1酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别4学时

实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别

预习内容:

1、光学显微镜的使用（参见周德庆,微生物学实验教程第3 版,23-27 页）

2、酵母菌的美蓝染色观察（参见周德庆,微生物学实验教程第3 版,91-95 页）

预习思考题:

1、随着物镜放大倍数的增加,视野的亮度就是增强还就是减弱？应如何调节？视野范围就是如何变化的？

2、制作水浸片时如何避免产生气泡？

3、影响活菌数目的因素有哪些？染液浓度、染色时间及染色时的pH 等因素对死活细胞数目比例有什么影响？

4、如何测定酵母菌死亡率？简述其原理。

5、标本片上的某一物象,第一次瞧到后如何再次找到它?

一、实验目的与要求

1、了解普通光学显微镜的构造及原理,正确掌握使用显微镜的方法;

2、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式;

3、学习区分酵母菌死活细胞的实验方法;

4、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。

二、实验原理

1、酵母菌

酵母菌就是不运动的单细胞真核微生物,其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍,不必染色即可用显微镜观察其形态。但由于细胞个体大,采用涂片的方法制片有可能损伤细胞,一般通过美蓝染液水浸片或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。

大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖,有的分裂繁殖;有性繁殖就是通过接合

产生子囊孢子。本实验通过美蓝染液水浸片与水一碘液水浸片来观察酵母的形态与出芽生殖方式,并对酵母细胞进行死活染色鉴别。

美蓝就是一种无毒性的染料

，

它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形

态,也可用来鉴别酵母菌的死细胞与活细胞。

图1：酵母菌美蓝浸片观察3min(10 X40)图2:酵母菌美蓝浸片观察30min(10 X40)

三、实验设备及材料

1、菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisia© 或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensi培养2天左右的豆芽汁液体培养物(需稀释)。

2、溶液或试剂：0、1%与0、05%吕氏碱性美蓝溶液(或0、01%美蓝水溶液), 革兰氏染色用碘液等。

3•器材:显微镜，擦镜纸，吸水纸,盖玻片、酒精灯、接种环、镊子、胶头滴管、小烧杯、洗瓶等等。

四、实验步骤与内容

1. 美蓝浸片的观察

(1) 在载玻片中央加一滴0、1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌放在染液中，并用接种环将其混合均匀，酒精灯上灼烧清洗接种环。

注:染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。用接种环将菌体与染液混合时，不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。

(2) 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上，用吸水纸吸取多余的液体。

2、美蓝染液

注:盖玻片不宜平着放，以免产生气泡。

(3) 将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态与出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞，绘图。

(4) 染色约0、5h后再次观察并绘图,注意死细胞数量就是否增加。

⑸用0、05%吕氏碱性美蓝染色液重复上述操作。

(6)清洗载玻片，整理实验台。

2. 水-碘液浸片的观察(选做)

在载玻片中央滴一滴革兰氏染色用碘液(卢戈氏碘液),然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。

五、实验结果

绘图说明您所观察到的酵母菌的形态特征、出芽情况及死活细胞数量变化。

图1：酵母菌0、1%美蓝浸片观察3min(10 X10)图2:酵母菌0、1%美蓝浸片观察3min(10 X40)

图3:酵母菌0、1%美蓝浸片观察30min(10 X40)图4:酵母菌0、05%美蓝浸片观察3min(10 X10)

图5:酵母菌0、05%美蓝浸片观察3min(10 X10)图6:酵母菌0、05%美蓝浸片观察30min(10 X40)

注意：显微镜的放大倍数=目镜放大倍数x物镜放大倍数。

物镜倍数(低倍镜10倍,高倍镜40倍，油镜100倍)

六、思考题

1、吕氏碱性美蓝染液浓度与作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。

美蓝浓度越大，作用时间越长则视野中死菌比例越大。

原因:要点一:渗透压增大一细胞失水；要点二:还原力有限，浓度高或时间较长都会对细胞结构造成破坏。

2、在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？

要点:(1)细胞大小及形态；(2)液泡;(3)出芽生殖;(4)鞭毛;(5)细胞核及细胞器

实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别练习题

一、名词解释

1、假菌丝:酵母生长旺盛时，出芽形成的芽细胞尚未脱离母细胞又长出了新芽，

容易形成成串的细胞。如果各细胞之间连接处面积小于细胞直径，形成的这种藕节状的细胞串称为假菌丝。

二、填空题

1、高倍镜头的数值孔径通常为_____ ，放大倍数为 ___ 。

2、油镜头的数值孔径通常为_____ ，放大倍数为___ 。

3、低倍镜头的数值孔径通常就是_______ ，放大倍数为__________ 。

4、使用显微镜低倍镜观察时，聚光器应该 _______ ，使用显微镜高倍镜观察时，聚

光器应该适当________ 。

等九部分组成。

8 简单染色的操作程序就是________________________________________________

9、酵母菌通过0、1%美兰染色1~2分钟后，活细胞呈 _ 色，死细胞呈__ 色；

10、在其它条件相同的情况下，物镜放大倍数越大，焦距___ ，其工作距离___ ,

所需光量_____ 。

11、用日光灯作光源时，通常用—反光镜，用自然光作光源时,通常用反光镜。

12、显微镜的倍数越大，焦深越__ ，调焦应该越___ 。

三、选择题

1、对光学显微镜观察效果影响最大的就是:()

A目镜B物镜C聚光器D总放大倍数

2、目镜头上的"K"字母表示:(C )

A、广视野目镜

B、惠更斯目镜

C、补偿目镜；

3、目镜头上的"P"字母表示:(A )

A、平场目镜

B、广视野目镜

C、平场补偿目镜

4、物镜头上的"PL"字母表示:(A )

A、正低相差物镜

B、正高相差物镜

C、负高相差物镜。

5、物镜头上的"UVL" 字母表示:( C )