ELISA试剂盒操作方法
ELISA检测试剂盒操作流程
ELISA检测试剂盒操作流程1.准备实验材料和试剂-检验样本：例如血清、尿液、细胞上清液等。
-ELISA试板：根据样本数量选择96孔或384孔的板。
- 试剂盒：包括标准品、washes缓冲液、检测抗体、底物等。
2.样本处理-对于血清等生物液体样本，可用离心将固体物质沉淀并分离下清液。
-样本需储存或运输途中应避免反复冻融。
3.实验板的板液处理-将实验板从包装中取出，将不需要的孔进行盖膜封闭。
- 根据试剂盒说明书，添加适量的板液（Coating Buffer）到每个孔中，使其充分覆盖孔内壁。
-封闭板液的孔，将实验板在2-8℃下放置静置一夜或在37℃下1-2小时孵育。
4.样本添加-倒掉盘液，用PBS或TBST洗板3次，去除残留物。
-将样本加到每个孔中，根据需要添加正样本、负样本和待测样本。
-注意每个样本的剂量和添加的体积，通过试剂盒说明书和实验设计标准控制。
5.抗体添加-清洗步骤同上，将洗板缓冲液加到孔中，重复3次。
-加入检测抗体，根据试剂盒说明书的建议将其添加到孔中。
-要确保抗体的浓度和添加的体积适宜。
6.洗涤-洗涤步骤同上，用洗涤缓冲液洗板，重复3次。
-每次洗涤时，将洗液完全加满孔，静置1分钟，然后倒出洗液。
-注意洗涤时间和洗涤次数的准确控制，以将非特异性结合物质彻底清除。
7.底物添加-清洗步骤同上，将洗液加到孔中，重复3次。
-加入底物，根据试剂盒说明书的建议将其添加到孔中。
-底物液体应完全覆盖孔底，防止反应过程中氧化。
8.反应停止-根据试剂盒说明书，将反应停止液加入到孔中，停止底物的反应。
-注意反应停止液的体积和浓度，以保证反应的准确停止。
9.色谱分析-用ELISA板读板仪读取各个孔的OD值。
-根据试剂盒说明书和实验设计的标准曲线确定样本中目标物质的含量。
-注意设置适当的控制组和标准曲线来保证测量结果的准确性。
总结：ELISA检测试剂盒的操作流程主要包括实验板处理、样本添加、抗体添加、洗涤、底物添加、反应停止和色谱分析。
简述使用elisa试剂盒的操作流程
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Elisa试剂盒操作方法
ELISA试剂盒操作方法Elisa试验广泛应用在免疫学检验的各领域中，那么Elisa试验有没有简单便捷的操作方法呢？ELISA试剂盒操作方法具体如下：ELISA试剂盒操作方法一:用于检测未知抗原的双抗体夹心法:1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。
在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。
次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。
（简称洗涤，下同）。
2.加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。
然后洗涤。
（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3.加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。
37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
4.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
5.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。
也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
ELISA试剂盒操作方法二：用于检测未知抗体的间接法：1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。
次日洗涤3次。
2.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。
（同时做空白、阴性及阳性孔对照）3.于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。
4.于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟5.于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml6.可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。
ELISA试剂盒操作方法
ELISA试剂盒操作方法ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的免疫学试验技术，用于检测体内或体外的蛋白质、抗体、抗原等物质。
ELISA试剂盒是用于进行ELISA实验的一种常见装置。
下面将为您介绍ELISA试剂盒的操作方法。
1.准备工作a.预热-将试剂盒中的所有试剂预热到适当的温度，通常为室温至37°C之间。
b.样品处理-准备好待测样品，可以是血清、细胞上清液、组织提取物等。
如果样品中含有大量的蛋白质或杂质，可以进行样品处理，如稀释、蛋白质去除等。
