制药行业容器密封性完整性测试的简介及选择
药品包装密封完整性检查方法
药品包装密封完整性检查方法药品包装密封完整性检查方法密封完整性检查方法验证是为了证明针对不同包装形式，选用的试验方法满足相应的检测要求，关注方法灵敏度的考察，明确检测方法的检出能力。
在方法验证时应结合所选择的方法开展方法学的验证，系统的方法学研究可结合检测方法，从以下几方面选择后开展：1属性属性指存在可能引起误判的干扰因素时,该方法能准确区分泄漏和非泄漏包装的能力。
例如采用示踪气体（真空模式）氦质谱检测泄漏时，通过包装壁的过量氦气渗透可能掩盖小泄漏，或者可能被误认为本身无密封缺陷包装的泄漏。
2、准确度对容器密封性测试而言，准确度是正确区分泄漏超过要求检测限的包装与泄漏低于此限的包装（即不泄漏）的能力。
可衡量假阳性和假阴性发生的量度。
对于直接定量测量气体泄漏率(或者气体含量或压力)的方法,准确度是系指该方法产生的结果与真实标准结果接近的程度。
3、精密度精密度是该方法产生可靠,可重复数据的能力。
在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性。
同一个实验室，考察随机变动因素，如不同日期，不同人员，采用不同仪器测得结果之间的精密度称为中间精密度。
在不同实验室，由不同分析人员测定样品结果之间的精密度称为重现性。
密封性检查方法验证中的精密度通常与可用资源(例如仪器台数)及预期的检查方法应用有关。
4、检测限检测限是泄漏检查方法能够检出的小泄漏率(或泄漏大小)，又称检出限。
检测限是检查方法灵敏度的度量。
当使用特定仪器品牌或模型来评估给定的产品包装系统时,泄漏测试的检测限取决于其给定的检查方法。
检测限可通过泄漏检查方法对具有和没有已知缺陷的包装进行挑战来证明。
5、定量限定量限系指一个泄漏检查方法在规定的试验条件下能确定的泄漏率或泄漏大小，且测定结果符合准确度和精密度要求。
6、线性线性系指是指方法得出测试结果与泄漏途径大小或泄漏率成正比的能力。
但是容器密封性测试的目的是识别泄漏存在，并且可获取泄漏相对尺寸。
无菌制剂容器密封性测试方法
2018年8月
工艺与设备
Technology and Equipment
化工设计通讯
Chemical Engineering Design Communications
无菌制剂容器密封性测试方法
张艳慧 （华北制药股份公司北元分厂，河北石家庄 050015）
摘 要 ：在考虑无菌制剂的既定用途和产品设计的基础上，需要采取一个灵活的方法评估产品的包装容器完整性。主要介 绍了高压泄露检测法，激光顶空分析法，真空衰减法等常见的检测方法。
Key words ：container integrity ；USP<1207> ；packaging system ；sample
无菌药品在使用前的无菌保证，是药品管理法规的要求。 因此，必须有容器完整性的验证和监测，以确保在无菌药品 生产，质控，运输和储存，乃至产品有效期的整个生命周期 过程中，产品不受微生物的污染，确保病人用药安全。目前 各个国家的药政法规，不存在容器完整性测试的一个黄金标 准，在考虑无菌制剂的既定用途和产品设计的基础上，需要 采取一个灵活的方法，来评估产品的包装容器完整性。 1 高压泄漏检测法
收稿日期 ：2018–05–04 作者简介 ：张艳慧（1984—），女，河北涿州人，工程师，主要研究
方向为药物制剂工艺。
并会产生假阳性结果（比如，当有滞留气体在闸盖处时 ；或 者受到湿度波动的影响时）；当应用于液体制剂时（黏度限制）， 镭射穿孔的阳性控制样本容易出现堵塞的情况 ；对预灌注注 射器，细孔也很容易被蛋白质或硅油堵塞 ；压力变化和泄漏 的尺寸，泄漏的速率有量级的相关性。然而，无法区分泄漏 是来自于多个泄漏小孔还是单个，或者是包装连接处的裂缝。 4 微生物挑战法（：On the basis of considering the intended use and product design of a sterile preparation，a flexible approach is needed to assess the integrity of the product’s packaging container.The article introduces common detection methods，such as high pressure leak detection method，laser headspace analysis，and vacuum attenuation method.
无菌药品容器密封完整性(CCIT)综述
无菌药品容器密封完整性（CCIT）综述1. 引言随着社会各界对药品质量日益重视，国内外法规也对药品生产和质量控制的每一步都提出了很高的要求。
在生产工艺的各控制环节中，药品包装容器的密封完整性往往被人忽视。
从风险管理角度来看，其存在很高的风险，尤其对无菌药品来说，一旦包装容器发生泄漏，将有很大可能被空气中微粒和微生物污染，极大地危害患者健康。
由于冻干粉针剂大多采用真空压塞和微负压压塞，因此容器密封完整性测试显得更为重要。
密封完整性检测的内容主要包括西林瓶有无裂缝，西林瓶胶塞与瓶口的密封效果等。
2. 法规要求各国法规也对 CCIT 提出了明确要求，由此可见其重要性。
中国 GMP 无菌附录第十三章，无菌药品的最终处理第77 条指出，无菌药品包装容器的密封性应当经过验证，避免产品遭受污染。
熔封的产品（如玻璃安瓿或塑料安瓿）应当作 100%的检漏试验，其它包装容器的密封性应当根据操作规程进行抽样检查。
