的蛋白质或表现出特定的性状。
基因敲除是指通过基因编辑技术，将目标基因从细胞中删除或失活。
细胞培养技术是细胞工程中最基础的技术之一，它包括细胞培养基的配制、细胞培养条件的优化和细胞培养设备的选择等方面。
细胞培养基是细胞培养的基础，它包含了细胞所需的营养物质和生长因子等。
细胞培养条件的优化是指通过调节培养基的成分和培养条件的控制，使细胞在体外获得最佳的生长和繁殖条件。
细胞培养设备的选择是指选择适合细胞培养的培养器具和设备，如细胞培养箱、生物反应器等。
细胞工程复习资料
细胞工程知识点汇总第一章细胞工程简介细胞工程（Cell engineering）是指主要以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型的一门综合性科学技术。
主要人物或事件：1）温特（Went）、高特里特（Gautheret）和诺比考特（Nobercourt）一起成为植物组织培养的奠基人。
2）1958年，史都华德和赖纳特发现胡萝卜体细胞可以分化成体细胞胚。
也即是说可以从细胞水平上到组织器官水平上的分化。
从而验证了细胞全能性学说。
3）1953年，沃森（Watson）和克里克（Crick）提出DNA双螺旋结构模型，标志着分子生物学诞生。
4）1997年，英国利用成年动物体细胞克隆出绵羊“多莉”，证明了高等动物体细胞的全能性，这是细胞工程历史上的一个里程碑式的成果。
细胞工程的应用（可出分析题）第二章细胞工程理论基础细胞全能性(totipotency)：是指分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体生长、发育所需要的全部遗传信息具有发育成完整个体的潜能。
细胞分化：（理解）是指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程，包括时间上和空间上的分化和空间上的分化。
时间上的分化：是指一个细胞在不同的发育阶段可以形成不同的形态和功能空间上的分化：是指同一种细胞由于所处的环境或部位不同可以形成不同的形态和功能细胞分化能力的强弱称为发育潜能。
形态发生（Morphogenesis）：是指通过细胞增殖、分化和行为塑造组织、器官和个体形态的过程。
细胞分化与形态发生是相互联系在起的。
细胞分化的实质：是奢侈基因按照一定顺序表达的结果，是基因的差异表达（Differential expression）脱分化（Dedifferentiation）：又称去分化，是指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程，即分化的细胞在适当条件下转变为胚性状态而重新获得分裂能力的过程。
细胞工程复习资料
细胞工程复习资料第一章1. 细胞工程：是指以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传特性，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。
2. 动物组织培养：从体内取出组织，模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长，并维持其结构和功能的方法。
习惯上又泛指所有体外培养，即：器官培养、组织培养和细胞培养3. 植物组织培养：在无菌条件下，利用人工培养基对植物组织的培养，包括原生质体、悬浮细胞和植物器官等的培养。
4. 细胞融合：在离体条件下利用人工方法把不同的细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的技术。
5. 单克隆抗体：利用细胞融合技术，将骨髓瘤细胞和淋巴细胞合并成杂交瘤，杂交瘤细胞会持续分泌成分单一、有特异性的抗体。
6. 细胞拆合：把完整细胞的细胞核和细胞质用特殊的方法分离开来，或把细胞核从细胞质中吸取出来，或用紫外线等把细胞中的核杀死，然后再把同种或异种的细胞核和细胞重新组合起来，培育新的细胞或新的生物个体。
7. 染色体工程：按照一定的设计，有计划地消减、添加或代换同种或异种染色体。
8. 转基因生物：在基因组中稳定地整合有人工导入外源基因的生物。
9. 胚胎工程：在胚胎发育过程中，定向控制、改造和创造生物新遗传性状的技术，如试管动物、嵌合体。
10. 细胞治疗：用自体或异体细胞来纠正个体的病理状态。
11. 基因治疗：把正常基因或治疗基因，通过载体转移到人体的靶细胞，进行基因修饰和表达，改善疾病的一种治疗方法。
第二章：1.游走型细胞：呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。