c.标准品准备-试剂盒通常包含一系列浓度已知的标准品，用于制作标准曲线。
按照说明书的要求，用缓冲液或适当的稀释液将标准品稀释为不同浓度的工作液。
2.涂膜板的处理a.涂膜板选择-根据实验需求选择合适的涂膜板，通常有96孔、384孔等。
b.板钉定位-使用板钉或其他适当的方法将涂膜板固定在适当的工作台上。
c.预涂底物溶液加入-将试剂盒提供的预涂底物溶液加入涂膜板的孔中，注意保持各孔液面平整。
3.样品与试剂添加a.标准品和样品加入-按照实验设计的需要，将标准品和待测样品分别加入涂膜板的孔中。
b.阳性对照和阴性对照加入-根据试剂盒的要求，加入阳性对照和阴性对照。
c.洗涤液加入-在每次试剂或样品加入后，使用专用的洗涤液将孔洗涤，以清除无关物质。
4.反应与显色a.结合抗体加入-按照试剂盒说明书要求，加入适当的结合抗体，用于与待测物质结合形成复合物。
b.二抗加入-加入带有底物标记的二抗，与结合抗体结合形成复合物。
c.显色底物加入-加入含有适当底物的显色底物试剂，使底物与酶结合并发出信号。
5.反应停止与测量a.反应停止液加入-在适当的时间点，根据试剂盒的说明，加入反应停止液，停止底物的酶反应。
b.光密封膜或保护板加盖-加盖光密封膜或保护板，防止溶液蒸发或污染。
6.读取和数据处理a.读取吸光度-使用ELISA读板仪读取各孔的吸光度值。
ELISA试剂盒的操作规范
ELISA试剂盒的操作规范
今天大家就一起来看看我公司ELISA试剂盒操作规范细节。
1.严格按照说明书进行操作。
操作前将试剂在室温下平衡30～60min。
2.加样后及时放入孵箱。
标本较多时，要分批操作。
按说明严格控制操作时间，防止孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗。
3.合理安排检测量，以免反应板过多导致洗板等待时间长。
4.加样时保持显色剂不外流；加终止液时应避免产生气泡。
5.应桌面清洁，整个操作过程中酶标板不被污染。
在加样的步骤中，您要注意加样器枪头的洁净与否和吸量的准确性，直接影响检测结果。
由于枪头构造特殊，导致清洗困难，加大了交叉污染的机会。
建议用一次性吸嘴。
加样器也要经常清洗，定期校准。
加样时应将所加物加在酶标板板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出。
ELISA操作规范
ELISA操作规范目前实验室进行ELISA方法建立的人员越来越多，为了减少因人员操作导致的实验误差，避免因仪器试剂公用导致的相互之间的干扰，便于实验结果的分析和评价，实验室准备建立统一的ELISA操作流程，请大家以后按此规范统一操作。
1.包被：准备干净的槽子，根据要包被的酶标板的数量（N）取10Nml的1*包被液到槽子中，取要包被的蛋白放置在冰盒上，吸取所需要体积的蛋白（用带滤芯的低吸附的Tip 头），特别要注意Tip头不可伸入液面太深，只需伸入液面1毫米左右，保证吸取到蛋白即可，如果发现此步操作Tip蘸的蛋白较多，则重新吸取。
蛋白加入到包被液之前，Tip头在蛋白保存管的内壁上稍做停靠以让Tip头尖尖上蘸的一点点蛋白吸附到蛋白保存管得内壁上。
加入蛋白到包被液之后，应该反复吹打几次，之后用大体积的移液器吹打混匀（枪或者枪头需要带滤芯）最后用排枪再吹打几下之后加入到酶标板中，每孔100微升，打出液体时，Tip头尽可能的接近酶标板的底部，垂直加入。
这时蛋白开始在酶标板上的包被，应立即将其用质量好的干净封口袋密封，并放入到冰箱指定位置。
包被过程完之后记得将包被液及时放回冰箱。
2.封闭：包被到时的酶标板取出之后甩掉孔内液体，并且尽量拍干板子，之后用洗涤液洗涤两次，每孔110微升，洗涤浸泡时间1分钟左右，第一遍板子正放从左往右加洗涤液，第二遍上下颠倒从左往右加。
两次洗涤完之后尽量拍干板子，每孔加入110微升的封闭液SB（每次吸取和吹打SB的时候，移液器的手法要保持一致，SB有一定的吸附性，容易挂枪头壁，可以吹打第一次之后适当的短暂停留之后再吹打一次，或者适当降低吹打的速度，让其在吹打的同时在重力的作用下自己向下流），用封口袋密封，37℃温箱平放，封闭1小时之后用多道移液器吸取出封闭液SB到一个干净的槽子，板子用中等力度的多拍几下以去掉蘸在孔壁的SB（SB有一定的吸附性，孔底仍然会留有一些），然后倒扣在37℃温箱干燥2小时。
ELISA检测试剂盒使用指南
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测体内特定抗原或抗体的存在和浓度。
ELISA检测试剂盒是用于进行ELISA实验的组合套装，包括抗体或抗原、酶标记物、底物、缓冲液等。
本文将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，以帮助用户顺利进行ELISA实验。
1.准备实验材料：-ELISA检测试剂盒：根据实验需要选择适当的ELISA检测试剂盒，确保其在储存和运输过程中无损坏。
-样本：准备需要检测的样本，如血清、尿液、组织提取物等。
确保样本的质量和浓度满足实验要求。
-微孔板：根据试剂盒的要求选择合适的微孔板，同时注意其质量有无污染。
-基本实验设备：如计量器、洗板机、显微镜等。
2.实验步骤：-取出储存在4℃的试剂，确保其达到室温（一般为20-25℃），再根据实验步骤进行下一步操作。
-预处理样本：根据试剂盒的说明书，进行样本的预处理，包括稀释、纯化、稳定化等步骤。
