死活细胞的鉴别word版
区别细胞死活的方法
区别细胞死活的方法细胞是生物体的最小单位，它们构成了人体的所有组织和器官，由此可以看出细胞死活对生物体的关键重要性。
细胞死活的评价是定量化和定性分析生物活动的关键环节。
目前，细胞死活评价仍然是仅限于实验室内容易掌握的技能，且受到许多因素的影响，因此区别细胞死活的方法极其重要。
首先，最常用的方法是通过显微镜观察细胞活力。
要辨识细胞死活，必须通过使用显微镜来确定细胞的形状和质地的变化。
死细胞不易发育，通常会呈现出“静止细胞”的特征，这就是细胞脱水由于内部膜蛋白的变化。
而活着的细胞则会有更多的活力，表面有许多触手，破裂的细胞也很常见。
此外，将细胞从直接观察转变为定量测量也是一种有效的方法。
细胞活力可以用流式细胞术和其他定量技术来测量，最常用的是荧光技术，它可以直接定量测定细胞死亡率。
细胞外基质的变化也可以通过吸收法、荧光比色或其它技术来检测，以区分细胞死活。
此外，细胞死活可以通过凋亡因子、抗凋亡抗体以及蛋白质补体来识别。
凋亡因子有细胞膜活性物质（CAMs）和其他多种因子，可以分子识别细胞外胞质中的死细胞，从而激活死细胞的凋亡过程。
抗凋亡抗体可以识别凋亡过程中的蛋白质进而来识别细胞是否已经死亡。
蛋白质补体可以检测细胞形态上的变化，如染色体、线粒体和其它细胞结构的变化，可以用来识别细胞是否死亡。
最后，通过细胞老化技术也可以识别细胞死活。
细胞老化技术是一种新兴的研究方法，它可以测定细胞的老化情况，也可以检测细胞的死亡率。
主要的方法有DNA电泳、分子探针法和基因表达分析，以及其它从细胞老化到细胞死亡早期检测方法。
总而言之，以上是区别细胞死活的常用方法，我们可以通过显微镜观察细胞活力，定量测量细胞活力，通过凋亡因子和抗凋亡抗体，以及蛋白质补体，来识别细胞死活。
此外，还可以通过细胞老化技术等来识别细胞死活。
在此基础上，精确计算细胞死活率，为生物活动的分析提供重要的依据，成为定量和定性分析生物活动的重要环节。
区别细胞死活的方法
区别细胞死活的方法细胞死活是生物学家研究细胞活力水平和状态的重要指标，对于评估微生物或细胞繁殖能力、细胞对药物作用与耐药性的反应、细胞功能障碍、细胞毒性研究和诊断实验等都有重要的意义。
近年来，借助现代生物技术的发展，人们发展出了一系列检测细胞死活的方法，有效地区分出细胞的生长和死亡状态。
一、细胞膜活性的检测是区别细胞死活的重要方法。
细胞膜的活性是评估细胞活力的重要指标，可以显示细胞死活。
细胞膜活性可以通过测定细胞膜电位、直接检测细胞膜转运系统活性和监测活细胞特异性指标，如细胞凋亡标志物等来确定。
测定细胞膜电位能直观反映细胞结构的活力水平，是常用的检测细胞死活的方法。
二、一些结构性指标也可以用来区分细胞死活状态，如细胞形态、细胞大小和细胞质组成。
观察活细胞形态，其细胞体形状各异，并具有活动性。
细胞大小可以根据荧光显微镜和流式细胞仪监测，死细胞体积一般小于活细胞体积。
此外，也可以测定细胞质组成，如细胞培养基中活细胞含量远高于死细胞，因此可以通过分析细胞培养基中的活细胞含量来量化评价活细胞的死活。
三、检测细胞代谢特性也是一种常见的检测细胞死活的方法。
细胞代谢特性是衡量细胞活力水平的重要指标，如细胞的糖异构化、蛋白质组合、酶的活性、细胞的ATP水平等均可以用来衡量活细胞的状态。
此外，细胞细胞因子，如细胞因子及表观遗传物质，如mRNA、miRNA等也可以作为调节和检测细胞死活的指标。
四、测定细胞核和其他细胞指标。
细胞死活状态的检测也可以利用细胞核指标来估算，活细胞的细胞核含有较多的染色质和活性核酸，而死细胞核中染色质明显变性，而其他细胞指标如非细胞物质的含量、活性氧的变化、离子通量的变化和细胞内ATP水平的变化也可以用来检测细胞死活。
总之，细胞死活是决定细胞繁殖及功能性状态的关键因素，细胞死活的检测对研究和诊断生物学研究有重要意义。
现代生物技术为探究细胞死活提供了有效的工具，如细胞膜电位检测、细胞结构检测、细胞代谢特性检测和细胞核等技术可以有效地检测细胞死活。
鉴定细胞死活的方法
鉴定细胞死活的方法
鉴定细胞死活的常见方法如下：
1.显微观察：使用倒置显微镜或荧光显微镜观察细胞形态和结构，判断细胞是否出现明显的形态变化或结构改变。
2.染色方法：使用各种染色剂（如乙酰红胶、甲基蓝、孔雀石绿等）对细胞进行染色，观察染色结果来判断细胞的颜色和形态，从而判断细胞的死活。
3.细胞膜渗透性检测：使用荧光染色剂（如PI、DAPI等）通过细胞膜进入细胞内，观察细胞是否发生荧光变化，判断细胞膜的完整性和死亡程度。
4.细胞内酶活性检测：使用特定的酶底物和荧光染料（如细胞色素c、卡尔比蓝等）对细胞内酶活性进行检测，观察是否发生荧光变化，判断细胞内的酶活性和细胞状态。
5.流式细胞术：使用流式细胞术对细胞进行筛选、分离和分析，通过测量细胞形态、大小、颜色等参数，来判断细胞的死亡程度和数量。
6.细胞增殖检测：通过检测细胞的DNA合成、核分裂或细胞周期等指标，来判断细胞生长和增殖的状态，进而推断细胞的死亡或存活。
值得注意的是，不同的细胞类型和实验目的可能需要使用不同的死活检测方法。
死活细胞的鉴别
