三花粉的贮藏和生活力测定
实验四 花粉采集及生命力的测定
3 ．染色观察法 （3）氯化三苯基四氮唑（TTC）法 原理：凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程 中都有氧化还原反应，而无生活力的花粉则无此反 应，因此当TTC渗入有生活力的花粉时，花粉中的 脱氢酶在催化去氢过程中与TTC结合，使无色的 TTC变成三苯基甲（TTF）而呈红色。 步骤和方法：取少量花粉放在载玻片上，在花粉 上滴1～2滴TTC溶液，用镊子使其混匀后，盖上盖 玻片。将此载玻片上置于恒温箱中（35～40℃）约 15～20分钟，在显微镜（100倍）下观察。凡有生 活力的花粉粒呈红色，其次呈淡红色，失去生活力 的和不育的花粉粒表现无色。
六、作业及思考题： １、按下表统计实验结果。 ２、绘一幅花粉粒发芽形态图。 染色法测定结果记载表
各视野中花粉粒数量及生活力
花 粉 来 源 平 均 其中 生 生 活 红 黄 活 力 色 色 力 (％)
其中 花 粉 生 红 黄 总 活 色 色 数 力
花 粉 总 数
其中
红 黄 鲜
培 养 基 法 测 定 结 果 记 载 表
花 粉 来 源
各视野中花粉粒数量及发芽率 培养 基浓 度 1 发芽数/ 总数 发芽 率 2 发芽数/ 总数 发芽 率 3 发芽数/ 总数 发芽 率 平均 生活 力(％)
0% 5% 贮 藏 10% 15% 20%
新 鲜
配制对二萘氧基联苯胺: a．0.2克联苯胺溶于100毫升50%的酒精溶液； b．0.15克a-萘酚溶于100毫升50%酒精溶液； c．0.25克的碳酸钠溶解在100毫升的蒸馏水中。 以上三种溶液分别放入棕色瓶中备用，使用 时将这三种溶液等量配成试剂Ⅰ，放入棕色滴瓶 中备用，在使用前准备好0.3%的过氧化氢水溶 液作为试剂Ⅱ。
２．花粉生活力的测定： （１）染色观察法 ——TTC 和KI染色法 ① 分别配制 TTC 和KI染色液各100ml，装入棕 色瓶中备用。 ② 制片：取少量花粉于载玻片上，滴入 1 ～ 2 滴 0.5 ％ TTC 或KI染色液，用镊子搅拌均匀，盖上 盖玻片，于 35 ～ 40℃ 条件下净置 15 ～ 20min 。 ③ 观察统计：在显微镜下观察三个不同的视野， 凡被TTC染成红色或玫瑰红的都是有生活力的花粉， 黄色或不着色者为没有生活力的花粉；被KI染成蓝色 者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力。
实验三花粉的贮藏和生活力测定
实验三花粉的贮藏和生活力测定一、目的和要求在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生活力。
花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。
从生产上来看，在选择相互授粉的品种时，也应考虑到品种的花粉发芽能力，凡是花粉发育不全的品种，其花粉的发芽率都很低。
因此不适宜做授粉品种。
本实验的主要目的是掌握花粉贮藏和花粉生活力测定的方法。
二、花粉及用具材料：桃或苹果树的花粉。
用具：显微镜、天平、盖玻片、凹式载玻片、培养皿、干燥器、试管、滴瓶、蒸馏水、凡士林、蔗糖、氯化钙、琼脂、联苯胺、α-奈酚、碳酸钠、过氧化氢等。
三、方法（一）花粉贮藏从发育良好的植株上采下将开的花朵、取出花药放在纸上或培养皿中，放于干燥的室内，令其开裂，花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶或指形管中，口上塞以棉花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。
再把花粉瓶放于干燥器内，使花粉在空气相对湿度较低的条件下（一般0～40%）保存；为了减少呼吸作用，可以放在低温（0～4℃）黑暗的地方贮藏。
（二）花粉生活力试验1、花粉发芽法人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱，此法的缺点是花粉发芽条件与实际不完全相符，所得的结果与实际有一定的差异，但操作方便，能测定出相对发芽率来。