-加样：将样本按照试剂盒要求的体积加入微孔板中，通常每个孔需要加入100-200μL的样品。
-洗板：使用洗板机或手工操作，将孔中的杂质洗净。
洗板时应注意洗涤缓冲液的使用浓度和洗涤次数。
-加入特异性抗体：根据试剂盒的说明书，将稀释好的特异性抗体加入各孔中，确保操作的准确性和每孔的稀释倍数。
-洗板：重复第4步的操作，将未结合的抗体洗净。
-加入酶标记物：根据试剂盒的说明书，将稀释好的酶标记物加入各孔中，确保加入的量准确无误。
-洗板：重复第4步的操作，将未结合的酶标记物洗净。
-加入底物：将稀释好的底物加入各孔中，使其与酶标记物反应，生成可视化的颜色。
-终止反应：根据试剂盒的要求，在一定的反应时间后，加入终止剂停止反应。
终止剂的选择需符合试剂盒的要求。
-检测结果：使用酶标仪或目视观察检测孔中的颜色变化，通过测量吸光度或颜色强度来确定样本中目标物的浓度。
3.数据分析：-计算样本的结果：根据试剂盒的说明书，根据吸光度或颜色强度测量结果，计算样本中目标物的浓度。
ELISA检测试剂盒操作流程
定量测定人血清中幽门螺杆菌（Hp）IgG抗体
ELISA检测试剂盒操作流程
一、操作流程：
1.根据需要，将若干孔德条带放置在支架上；
2.将标本、阴性质控、阳性质控以及标准品作1：200稀释（将５μｌ样品加稀
释液稀释到1ml，混匀）；
3.取100μl已稀释的血清样品、标准品和阴性质控、阳性质控加入相应得孔板
内（质控和标准品至少需做两孔），A1孔不加液体作为空白底色；
4.在37℃温箱中放置30分钟；
5.到时间后将孔被液体甩去，并用1X洗涤液反复清洗4次，最后用蒸馏水洗
一次；
6.在每孔内加100μl酶结合物（需按比例稀释，除A1孔外），轻微混匀；
7.在37℃温箱中放置30分钟；
8.甩去孔内酶结合物，用1X洗涤液反复清洗4次，最后用蒸馏水洗一次；
9.在每孔内加100μlTMB（使用前混合Ａ液和Ｂ液）（包括A1孔也加），轻微
混匀；
10.37℃放置15分钟；
11.每孔加50μl 1N硫酸终止液（包括A1孔），轻微混匀；
12.在15分钟内，用酶标仪在450nm处读取吸光度值（OD值）（将酶标仪A1
孔设定为空白孔）。
二、结果换算：
以标准样品的OD值为轴，标准样品的数值为X轴，在方格纸或计算机上作出标准曲线，然后根据标本的OD值读数在标准曲线上读出相应的IgG抗体浓度。
三、结果判定：
阴性：抗体浓度≤20u/ml为正常
阳性：抗体浓度＞20u/ml为阳性。
ELISA操作规程
ELISA操作规程一、实验室准备1.确保实验室环境清洁、整洁，并消毒操作台面和仪器。
2.准备所需材料：ELISA板、酶标仪、洗涤液、稀释液、标准品、试剂盒、试管、移液管、显色液、终止液等。
3.确保试剂保存完好，过期试剂及时更新，避免使用失效试剂。
二、实验操作步骤1.实验板的涂覆（1）选择合适的ELISA板，根据所需实验的样品数量确定使用的孔板数量。
（2）将需要的涂覆抗原或抗体稀释至适当浓度，用1:1000的稀释液稀释。
（3）将稀释液孔板均匀涂覆，避免产生气泡和交叉污染。
（4）将涂覆好的板以适当温度、湿度下放置2-4小时，或过夜在4摄氏度培养箱中。
2.样品处理（1）收集样品并编号，避免混淆。
（2）将样品稀释至合适浓度，一般为1:100-1:1000。
3.加标准品和样品（1）将标准品按照一定比例稀释。
（2）将稀释好的标准品和样品加入涂覆好的ELISA板的对应孔中。
4.孵育孔板（1）将ELISA板密封，放置在适当温度下孵育，时间根据实验需要设定，一般为1-2小时。
（2）检查孔板中是否有泡沫或交叉污染，若有，请及时处理。
5.洗涤（1）将孔板固定在洗涤器上，加入洗涤液。
（2）按照洗涤液说明书上的步骤进行洗涤。
6.加酶标记二抗（1）将酶标二抗按照一定比例稀释。
（2）将稀释好的酶标二抗加入每个孔中。
7.孵育孔板（1）将ELISA板密封，放置在适当温度下孵育，时间根据实验需要设定，一般为1-2小时。
（2）检查孔板中是否有泡沫或交叉污染，若有，请及时处理。
8.洗涤（1）将孔板固定在洗涤器上，加入洗涤液。
（2）按照洗涤液说明书上的步骤进行洗涤。
9.加显色底物（1）将显色底物按照一定比例稀释。
（2）将稀释好的显色底物加入每个孔中。
10.显色反应（1）将ELISA板在适当时间内观察显色反应的结果。
（2）根据所用试剂盒的说明书，记录每个孔的颜色强度。
11.反应终止（1）根据试剂盒的说明书，使用终止液终止显色反应。
（2）终止反应后，可通过酶标仪读取各孔的吸光度值。
ELISA试剂盒操作方法
ELISA试剂盒操作方法1.准备工作-将所需试剂和物质取出，并按照使用说明书中的要求进行储存和保存。
确保试剂完整无损，并严格遵守保存条件。
2.样品处理-根据试剂盒的要求，处理待测样品。
这可能涉及到稀释、离心、过滤等步骤，以确保样品符合试剂盒的要求。
注意避免样品的污染和损坏。
3.准备试剂和标准曲线-根据试剂盒的要求，准备所需的试剂和标准曲线。
试剂通常由酶标板和洗涤缓冲液组成。
标准曲线是用于确定未知浓度样品的参考标准。
4.酶标板涂层-先加入涂层抗体或抗原到酶标板的孔中，然后将其在室温下孵育一段时间。
这会使孔中形成抗原或抗体的层，以便后续的反应。
5.吸附溶液去除-将酶标板颠倒并用纸巾轻轻拍干，以将未吸收的溶液去除。
6.样品和标准品加入-根据试剂盒的要求，将样品和标准品加入到孔中。
同时留有几个孔作为空白对照。