第 78 条指出，在抽真空状态下密封的产品包装容器，应当在预先确定的适当时间后，检查其真空度。
欧盟 GMP 无菌附录，第 177 条指出，应采用经验证的适当方法完成产品的密封。
融封的产品（如玻璃或塑料安瓿瓶的形式）应作 100%的检漏试验。
其它密封形式的完整性应根据适当的规程抽样检查。
美国药典对包装容器密封完整性早有明确要求及说明。
USP（1207）关于无菌药品包装材料完整性评估有以下 4 个通论：Sterile product packaging - integrity evaluation （1207）无菌产品包装----完整性评估Package integrity and test method selection （1207.1）包装完整性和检验方法选择Package Integrity leak testing technologies （1207.2）包装完整性泄漏检测技术Package seal quality test methods（1207.3）包装密封质量检测方法3. 检测方法最理想、直接的方法是逐瓶测试容器的密封完整性，然而限于工业发展的现状和成本较高的原因，除对熔封方式的注射剂要求 100%检漏外，目前对无菌药品的逐瓶完整性测试设备应用尚不普遍。
安瓿瓶密封完整性测试方法
安瓿瓶密封完整性测试方法安瓿瓶泄露的影响安瓿瓶作为医药常用的包装形式之一，安瓿瓶密封性检测项目是需要重点关注的。
安瓿瓶包含塑料安瓿瓶和玻璃安瓿瓶，里面一般填充无菌液体制剂。
安瓿瓶可能会填充无菌空气或氮气。
采用充氮工艺的目的是一方面可以抑制好氧细菌的生长，另一方面也可以防止氧敏感产品被氧化。
安瓿瓶一旦泄漏，空气中的氧气和微生物会侵入容器内，使得内部填充的产品可能被氧化，影响了产品的稳定性；且微生物侵入后，假如填充的产品适合微生物的生长，微生物会快速繁殖，进而给病人的生命安全埋下隐患。
安瓿瓶检漏方法选择容器密封完整性（ container—closure integrity，CCI）是无菌制剂研究和评价的一项重点关注内容，是其在整个生命周期内保证产品质量并保持无菌的关键因素。
2024年6月CDE发布的《化学药品注射剂包装系统密封性研究技术指南（征求看法稿）》明确了始终以来注射剂行业所存在包装系统是否要进行密封性测试的疑虑。
提及了进行注射剂包装密封性测试的几种测试方法。
明确了包装完整性泄漏测试技术（容器密闭完整性测试技术（CCIT））将检漏方法分类为确定性的方法和概率性的方法，其中真空衰减法、压力衰减法、高压放电法和激光顶空分析方法是确定性的方法，而传统的微生物侵入法和色水法是概率性的方法。
安瓿瓶密封完整性检测方法有很多种，认真研读国内外标准，我们给出制药企业常用的几种方法：方法方法灵敏度适用性局限性真空衰减法1.0um—5.0um是目前应用范围较广确实定性检测方法，可用于各种液体、固体，负压、常压，有颜色无颜色包装系统，非破坏性。
不适用于混悬液、乳状液（如蛋白质）、高粘度物质（如糖浆）等容易堵塞泄漏通道的产品。
无法区分泄漏位置及多个泄漏孔还是单个。
高压放电法1.0um—5.0um适用于混悬液、乳状液、黏稠液体、蛋白质等各类制品测试。
检测速度块，可准确找到泄漏位置。
不适用于粉针等固体产品。
内容物必需是导电的液体。
完整性测试简介
3 完整性测试的方法
扩散流法
4 完整性测试的实现
在线完整性
需要实现滤芯的润洗， 需要预留完整性测试口， 需要有合适的排水/排气出口。
离线完性
对管路配置无特殊要求
4 完整性测试的实现
灭菌前 可在线，可离线，无特殊要求
灭菌后 只能在线，保证不对无菌环境造成破坏
生产后 可在线，可离线，无特殊要求
2法规中对完整性测试的要求
3 完整性测试的方法
完整性测试分为2种
破坏性：细菌挑战试验。 由制造商和客户进行。
非破坏性：起泡点（亲水滤芯）/浸入压法（疏水滤 芯），扩散流法
3 完整性测试的方法
起泡点（亲水滤芯） /浸入压法（疏水滤芯）
3 完整性测试的方法
起泡点（亲水滤芯）
3 完整性测试的方法
1 完整性测试的目的
什么是完整性？
2法规中对完整性测试的要求
药品生产质量管理规范（2010年修订） 无菌药品附件 第四十二条 进入无菌生产区的生产用气体（如压缩空气、
氮气，但不包括可燃性气体）均应经过除 菌过滤，应当定期检查除菌过滤器和呼吸 过滤器的完整性。
2法规中对完整性测试的要求
1进入设备压送物料的压 缩气体
4 完整性测试的实现
离线完整性
4 完整性测试的实现
在线完整性（灭菌前及生产后）管路配置
4 完整性测试的实现
在线完整性（灭菌后）管路配置
2法规中对完整性测试的要求
2进入二级过滤器中间压送物料的压缩气体
2法规中对完整性测试的要求
• 第七十五条 非最终灭菌产品的过滤除菌应当符合以下要求： • （一）可最终灭菌的产品不得以过滤除菌工艺替代最终灭菌工艺。如果药
无菌药品包装容器的密封性验证方案
无菌药品包装容器的密封性验证方案1.概述：无菌药品的容器应能在整个有效期内有完好的密封性，防止微生物的浸入。
药品包材的设计及选择要考察相互的配合情况。
无菌容器/密封件系统的完整性测试可以在培养基灌装时进行。
2.目的：评估产品包装的密封性，以充分保护产品在储存期的无菌状态。
3.依据：《药品生产质量管理规范》2010修订版：附录1：第九十五条无菌药品包装容器的密封性应经过验证，以避免产品遭受污染。
4.责任：质量部、生产部对本验证负责。
5.微生物浸入试验法验证密封完整性：往产品容器内灌入培养基并按照常规方式压塞封盖，灭菌后冷却备用。
将冷却后的容器倒置并将瓶口完全浸没于高浓度（108CFU/ml）的运动性菌液中，4小时后，将容器外表面消毒并培养，看是否有挑战性细菌在容器内生长。