此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别2.多形性细胞：3.细胞融合率细胞融合率＝（融合族多核细胞核数－对照组多核细胞核数）/全部细胞的细胞核总数×100％4.可逆电击穿据膜击穿实验的大量现察，当对细胞膜施加短时程 (10~100µs)的电脉冲，使膜产生瞬间极化，脉冲幅度达到一定的场强时，膜的电导率和透过性将急剧增大形成大量微孔，其透过性增大的程度足以使胞间产生细胞质成分的交换或透过基因大分子。
细胞工程学复习题
细胞工程学复习题细胞工程学是一门综合性学科，涉及到细胞生物学、生物工程学和材料科学等多个领域的知识。
通过利用工程原理和技术手段，细胞工程学致力于研究和应用细胞的生物功能以及与之相关的工程应用。
以下是一些关于细胞工程学的复习题，希望能帮助你回顾和巩固相关知识。
1. 什么是细胞工程学？2. 细胞工程学的研究对象主要是哪些细胞类型？3. 请列举细胞工程学的主要应用领域。
4. 细胞工程学中常用的细胞培养技术有哪些？5. 什么是细胞培养基？它对细胞的生长和分化有什么影响？6. 细胞工程学中常用的细胞筛选技术有哪些？7. 请简要介绍细胞工程学中常用的细胞培养槽和生物反应器。
8. 什么是细胞培养的规模化生产？有哪些常用的规模化生产方法？9. 细胞工程学在组织工程和再生医学中的应用有哪些？10. 细胞工程学在药物筛选和药物递送系统中的应用有哪些？11. 请简要介绍细胞工程学在生物传感和生物芯片领域的应用。
12. 细胞工程学中常用的细胞植入技术有哪些？它们在治疗方面有何作用？13. 请简要介绍细胞工程学中常用的干细胞技术和基因工程技术。
14. 细胞工程学中的质量控制和质量保证措施有哪些？15. 细胞工程学的发展趋势和前景如何？以上是关于细胞工程学的一些复习题，希望能够帮助你进行知识回顾和巩固。
细胞工程学作为一门新兴的学科，其在医学、生物技术和生物工程领域的应用前景广阔，相信随着科学技术的不断进步，细胞工程学将会取得更加重要的突破和进展，为人类健康和福祉做出更大的贡献。
希望大家能够认真复习，掌握细胞工程学的基本理论和技术方法，为将来的学习和科研打下坚实的基础。
细胞工程复习资料最终版
第一章细胞工程：是指以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。
细胞工程的应用细胞工程是现代生物技术的基础。
细胞是大部分生命体存在的基本结构，而现代生物技术（如基因工程蛋白质工程等）无不是对细胞或细胞的物质进行改造而达到获取目的产物影响生物什么状态的目的，在这里，细胞都是这些技术开展的平台和基础。
第三章无菌技术灭菌方法：物理灭菌法、化学灭菌法、使用抗生素。
物理方法：干热、湿热、射线/微波/紫外线处理、过滤、离心沉淀、大量无菌水冲洗等。
化学方法：各种灭菌剂。
抗生素的使用：青霉素、链霉素、卡那霉素、制霉菌素等，主要用于细胞培养过程中。
细胞冷冻方法：1.缓慢冷冻法——将处于0°C或其他预处理温度的材料以1~2°C/min的降温速度从起始温度降到-100°C，稳定1h后投入液氮中保存或以此降温速度连续降温至-196°C。
按1mL每安瓿的量分装细胞悬液，在火焰下将安瓿封口。
将封口的安瓿放入慢冻机内，添加保护剂的细胞悬液按照一定梯度降低温度进行缓慢冷冻。
当温度在-25°C 以上时，可以按照1~2°C/min的梯度降温；当温度达-25°C以下时，可以按照5~10°C/min的梯度降温。
2.预冷冻法——包括两步冷冻、逐级冷冻两种，前者是将预处理后的材料先通过缓慢冷冻法降温至-40°C，保存一段时间（约30min）后，再投入液氮中保存。
后者将经过预处理的材料先制备成不同温度等级的溶液，如-10°C、-15°C、-23°C、-35°C及-40°C，并在每级温度中停留一定时间（4~6min），然后将材料投入液氮中保存。
3.快速冷冻法——将材料从0°C或者其他预处理温度直接投入液氮中保存。
细胞工程期末复习资料
细胞工程第一章论绪1、细胞工程：按照一定的设计方案，通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行实验操作，获得重构的细胞、组织、器官及个体，创造优良品种和产品的综合性生物工程。
(1)分类a.按生物类型分为：动物细胞工程、植物细胞工程、微生物细胞工程b.按实验操作对象分为：细胞与组织培养、细胞融合、细胞核移植、染色体操作、转基因工程。
(2)操作水平：细胞整体水平或细胞器水平(3)目的：定向改变遗传物质或获得细胞产品(4)理论基础：细胞全能性(5)依据：生物体的每一个干细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质。
2、植物细胞工程包括：植物体细胞杂交、植物组织培养。
3、动物细胞工程包括：动物细胞融合、动物细胞培养、单克隆抗体技术、核移植、胚胎移植。