注意将样品和标准品加入到正确的孔中，避免交叉污染。
7.孵育和洗涤-放置酶标板在孵育箱中（一般在37摄氏度）孵育一段时间，以促使样品中的目标物质与酶标记的抗体结合。
然后将液体从孔中洗涤掉，以去除未结合的物质。
8.酶标记的二抗加入-加入酶标记的二抗（通常是抗人IgG的辣根过氧化物酶）到酶标板中的每个孔中，使其与目标物质结合。
9.孵育和洗涤-将酶标板重新放回孵育箱中孵育，然后再次进行洗涤，以去除未结合的物质。
10.底物添加-向每个孔中加入底物，使其与酶发生反应，产生颜色的变化。
反应时间根据试剂盒的要求进行控制。
11.反应终止-加入反应停止液，停止酶的反应，防止进一步的颜色变化。
具体的反应停止方法要根据试剂盒的要求进行。
12.颜色的测定-使用酶标仪或光度计测量各个孔中颜色的强度，并将其与标准曲线上的标准值进行比较，以确定样品中目标物质的浓度。
以上是ELISA试剂盒的基本操作步骤。
不同的试剂盒可能略有不同的要求和步骤，因此在操作之前务必仔细阅读和遵守试剂盒的使用说明书。
ELISA操作步骤（双抗体夹心法）
ELISA操作步骤（双抗体夹心法）ELISA操作步骤（双抗体夹心法）1. 包被过程(注意设置空白对照,阴性对照):将所用抗原用包被稀释液稀释到适当浓度，每孔抗原加入100μl, 置37℃,4h,或4℃,24h;弃去孔中液体，(为避免蒸发,板上应加盖或将板平放在底部有湿纱布的金属湿盒中)。
2 PBS洗3次，每次3分钟。
具体为.吸干或甩干孔内反应液；.用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去）；浸泡，即将洗涤液注满板孔，放置1-2分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短；吸干孔内液体，可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干；.重复操作涤3次。
3. 加入待检测样品(建立合适的浓度梯度):检测时一般采用1:50-1:400的稀释度, 应采用较大稀释体积进行,一般保证样品吸取量>20μl。
将稀释好的样品加入酶标反应孔中，每样品至少加双孔，每孔100μl，置于37℃,40-60min。
4 PBS洗3次，每次3分钟。
5. 加入酶标抗体:酶标抗体: 根据酶结合物提供商提供的参考稀释度进行或建立浓度梯度，37℃,30-60min之间，短于30min往往结果不稳定，每孔加100μl。
6 PBS洗3次，每次3分钟。
7. 加入底物液(现用现配):TMB(四甲基联苯胺)使用液:TMB(10mg／5ml无水乙醇) 0.5ml底物缓冲液(PH5.5) 10ml0.75％H2O2 32μl，底物加入量每孔100μl （TMB空白显色孔除外）,置37℃避光放置20-25分钟。
8. 终止反应:每孔加入终止液50μl(2M H2SO4)终止反应, 此时蓝色立转黄色，于20min内测定实验结果。
9 结果判断:可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅。
也可测吸光值：在ELISA检测仪上，TMB反应产物检测需要450nm波长，检测时一定要首先进行空白孔系统调零。
用测定标本孔的吸收值与一组阴性标本测定孔平均值的比值(P/N)表示，当P/N大于2时作为抗体的效价即大于阴性对照吸光值的2倍，(数值的大小依具体检测要求而定)。
elisa 试剂盒操作步骤
操作步骤1．取出试剂盒室温平衡30min，取出血样放至室温。
2．配标准品：取150uL标准品加入150uL标准品稀释液稀释，依次稀释5次。
3．加样：分别于各反应孔中加入标准品50uL，样品40UL，标准品做复孔，样品做3孔。
4．分别于样品孔中加入10UL抗体。
5．标准品和样品孔中分别加入50uL链酶亲和素-HRP，盖上封板膜,轻轻震荡混匀，37℃温育60min。
6．配洗涤液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
7．洗涤：小心揭开封板膜，弃去液体，甩干，每孔加200uL洗涤液，静置30s后弃去，如此重复5次，拍干。
8．显色：每孔先加入显色剂A 50uL，再加显色剂B 50uL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色6min。
9．终止：每孔加入终止液50uL，终止反应（此时蓝色立即转为黄色）。
10．测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度。
测定应在加终止液10min 之内进行。
22．保存结果，收拾桌面。
12．分析处理数据注意事项1. 取出板条前恢复到室温后再打开外包装袋，实验中不用的板条立即放回包装中，密闭封口，其余不用试剂应盖好。
2. 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
3．实验板孔加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应孔的孵育时间一致。
4．洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。
5．试剂盒内试剂请在保质期内使用，不同批号试剂不要混用。
6．1000pg/ml以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