（1）培养基的制作与接种一般采用5～20%蔗糖或葡萄糖加1～2%琼脂，溶于蒸馏水中。
加热煮沸即可，将已配制好的培养基保持在40℃温度即不凝固，用玻璃棒点一点培养基敷在载玻片的凹坑内，然后用接种针或解剖针沾以少量花粉。
轻轻振动，使花粉均匀地撒在培养基上，将载玻片放在垫有湿润棉花培养皿内或倒扣在培养皿上，并贴上标签写明处理、种类、播种日期，将培养皿放于20℃的恒温箱中培养。
（2）观察记数在显微镜下隔一定时间检查一次（花粉发芽快的经过几个小时即可观察到已经发芽，慢的需24小时以上）若发现花粉已发芽时，便按一定方向，就同一视野中用记数器记录花粉粒总数和发芽数，观察记录3～5个显微镜视野的数字，求其平均数，即得出花粉发芽百分率。
实验一花粉收集[方案]
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实验一花粉收集、贮藏及花粉生活力测定一、实验目的1.掌握鲜花粉收集、储藏的方法及原理。
2.观察花粉在人工配制的培养基上的萌发情况，认识花粉萌发形成花粉管的外形和伸长过程，为理解植物的生殖过程奠定基础。
二、实验原理花期不遇，给杂交工作造成困难，有的树木和园林植物可通过延长花期解决，有的不得不进行花粉储藏，花粉贮藏对某些园林植物杂交育种具有重要的意义。
通过花粉贮藏，它可以使一些迟开花的园林植物和早开花的园林植物进行杂交，或到较远的地方给母本授粉，花粉的贮藏与运输可以打破杂交育种中双亲时间上和空间上的隔离，扩大育种的范围。
花粉在贮藏期间的稳定性，与花粉壁外层（外壁）的性质和贮藏期间花粉原生质的代谢有关。
在贮藏期间代谢调较少可溶性糖类和有机酸的花粉能够在较长期间保持其活力。
花粉贮藏的原理在于创造一定的条件，使花粉降低代谢强度，延长花粉的寿命。
花粉寿命的长短，因植物种类不同而异。
在自然条件下，大多数植物的花粉从花药散出后只能存活几小时，几天或几个星期。
如一般木本植物花粉寿命很长，如在干燥凉爽的条件下，柑橘花粉能存活40～50d，椴树45d，苹果10～70d，樱桃30～100d，麻栎一年，叶培忠教授试验发现杉木的花粉可存活17年之久；而在草本植物中，如棉属花粉采下后24h存活只有65％，超过24h 很少存活；多数禾本科植物的存活时间不超过一天，如玉米1～2d，水稻花粉在田间条件下3min就有50％丧失生活力，5min后几乎全部死亡，是寿命最短的例子。
一般在自然条件下自花授粉植物花粉寿命比常异花、异花授粉植物为短。
花粉的类型和生活力也表现了相关性，通常三胞花粉的寿命要比二胞花粉短，如水稻等禾本科植物为三胞花粉，寿命都是比较短的。
花粉寿命的长短除了上述因种遗传性的差异以外，还与温度、湿度有密切的关系。
通常高温高湿下花粉呼吸旺盛，会很快失去生命力，但在极干燥的条件下，花粉失去水分，也不利于保存。
据亚达姆斯试验，苹果花粉在干燥状态下，可保存3个月；如放在2～8℃，湿度80％的条件下，经过5个星期即失去生活力。
花粉的形态观察及生活力测定
实验一花粉贮藏及花粉生活力的测定花期不遇给杂交工作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进行花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。
为了避免杂交工作失误，在使用外地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的生活力进行检测，以便对杂交结果进行分析与研究。
因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉生活力测定的原理和技术一、实验目的掌握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。
二、实验材料百合、金鱼草、菊花等花粉。
三、仪器及药品显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、吸水纸、TTC（2.3.5—氯化三苯基四唑）、KI-I2、蓝墨水。