多准备一些灌装培养基的样品，在与产品相同地的贮存条件下贮存。
在贮存的一定时间间隔（12,24，36和48个月等），取出部分样品，进行微生物浸入试验，以确定密封系统在贮存期内的有效性。
6.范围：西林瓶、胶塞及铝盖的密封性验证，共有10ml及2ml两种规格。
7.用品：胆盐乳糖培养基铜绿假单胞菌（ATCC 9027）乙酸异丙醇8.实施：8.1制备样品：取已经按相应清洗灭菌操作规程制备好的西林瓶、胶塞及铝塑组合盖150套，西林瓶内灌装入已灭菌的胆盐乳糖培养基，在正常生产线上抽真空、压塞、轧盖。
将每一试样品倒转，使培养基与西林瓶内表面及胶塞充分接触，在30～35℃竖立倒置培养14天，培养基应澄清，无菌落生长。
8.2制备微生物菌悬液：从铜绿假单胞菌（ATCC 9027）的新鲜斜面上取培养物，分别接入含6ml无菌胆盐乳糖培养基的试管中，在30～35℃下培养18～24h；将每管的培养物分别转入含600ml相同培养基的容器内，于30～35℃下培养（约24小时），在培养结束时，能明显见容器内培养基出现浑浊，计数，当菌落数大于108CFU/ml时，停止培养，待用（在微生物侵入试验开始，所用菌悬液浓度（活菌数）必须达到1×108CFU/ml。
无菌药品容器密封完整性(CCIT)综述
无菌药品容器密封完整性（CCIT）综述1. 引言随着社会各界对药品质量日益重视，国内外法规也对药品生产和质量控制的每一步都提出了很高的要求。
在生产工艺的各控制环节中，药品包装容器的密封完整性往往被人忽视。
从风险管理角度来看，其存在很高的风险，尤其对无菌药品来说，一旦包装容器发生泄漏，将有很大可能被空气中微粒和微生物污染，极大地危害患者健康。
由于冻干粉针剂大多采用真空压塞和微负压压塞，因此容器密封完整性测试显得更为重要。
密封完整性检测的内容主要包括西林瓶有无裂缝，西林瓶胶塞与瓶口的密封效果等。
2. 法规要求各国法规也对 CCIT 提出了明确要求，由此可见其重要性。
中国 GMP 无菌附录第十三章，无菌药品的最终处理第77 条指出，无菌药品包装容器的密封性应当经过验证，避免产品遭受污染。
熔封的产品（如玻璃安瓿或塑料安瓿）应当作 100%的检漏试验，其它包装容器的密封性应当根据操作规程进行抽样检查。
第 78 条指出，在抽真空状态下密封的产品包装容器，应当在预先确定的适当时间后，检查其真空度。
欧盟 GMP 无菌附录，第 177 条指出，应采用经验证的适当方法完成产品的密封。
融封的产品（如玻璃或塑料安瓿瓶的形式）应作 100%的检漏试验。
其它密封形式的完整性应根据适当的规程抽样检查。
美国药典对包装容器密封完整性早有明确要求及说明。
USP（1207）关于无菌药品包装材料完整性评估有以下 4 个通论：Sterile product packaging - integrity evaluation （1207）无菌产品包装----完整性评估Package integrity and test method selection （1207.1）包装完整性和检验方法选择Package Integrity leak testing technologies （1207.2）包装完整性泄漏检测技术Package seal quality test methods（1207.3）包装密封质量检测方法3. 检测方法最理想、直接的方法是逐瓶测试容器的密封完整性，然而限于工业发展的现状和成本较高的原因，除对熔封方式的注射剂要求 100%检漏外，目前对无菌药品的逐瓶完整性测试设备应用尚不普遍。
药品包装密封完整性检测方法概述
药品包装密封完整性检测方法概述药品包装密封完整性是指药品包装密封系统能够提供的保护药品的能力。
它通过确保药品在生产、储存和运输过程中免受污染或损坏，从而确保药品的有效性和安全性。
药品包装的密封完整性是确保药品质量和安全的重要因素。
药品包装密封完整性测试通过物理化学或是微生物方法直接或是间接地证明包装密封完整性。
《药品生产质量管理规范》2010 年修订版明确规定，无菌药品包装容器的密封性应当经过验证，避免产品遭受污染。
2020 年 5 月国家药品监督管理局药品审评中心发布的《化学药品注射剂仿制药质量和疗效一致性评价技术要求》已明确密封性检测方法需经适当的验证; 在稳定性考察部分中明确稳定性考察初期和末期进行无菌检查，其他时间点可采用包装密封完整性替代。
包装密封完整性可采用物理完整性测试方法( 如压力/真空衰减等)进行检测，并进行方法学验证。
《美国药典》 USP1207系列指导原则对于包装系统密封性相关研究和评价工作具有较高的借鉴意义，其对无菌药品包装系统密封性的概念，范围，检验等主要包括三个章节：USP1207.1产品生命周期的包装系统密封性检查-检测方法的选择与验证，USP1207.2密封性泄漏检测技术，USP1207.3包装密封质量检测技术。
本文参考该系列指导原则，对药品包装密封完整性的检测方法关内容进行介绍和梳理。
药品包装密封完整性检测，即包装泄漏检测，理想状况下，应能够检测到给定包装产品所不能接受的最小泄漏。
换言之，包装产品所能接受的最大泄漏水平应在检测范围内。
美国药典USP1207对于包装系统完整性检验的方法：主要由传统的微生物挑战法、色水法、气泡释放法、无损定量测试法（真空衰减）、高压放电法、激光法。
并将微生物挑战法与色水法定性为概率性的检测方法，真空衰减法、高压放电法、激光法定性为确定性检测方法。
微生物挑战法实施相对容易，在仪器投入方面成本不高，但其属于破坏性测试方法，对原料损耗相对偏大，无法定量漏孔级别；尤其在当泄漏通道为曲折路径时，漏检率较高。