大于1000pg/ml 的样品应以标准稀释缓冲液稀释后重做。
在结果分析时，结合考虑相应的稀释度。
ELISA 检测试剂盒 说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断小鼠小鼠（（MouseMouse））肿瘤坏死因子可溶性受体肿瘤坏死因子可溶性受体ⅠⅠ（TNFsR-TNFsR-ⅠⅠ）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ（TNFsR-Ⅰ）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ（TNFsR-Ⅰ）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
ELISA检测试剂盒使用指南
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学实验方法，用于检测病原体、抗体或其他分子的存在和浓度。
它具有高灵敏度、高特异性、易操作和较低成本的优势，被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和免疫学领域。
本篇文章将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，包括实验准备、试剂的使用步骤和结果解读。
一、实验准备1.阅读检测项目的说明书：在使用试剂盒前，仔细阅读说明书，了解试剂的使用方法、灵敏度和特异性等关键信息。
2.样本准备：根据实验要求，准备样本。
如果需要检测血清中的抗体水平，可以采集血液样本，离心分离血清；如果需要检测细胞培养上清中的分子，将上清收集，并使其清晰，避免细胞或杂质的污染。
3.样本预处理：根据实验需求，对样本进行必要的预处理。
例如，可以通过加热、稀释、酶解等方式来处理样本，以改变样本组分和浓度。
4.准备品质控制样品：制备阳性和阴性控制样品，用于评估试剂盒和实验操作的稳定性和准确性。
5.实验器材准备：准备所需实验器材，如酶标板、移液器、微孔板洗涤仪等。
确保器材的干净和完整，并按照说明书要求对其进行预处理。
二、试剂使用步骤1.试剂准备：根据说明书要求，将试剂从冰箱中取出，并在室温下放置一段时间使其恢复到室温。
确保试剂瓶盖紧闭，并避免暴露在直接阳光下。
2.实验操作：按照说明书的要求，将试剂加入到酶标板中，并根据实验设计进行标准曲线的设置。
标准曲线用于测量未知样品的数量，并计算出浓度。
3.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行孵育。
孵育温度和时间应根据实验要求进行调整。
4.洗涤：使用洗涤缓冲液对酶标板上的不特异性结合物进行洗涤。
洗涤过程应准确控制洗涤孔板次数和洗涤液的体积。
5.补液：在洗涤完成后，加入辣根过氧化物酶标况稀释液，促进酶标物与特异性结合物的反应。
6.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行二次孵育。
7.反应停止：根据试剂盒的要求，加入相应的停止液，停止酶反应。
ELISA试剂盒操作方法
ELISA试剂盒操作方法ELISA（酶联免疫吸附法）是一种常用的实验技术，用于检测目标物（如蛋白质、抗原或抗体）的存在和浓度。
ELISA试剂盒是ELISA实验的核心，包括特定的试剂和材料，用于执行特定的步骤和操作。
以下是一般ELISA试剂盒的操作方法，包含以下步骤：1.准备实验样品：收集所需分析物的样品（例如血清、细胞上清液或组织提取液等），并适当保存或稀释以便后续操作。
2.预处理步骤：根据实验的目的和试剂盒的要求，进行样品的预处理。
这可能包括去除干扰物质、离心、稀释或加热等处理步骤。
3.涂覆酶联免疫板：打开试剂盒中提供的酶联免疫板，将其放置在工作台上。
将涂覆物质（如抗体或抗原）加入到每个酶联免疫孔中，通常使用多通道移液器或微量移液器进行操作。
涂覆后，尽量避免泡沫和交叉污染。
4.触发剂孵育：将涂覆后的酶联免疫板放入孵育箱或板上孵育器中，在适当的温度下孵育一段时间。
此步骤的目的是固定涂覆物质，并优化其活性。
5.洗涤：将试剂盒中提供的缓冲液加入酶联免疫孔中，并倾斜孔盘轻轻敲打或使用洗板仪进行洗涤，以去除未结合的物质和杂质。
通常，洗涤液需要多次更换，充分洗涤以获得更好的准确性和灵敏度。
6. 过量引物（Block）：加入试剂盒提供的阻断缓冲液至孔中，目的是防止非特异性结合的发生。
阻断时间可以根据试剂盒的要求进行调整。
7.加入样品和控制物质：将处理好的样品和控制物质，如阳性对照和阴性对照，加入到各个酶联免疫孔中。
注意要根据试剂盒的要求进行适当的稀释。
8.孵育和洗涤：将孔盘放回孵育箱或板上孵育器中，按照试剂盒的要求进行孵育。
完成孵育后，继续进行洗涤步骤，以去除未结合的物质。
9.检测剂加入：将检测试剂（通常是特异性抗体或酶标记物质）加入酶联免疫孔中。
如有需要，可以进一步稀释试剂以适应实验要求。
10.再次孵育和洗涤：将孔盘放回孵育箱或板上孵育器中，对要求进行的步骤进行孵育。
完成孵育后，进行洗涤步骤以去除未结合的物质。
elisa操作步骤及注意事项
elisa操作步骤及注意事项以elisa操作步骤及注意事项为题，本文将为大家介绍elisa（酶联免疫吸附测定法）的操作步骤和注意事项。