（一）、死活细胞的鉴别生活细胞近似无色透明，用普通光镜无法观察其形态，需用相差显微镜来观察。
染色排除法：组织培养中检查死活细胞最常用的是“染色排除法”这类方法简单但不甚严格，它只能判断细胞的代谢死亡，不反映细胞能否增殖。
由于未经过固定、专门染色，所以看不到死活细胞的形态差别。
所用染料的分类：一般的生物染料不能穿过活细胞膜只有细胞被固定或细胞膜被破坏，染料才能进入细胞膜。
第一类：死细胞着色，使死细胞着色的大部分是酸性染料。
它们不容易穿透活细胞的质膜，进入胞内，但却能渗透死亡的细胞，使之着色。
如①台盼兰（Trypan blue）：0.5-1%的台盼兰，pH7.0-7.2，每毫升细胞悬液加0.1ml 染液，2 分钟后镜检，活细胞没有染上，死细胞全部被染成蓝色。
②苯胺兰(Aniline’ black)：0.05%的苯胺黑以1：10 的量与细胞悬液混匀，1-2 分钟后，死细胞被染成黑色。
③伊红Y：细胞悬液与细胞悬液混喝，2 分钟后死细胞被染成桃红色。
等。
第二类：活细胞着色，多为碱性染料，如中性红、健那绿、亚甲蓝、甲苯胺蓝等。
它们是一些无毒或毒性很小的染料，由于电性吸引而堆积在细胞中某一特定的结构上从而显色，即它们解离后带正电，其中有的染料可与胞内某些结构专一性的结合。
①1%结晶紫染色生理1%结晶紫盐水与细胞悬液1：2 混合，立即镜检，或细胞被染成蓝紫色，而死细胞不着色。
属于活细胞染料。
活细胞染料无毒，无物理、化学变化，基本上不影响细胞的生命活动。
②用呀啶橙染色可以鉴别出细胞固定前的死活状态。
丫啶橙是一种与DNA 和RNA 都能结合的荧光染料，在兰光或紫外光激发下，DNA 可激发出530nm 的荧光发射峰，RNA 可激发出640nm 的荧光发射峰，它与双链DNA 的结合方式是潜入双链之间，而与单链DNA 和RNA 则由静电吸引堆积在磷酸根上。
在蓝光的激发下，细胞核发亮绿色荧光，核仁和胞质RNA质发生变形，其核呈暗绿色，胞质整个呈暗绿色。
区分活细胞和死细胞的方法
区分活细胞和死细胞的方法同学们，今天咱们来研究一下怎么区分活细胞和死细胞，这可有意思啦！有一种简单直接的方法，那就是观察细胞的形态。
活细胞通常看起来饱满、有光泽，就像充满活力的小朋友，精神头十足。
而死细胞呢，往往会变得干瘪、皱缩，就像泄了气的皮球。
比如说，我们观察洋葱表皮细胞，如果细胞看起来圆润、透明，那很可能是活的；要是变得皱巴巴、颜色暗淡，那可能就是死了。
还有一种方法是看细胞能不能进行新陈代谢。
活细胞就像一个小工厂，不停地进行着各种化学反应，吸收营养物质，排出废物。
我们可以通过检测细胞对某些物质的吸收或者产生来判断它是不是活着。
比如，给细胞提供一些有颜色的染料，如果活细胞能吸收这些染料，就说明它在进行新陈代谢。
再来说说细胞膜的通透性。
活细胞的细胞膜就像一个聪明的保安，只允许对细胞有用的物质进来，没用的或者有害的就挡在外面。
而死细胞的细胞膜就失去了这种控制能力，什么东西都能随便进出。
我们可以用一些特殊的染料或者试剂来检测细胞膜的通透性，从而判断细胞的生死。
细胞的繁殖能力也是一个重要的指标。
活细胞能够分裂、生长，不断产生新的细胞。
如果我们在显微镜下观察到细胞正在进行分裂，那它肯定是活的。
而死细胞可没有这种本事。
还有一种有趣的方法是台盼蓝染色法。
台盼蓝这种染料一般进不了活细胞，但能进入死细胞，让死细胞染上蓝色。
所以，我们把细胞和台盼蓝染料放在一起，如果细胞被染成蓝色，那就是死细胞；没被染色的就是活细胞。
在观察培养的细胞时，我们用台盼蓝染色，发现大部分细胞没有被染色，只有少数细胞变蓝了，那就说明大部分细胞是活的，少数细胞已经死亡。
通过这些方法，我们就能比较准确地区分活细胞和死细胞啦。
这对于我们研究细胞的生命活动、疾病的发生机制，还有药物的效果等等都非常重要。
想象一下，如果医生不知道怎么区分病变组织中的活细胞和死细胞，就很难制定出有效的治疗方案。
所以，学会区分它们，能帮助我们更好地了解生命的奥秘，解决很多实际的问题呢！。
死活细胞鉴别实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞培养的无菌操作技术。
2. 学习并掌握动物细胞原代培养和传代培养的实验方法。
3. 了解细胞生死状态鉴别的原理和方法。
4. 熟悉和掌握各种鉴别细胞生死状态方法的判定特征。
二、实验原理细胞培养是指在无菌条件下，将动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体内的生理环境，使离体的细胞在体外生长和繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。
细胞生死状态的鉴别方法主要包括化学染色法和荧光染色法。
活细胞和死亡细胞在生理功能和性质上存在以下差异：1. 细胞膜通透性差异：活细胞的细胞膜具有选择性通透性，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性地通过；而细胞死后，细胞膜受损，通透性增加。
2. 代谢差异：活细胞具有正常的代谢活动，而死亡细胞代谢活动停止。