4、细胞工程研究内容(1)细胞与组织培养（离体培养）：是细胞工程的最基本技术。
(2)细胞融合（细胞杂交）：自然融合、人工诱导融合。
试管婴儿 单克隆抗体技术(3)细胞核移植：克隆羊多莉(4)染色体工程：多倍体育种(5)胚胎工程：以生殖细胞和胚胎细胞为对象，包括体外受精、胚胎移植、胚胎切割。
(6)干细胞与组织工程：胚胎干细胞、组织细胞。
人工培养的肌肉、器官。
5、细胞工程的应用：a.快速繁殖b.种苗脱毒c.动物胚胎工程快速繁殖优良、濒危品种d.利用动植物细胞培养生产活性产物、药品（生物反应器工程），如利用动物细胞融合形成单克隆抗体，利用植物细胞培养次生代谢产物。
e.新型动植物品种的培育f.供医学器官修复或移植的组织工程g.珍稀动植物资源的保存与保护h.在遗传学、发育生物学领域的理论研究第二章细胞全能性与形态发生1、名词解释：◆细胞全能性：细胞经分裂和分化后仍具有形成完整个体的潜能或特性。
❖极性：指植物的器官、组织、甚至单个细胞在不同的轴向上存在的某种形态结构以及生理生化上的梯度差异。
♦离体器官发生：培养条件下的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定根、不定芽等器官的过程。
⌧细胞分化：导致细胞形成不同结构或引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。
细胞工程考试复习资料
细胞工程考试复习资料细胞全能性：是指多细胞生物中每个体细胞的细胞核具有个体发育的全部基因，就有发育成完整个体的潜力。
愈伤组织：脱分化后的细胞经过细胞分裂产生无组织结构，无明显极性的松散的细胞团。
外植体：植物体上切取下来进行培养的部分组织或器官。
体细胞胚又叫胚状体，是指立体培养条件下没有经过受精过程而形成的胚胎类似物。
原生质体：是去除细胞壁后裸露的球形细胞。
玻璃化：是指组织培养过程中特有的一种生理失调或生理病变，试管苗呈半透明状，外观形态异常的现象。
褐变：可分为酶促褐变和非酶促褐变，酶促褐变是由酚酶催化酚类物质形成醌及其聚合物的结果。
人工种子：是指将植物离体培养的胚状体或牙包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中的类似种子的颗粒。
同核体：基因型相同的细胞融合成的融合细胞。
异核体：来自不同基因型的融合细胞。
体细胞杂交：将不同来源的体细胞融合并使之分化再生、形成新品种的技术。
原代培养：在首次传代前的培养。
传代培养：是指将原代培养的细胞继续转接培养的过程。
杂交瘤技术：将骨髓瘤细胞与免疫的动物皮细胞融合得到即能够分泌抗体又能在体外长期繁殖的杂交瘤细胞，经过克隆化培养得到可以分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。
转基因动物：是指在基因组内稳定的整合外源基因，并且外源基因可以稳定地遗传给后代的基因工程动物。
乳腺生物反应器：是将外源基因置于乳腺特异性调节序列之下，使之在乳腺中表达，然后通过回收乳汁获得重要价值的生物活性蛋白。
组织工程：是利用生命科学、医学、工程学原理与技术，单独或组合地利用细胞生物材料、细胞因子实现组织修复或器官再生的一门技术。
胚胎工程：是指对动物早期胚胎或配子进行工程技术操作，获得所需要的成体动物的技术。
体外受精：是指将哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境找那个完成受精过程。
体外受精动物也称试管动物，是指将供体的精子和卵子在体外受精，在体外培养胚胎发育到一定阶段通过胚胎移植移入受体完成发育出生发育阻滞：体外受精的早期胚胎在体外发育中往往会停止在某一阶段不再发育。
细胞工程期末复习资料
细胞工程期末复习资料2009级细胞工程复习资料（仅供参考）名词解释1、细胞工程：是应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。
2、细胞全能性：一个生活细胞所具有的产生完整生物个体的潜在能力称之为细胞的全能性。
3、细胞分化：是指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程，包括时间上和空间上的分化。
4、细胞脱分化：培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程就是细胞脱分化（dedifferentiation）。
5、细胞再分化：再分化(redifferentiation)是指在离体条件下，无序生长的脱分化的细胞在适当条件下重新进入有序生长和分化状态的过程，事实上是基因选择性表达与修饰的人工调控过程。
6、细胞凋亡：也叫程序性死亡，是机体维持环境稳定、有基因控制的细胞自主的有序性死亡7、细胞坏死：是细胞受到化学因素、物理因素和生物因素等环境因素伤害，引起的细胞死亡现象。