一、操作步骤1. 准备工作在进行elisa实验前，需要准备好实验所需的试剂和仪器设备，包括酶标板、试剂盒、洗涤缓冲液、底物溶液、阻断缓冲液等。
同时，需要对实验室台面和仪器进行消毒，并佩戴好实验手套和口罩，以确保实验的准确性和安全性。
2. 样品处理将待测样品（如血清、尿液、细胞培养上清液等）和对照样品放置在室温下静置，使其达到室温后，进行稀释处理。
通常情况下，待测样品需要按照一定比例进行稀释，以确保其浓度处于检测范围之内。
3. 酶标板涂覆将酶标板中的亲和素或抗体溶液加入到孔板中，然后将其在4℃下静置过夜，使亲和素或抗体能够均匀地吸附在酶标板上。
4. 标准曲线制备将标准品按照一定比例稀释，以制备出一系列浓度递增的标准品溶液。
然后将这些标准品溶液依次加入已涂覆的酶标板孔中，孔位之间要保持一定的距离。
5. 样品孔加样将样品溶液加入到酶标板的样品孔中，注意每个孔的加样量要保持一致。
为了保证实验的准确性，通常会设置阳性对照孔和阴性对照孔，以验证实验的可靠性。
6. 孔板洗涤使用洗涤缓冲液对酶标板进行洗涤，去除未结合的物质和杂质。
洗涤时要注意洗涤液的温度和洗涤次数，以确保洗涤的充分彻底。
7. 酶标记物加入将酶标记的二抗或酶标记的亲和素加入到酶标板的孔中，使其与靶分子结合。
然后，将酶标板置于恒温摇床上，进行孵育反应，使酶标记物与靶分子发生特异性结合。
8. 反应终止通过加入反应终止溶液，使酶标记物的酶活性停止，并终止酶标记物与靶分子的结合。
终止溶液的选择要根据实验所使用的底物和酶标记物来确定。
9. 读板测定使用酶标仪或多功能酶标仪对酶标板进行测量，测定底物的反应产物的吸光度。
根据吸光度值，可以计算出样品中靶分子的浓度。
二、注意事项1. 严格控制实验条件在进行elisa实验时，需要严格控制实验条件，包括温度、湿度、时间等。
IL-6ELISA试剂盒操作说明（RD）
IL-6 ELISA试剂盒操作说明（R&D）注意：1.Calibr ator Diluen t RD6F 包含叠氮化钠（可能与铅和铜的管道）形成爆炸的金属叠氮化合物。
处理期间用大量的水冲洗。
2.该盒的终止液为酸溶液。
使用时戴眼睛、手、脸和衣服的防护。
试剂准备：1.使用前将所有试剂平衡至室温。
2.洗液（Wash Buffer）：如果浓缩液中已经形成结晶，平衡至室温，并轻轻地摇晃直到结晶完全溶解。
加入去离子水或蒸馏水稀释20ml浓缩洗涤液至500m l。
3.底物溶液（Substr ate Soluti on）：显色试剂A和B应该在使用前15m in以等体积混合。
避光保存。
每孔需要200ul生成的混合物。
4.IL-6标准品（IL-6 Standard）：使用5ml标准稀释液R D5T（Calibr atorDiluen tRD5T）（适用于细胞培养上清液样本）或标准稀释液R D6F（Calibr atorDiluen t RD6F）（适用于血清/血浆样本）重新配制IL-6标准品。
重新配制的产品为300pg/ml贮存液。
稀释前允许将标准品至少轻轻搅拌15min。
5.吸取适当的标准稀释液667ul到100pg/ml EP管，500ul稀释液到其它EP管中。
适用贮存液配制一系列的稀释液（如下）。
进行下一次转移前充分地混匀各个E P管。
没有稀释的标准品作为高标准。
适当的标准稀释液作为0标准（0pg/ml）。
测定步骤：使用前将所有试剂和样本平衡至室温。
推荐所有的样本、标准和对照测定双份。
1.如前所示，准备所有的试剂和工作标准品。
2.取下多余的微量培养板条，放回装有干燥剂的锡箔袋中，重新密封。
3.每孔加入100ul AssayDiluen t RD1W。
ELISA试剂盒操作方法
人血小板碱性蛋白，PBP/CXCL7ELISA试剂盒操作方法供应商：上海樊克生物有限公司产品规格：96T/48T。
保存条件：2-8℃低温保存保质期：6个月，所有试剂盒均提供最新批次。
试剂盒成分：酶标板，试剂，标准品等。
【人血小板碱性蛋白，PBP/CXCL7ELISA试剂盒】本试剂仅供研究使用计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒组成：封板膜:2片（48）/2片（96）说明书:1份密封袋:1个标准品：2700ng/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存酶标包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存样品稀释液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液: 3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液:（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存【人血小板碱性蛋白，PBP/CXCL7ELISA试剂盒】实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人铁蛋白(FE) 水平。
用纯化的人铁蛋白(FE) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入铁蛋白(FE) ，再与HRP标记的铁蛋白(FE) 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的铁蛋白(FE) 呈正相关。