基于以上差异，我们可以通过以下方法鉴别死活细胞：1. 台盼蓝染色法：活细胞不会被台盼蓝染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。
2. 伊红染色法：活细胞不着色，而死细胞会被染成红色。
3. 荧光染色法：活细胞不发光，而死细胞会发出荧光。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：动物细胞培养液、培养皿、移液枪、吸管、显微镜、台盼蓝染液、伊红染液、荧光染液等。
2. 实验仪器：超净工作台、离心机、细胞培养箱、显微镜等。
四、实验步骤1. 取动物细胞培养液，加入适量的台盼蓝染液，混匀后静置5分钟。
2. 用吸管吸取染色的细胞悬液，滴加在载玻片上，盖上盖玻片。
3. 将载玻片置于显微镜下观察，活细胞不着色，而死细胞被染成蓝色。
4. 取动物细胞培养液，加入适量的伊红染液，混匀后静置5分钟。
5. 用吸管吸取染色的细胞悬液，滴加在载玻片上，盖上盖玻片。
6. 将载玻片置于显微镜下观察，活细胞不着色，而死细胞被染成红色。
7. 取动物细胞培养液，加入适量的荧光染液，混匀后静置5分钟。
8. 用吸管吸取染色的细胞悬液，滴加在载玻片上，盖上盖玻片。
9. 将载玻片置于荧光显微镜下观察，活细胞不发光，而死细胞发出荧光。
死活MSCs细胞的鉴别
方法2：
1、细胞培养在盖玻片上，取出经Hank s液轻轻洗两次，半小时入纯甲醇固定5分钟，或者甲醇－冰醋酸（9：1）固定10分钟，如果着重显示染色体，则可用甲醇－冰醋酸（3：1）反复固定10分钟（具体方法见前面的实验）。充分晾干。
2、将Giemsa原液用磷酸缓冲液（1/15MpH6.8）稀释10－20倍，、滴在载玻片上，染色5-15分钟。
第二类：活细胞着色法
0。1%的结晶紫生理盐水溶液与细胞悬液1：2混合，立即镜检，活细胞染成兰色。
此外使活细胞着色的染料还有亚甲基兰（Methylene blue）、甲苯胺兰（Toluidine blue）。
方法（二）吖啶橙法
[一]实验原理：
细胞经甲醇-乙醚固定后，用吖啶橙染色，能鉴别出固定之前细胞的死、活状态。吖啶橙（Acridine Orange，AO）是一种与DNA和RNA都能结合的荧光染料，在兰光或紫外光激发下，原来的活细胞经固定，染色后细胞呈绿色，核仁和散布在细胞质中的RNA呈桔红色，细胞质其余部分为淡红褐色。而死亡的细胞因物质发生变性，其核呈暗绿色，细胞质整个呈这铜色。染色后的标本可存放14天以上。此法用于观察药物杀死的细胞的形态特征等。
10×母液配制：
NaCl80.0gMgSO4·7H2O 2.0g
KCl4.0gNa2HPO4·12H2O 1.2g
KH2PO40.6g葡萄糖（无水）10.0g
*CaCl21.4g（先单独用100ml三蒸水另溶后合并）
Hanks工作液配法：取100ml母液+900ml三蒸水＋1％酚红（单独配置）2ml，10磅20分钟高压消毒，后用消毒的NaHNO3调PH至7.0－7.2.4℃保存备用。
磷酸盐缓冲液（pH6.8）：
死活细胞鉴别操作流程
死活细胞鉴别操作流程下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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区别细胞死活的方法
区别细胞死活的方法以《区别细胞死活的方法》为标题，写一篇3000字的中文文章表达细胞的存活状态一直是生物学领域的一个重要课题。
实验室中的细胞死活的检测，对每一个研究者来讲都十分重要。
然而，有几种检测方法可用于指示细胞的活替死的特性。
在本文中，我们将重点介绍几种常见的区别细胞死活的方法，以及这些方法的优势和局限性。
第一种检测方法是测量细胞膜电位、吞噬活力和膜稳定性。
在这种检测方法中，研究人员可以测量细胞膜电位和膜稳定性，检测细胞内存在的活性物质，以衡量细胞的能量代谢状态和其他活力特性。
此外，研究人员可以利用吞噬活力（如细胞吞噬染料）来检测细胞是否还活着。
第二种检测方法是针对细胞膜蛋白、游离脂肪酸和核酸来检测细胞活替死。
研究人员可以通过分析细胞膜蛋白的量来检测细胞死活状态，因为当细胞死亡后，膜蛋白会消失或衰退。
此外，研究人员可以利用脂肪酸比例来检测细胞的死活程度，因为当细胞死亡后，游离脂肪酸的含量会明显升高。
此外，研究人员还可以利用核酸检测技术，如定量PCR（qPCR），来检测细胞中特定基因的表达情况，以推断细胞是否存活。
第三种检测方法是测量细胞核状态。
此种方法借助染色技术，可以检测细胞核的形态及物理状态，以区分细胞的死活状态。
研究中，研究人员经常采用细胞核染色剂如碱型染料（如阿魏酸盐）和液态氨基丹（DAPI），来检测细胞核是否仍然存活。
总的来说，以上是几种测量细胞死活的方法，每一种都有其独特的优势和局限性。
测量细胞膜电位、吞噬活力和膜稳定性的方法可以提供电子显微镜下的细胞形态及物理状态的细节，可以更准确地判断细胞死活状态。
针对细胞膜蛋白、游离脂肪酸和核酸的检测方法，可以提供细胞代谢和基因表达方面的活替死信息，可以给出细胞死活状态的更精确的估计。