四、实验原理花粉在低温（ 0 ～ 2 ℃）、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。
花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。
鉴定花粉生活力的方法很多，概括起来主要有如下几种：1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。
此法最准确，但需时较长，且实验结果易受气候条件的影响。
也可在授粉后隔一定时间切下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。
2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。
此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。
3 ．染色观察法1 ）碘－碘化钾染色法：以碘－碘化钾溶液（ 0.3g 碘＋ 1.3g 碘化钾溶于 100ml 蒸馏水）染色后于显微镜下观察，花粉被染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力。
2 ） TTC 染色法：使用TTC测定花粉生命力的原理，主要是无色药液进入花粉遇到活组织里的脱氢酶，接受氢离子，还原成红色三苯基甲腊TTF，还原结果使有生命力的花粉染上红色，死花粉不着色；花粉生活力强弱有异，染色深浅也有不同。
2实验二、花粉生活力测定
前 言
花粉生活力测定在育种 力 2．雄性不育系的鉴定
实验目的：
学习并初步掌握作物花粉生 活力测定的常用方法
测定方法:
（一）I-KI染色鉴定
（二）TTC染色鉴定
（三）花粉粒发芽鉴定
实验方法 I-KI染色鉴定：
正常的成熟花粉粒体积较大， 并含有大量的淀粉粒，遇I-KI 呈紫黑色，不正常的花粉粒体 系较小、有时畸形、染色浅或 不染色。
实验方法 TTC染色鉴定：
具有生活力的花粉中含有 脱氢酶，它能催化引物使脱下 的氢与TTC结合，生成红色化 合物甲替。凡有生活力的花粉 呈红色，生活力弱的呈浅红色， 无生活力的不显色或成黄色。
实验方法
花粉粒发芽鉴定：
在人工培养基上进 行发芽试验，可以比较 准确地判断花粉的生活 力。
实验步骤
I-KI染色鉴定：
2 ．准备 TTC 染色和发芽试验的材料， 置培养箱保温； 3．调试显微镜，I-KI染色鉴定； 4．TTC染色鉴定、发芽率调查。
作业
实验三、作物花粉生活力测定 1．测定方法和原理： （一）I-KI染色鉴定：正常的成熟花粉粒体积较大，并含有大量的淀粉 粒，遇I-KI呈紫黑色，不正常的花粉粒体系较小、有时畸形、染色浅或 不染色。 （二）TTC染色鉴定：具有生活力的花粉中含有脱氢酶，它能催化底物 使脱下的氢与TTC（氯化三苯基四氮唑）结合，生成红色化合物甲替。 凡有生活力的花粉呈红色，生活力弱的呈浅红色，无生活力的不显色或 成黄色。 （三）花粉粒发芽鉴定：在人工培养基上进行发芽试验，可以比较准确 地判断花粉的生活力。 2．实验结果： 材料 I-IK染色率% TTC染色率% 发芽率%
用镊子夹一个花药于载玻片 上滴上一滴1%I-KI溶液 用镊子将花药夹碎并把碎片 去干净盖上盖玻片置显微 镜下观察。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉生活力是指花粉颗粒的活力和生长能力，是衡量植物繁殖成功的重要指标。
花粉生活力测定方法是一种用来评估花粉质量和活力的技术手段，对于植物繁殖和种子生产具有重要意义。
传统的花粉生活力测定方法主要包括花粉染色观察法、花粉萌发率测定法和花
粉活力染色法。
花粉染色观察法是将花粉染色后在显微镜下观察其形态和数量，从而评估花粉的活力和质量。
花粉萌发率测定法则是将花粉培养在适宜的培养基上，观察其萌发情况以评估花粉的活力。
花粉活力染色法则是利用染色技术来观察花粉内部的活力指标，如线粒体和细胞核的活跃程度。