ELISA检测试剂盒使用指南
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA检测试剂盒使用指南1.简介：1.1 本文档旨在提供ELISA检测试剂盒的详细使用指南，以帮助用户正确、高效地进行ELISA检测。
1.2 ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫测定方法，用于检测体液中特定抗原或抗体的存在与浓度。
1.3 本文档将涵盖ELISA检测试剂盒的准备、样本处理、试剂操作、结果读取等详细步骤。
2.准备：2.1 确保实验室环境整洁，无污染。
2.2 检查所需试剂、仪器和设备是否完整，并检查有效期和储存条件。
2.3 根据实验需要，准备所需样本和质控品，并储存于适当的条件下。
3.样本处理：3.1 根据实验目的选择合适的样本类型，如血清、血浆、尿液等。
3.2 根据试剂盒说明书的要求，对样本进行适当的稀释和预处理。
3.3 严格控制操作条件，避免样本污染和交叉污染。
4.试剂操作：4.1 根据试剂盒说明书，将所需试剂从冰箱中取出，并在室温下适当恢复。
4.2 严格按照说明书的要求，对试剂进行稀释和混合。
4.3 操作过程中注意洁净实验台面，避免试剂交叉污染。
5.检测步骤：5.1 将适量的稀释后的样本、质控品和标准品分别装入试管中。
5.2 添加适量的酶标记抗体或底物，并充分混匀。
5.3 按照试剂盒说明书的要求，进行孵育和洗涤步骤。
5.4 添加底物并进行反应，控制反应时间。
5.5 停止反应，并使用酶标仪测量吸光度。
6.结果读取：6.1 根据试剂盒说明书，根据吸光度值和标准曲线，计算样本中目标物质的浓度。
6.2 将测量结果记录，并进行统计和分析。
6.3 评估实验结果的可靠性，并进行结果的解释和报告。
7.注意事项：7.1 严格按照试剂盒说明书的要求进行操作，避免任何操作步骤的误差和误操作。
7.2 注意实验室安全，避免接触有害化学物质，正确使用防护设备。
7.3 在实验过程中遵循生物安全操作规范，避免潜在的感染风险。
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6.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
三、加血清样本及反应试剂
在现在的ELISA商品试剂盒中，血清样本的加入几乎是唯一的要使用微量加样器加入样本的步骤。使用微量加样器加样必须注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。试剂的加入在国产试剂盒中基本上均是从滴瓶中滴加，除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很容易出现重复滴加或加在两孔之间的现象，这样就会在孔内的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异显色。所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。
ELISA 是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法，由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素，以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测，既可以做定性试验也可以做定量分析等优点，已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。
如何正确进行ELISA操作
一、临床标本的收集和保存
2.加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3.加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
ELISA试剂盒操作方法
拜力生物编辑整理：
Elisa试验广泛应用在免疫学检验的各领域中，那么Elisa试验有没有简单便捷的操作方法呢？
ELISA试剂盒操作方法具体如下：
ELISA试剂盒操作方法一:用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。
（5）标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测。
二、试剂准备
在临床实验室，对试剂准备一般不太注意，通常的做法是，在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此在ELISA测定中试剂的准备最为关键的是，在实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定，以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的，主要是为了在后面的温育反应步骤中，能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度，以满足测定要求。其次，目前的商品ELISA试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制，因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。此外，当试剂盒以OPD为底物时，则底物溶液应在反应显色前临时配制。