细胞核染色的技术，可以判断细胞的死活状态以及细胞的健康状况。
此外，不同的检测方法都可以结合实验技术，以便由研究人员选择最合适的技术，以正确地判断细胞的死活状态。
细胞建议实验一死活细胞的鉴定（参考）
建议实验一、死活细胞的鉴定一、实验原理死活细胞的鉴定在生物学和医学上具有很重要的意义。
细胞培养过程中要随时记录细胞的生长情况，需要经常测定细胞的存活率；在肿瘤细胞的研究中，为了检验各种药物对肿瘤细胞的杀伤力，也需要测定肿瘤细胞的存活率。
在临床医学中死活细胞的鉴定也有很大的应用，例如为了检测某一男子的生育能力，测定精子细胞的存活力是比较常用的办法。
精子存活率以“活”精子比率表示，若不活动的精子较多，应体外活体染色检查，以鉴别其死活。
活精子的细胞膜能阻止伊红Y、台盼蓝等染色剂进入细胞内，故不被染色；死精子细胞膜完整性受损。
失去屏障功能，可被染色成橘红或蓝色，有生育力男性伊红染色法的活精子率≥75%。
死活细胞的鉴定方法有很多种，常用的有染色法和仪器分析法。
染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作。
但是通过直接的形态观察来鉴别细胞死活，实验结果很容易受操作者的主观因素的影响，存在一定的误差，所以，在实际操作中也常采用一些仪器来进行精确的批量检测。
不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理，但无论采用何种办法，都是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异。
常用的方法包括染色法和仪器分析法。
死活细胞在生理机能和性质上的差异主要包括：死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择透性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。
常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就是利用了这一性质。
台盼蓝，又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜。
所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色，而活细胞不被着色。
甲基蓝有类似的染色机理。
死活细胞在代谢上的差异：是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。
美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色。
由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色；而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱，使美蓝处于氧化态，从而被染成蓝色或淡蓝色。
(完整word版)1.酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别 3学时
实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别一、实验目的与要求1. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式；2。
学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；3. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别.二、实验原理1。
酵母菌酵母菌是不运动的单细胞真核微生物,其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。
但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片或水—碘液浸片法来观察酵母细胞。
大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。
本实验通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式，并对酵母细胞进行死活染色鉴别。
2. 美蓝染液美蓝是一种无毒性的染料,它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞,无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此,不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。
图1:酵母菌美兰浸片观察3min（10×40）图2：酵母菌美兰浸片观察30min（10×40）三、实验设备及材料1。