8、体细胞胚：又叫胚状体，是指离体培养条件下没有经过受精过程而形成的胚胎类似物。
9、胚胎培养：是指对植物的胚及胚器官进行人工离体无菌培养。
使其发育成幼苗的技术。
10、胚乳培养：指处于细胞期的胚乳组织的离体培养。
11、人工种子：又称合成种子或体细胞种子，是指将植物离体培养的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中的类似种子的颗粒。
12、看护培养：是指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，使其持续分裂和增殖的一种培养方法。
13、细胞系：是以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。
14、细胞株：是指从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。
15、细胞固定化：是指将游离的细胞埋在支持物内部或表面、培养液成流动状态进行培养的一门技术16、亚原生质体：在原生质体分离过程中，有时会引起细胞内含物的断裂而形成一些较小的原生质体就叫做亚原生质体。
细胞工程学复习资料迟长凤
细胞⼯程学复习资料迟长凤细胞⼯程学1. 细胞⼯程指以细胞为研究对象，应⽤⽣命科学理论，借助⼯程学原理与技术，有⽬地利⽤或改造⽣物遗传性状，以获得特定细胞、组织产品或新型物种的⼀门综合性科学技术2. 显微操作术借助显微操作仪和微针。
微吸管等⼯具实现细胞操作和研究的⼀种技术3. 细胞培养指从组织分离细胞，模拟体内环境，在⽆菌，适当条件下使其⽣长繁殖的⼀种技术4. 原代培养直接取材于有机体组织的细胞进⾏培养传代培养把原代培养的细胞从培养瓶中取出进⾏培养5. 细胞⼯程的研究对象：动物、植物、微⽣物6. 发现鸡神经元在⽣理盐⽔中可以存活，并使⽤了“组织培养”⼀词——Roux 卢克斯分离蝌蚪神经组织，开创动物组织培养先河——Harrison 哈⾥森7. 植物组培奠基⼈：Went,Gautheret,Nobercount8. 第⼀个体外受精动物——试管兔——张明觉仓⿏肾细胞的悬浮培养，为动物细胞⼤规模培养技术的建⽴提供了基础——Capstick9. Carlson -- ⽤NaN03作为融合诱导剂进⾏烟草原⽣质体融合，获得世界第⼀个体细胞杂种植株10. 成功利⽤胚胎细胞克隆出⼀只绵⽺，⾸次证实的通过核移植技术克隆的哺乳动物——Villadsen 多莉⽺——证明⾼等动物体细胞细胞核的全能性11. ⾎细胞计数板使⽤⽅法12. 单细胞的获得：有限稀释法、显微操作分离法、流式细胞仪分离法、激光捕获纤维切割、免疫磁珠分离13. 细胞保存⽅法：传代培养保存法低温冷冻保存法：a低温保存（-20C左右）b超低温保存（液氮-196C）14. 细胞培养⽅式：分批式、流加式、半连续式、连续式、灌流式15. 分批培养的5 个时期：适应期：cell很少分裂，营养不消耗平台期：cell浓度max，⽣长静⽌指数⽣长期：max-V⽣长，细胞浓度指数增长衰退期：cell开始⾃溶，死亡减速期：cell ⽣长受抑制，V ⽣下降16. 外植体指⽤于离体培养的植物或组织切段17. ⼈⼯种⼦指将植物离体培养中产⽣的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的⼈⼯胚乳和⼈⼯种⽪中形成的类似种⼦的颗粒18. 植物组织培养的应⽤：快速繁殖、种苗脱毒、突变育种、基因⼯程育种、远缘杂交19. 常⽤⽣长素（根）：吲哚⼄酸（IAA）、2,4-⼆氯苯氧⼄酸（2, 4-D）、萘⼄酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）常⽤细胞分裂素（芽）：6-芐氨基嘌呤（BA）、6-呋喃氨基嘌呤（激动素KT）⽣长素/ 细胞分裂素：⾼（根的形成，愈伤组织的形成）中（根芽分化）低（芽的分化）2 0 .⼈⼯种⼦三⼤结构：⼈⼯种⽪外层、⼈⼯胚乳、胚状体或芽2 1 .胚状体同步发育的调节⽅法（5 种）：抑制剂法、低温法、渗透压法、通⽓法、分离筛选法22. 细胞⼯程的应⽤领域及各领域的技术细胞⼯程的应⽤领域⾮常⼴泛，涉及农业、⾷品、医药、化⼯与能源等许多⽅⾯。
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第二章一.实验室的常规设备:天平冰箱酸度计离心机水纯化装置可调式微量移液器磁力搅拌器水浴锅或微波炉.二．实验材料的灭菌方法物理方法1.热力灭菌，干热湿热2.辐射灭菌:常用紫外线灭菌(紫外灯)3.过滤灭菌，孔径0.45或0.20微米0.20微米滤膜除去病毒以外的所有微生物0.45微米滤膜可过虑酶系或小量液体培养基化学方法(化学药物灭菌)1、含氯化合物:常用的为漂白粉、0.1%氯化汞、次氯酸钠。