药液容器的密封性测
引言化学药品注射剂仿制药质量与疗效一致性评价技术要求（征求意见稿）中，稳定性研究技术要求中提到：“稳定性考察初期和末期进行无菌检查，其它时间点可采用容器密封性替代。
容器密封性可采用物理完整性方法（例如压力/真空衰减等）进行检测，并进行方法学验证。
”1、常见的容器密封完整性验证方法主要有如下几种1.1 微生物侵入实验法验证密封完整性：往产品容器内灌入培养基并按常规方式压塞，轧盖，灭菌后冷却备用。
将冷却后的容器倒置并将瓶口完全浸没于高浓度的运动菌液中，如大肠埃希菌，铜绿假单胞菌或粘质沙雷菌，4小时后，将容器外表面消毒并培养，看是否有挑战性细菌在容器内生长。
1.2 饱和盐水法测试密封性：有些产品可以做盐水渗入试验：在玻璃瓶灌入注射用水，并按常规方法密封（压塞、轧盖），此后，将其倒置于一盛有饱和盐水的托盘内，是胶塞及铝盖全部进入饱和盐水中。
将其放入灭菌设备并按常规的灭菌程序灭菌，分析瓶中内容物是否含氯化钠检查密封完整性。
1.3 亚甲基蓝溶液法：取适当数量的玻璃瓶，在玻璃瓶中灌入注射用水，按常规方法压塞、轧盖。
胶塞及样品的处理最好模拟实际生产工艺。
将样品倒置，放入装有一定浓度亚甲基蓝溶液的容器中，使其完全浸没。
将容器放入真空箱中抽真空，维持一段时间，真空箱恢复至常压，继续维持一段时间。
取出，用水冲洗瓶外，目检。
亚甲基蓝溶液不得渗入瓶内。
开发阶段的容器密封完整验证方法有时也用于生产过程中的检测。
2、常见的密封完整性检查方法主要有如下几种2.1 利用染色浴测试密封性：在高温灭菌箱灭菌之后，染色浴的测试可以在灭菌腔室内进行（如果技术条件允许的话），也可在另一个可以调整压力的容器中进行。
将容器完全浸没在染色浴，并且存在负压的环境中。
如果该容器有裂缝，空气就会从瓶中溢出，当容器表面有正压时，染色溶液会从裂缝进入瓶内部。
通过目检剔除变色的容器。
对于小批量产品，染色浴是一个相对经济的做法，不需要很多技术仪器，而且可以检出较大的泄漏。
容器密封性试验
容器/密封系统完好性试验---微生物侵入试验方案---大容量注射剂产品验证编号：起草人：部门审核：QA审核:审核批准人：批准日期：1 概述微生物侵入试验是对最终灭菌容器／密封件系统完好性的挑战性试验。
在验证试验中，取输液瓶，灌装入培养基，在正常生产线上压塞、压盖灭菌。
此后，将容器密封面浸入高浓度运动性菌液中，取出、培养并检查是否有微生物侵入，确认容器密封系统的完好性。
此同时，需作阳性对照试验，确认培养基的促菌生长能力。
2 试验样品的制备2.1 在玻瓶输液及软袋输液生产线上，按100ml、250ml二种产品规格，各取300瓶（袋）数量的瓶（袋）中，灌装营养肉汤培养基，使用自动压塞和压盖设备将容器密封。
2.2 将灌装后的容器经121℃、20分钟灭菌（过度杀灭法灭菌）。
2.3 从灭菌柜中取出试样，冷却，将每一试样倒转，使培养基与容器内表面充分接触，在30～35℃下竖放培养14天。
3 确认培养基促菌生长能力——营养性试验3.1 所有试样培养14 天均不长菌时，随机取20 个带盖试样，每个试样内接种1ml 的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC 9027，菌液浓度：10～100CFU/1ml。
3.2 在30～35℃下培养7天，或培养至所有试样都呈阳性结果。
3.3 若7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样中，微生物生长良好，则容器内培养基的促菌生长能力可判为合格。
使用革兰染色和紫外灯下肉汤呈蓝绿色荧光的性质，来鉴定并确认试样容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌。
4 挑战菌悬浮液的制备4.1 从铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)ATCC 9027 的新鲜斜面上取一整环培养物，分别接入含lOml 无菌培养基的试管中，在30～35℃下培养16～18h。
4.2 将每管的培养物分别转入含1000ml 相同培养基的容器内，于30～35℃下培养22～24h。
在培养结束时，能明显见容器内培养基出现浑浊。
为什么医药企业要进行密封性检测？
为什么医药企业要进行密封性检测？密封测试仪又叫包装检漏仪，是生产、加工企业专门用来检测食品、乳制品以及制药行业的包装袋、瓶子、罐子等容器密封性的仪器，从而保证产品不会因为包装泄漏而产生质量问题延长产品的货架期。
因为有些泄漏点是肉眼看不到的，而密封测试仪可以精准的检测包装的完整性，通过测试判断包装是否存在泄漏问题。
随着医疗行业的发展，密封性检测仪在医疗行业扮演着重要的角色。
在制药行业的应用中，密封试验仪可以进行以下测试：1.测试药品瓶盖和瓶口之间的密封性能，以评估其是否能够有效防止空气、水分和微生物的进入。
2.测试软包装的密封性能，以评估其能否有效防止药品受潮、变质和污染。
3.测试药品注射器的密封性能，以评估其能否有效防止空气和微生物的进入，保证药品的质量和安全。
4.测试药品泡罩的密封性能，以评估其能否有效防止空气、水分和微生物的进入，保持药品的新鲜度和有效性。
比如安瓿瓶、西林瓶密封性不好发生泄漏药品会和外界的空气发生反应，医护人员在不知情的情况下注射到人体后果不堪设想。
所以，西林瓶、安瓿瓶的密封完好性是保证内容物的根本，也是药品生产厂家关心的检测项目。
（推荐济南赛成MFY-CM 智能密封性测试仪）测试原理：通过对真空室抽真空，使浸在水中的试样产生内外压差，观测试样内气体外逸情况，以此判定试样的密封性能；通过对真空室抽真空，使试样产生内外压差，观测试样膨胀及释放真空后试样形状恢复情况，以此判定试样的密封性能。