菌种酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae) 或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2 天左右的麦芽汁（或豆芽汁）液体培养物。
2. 溶液或试剂：0.1％和0.05%吕氏碱性美蓝溶液(或0。
01%美篮水溶液),革兰氏染色用碘液等。
3．器材：显微镜，擦镜纸，吸水纸，盖玻片、酒精灯、接种环、镊子等等。
四、实验步骤与内容1．美蓝浸片的观察(1）在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染色液,然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。
注:染液不宜过多或过少,否则,在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。
酵母菌死活细胞鉴别
四、操作步骤
1、滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央，无 滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央 吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央， 菌操作用接种环由酵母菌培养斜面上挑取少许菌体置于染液 混合均匀；（不要过于剧烈，以免破坏细胞） ；（不要过于剧烈 中，混合均匀；（不要过于剧烈，以免破坏细胞） 2、用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢 用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触， 将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上；（不要产生气泡） ；（不要产生气泡 将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上；（不要产生气泡） 3、将制片放置3min后，用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形 将制片放置3min后 态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死活细胞； 态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死活细胞； 4、染色30min后再次观察，注意死活细胞比例是否发生变 染色30min后再次观察 后再次观察， 化； 5、用0.05%吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验。 0.05%吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验 吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验。 建议做，用等量生理盐水稀释染液即可） （建议做，用等量生理盐水稀释染液即可）
酵母出芽
三、器材
1、菌种：酵母菌2d的培养斜面或平皿； 的培养斜面或平皿； 菌种：酵母菌2d的培养斜面或平皿 2、溶液和试剂：吕氏碱性美蓝染液； 溶液和试剂：吕氏碱性美蓝染液； 3、仪器和其他用品：酒精灯，载玻片，盖玻片， 仪器和其他用品：酒精灯，载玻片，盖玻片， 显微镜，接种环，滴管等。 显微镜，接种环，滴管等。
酵母菌细胞的形态观察、 酵母菌细胞的形态观察、 死活细胞的鉴别
一、目的和要求
1、观察酵母菌细胞的形态结构； 观察酵母菌细胞的形态结构； 2、掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色原理和 方法； 方法；
死活细胞的鉴定方法
死活细胞的鉴定方法鉴定死活细胞有多种方法，以下是几种常见的死活细胞鉴定方法：1.染色法染色法是一种常用的死活细胞鉴定方法。
它通过染色剂对细胞膜通透性的不同来区分活细胞和死细胞。
常用的染色剂有台盼蓝、中性红、碘化丙啶等。
台盼蓝可以透过死亡细胞的细胞膜，使死细胞着色，而活细胞则不能。
中性红和碘化丙啶则只能透过活细胞膜，使活细胞着色。
通过这种方法，可以清楚地看到细胞中的死活细胞分布情况。
2.荧光染色法荧光染色法是一种灵敏度更高的死活细胞鉴定方法。
它利用荧光染料对细胞进行染色，在荧光显微镜下观察细胞的荧光情况。
活细胞能够吸收荧光染料，发出荧光，而死细胞则不能。
这种方法可以更准确地检测出细胞中的死活细胞比例。
3.呼吸测试法呼吸测试法是一种直接检测细胞活性的方法。
它通过测量细胞在氧气消耗和二氧化碳释放方面的变化来评估细胞的活性。
活细胞在代谢过程中需要消耗氧气并释放二氧化碳，而死细胞则不具备这种代谢活性。
通过测量氧气和二氧化碳的浓度变化，可以判断细胞的死活情况。
4.膜电位法膜电位法是一种通过检测细胞膜电位变化来区分活细胞和死细胞的方法。