2、过氧化物:3%一6%双氧水，0、2%过氧乙酸3、醇类:70%乙醇。
4、季胺盐类:常用0.1%-0.5%新洁尔溶液5、酚类:35%有炭酸或煤酚皂6，醛类:甲醛30%-35%三．灭菌1.培养基灭菌某些激素、维生素等不耐高温高压灭菌的采用过滤灭菌若采用高压蒸汽灭菌（121℃，15-40min），具体操作方法：（1）洗涤（2）配制培养基并分装包扎（3）装水，在高压灭菌锅内装水至淹没电热丝。
（4）装物品（5）灭菌注意：先打开放气闸，再打开锅盖（避免锅内压力大而爆炸）2.玻璃器皿灭菌干热灭菌：160-180℃，1.5h-2.0h；湿热灭菌：121℃，20-40min操作步骤：（1）洗涤（2）包扎（3）灭菌3.金属用具灭菌用前干热灭菌：160-180℃，1.5h-2h；用前湿热灭菌：121℃，20-30min接种前酒精棉擦拭，浸入95%酒精灯中，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌4.接种室灭菌紫外灯照射：波长260nm，距离小于1.2m，20-30min。
接种台喷雾消毒：75%酒精四.培养条件1.光照分为光照强度、光质、光周期。
光照强度:光照强度较强，幼苗生长粗壮，光照强度较弱，幼苗容易徒长光质:光质对愈伤组织诱导、培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响光周期:最常用的是16h光照、8h黑暗。
（对短日照敏感品种的器官组织，在短日照下易分化，而在长日照下产生愈伤组织。
）2.温度:大多数植物组织培养都是在23-27℃进行3.湿度:培养容器内的湿度条件，容器内主要受培养基水分含量和封口材料的影响及琼脂含量的影响。
细胞工程的复习
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后代具有相同的遗传物质.克隆.
发育良好的,形态正常的桑椹胚 或囊胚。
实体显微镜和显微操作仪。
体重、毛色、斑纹等性状方面存在差异。该技术产生的同卵多胎的可能性有限，一般常见 的为同卵双胎。
四、胚胎分割
五、胚胎干细胞
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分化诱导因子
牛磺酸、丁酰环腺苷酸
5.胚胎移植成功与否要有两个条件
01
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胚胎移植一般应在同种的雌性供体和受体之间进行。
02
添加标题
进行胚胎移植的供体和受体的生理状态要相同。
1.概念: 2.特点: 3.选择的胚胎: 4.使用的主要仪器： 5、存在问题：
采用机械方法将早期胚胎切割成2等份,4等份或8等份等,经移植获得同卵双胎或多胎的技术。
3.过程： 一)受精前的准备阶段: 1)精子获能:精子必须在雌性动物的生殖道发生相应的生理变化后,才获得受精能力的生理现象. 2)卵子的准备:在输卵管中发育到减数第二次分裂的中期,才具有与精子受精的能力
受精阶段:
#2022
卵子受精的标志： 当在卵黄膜和透明带的间隙可以观察到两个极体时，说明卵子已经完成了受精。
（1）饲料加工过程温度较高，要求植酸酶具有较好的高温稳定性。利用蛋白质工程技术对其进行改造时，首先必须了解植酸酶的 ，然后改变植酸酶的 ，从而得到新的植酸酶。 （2）培育转植酸梅基因的大豆，可提高其作为饲料原料磷的利用率。将植酸酶基因导入大豆细胞常用的方法是 。请简述获得转基因植株的完整过程。
细胞工程复习提纲-有答案
《细胞工程》复习提纲一、名词解释细胞工程：是以细胞生物学和分子生物学为基础理论，采用原生质体、细胞或组织培养等试验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性，以获得具有新的性状的细胞系或生物体以及生物的次生代谢产物，并发展有关理论和技术方法的学科。
细胞分化：是指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程,包括时间上和空间上的分化。
时间上的分化：是指一个细胞在不同的发育阶段可以形成不同的形态和功能;细胞全能性:是指分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体生长、发育所需要的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能.无性生殖：不涉及性别、没有配子参与、没有受精过程的生殖都属于无性生殖。
有性生殖：是两个配子融合为一，成为合子或受精卵，再发育成为新一代个体的生殖方式。
脱分化:又称去分化，是指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程，即分化的细胞在适当条件下转变为胚性状态而重新获得分裂能力的过程。