该仪器符合多项国家和国际标准：GB/T 15171、ASTM D3078 、YB00112023-2023、YBB00122023-2023、YBB00262023-2023 总而言之，密封试验仪的应用非常重要，它不仅可以帮助生产厂家测试药品包装的密封性能，提高工作效率，减少材料成本的损失，还能确保药品包装的质量和安全，保护患者的健康和利益。
赛成仪器立足济南，服务全球。
公司始终秉承持续创新的经营理念，用匠心铸就精品，以品质赢得信赖。
无菌药品包装密封完整性验证研究
无菌药品包装密封完整性验证研究【摘要】密封的包装是保证药品无菌的重要手段之一，本文针对无菌原料药企业常用的包装——10Kg装铝瓶进行论证，并设计了完整的验证步骤，对药用铝瓶的包装密封完整性进行针对性验证。
【关键词】无菌原料药；药品包装；完整性；验证1、目的用微生物挑战试验——液体浸没法，检测瓶装无菌产品密封系统的完整性。
2、适用范围本验证适用于检测10Kg装铝瓶装无菌产品密封系统的完整性。
3、铝瓶生产厂家及批号（略）每个厂家的铝瓶都应取至少3个批次进行试验，以充分证明该厂家生产铝瓶的密封性。
4、概述4.1试验原理向无菌产品铝瓶中灌装无菌培养基并在正常生产线上加塞和压盖，将铝瓶封口端浸在含有高浓度的细菌悬液中，培养这些铝瓶并检查是否有挑战微生物侵入。
4.2试验中的关键控制点a）挑战用培养基的配方；b）挑战用微生物细胞的大小；c）挑战用菌悬液的浓度要足够高（不得低于105CFU/ml）；d）样品浸入菌悬液的时间；e）无菌培养基对挑战微生物的灵敏度。
5、内容5.1仪器用具5.2培养基5.3挑战菌：粘质沙雷氏菌【CMCC（B）41 002】注：粘质沙雷氏菌为短杆菌，约0.5×（0.5～1.0）um，周身鞭毛，能运动，无荚膜，无芽胞，常用于0.45um滤膜的过滤除菌验证。
5.4实验前准备5.4.1无菌培养基的灌装将制备好的培养基经湿热灭菌，待培养基冷却至室温后，在A级层流的保护下，通过无菌操作将培养基灌装至灭菌的10Kg装铝瓶中，在正常生产线上加塞、压盖。
5.4.2无菌检查随机抽取已灌装培养基的铝瓶7瓶，在30-35℃培养14天，每隔两天随机抽取一个铝瓶进行无菌检查。
所有铝瓶均应无微生物生长。
对于铝瓶，因培养期内无法观察是否有微生物生长，检查时，将铝瓶内培养基倒出，转移至一无菌玻璃容器内，观察是否有微生物生长，如发现任何瓶内培养基有微生物生长，丢弃所有的铝瓶，重新开始试验。
5.4.3对试验用铝瓶进行培养基灵敏度检查（略）5.4.4挑战用菌悬液的制备取2-3支粘质沙雷氏菌的斜面培养物，用10ml 0.9%无菌氯化钠溶液洗脱菌苔，将洗脱后的菌苔接入含200L培养基的容器内，于30-35℃培养18-24小时。
无菌药品包装容器的密封性验证方案
述：无菌药品的容器应能在整个有效期内有完好的密封性，防止微生物的浸入。
药品包材的设计及选择要考察相互的配合情况。
无菌容器/密封件系统的完整性测试可以在培养基灌装时进行。
2.目的：评估产品包装的密封性，以充分保护产品在储存期的无菌状态。
3.依据：《药品生产质量管理规范》2010修订版：附录1：第九十五条无菌药品包装容器的密封性应经过验证，以避免产品遭受污染。
4.责任：质量部、生产部对本验证负责。
5.微生物浸入试验法验证密封完整性：往产品容器内灌入培养基并按照常规方式压塞封盖，灭菌后冷却备用。
将冷却后的容器倒置并将瓶口完全浸没于高浓度（108CFU/ml）的运动性菌液中，4小时后，将容器外表面消毒并培养，看是否有挑战性细菌在容器内生长。
多准备一些灌装培养基的样品，在与产品相同地的贮存条件下贮存。
在贮存的一定时间间隔（12,24，36和48个月等），取出部分样品，进行微生物浸入试验，以确定密封系统在贮存期内的有效性。
6.范围：西林瓶、胶塞及铝盖的密封性验证，共有10ml及2ml两种规格。
7.用品：胆盐乳糖培养基铜绿假单胞菌（ATCC 9027）乙酸异丙醇8.实施：8.1制备样品：取已经按相应清洗灭菌操作规程制备好的西林瓶、胶塞及铝塑组合盖150套，西林瓶内灌装入已灭菌的胆盐乳糖培养基，在正常生产线上抽真空、压塞、轧盖。
将每一试样品倒转，使培养基与西林瓶内表面及胶塞充分接触，在30～35℃竖立倒置培养14天，培养基应澄清，无菌落生长。
8.2制备微生物菌悬液：从铜绿假单胞菌（ATCC 9027）的新鲜斜面上取培养物，分别接入含6ml无菌胆盐乳糖培养基的试管中，在30～35℃下培养18～24h；将每管的培养物分别转入含600ml相同培养基的容器内，于30～35℃下培养（约24小时），在培养结束时，能明显见容器内培养基出现浑浊，计数，当菌落数大于108CFU/ml时，停止培养，待用（在微生物侵入试验开始，所用菌悬液浓度（活菌数）必须达到1×108CFU/ml。
包装完整性测试方法重要分析
包装完整性测试方法紧要分析包装系统密封性，又称容器密封完整性，是指包装系统防止内容物损失、微生物侵入以及气体（氧气、空气、水蒸气等）或其他物质进入，保证药品连续符合安全与质量要求的本领。
包装系统密封性检查，或称为容器密封完整性检查，是指检测任何分裂或缝隙的包装泄漏检测（包含理化或微生物检测方法），一些检测可以确定泄漏的尺寸和/或位置。
注射剂包装系统的泄漏类型紧要包含：1）微生物的侵入；2）药品逸出或外部液体/固体的侵入；3）顶空气体含量变化，例如，顶空惰性气体损失、真空破坏和/或外部气体进入。
密封性检查方法优选能检测产出品最大允许泄漏限度确实定性方法，并对方法的灵敏度等进行验证。