随着科学技术的发展，现代的花粉生活力测定方法也在不断完善和创新。
比如，利用生物技术手段对花粉进行基因测序和分析，可以更准确地评估花粉的生活力和遗传信息。
同时，利用先进的显微镜和成像技术，可以对花粉的微观结构和形态进行更精细的观察和分析。
花粉生活力测定方法的发展不仅有助于科学家和植物育种者更好地了解植物的
繁殖机制和生长规律，也为农业生产和生态保护提供了重要的技术支持。
通过准确评估花粉的生活力，可以选择出高质量的花粉进行人工授粉或者种子生产，从而提高植物的繁殖成功率和产量。
此外，对花粉生活力的准确测定也有助于保护植物遗传资源，促进植物多样性的保护和利用。
总之，花粉生活力测定方法是一项重要的植物科学技术，它为我们深入了解植
物繁殖机制和提高农业生产效率提供了重要的技术手段和支持。
随着科学技术的不断进步，相信花粉生活力测定方法将会在未来发挥更加重要的作用。
实验三 主要树种花粉形态
实验三主要树种花粉形态、花粉贮藏及花粉生命力测定（一）实验目的通过本实验，掌握主要树种花粉的形态，花粉储藏及花粉生命力测定的方法及其原理。
（二）实验材料与药剂配制供测定树种的花粉、硫酸、氯化钙、蔗糖、葡萄糖、蒸馏水、凡士林、乳酸、苯胺兰、联苯胺、α一苯酚、酒精、碳酸钠、过氧化氢、琼脂等。
染色剂的配制：A 配制1%苯胺蓝水溶液。
将1克苯胺蓝溶于100ml的蒸馏水中。
B 配制0.5%苯胺蓝乳酸酚。
先以一份酚溶解在一份蒸馏水内，然后加入甘油、乳酸各一份做成苯胺蓝乳酸酚。
固体培养基：10g的10%蔗糖（或者葡萄糖）+2克的2%琼脂+100ml 水加热至琼脂完全融化为止。
用纱布过滤冷凝就得出固体培养基。
液体培养液：以千分之一的硼酸代替蒸馏水，加5％葡萄糖，加热溶解，最好煮沸几分钟达到消毒目的即可。
（三）实验工具载玻片，盖玻片，解剖针，毛笔，干燥器，小试管或指形管，脱脂棉，花粉筛，标签，玻璃铅笔、显微镜、冰箱、培养皿．悬滴载玻片。
（四）实验方法及步骤1 树木花粉一般形态（1）花粉壁：花粉有两层壁（内壁和外壁）。
外壁是角质化的，有几层组成，一般为三层，表面是光滑的或者呈波浪形（凸起或者凹下），有的还具有各种雕纹（纹饰）；内壁是果胶质的，花粉粒经过酸或碱处理后，内壁都被溶解掉，内壁是由透明的玻璃状物质组成的，最易吸水膨胀。
（2）发芽沟：发芽沟是外壁上沟状的凹陷，上面蒙着一层薄膜。
花粉发芽时花粉管就从这些地方长出来。
发芽沟的数量对每种树木通常是一定的。
一般1~30个以上的范围内变化，被子植物、双子叶植物经常有3个发芽沟，裸子植物只有一个发芽沟。
（3）发芽孔：也是花粉管伸出的地方。
花粉发芽孔数量和形状对某些植物是一定的。
发芽孔往往分布在发芽沟里，并且排列顺序对每一种植物是一定的。
裸子植物中发芽孔很少见。
（4）气囊：裸子植物的某些树种的花粉带有气囊，实际上就是花粉外壁的外层的延长和伸展。
气囊一般有两个，有些树种或者还多于两个。
花粉生命力的测定与形态观察
实验三花粉生命力的测定与形态观察花期不遇，给杂交工作造成困难，有的树木和园林植物可通过催延花期解决，有的则不得不进行花粉贮藏，为此我们必须掌握花粉贮藏的原理与技术。
为了避免杂交工作失误，在使用远地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉生命力进行鉴定，以便对杂交成果进行分析与研究。
一、实验目的掌握了解花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法及原理。
二、实验材料芙蓉花的花粉。
三、仪器及药品载玻片、盖玻片、标签、标记笔、显微镜、蔗糖、蒸馏水、联苯胺、 -萘酚、酒精、碳酸钠、过氧化氢、琼脂。
四、实验原理在园艺植物有性杂交工作中，常因杂交亲本间花期不遇，或父本植株栽在异处(地)而必须预先收集花粉。
花粉贮藏在低温(0～4℃)、干燥(相对湿度0～40％)、黑暗的环境下，代谢降低，可以较长时间地保持花粉生活力，但其贮藏期长短对花粉生活力的影响因品种而不同。
在授粉之前，对贮藏的或外地采来的花粉必须预先测定花粉的生活力，以确定哪些花粉不能用于杂交，这对取得杂交效果有直接影响。