植物组织培养：是将植物器官、组织、细胞或原生质体等外植体材料无菌条件下培养在人工培养基上，在适当条件下诱发长成完整植株的一种技术。
愈伤组织:脱分化后的植物细胞经过细胞分裂，产生无组织结构、无明显极性的松散的细胞团，称之为愈伤组织外植体：主要指用于离体培养的植物或组织切段。
胚状体（体细胞胚）：又叫胚状体,是指离体培养条件下没有经过受精过程而形成的胚胎类似物。
人工种子：是指将植物离体培养中生产的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳。
体外受精:是指将哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。
试管动物:是指将供体的精子和卵子在体外受精,体外培养胚胎发育到一定阶段通过胚胎移植移入受体完成发育出生的动物。
胚胎分割：即是将一枚胚胎用显微手术的方法分割成二分、四分甚至八分胚，经体内或体外培养，然后移植入受体中，以得到同卵双生或同卵多生后代的技术,也是胚胎克隆的一种方法。
性别控制：就是通过人为干预或操作手段使母畜繁殖所需要的后代。
细胞工程期末复习资料
1.生物工程：指人们运用现代生物科学、工程学和其他基础学科的知识，按照预先的设计对生物进行控制和改造或模拟生物及功能，用来发展商业性加工，产品生产和社会服务的技术领域。
2..细胞工程：指主要以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术3.原代培养(primary culture)：以直接取自生物体细胞、组织、或器官的培养。
4.4.传代培养（passage culture）：将原代培养的细胞继续转接培养的过程。
细胞的体外大量增殖是通过传代培养实现的。
5.5.细胞系(cell line)：由原代培养经传代培养纯化，获得的以一种细胞为主，能在体外生存的不均一细胞群体,。
第一次传代培养后的细胞即为细胞系。
6.6.细胞株(cell strain)：从一个经过生物学鉴定的细胞系由单细胞分离培养或通过筛选的方法由单细胞增殖形成的细胞群叫细胞株。
7.7.接触抑制：动物细胞体外培养的方式之一，指由于细胞相互接触而抑制细胞运动性现象。
由于这个特性，正常细胞并不会相互重叠，而是呈单层细胞生长。
8.8.无血清培养基：无血清培养基是不加动物血清，由基础培养基和添加组分组成。
试图全部替代血清成分。
9.9.微载体：是直径60-250微米的微珠。
由天然葡聚糖或各种合成聚合物组成。
10.10.干细胞（stem cell）：是具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体，即这些细胞可通过分裂维持自身细胞的特性和大小，又可进一步分化为各种组织细胞，从而在组织修复等方面发挥积极作用。
11.胚胎干细胞(Embryo Stem)：ES细胞，是一种全能干细胞，它是从着床前胚胎内细胞团经体外分化抑制培养分离的一种全能细胞系，可以分化成任何一种组织类型的细胞。
12.12.成体干细胞（adult stem cell)：成体组织内具有自我更新及分化产生1种或1种以上子代组织细胞的未成熟细胞。
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细胞工程学1. 细胞工程指以细胞为研究对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目地利用或改造生物遗传性状，以获得特定细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术2. 显微操作术借助显微操作仪和微针。
微吸管等工具实现细胞操作和研究的一种技术3. 细胞培养指从组织分离细胞，模拟体内环境，在无菌，适当条件下使其生长繁殖的一种技术4. 原代培养直接取材于有机体组织的细胞进行培养传代培养把原代培养的细胞从培养瓶中取出进行培养5. 细胞工程的研究对象：动物、植物、微生物6. 发现鸡神经元在生理盐水中可以存活，并使用了“组织培养”一词——Roux 卢克斯分离蝌蚪神经组织，开创动物组织培养先河——Harrison 哈里森7. 植物组培奠基人：Went,Gautheret,Nobercount8. 第一个体外受精动物——试管兔——张明觉仓鼠肾细胞的悬浮培养，为动物细胞大规模培养技术的建立提供了基础——Capstick9. Carlson -- 用NaN03作为融合诱导剂进行烟草原生质体融合，获得世界第一个体细胞杂种植株10. 成功利用胚胎细胞克隆出一只绵羊，首次证实的通过核移植技术克隆的哺乳动物——Villadsen 多莉羊——证明高等动物体细胞细胞核的全能性11. 