如方法灵敏度无法实现产品最大允许泄漏限度水平或产品最大允许泄漏限度不明确，建议至少采用两种方法（其中一种介绍微生物挑战法）进行密封性研究，对两种方法的灵敏度进行比较研究。
微生物挑战法建立时需关注微生物的种类、菌液浓度、培养基种类和暴露时间等。
确定包装系统的最大允许泄漏限度通常基于科学和风险，应综合考虑包装构成和装配、产品内容物以及产品在其生命周期中可能暴露的环境。
有研究表明，刚性包装上直径约为0.1μm的孔隙，液体泄漏的风险很小；而直径约为0.3μm的孔隙存在微生物侵入的风险。
对于无需维持顶空气体的刚性包装，可采用6×10—6mbar·L/s的最大允许泄漏限度值，相当于直径介于0.1～0.3μm 的孔隙，选择这个保守的最大允许泄漏限度可确保较低风险的微生物侵入或液体泄漏，可不进行用于表征漏洞尺寸的额外的微生物或液体侵入挑战研究。
密封性检查方法分为确定性方法和概率性方法两大类。
下表列举了常用的密封性检查方法供参考：类别检测方法一般适用范围文献报道检测限级别定量/定性概率性方法微生物挑战法（浸入或气溶胶法）包装必需能够经受浸没条件，可能需要工具限制软包膨胀或移动，且可用于培养基灌装；常用于包装密封性验证。
药液容器的密封性测
引言化学药品注射剂仿制药质量与疗效一致性评价技术要求（征求意见稿）中，稳定性研究技术要求中提到：“稳定性考察初期和末期进行无菌检查，其它时间点可采用容器密封性替代。
容器密封性可采用物理完整性方法（例如压力/真空衰减等）进行检测，并进行方法学验证。
”1、常见的容器密封完整性验证方法主要有如下几种1.1 微生物侵入实验法验证密封完整性：往产品容器内灌入培养基并按常规方式压塞，轧盖，灭菌后冷却备用。
将冷却后的容器倒置并将瓶口完全浸没于高浓度的运动菌液中，如大肠埃希菌，铜绿假单胞菌或粘质沙雷菌，4小时后，将容器外表面消毒并培养，看是否有挑战性细菌在容器内生长。
1.2 饱和盐水法测试密封性：有些产品可以做盐水渗入试验：在玻璃瓶灌入注射用水，并按常规方法密封（压塞、轧盖），此后，将其倒置于一盛有饱和盐水的托盘内，是胶塞及铝盖全部进入饱和盐水中。
将其放入灭菌设备并按常规的灭菌程序灭菌，分析瓶中内容物是否含氯化钠检查密封完整性。
1.3 亚甲基蓝溶液法：取适当数量的玻璃瓶，在玻璃瓶中灌入注射用水，按常规方法压塞、轧盖。
胶塞及样品的处理最好模拟实际生产工艺。
将样品倒置，放入装有一定浓度亚甲基蓝溶液的容器中，使其完全浸没。
将容器放入真空箱中抽真空，维持一段时间，真空箱恢复至常压，继续维持一段时间。
取出，用水冲洗瓶外，目检。
亚甲基蓝溶液不得渗入瓶内。
开发阶段的容器密封完整验证方法有时也用于生产过程中的检测。
2、常见的密封完整性检查方法主要有如下几种2.1 利用染色浴测试密封性：在高温灭菌箱灭菌之后，染色浴的测试可以在灭菌腔室内进行（如果技术条件允许的话），也可在另一个可以调整压力的容器中进行。
将容器完全浸没在染色浴，并且存在负压的环境中。
如果该容器有裂缝，空气就会从瓶中溢出，当容器表面有正压时，染色溶液会从裂缝进入瓶内部。
通过目检剔除变色的容器。
对于小批量产品，染色浴是一个相对经济的做法，不需要很多技术仪器，而且可以检出较大的泄漏。
USP1207《容器密封完整性测试》解读
USP1207《容器密封完整性测试》解读●关于方法适用性：没有一种方法适合所有应用，测试方法选择基于特定产品的具体情况。
对于给定产品的生命周期，通常采用超过1种方法。
●关于方法适用性：产品包装的小差异可能允许一种方法适用于多个产品包装。
●关于方法的选择：包装存在分压差但不存在绝压差的情况下，可以用示踪气监测法判断泄漏；包装存在绝压差的情况下，可以通过监测顶空绝压随时间变化来判断泄漏。
●关于方法的选择：抽真空时产品成分固化可能会堵塞漏孔，使得真空衰减无效，此时可以考虑用高压放电法，前提是液体产品比包材更导电。
●关于方法的选择：铝箔包装可能证实与高压放电法不兼容，高压放电法最适用于相对不导电的包装材料。
然而，西林瓶的铝盖对高压放电法没有妨碍，甚至可以用于查找西林瓶封口的泄漏。
●关于方法的干扰因素：在某些情况下，包装内容物会干扰方法检测最小泄漏的能力。
如蛋白质成分或盐类可能堵塞漏孔，阻碍了真空衰减法或质量提取法的气体流动使得不能检出。
因此，要很谨慎理解产品对所选方法的潜在干扰，包括在包装装配好的最初时间及后续时间。
●关于微生物和液体侵入：液体在0.1um开始侵入，微生物在0.3um开始侵入。
●关于最大可允许泄漏限值：如果产品不仅要求无菌，还要求顶空气保留，那么此类产品的最大可允许泄漏限值要求更严格，同时还要考虑包装的阻隔性。
●关于最大可允许泄漏限值：硬质容器最大可允许泄漏限值可以采用0.1-0.3um，软包装最大可允许泄漏限值没有指明具体的漏孔。
●关于泄漏级别：要求包装绝对不漏是不切实际的，而是需要考虑与产品质量有关的泄漏级别，也就是说，不应当允许包装泄漏超过产品的最大可允许泄漏限值，此类泄漏应当不存在。
●关于泄漏引发的产品质量风险：由所关心的泄漏引发的产品质量风险包括3类：微生物侵入导致的产品无菌风险；液体或固体的侵入导致产品理化质量风险；顶空气含量改变导致产品理化质量风险或阻碍产品被终端客户使用。
制药行业容器密封性完整性测试选择分析
制药行业容器密封性完整性测试选择分析制药行业中，容器的密封性完整性测试非常关键，因为容器的密封性能直接影响药物的质量和安全性。
选择合适的密封性测试方法对于确保药物包装的质量和完整性非常重要。
以下是对几种常用的容器密封性完整性测试方法的选择分析。
1.液体颗粒检查法液体颗粒检查法是一种常用的密封性测试方法，通过将容器内部填充液体并倾斜容器，观察是否有漏液或颗粒漏出来来判断容器的密封性。