活细胞的细胞膜内外的电位差通常为负值，而死细胞的电位差则为正值。
利用这种电位差的变化，可以判断细胞的死活情况。
5.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）活性检测法G6PD活性检测法是一种通过检测G6PD酶的活性来区分活细胞和死细胞的方法。
G6PD是红细胞中的一种酶，当红细胞死亡时，该酶的活性会迅速下降。
通过检测G6PD的活性，可以判断细胞的死活情况。
6.线粒体膜电位检测法线粒体膜电位检测法是一种通过检测线粒体膜电位的变化来区分活细胞和死细胞的方法。
线粒体是细胞中负责能量代谢的重要细胞器，活细胞的线粒体膜电位通常为负值，而死细胞的线粒体膜电位则为正值。
通过检测线粒体膜电位的变化，可以判断细胞的死活情况。
培养细胞之死活细胞的鉴别实验报告
五、注意事项
5.1 在进行方格查数时注意：数上不数下，数下不数上。
5.2 实验涉及的台盼蓝染料有致癌危险，因此滴加染液时要小心，防止溅到皮肤上。
5.3 动物细胞培养使用的所有器皿、用具、溶液等必须经过严格消毒或除菌处理，才能进超净工作台中使用，整个实验过程都要有无菌操作的概念，避免细胞被污染。
5.7 器皿、离心管培养瓶等在离开超净工作台前必须将盖子或橡皮塞盖紧，以防止细胞污染或溶液漏出。
六、实验结果
取样位置
左上
左下
右上
右下
活细胞数
27
33
35
37
死细胞数
78
61
89
80
细胞总数
105
94
124
117
每大格细胞总数平均值为110，每大格平均死亡细胞数为77
每毫升溶液中细胞总数=110*10000*2=2.2*106个
② 代谢上的差异：活细胞中新陈代谢作用强，细胞内的酶具有较强的活性和还原能力。基于此，发展处了以荧光素二乙酸酯（FDA）、荧光素二丙酸酯、荧光素二丁酸酯或荧光素二苯甲酰酯等酯化的荧光素鉴别细胞生死状态的方法，上述酯化的荧光素亲脂性提高，容易被细胞吸收进入，活细胞内的酯酶具有较强的活性，可将酯化的荧光素分解而释放出能发荧光的荧光素，该物质不能自由透过活的细胞膜，积累在细胞内，荧光显微镜下显示有明亮的绿色或黄绿色荧光；而死亡细胞内的酯酶因失去活性，不能分解酯化的荧光素，荧光显微镜下显示不发光。
细胞存活率=（110-77）/110*100%=30.0%
七、分析与讨论
7.1 实验数据讨论
实验四死活细胞鉴别
实验四死活细胞鉴别实验四死活细胞鉴别目的要求学习并掌握死活细胞鉴别的原理及方法。
实验原理死活细胞鉴别有许多不同的方法，其中最常用方法是染色排除法。
其原理是：许多酸性染料不容易穿过活细胞的质膜进入胞内，使其着色，以此来鉴别死活细胞。
也可以用荧光排除法来鉴别，其原理是：由于活细胞内有较强的酯酶活性，可将二丙酸酯荧光素分解出来，从而使细胞发出强烈的黄绿色荧光。
而死亡的细胞，由于酯酶活性丧失，不能分解二丙酸酯荧光素，则完全没有荧光，从而区别死活细胞。
实验用品（1）器材：显微镜、荧光显微镜、离心机。
（2）试剂：1％台盼蓝溶液（生理盐水配制）、0.05％苯胺黑Hanks溶液、0.02％赤藓红B 染液、0.15％伊红Y染液（生理盐水配制）、丙酮Ph5～6的生理盐水、0.65mol/L甘露醇、二丙酸酯荧光素染液（取二丙酸酯荧光素10mg溶于5ml丙酮中，将此溶液逐滴加入5ml生理盐水或0.65mol/L甘露醇溶液中直至出现永久性乳白色沉淀为止）。
（3）材料：培养细胞。
方法台盼蓝（Trypan Blue）法。
（1）试剂：用生理盐水配成0.4％台盼蓝染液。
（2）染色制片：取0.5ml细胞悬液放入干净试管中，加入约0.1ml（1～2滴）染液，混合，2min后立即制成临时装片，镜检。
（3）结果：死细胞染成蓝色，活细胞不着色。
根据下式求细胞活力：细胞总数－死细胞数细胞存活率（％）＝×100％细胞总数观察结果生活力强的细胞能发出强烈的黄绿色荧光；生活力弱的细胞发出荧光也较弱；死亡细胞则无荧光。
作业书写实验报告，计算所测细胞成活率。
思考题细胞活力检测有何用途？。
植物细胞死活的鉴定和植物组织渗透势的测定.doc
植物细胞死活的鉴定和植物组织渗透式的测定中文摘要：植物活细胞是一个渗透系统，通过渗透的性质及现象可以鉴定一个植物细胞的死活。
当植物细胞或组织放在外界等渗溶液中时，组织与外界溶液的水分交换达到动态平衡，植物细胞处于初始质壁分离状态，细胞压力势为零，此时溶液的渗透势就等于所测植物的渗透势。
英文摘要：Plants living cells is a osmosis system, we through permeating the nat ure and phenomena can be id entified a plant cell anyway. When the plant cell or tissue on external etc, organization and infilt ration solution when the moisture exchange reach outsid e solution dynamic balance, plant cells in its initial qualitative wall separated, the cellular pressure potential zero, then solution penetration of potential is measured the pl ant penetration of potential.Part I 植物细胞死活的鉴定实验原理：植物细胞是一个渗透系统。