血细胞计数板使用方法12. 单细胞的获得：有限稀释法、显微操作分离法、流式细胞仪分离法、激光捕获纤维切割、免疫磁珠分离13. 细胞保存方法：传代培养保存法低温冷冻保存法：a低温保存（-20C左右）b超低温保存（液氮-196C）14. 细胞培养方式：分批式、流加式、半连续式、连续式、灌流式15. 分批培养的5 个时期：适应期：cell很少分裂，营养不消耗平台期：cell浓度max，生长静止指数生长期：max-V生长，细胞浓度指数增长衰退期：cell开始自溶，死亡减速期：cell 生长受抑制，V 生下降16. 外植体指用于离体培养的植物或组织切段17. 人工种子指将植物离体培养中产生的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中形成的类似种子的颗粒18. 植物组织培养的应用：快速繁殖、种苗脱毒、突变育种、基因工程育种、远缘杂交19. 常用生长素（根）：吲哚乙酸（IAA）、2,4-二氯苯氧乙酸（2, 4-D）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）常用细胞分裂素（芽）：6-芐氨基嘌呤（BA）、6-呋喃氨基嘌呤（激动素KT）生长素/ 细胞分裂素：高（根的形成，愈伤组织的形成）中（根芽分化）低（芽的分化）2 0 .人工种子三大结构：人工种皮外层、人工胚乳、胚状体或芽2 1 .胚状体同步发育的调节方法（5 种）：抑制剂法、低温法、渗透压法、通气法、分离筛选法22. 细胞工程的应用领域及各领域的技术细胞工程的应用领域非常广泛，涉及农业、食品、医药、化工与能源等许多方面。
主要可分为四块，如下：1）动植物快速繁殖指采用细胞工程技术实现优良动植物快速繁殖以及濒危物种的保护。
主要技术：组织培养植物、人工种子、试管动物、克隆动物等2) 新品种的培育与细胞重组指通过细胞工程技术对现有生物的遗传性状进行改良和培育新型物种。
主要技术：原生质体诱变、细胞融合技术、细胞器水平上的细胞重组、染色体水平上的多倍体、单倍体育种、雌(雄)核发育、胚胎嵌合等3) 细胞工程生物制品指利用动植物细胞、组织培养或转基因动植物反应器生产生物制品。
主要技术：杂交瘤细胞培养大量制备单克隆抗体、动物细胞培养技术生产疫苗、生长因子等4) 细胞疗法与组织修复指利用培养的细胞或离体再造的组织修复受损细胞与组织或器官的技术。
主要技术：干细胞与组织工程为核心的细胞工程技术23. 体外受精指使哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术24. 细胞核移植一种利用显微操作技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成熟卵细胞内的技术25. 显微受精技术( 3 种)：透明带下注射法、卵浆内精子注射法、透明带修饰法26. 试管婴儿之父——罗伯特.爱德华兹世界首例试管婴儿——路易斯. 布朗国内首列——郑萌珠27. 控制X、Y 精子方法：(1 )酸碱法：X-酸, Y•碱(3)流式细胞仪分离法：X上的DNA量＞Y(2)电泳法：Y的负电荷＜X的负电荷 (4)离心分离法：Y的质量＜X(5 )免疫学分离法：Y上存在H-Y抗原28. 体外受精动物与核移植动物的比较：体外受精动物：即试管动物，指供体的精子和卵子在体外受精，在胚胎发育到一定阶段时，通过胚胎移植移入受体完成发育出生的动物。
培育过程分 5 步：精子采集与体外获能、卵子采集与成熟培养，体外受精，重组胚激活与体外培养，胚胎移植，体内发育、出生优点：发挥优良母畜的繁殖能力，促进家畜改良速度，保存遗传资源，作为辅助技术缺点：胚胎体外发育阻滞，胚胎细胞数量少核移植动物：即核质杂种，利用显微操作术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成熟卵细胞内构建组胚，再通过胚胎移植移入受体完成发育出生过程的动物。
培育方法分 6 步：核供体细胞获得与取核，受体细胞去核，细胞核移植，重组胚激活，重组胚培养和移植，核移植后代的鉴定优点：加快珍惜动物繁殖，保存濒危动物，能克服远缘杂交、培育出优良品种，保持优良物种缺点：技术复杂，对生物多样性提出挑战导致生物品系减少，个体生活力差29. 核供体细胞：1-5天的缺血饥饿培养，诱使细胞处于“静止”状态，进入GO期30. 细胞融合指使用人工方法使2 个或2 个以上的细胞合并形成1 个细胞的技术31. 原生质体去除细胞壁后裸露的球形细胞原生质体融合32 .细胞融合过程：亲本选择，粘附，形成细胞桥，胞质渗透、细胞核融合，融合细胞筛选33. 细胞融合方法：( 1 )生物法：病毒诱导细胞融合，如仙台病毒，不常用(2 )化学法：NaNO3诱导融合，高pH的高浓度C尹诱导融合，PEG诱导融合现在主要用高Ca高pH和PEG结合诱导融合，融合成本低，无需特殊设备，任何细胞都能融合(3)物理法：电融合诱导法34. 融合细胞的筛选方法：细胞形态大小差异，选择性培养基筛选法，再生后植株与亲本形态性质差异35. 染色体工程按照一定的设计，有计划地消减、添加或替换同种或异种染色体从而达到定向改变遗传特性和选育新品种的一种技术36. 染色体组生物体配子的全部染色体37. 初级代谢产物指通过初级代谢产生的维持细胞生命活动必需的物质，如氨基酸、核苷酸、多糖、脂质维生素等38. 次级代谢产物指通过次级代谢合成的产物，大多是分子结构比较复杂的小分子化合物。