这种方法简单易行，成本低廉，可以快速检查容器密封性。
但是，它并不能对容器的微小漏洞或在压力变化下的密封性进行准确检测。
2.负压检验法负压检验法是一种通过在容器内部产生负压以检测是否有气体泄漏的方法。
这种方法可以对容器的密封性进行较准确的评估，能够发现微小的漏洞。
它需要专门的设备和技术来产生负压，并需要一定的时间进行检测。
然而，负压检验法无法评估容器在正压下的密封性能，因此可能无法全面评估容器的密封性。
3.紫外可见光或螺旋路径检验法紫外可见光或螺旋路径检验法是一种通过添加适量的红外吸收剂或荧光体到容器封口处，并使用紫外可见光或螺旋路径检验仪器来观察吸收剂或荧光体是否与容器封口处接触来判断容器的密封性。
这种方法可以检测微小的漏洞和不完全封闭，具有高灵敏度和准确性。
但是，它需要特殊的仪器设备来进行检验，设备较为昂贵。
根据以上选择分析，结合制药行业对容器密封性完整性测试的要求和实际情况，建议使用紫外可见光或螺旋路径检验法来进行容器密封性完整性测试。
因为该方法可以检测微小的漏洞和不完全封闭，具有高灵敏度和准确性，能够全面评估容器的密封性。
尽管该方法需要特殊的仪器设备来进行检验，设备较为昂贵，但这可以通过制药企业的资本投入来解决。
此外，紫外可见光或螺旋路径检验法与负压检验法相比，能够在正压下评估容器的密封性能，并且相对准确。
因此，该方法更符合制药行业对密封性完整性测试的要求。
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制药行业容器密封性完整性测试的简介及选择1 概述近年来，国外开发了真空衰减法等无损定量的测试方法，并且出台了相应的测试标准和法规。
美国药典USP 1207 提出多种确定性的检测方法：真空衰减法、高压放电法和激光法等，将传统的微生物挑战法、色水法等归类为概率性的检测方法。
尤其是国外，对药品质量控制设定的技术门槛越来越高，部分FDA及欧盟审计官甚至明确推荐采用国际先进的无损测试技术替代传统的破坏性测试技术。
针对美国药典USP 1207 常见的3大确定性的检测方法：真空衰减法、高压放电法和激光法做详细阐述，并且根据一些典型的应用推荐了最佳的测试方法。
2 真空衰减法美国材料试验学会(ASTM)于2009年推出了真空衰减法作为包装无损检漏的测试标准A STM F2338-09，该测试标准后来又得到了美国FDA的批准和认可。
国内暂时还没有相关的测试标准出台。
真空衰减法的原理是将包装容器置于专门的测试腔体中，对测试腔体抽真空，容器内外压差使得容器内部气体通过漏孔泄漏进入测试腔体，主机压力传感器监测到压力的变化，将压力变化值和参考值做比较，以判定容器是否合格。
下图是真空衰减法设备主机和西林瓶测试腔体。
真空衰减法的测试步骤主要包括：抽真空、保压和测试，见图2。
1) 抽真空：在抽真空阶段，如果在指定的抽真空时间内，实际真空度无法达到参考真空度，那么包装有大漏。
2) 保压：在保压阶段，如果在指定的保压时间内，实际真空度无法达到参考真空度，那么包装有中漏。
3) 测试：在测试阶段，如果实际dp值大于参考dp值，那么包装有小漏。
通过上述3个步骤，可以将不同程度的泄漏分别识别出来。
从而保证了该方法既能测大漏，又能测微漏。
真空衰减法分为只有绝压传感器的单传感器和具有绝压和差压传感器的双传感器技术，单传感器的技术通常精度为15-25um，双传感器技术的精度一般为1.5-10um。
绝压传感器和差压传感器可以看做是两把具有不同分辨率的标尺，绝压传感器的分辨率低，差压传感器的分辨率高，因而，单传感器的精度要比双传感器的精度差。
真空衰减法的适用范围很广。
既适用于常压、微负压和高真空的各类容器检漏，也适用于粉体、液体填充容器的检漏。
既可以测软包装容器，也可以测硬质容器。
通过采用双循环的测试技术，真空衰减法可以避免小顶空容器出现大漏时的漏检。
测试腔体的选择对于软包装的测试，可以采用专门的软膜腔体，软膜腔体在抽真空时会紧密贴合在一起，如果放入包装，就会将包装紧紧裹住，因而可以获得较好的测试灵敏度和较低的本底噪声。
为了提高测试效率，通常采用更大尺寸的软膜腔体，这样一次可以放多个样品。
当然软膜腔体不能做成太大，否则本底噪声会相对高。
如果对测试精度要求不高，比如只需要测到30um漏孔，那么甚至可以将软袋堆叠在一起测试，这样可以大大提高工作效率。
对于硬包装的测试，通常需要定制测试腔体，而且一般来说，一个特定的测试腔体只允许一次放置一个样品。
如果硬包装的外径相同高度不同，可以考虑采用同一个测试腔体，只是可能会损失一些精度。
如果硬包装的外径较小，如1mL预灌装注射器，可以考虑在一个测试腔体内放置多个注射器，但是相比一个腔体内放置1个预注射器，其精度会降低。
检测精度和检测方式由于软膜腔体的本底噪声比硬腔体的大，所以软膜腔体的精度要比硬腔体的差。
软包装的最高测试精度一般是10um，硬包装的最高测试精度是1.5um。
真空衰减法的单次测试时间一般需要几十秒到一分钟。
因此，如果产线的生产速度高达100个产品/min，那么采用真空衰减法进行100%全检会有难度。
所以，如果采用真空衰减法，一般是采用离线抽检方式或在线抽检方式，在线抽检固然无法实现100%全检，但它可以替代部分人工，而且实现自动化。
在线抽检方式一般会生产线旁边增加一个传送带，即该传送带和生产主传送带是并联的，待测产品直接从主生产线上提取，进入测试区域，测试完毕后，将合格品返回到主生产线，不合格品被剔除。
采用在线抽检方式通常精度会比离线抽检略低。
比如，如果离线抽检的精度为10um，那么在线抽检的精度可能是15um。