当细胞处于比其水势低的高渗透溶液中时，细胞由于失水而使原生质体体积缩小，从而引起质壁分离。
当提高细胞外溶液的水势，使其大于细胞内的水势时，细胞重新吸水，原生质体体积膨胀，可见质壁分离复原。
活细胞与死细胞的膜在性质上有许多差别，特别是透性的变化最为明显；因此活细胞在高渗溶液中能产生质壁分离，而死细胞不能产生质壁分离现象，即可以此鉴定。
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（一）、死活细胞的鉴别生活细胞近似无色透明，用普通光镜无法观察其形态，需用相差显微镜来观察。
染色排除法：组织培养中检查死活细胞最常用的是“染色排除法”这类方法简单但不甚严格，它只能判断细胞的代谢死亡，不反映细胞能否增殖。
由于未经过固定、专门染色，所以看不到死活细胞的形态差别。
所用染料的分类：一般的生物染料不能穿过活细胞膜只有细胞被固定或细胞膜被破坏，染料才能进入细胞膜。
第一类：死细胞着色，使死细胞着色的大部分是酸性染料。
它们不容易穿透活细胞的质膜，进入胞内，但却能渗透死亡的细胞，使之着色。
如①台盼兰（Trypan blue）：0.5-1%的台盼兰，pH7.0-7.2，每毫升细胞悬液加 0.1ml 染液，2分钟后镜检，活细胞没有染上，死细胞全部被染成蓝色。
②苯胺兰(Aniline’ black)：0.05%的苯胺黑以 1：10 的量与细胞悬液混匀，1-2 分钟后，死细胞被染成黑色。
③伊红 Y：细胞悬液与细胞悬液混喝，2 分钟后死细胞被染成桃红色。
等。
第二类：活细胞着色，多为碱性染料，如中性红、健那绿、亚甲蓝、甲苯胺蓝等。
它们是一些无毒或毒性很小的染料，由于电性吸引而堆积在细胞中某一特定的结构上从而显色，即它们解离后带正电，其中有的染料可与胞内某些结构专一性的结合。
①1%结晶紫染色生理1%结晶紫盐水与细胞悬液 1：2 混合，立即镜检，或细胞被染成蓝紫色，而死细胞不着色。
属于活细胞染料。
活细胞染料无毒，无物理、化学变化，基本上不影响细胞的生命活动。
②用呀啶橙染色可以鉴别出细胞固定前的死活状态。
丫啶橙是一种与 DNA 和 RNA 都能结合的荧光染料，在兰光或紫外光激发下，DNA 可激发出 530nm 的荧光发射峰，RNA 可激发出 640nm 的荧光发射峰，它与双链 DNA 的结合方式是潜入双链之间，而与单链 DNA 和 RNA 则由静电吸引堆积在磷酸根上。
在蓝光的激发下，细胞核发亮绿色荧光，核仁和胞质 RNAPage 9发桔红色荧光。
因此，原来的活细胞经固定、染色后细胞核呈亮绿色，核仁和散布在细胞质中的 RNA 呈桔红色，胞质其余部分为淡红褐色。
死亡的细胞，因物质发生变形，其核呈暗绿色，胞质整个呈暗绿色。
但丫啶橙的阳离子也可以结合在蛋白质、多糖和膜上而发荧光，但由于经过细胞固定抑制了这种结合，从而主要显示出的是 DNA 和 RNA 两种核酸。
本次实验即选用活细胞染料健那绿来显示线粒体。
（二）细胞核和染色体的染色Giemsa 染色：姬姆萨是常用的染料，可观察核、染色体。
醋酸地依红染色：可显示有丝分裂染色体的微细结构，如次缢痕、染色质丝的螺旋化等。
该染料同时具有固定和染色的作用，因此也可用来坐快速检查有丝分裂指数。
（细胞涂片，0.075 mol 的 KCI 低渗 5-10 分钟，使细胞膨胀，染色体分裂；甲醇固定 10 分钟，空气干燥，滴加 2%醋酸地衣红，染 10-20 分钟后即可观察。
（三）细胞器的特殊染色1、内质网的显示早在 1945 年，有人用电子显微镜就观察到了小鼠成纤维细胞的内质网。
之后，观察内质网基本是采用电子显微镜。
在 80 年代中开始发展了一些活细胞荧光染料，又称“荧光探针”，为显示细胞内的模型结构，包括内质网，提供了新的途径。
DiOC6(3):是一种亲脂性的阳离子荧光染料，可选择性的与负电性的膜结构结合。
在低浓度时仅能染出线粒体，细胞界限不清，较高浓度时（0.5-2.5μg/ml）内质网染色最佳，而容媒体、高尔基体等均然浅色。
2、高尔基体的显示在光镜下观察高尔基体可用景点的固定染色，也可用活细胞荧光染料。
由于高尔基参与分泌这一动态过程，对糖蛋白、糖脂进行加工、分选和运输，所以在活细胞中研究其动态和三维结构具有重要的意义。
Baker 苏丹黑染色法：可用于组织块、体外培养的单层细胞的染色。
染色结果：高尔基体呈黑色囊泡，细胞核呈红色。
Page 10活细胞中高尔基体染色：用荧光探针 NBD-hexanoic ceramide 进行染色。
溶酶体的显示：观察溶酶体可以用电子显微镜，也可以采用细胞化学的方法来现实。
比如，酸性磷酸酶是溶酶体的标志酶。
这部分内容在下学期讲。
3、线粒体的显示线粒体（mitochondrin）:是细胞内一个极为重要的细胞器，是细胞内物质氧化磷酸化产生能量的重要结构。