39. 植物细胞培养的特点（与微生物细胞相比）：（1）细胞直径比微生物大30-100 倍（2）细胞通常以一定数目的非均相细胞团方式存在（3）细胞具有纤维素细胞壁和大的液泡，很容易被剪切力损伤（4）细胞生长速度慢，操作周期长（5）细胞培养基成分营养丰富而复杂，适合微生物生长，防止污染更困难（6）细胞培养需光照，通过光合作用合成有机物40. 常规生物反应器：机械搅拌式生物反应器，气升式生物反应器，鼓泡式生物反应器，转鼓式生物反应器41. 分批式培养的细胞生长与产物的关系：生长偶联型，中间型，非生长偶联型42. 影响（提高）植物细胞培养生产次级代谢产物的因素及调控方法（途径）：提高次级代谢产物产量需考虑的因素有四个方面：细胞株，培养工艺，培养技术，培养设备植物细胞培养生产次级代谢产物包括两个重要环节，细胞生长和产物合成。
这两个环节的任何影响因素都能影响生产率。
具体因素可分为生物，物理，化学因素生物因素：细胞株特性，稳定高产生长速度快的细胞株是细胞大规模生产代谢产物的前提。
细胞凋亡，通过采用合适的培养工艺来保证充足的营养供给以及避免有害代谢产物的积累，如半连续培养法。
细胞团，选用合适的生物反应器减小因细胞团容易受剪切力影响而破碎，引起培养液黏度增加，气体交换与传递受到的影响。
生物合成机制。
化学因素：营养盐，确保植物细胞生物量的增长，同时细胞能合成积累次级代谢产物。
前体，前体的加入刺激细胞中特定酶，促使次级代谢产物量的增加。
诱导子。
反馈抑制，采用流加式培养法克服反馈抑制。
物理因素：光照，温度，pH 其他因素：培养液的流变特性，气体传递，搅拌与剪切力，泡沫与器壁表面黏附性43. 动物细胞培养模拟体内生理环境使分离的动物细胞在体外生存、增殖的一门技术44. 细胞系由原代培养经传代培养纯化，获得的能在体外生存的细胞群体细胞株指从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群45. 微载体直径60~250um 的适用于贴壁依赖型细胞生长的微珠。
46. 维茨尔（van Wezel）开发了微载体系统卡尔雷Carrel设计卡氏瓶47. 微载体分类：实心微载体，多孔微载体48. 理想微载体的特征：（ 1 ）良好的生物相容性，无毒无害（ 2 ）好的黏附性，一般带有正电荷（ 3 ）大的比表面积，颗粒均匀，孔径均一（4）良好的传质性能（ 5 ）强的机械强度，能保护细胞，方便清理，重复利用49. 动物细胞体外生长特点（与微生物相比）（1）细胞比微生物细胞大，无细胞壁，对机械搅拌或剪切力敏感（2）细胞生长缓慢，易受污染（3）正常细胞培养的世代数有限，只有癌细胞或发生转化的细胞才能无限生长下去（4）细胞间主要以聚集体形式存在，大多需要贴附在载体表面才能生长，且有接触性抑制和密度抑制50. 贴附型细胞可分为4 类：成纤维型细胞，上皮型细胞，游走型细胞，多形型细胞51. 动物细胞培养天然培养基中血清的作用：（1）提供生长因子（3）提供细胞贴附因子和展开因子（2）补充营养成分（4）作为缓冲系统，保护细胞免受损伤52. 单克隆抗体的制备步骤：（1）动物免疫与免疫脾细胞制备：体外法，体内法（2）骨髓瘤细胞的获得与培养：多用BALB/C小鼠的骨髓瘤细胞，通常采用HGPRT或TK缺陷型的骨髓瘤细胞。
采用饲养层培养法促进杂交瘤细胞生长。
采用HAT 培养基做敏感性试验选择骨髓瘤细胞，其原理是：DNA 的合成正常途径和补救途径两条，其中正常途径可被氨基喋呤（A）阻断，补救途径可被HGPRT和TK这两种酶阻断。
HAT选择培养基中含有次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）、胸腺嘧啶核苷（T），瘤细胞是HGPRT或TK缺陷型细胞，所以DNA合成途径被阻断，死亡。
而融合细胞具有来自B细胞的HGPRT与TK,所以能采用补救途径合成DNA成活繁殖。
（3）细胞融合：采用PEG（聚乙二醇）诱导细胞融合法。
骨髓瘤细胞与脾细胞按1:10或1:5 比例混合在一起。
（4）细胞融合后筛选：先HAT培养液培养，再HT培养基，最后RPMI1640培养液培养（5）分泌抗体细胞的鉴定与筛选：以快速，简便，特异，敏感为原则。