四、温育
温育是ELISA测定中影响测定成败最为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。
ELISA试剂盒操作方法二：用于检测未知抗体的间接法：
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。
2.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。（同时做空白、阴性及阳性孔对照）
3.于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。
4.于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟
5.于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6.可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
（1）要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。
（2）Байду номын сангаас本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。
温育这一步是临床ELISA测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟～1小时，进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1～2小时才能有较完全的结合，低于1小时，可能会影响测定下限。因此，关于温育，在实际测定操作中一定要注意以下几点：
要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说，加完样本和/或反应试剂后，将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时，孔内温度从室温升至37℃，需要一定的时间，尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下，这段升温时间可能还比较长，而在临床实验室中，很少有人注意这个问题，通常是将微孔板一放入温箱即开始计时，这样就很容易造成实际测定中温育时间不够，弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题，就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间，在做HBsAg测定的室内质控中，测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时，总是测不出来，不知原因为何？这可能就与南方冬天室内温度较低有关，此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够，以致弱阳性样本测定为阴性。因此，为保证37℃下足够的温育时间，临床实验室可自行确定本实验室不同季节（不同室温下）微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃，从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是，用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。
用于ELISA测定的临床标本最为常用的是血清（浆），有时因为特定的检测目的，也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。目前临床上使用血清标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子和治疗药物等。对用于激素和治疗药物测定的血清标本的收集，要注意收集时间甚或体位有可能会对测定结果产生影响。如可的松在早晨4～6点之间，会有一峰值出现：生长激素、促黄体激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以阵发性方式释放，因此，在测定此类激素时，有必要在密切相连的时间间隔内采取数份血样本，以其中间值为测定值。又如当从卧位变为站立位时，血清中肾素活性将出现明显增高。再如治疗药物的检测，应根据药代动力学选择服药后的最适时间抽血检测。用于传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物和特种蛋白等的检测的血清标本的收集则没有时间和体位方面的影响，只是在处理和保存方面要考虑以下几个方面：
（3）血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保存，应在-70℃以下。
（4）冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。