线粒体的形态结构和功能定位光镜：多为粒状、杆状、线状。
不同的细胞类型，不同的生理状况，其形态大小也有所不同。
电镜：是由二层单位膜围成的膜性囊，⑴．外膜与内膜不连接。
⑵．内膜是皱褶的。
⑶．内膜表面不光化的膜结构向内凹陷，形成嵴。
⑷．嵴上有基体微粒（上面有 ATP 酶，是偶联磷酸化的关键装置）。
⑸．嵴间为基质，含蛋白质、脂类、DNA、RNA 和核蛋白体。
有关催化线粒体内各种生命活大过程所需的酶和辅酶，都分布在线粒体的基质中。
细胞生命活动中需要的大约 95%的能量来自线粒体。
所以说线粒体是一个重要的细胞器。
细胞的内外环境因素的改变，可引起线粒体结构和功能的异常。
发现和检查线粒体就显得十分重要了。
但线粒体在动物死后极易产生变化，故取材必须新鲜。
实验三健那绿染活细胞线粒体原理：健那绿（Janus green B）是对线粒体专一的活细胞染料，具有脂溶性，能跨过细胞膜，解离后，有染色能力的基团带正电，结合在负电性的线粒体内膜上。
内膜上的细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态，呈蓝绿色。
而在胞质内染料被还原成无色。
线粒体浸泡在染液中能维持活性数小时，使我们能够直接看到生活状态的线粒体的外形，分布及运动。
试剂：0.2%Janus green B 0.1g 加温到 30-40℃，充分生理盐水50ml 溶解。
（需新鲜配置，以保持被氧化的能力）染色：1.培养的细胞或用牙签刮下口腔粘膜上皮细胞；2.涂在干净的载玻片上；2.滴加 0.2%Janus green 液，室温染 10 分钟，盖上盖玻片观察，注意在盖玻片下放两根头发丝，避免细胞被压迫，并可存有较多的液体。
结果：线粒体呈蓝绿色，细胞质接近无色。
实验四过氧化物酶的显示微体:早在 50 年代初有人发现在动物的细胞内存在有一种微小的颗粒，它多见于肝细胞和肾小球上皮细胞内，但也广泛分布在小肠、心肌、骨骼肌、肺、肾上腺、附睾、神经、脊髓、脑等。
在不同的组织中微体所含的酶也不同，如苹果酸合成酶、过氧化氢酶、天东氨酸氨基转移酶等，过氧化氢酶是微体的标志酶。
在过氧化氢酶分子中，有两种酶活性，即过氧化氢酶活性和过氧化物酶活性。
过氧化物酶和过氧化氢酶两者具有相似的化学性质，它们像血红蛋白和肌红蛋白一样，都属于血红蛋白素蛋白，具有相同的辅基，即铁卟啉或血红素。
过氧化氢酶可使过氧化氢分解成水和氧，2H2O2=2H2O+ O2这个分应称为过氧化氢酶反应，过氧化氢酶因有这种分解作用而被划分为分解酶类，也可把它看作是转移酶或岐化酶。
过氧化物酶对纯过氧化氢没有分解作用，但如果有合适的受体存在，则能催化氧转移到受体上，而使受体被氧化，H2O2+AH2=2H2O+A这个反应称为过氧化物酶反应。
过氧化物酶：又称过氧化酶（peroxidase）过氧化物酶是一种氧化还原酶，它除了分布在髓性白细胞外，还广泛的存在于各种组织细胞中。
它的种类很多，如在牛奶中有乳-过氧化物酶、红细胞中的谷胱甘肽过氧化物酶、酵母中的细胞色素 c 过氧化物酶等。
过氧化物酶的功能：是机体中的抗氧化酶，在防止氧代谢物的损伤中具有重要的作用。
⑴过氧化氢对细胞有毒害作用，通过过氧化物酶的作用可清除过氧化氢，防止其在细胞内聚集。
⑵参与肝、肾对有毒物质的解毒。
⑶对细胞的氧张力具有调节作用。
⑷可能参与核酸、脂肪和糖代谢。
反应原理:过氧化物酶在分解H2O2的过程中，必须由过氧化物而来的氧进行氧化作用的。
在反应中有两种底物，即受氢体与供氢体，前者的代表是过氧化氢，后者的代表是联苯胺类的药。
过氧化物酶的反应通式如下：AH2（供氢体） +H2O2受氢体= A（供氢体的氧化物）+ 2H2O过氧化物酶可将底物中的H2O2分解，产生新态氧，使无色的联苯胺蓝氧化为蓝色的联苯胺蓝。
实验：过氧化物酶的显示原理：同上。
材料和方法：材料：0.5%硫酸铜、1%联苯胺（含有 30%的H2O2）、0.5%藏红花、玻片、滴管、剪子、小鼠。
操作方法：⑴涂片：剪小鼠尾部，取血涂片，晾干备用。
⑵在晾干的涂片上滴一滴 0.5%硫酸铜，染 2 分钟。
⑶倾去硫酸铜，滴加联苯胺冲掉硫酸铜，在加一滴新的联苯胺，染 2-5 分钟。
⑷ 1%的藏红花复染。
⑸流水冲洗，晾干、镜下观察。
结果：粒细胞的过氧化物酶反应阳性，呈蓝色颗粒，细胞质为红色。
临床意义：主要用于定性、定位观察急性白血病及其鉴别诊断。
在正常血骨髓中：过氧化物酶阳性的主要是中性粒细胞。
中性粒细胞：原粒时 POX 为阴性，早幼粒时开始出现阳性反应，以后逐渐反应增强。
嗜酸性粒细胞：P0X 可成团块状。
嗜碱性粒细胞：反应多为阴性。
单核细胞：阳性反应颗粒多为细小弥散。
病理：在急粒、慢粒时 POX 增强，在急单时 POX 减弱。
而在急性淋巴型白血病时，POX 是阴性，因此可以与急性粒细胞性白血病和单核细胞型白血病进行鉴别。
在慢性粒细胞性白血病中嗜碱性粒细胞的 POX 反应呈阳性反应。
（注：本资料素材和资料部分来自网络，仅供参考。
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