产品一旦泄漏，那么空气中的水分、氧气、微生物会侵入包装容器内。
有研究表明，水分和氧气侵入的临界漏孔尺寸大约是10-15um，微生物侵入的漏孔尺寸是10um以下。
制药行业的一些无菌制剂往往对无菌要求高，这就意味着所选用的测试方法精度必须至少达到10um，才能降低微生物侵入的风险。
制药行业传统的色水法在理想条件下，检漏精度可以达到5um，如果要采用新的无损干法测试技术替代传统的色水法，那么通常会要求新的方法的精度高于或等于传统的方法。
真空衰减法应用于药厂的预注射器、西林瓶和安瓿瓶等硬质容器的精度高达1.5um。
因此，完全可以满足药厂无损干法测试的要求。
3 高压放电法高压放电法是在待测容器表面外加高压电，根据泄漏容器和合格容器产生的电压差异判断是否泄漏及泄漏程度。
高压放电法一般适用于容器本身绝缘但容器内填充物导电的容器，其检漏精度高达1.0um。
典型的应用是水针西林瓶、液体安瓿瓶、液体填充预注射器和卡式瓶的完整性测试。
测试时需要用夹具夹住待测容器，将待测容器按照一定速率旋转，然后用2根探针对容器（比如预注射器）两侧进行扫描，探测泄漏出来的电压。
图3是测试夹具，图4和图5是预注射器的测量结果。
图3 高压放电测漏的测试夹具图4 合格品的测试电压（样品数量30个）图5 缺陷样品的测试电压（样品数量18个）4 激光法激光法是通过监测容器顶空压力、水汽和顶空氧变化来判定容器的完整性，其测定原理(见图6)是，发射的激光穿透容器顶空，容器顶空的水汽和氧对激光有吸收，激光吸收量和对应的物质含量成正比。
通常顶空水汽的测定波长是1400nm，顶空氧的测定波长是760nm。
顶空水汽的吸收峰宽度和顶空压力成正比（见图7），因而可以通过顶空水汽的吸收峰宽度来获得顶空压力。
因此，如果顶空水汽含量过低，可能会影响顶空压力的测定。
事实上，对于绝大多数负压冻干粉西林瓶，其内部都有一定含量的顶空水汽，因而，顶空压力可以测定得到。
图6 激光法原理图图7 激光法光谱图，其中吸收峰的宽度和顶空压力(真空度)成正比5制药行业不同应用的方法选择5.1 负压冻干粉针西林瓶完整性测试冻干粉针西林瓶通常采用高真空(绝压约0mbar)工艺密闭或充氮微负压(绝压约800-90 0mbar)工艺密闭。
在高真空下，如果存在漏孔，空气将会迅速进入西林瓶内。
此时，可以采用真空衰减法测试，因为在抽真空过程中，容器内外仍然会形成压差，气体将会通过漏孔从容器进入到测试腔体。
也可以采用激光法进行测试，一方面西林瓶是透光的，另外，高真空下，空气中的水汽、氧气会迅速进入西林瓶顶空，进而改变了西林瓶顶空条件，包括顶空压力和顶空氧含量。
采用激光法通过无损监测顶空压力或顶空氧变化，可以判定西林瓶是否泄漏。
西林瓶从生产好到开始检测的放置时间会影响检测精度，放置时间短，检测精度相对差；放置时间长，检测精度高。
可以根据建立的泄漏数学模型按照精度要求选择所需的放置时间。
理论上来说，只要放置时间足够长，激光法可达到极高的检漏精度(如<1um的漏孔)。
对于微负压(绝压>500mbar)的西林瓶，更适合采用监测顶空氧的模式进行完整性测试。
如果采用监测顶空压力模式进行完整性测试，可能会不够灵敏。
如果西林瓶在加胶塞后轧盖前存在临时泄漏，激光法也可以判定出。
也就是说，激光法不仅可以检出永久的泄漏，还可以检出临时的泄漏。
5.2 常压水针西林瓶完整性测试常压水针西林瓶通常采用充氮工艺，是为了保护氧敏感产品不被氧化破坏。
水针西林瓶有的液体装量少，顶空大；有的液体装量大，顶空小；有的西林瓶装量接近满瓶，顶空几乎没有。
一般来说，如果是大顶空，或小顶空且外径较大，可以采用激光法进行完整性测试。
此时，激光法通过监测顶空氧含量的变化来判断是否泄漏。
如果是顶空极小(接近零顶空)，那么激光法将不适用，需要采用真空衰减法来测试。
真空衰减法测试液漏的原理是在抽真空时抽到极限真空（接近0mbar），在如此高的真空下，液态水将会被汽化为气态水，气态水通过漏孔进入到测试腔体，进而被主机压力传感器监测到。
需要注意的是，液体本身的粘度不能过大，否则将无法汽化。
另外，液体里如果有未溶解完全的小颗粒，也可能会堵塞漏孔，导致假阴性的结果。
水针西林瓶也可以采用高压放电法测试，但高压放电法的设备成本较高。
5.3 卡式瓶完整性测试卡式瓶里通常装有类似蛋白质的乳状液或悬浊液，这种溶液里面含有小的颗粒，可能会堵塞漏孔。
所以如果采用真空衰减法会出现假阴性的结果。
激光法也不适用，因为里面几乎没有顶空。
此时可以考虑采用高压放电法。
高压放电法要求容器本身必须是绝缘的，内部填充的液体是导电的。
卡式瓶符合高压放电法的要求。
5.4 液体安瓿瓶完整性测试液体安瓿瓶根据顶空的大小可以选用不同的方法，如果是极小的顶空，那么可以用真空衰减法或高压放电法；如果顶空大，可以采用激光法、真空衰减法、高压放电法中的任意一种方法。
5.5 预灌装注射器完整性测试预灌装注射器和液体安瓿瓶类似，需要根据顶空的大小选用不同的方法，如果是极小的顶空，那么可以用真空衰减法或高压放电法；如果顶空大，可以采用激光法、真空衰减法、高压放电法中的任意一种方法。
5.6 泡罩完整性测试泡罩由于具有多个孔，且里面装的一般是片剂，激光法和高压放电法通常不适用。
真空衰减法可以用于测泡罩，因为测试腔体可以根据泡罩的形状和大小进行定做，而且在腔体的上方可以安装压力传感器，对漏点进行定位。
通常真空衰减法测定泡罩可以获得大约15um的测试精度。
图8是泡罩的测试腔体。
5.7 滴眼液瓶完整性测试单个滴眼液瓶的完整性测试可以采用真空衰减法结合定制的硬腔体，也可以采用高压放电法。
由于滴眼液瓶的顶空有时比较小，如<1mL, 激光法不太适用。