一是将待测花粉直接授粉，然后统计结实率和结子数。
此法的缺点是需时间较长，且实验结果易受气候条件的影响；二是将待测粉受到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微镜下检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生命力；三是在培养基上进行花粉的人工萌发，检查待测花粉萌发率的高低。
将花粉播种在特定的培养基上，并在一定的环境条件下来测定其发芽能力的方法。
培养基常用蔗糖、琼脂(1％)和蒸馏水配制而成。
不同植物的花粉，对蔗糖浓度要求不同，如柑桔花粉要求25％左右，苹果和梨10～15％，桃10％左右为宜。
蔗糖浓度高低可调节培养基的渗透压，以防止花粉在培养基上破裂。
培养基以微酸性为宜，一般在pH5.2～6之间。
发芽温度在20～25℃左右，并需要空气和湿度，为了促进花粉发芽，在培养基中还可加入少量的硼酸和维生素B1。
利用花粉发芽试验测定花粉生活力是一种直接的测定方法，其结果也最可靠，但操作较麻烦，要有一定设备和一定时间。
花粉的采集与保存、形态观察及生活力测定思考题
花粉的采集与保存、形态观察及生活力测定1.上述方法是否适合于所有植物花粉活力的测定？答：否。
形态观察法只适用于测定新鲜花粉的生活力，不适用于测定贮藏的花粉，体积较小的花粉和形态结构不规则的花粉，这都会影响实验结果。
染色观察法不适用于测定花粉颜色与染色结果相近的植物花粉活力，会对观察有一定的干扰。
另外，碘－碘化钾染色法不能准确表示花粉的活力，也不适用-KI 于研究某一处理对花粉活力的影响。
因为核期退化的花粉已有淀粉积累，遇I2呈蓝色反应。
另外，含有淀粉而被杀死的花粒遇I-KI也呈蓝色。
2培养基发芽法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定，不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发。
不同种类植物花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
2.哪种方法更能准确反应花粉的活力？答：个人认为发芽实验法更能准确反应花粉活力，虽然发芽试验法更为麻烦一些，但其结果更接近花粉的自然生活力，能较为直接的反应花粉的萌发率。
3.还有哪些方法可以用来检测植物花粉活力？答：①醋酸洋红染色法。
此法的染色原理是靠花粉中的脱氢辅酶而染色，有活力的花粉被染成红色，部分失去活力的呈现粉红色，而无活力或不育的花粉无色。
②过氧化物酶染色法。
此法又称联苯胺染色法,是根据花粉中过氧化物酶的活性来判断花粉的活力。
由于有活力的花粉含有活跃的过氧化物酶，所用试剂与过氧化物酶发生氧化反应而染色，有活力的花粉被染成红色，无活力的花粉则呈现黄色或无色透明。
③MTT染色法。
MTT染色法是根据花粉粒中脱氢酶的活性判断花粉生活力，镜检时,花粉呈现蓝色表明花粉有活力。
④FCR染色法。
此法也叫荧光染料反应法，其基本原理是荧光染料本身不产生荧光，无极性，并能自由地透过完整的原生质膜。
当此种染料进入原生质后，即被醋酶作用形成一种能产生荧光的极性物质一荧光素。
由于荧光素不能自由地出人原生质膜，而只在细胞内积累，因此可以根据花粉产生荧光的情况来判断花粉的生活。
花粉贮藏及花粉生活力的测定
实验四花粉贮藏及花粉生活力的测定花期不遇给杂交工作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进行花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。
为了避免杂交工作失误，在使用外地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的生活力进行检测，以便对杂交结果进行分析与研究。
因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉生活力测定的原理和技术。
（为什么贮藏花粉？）一、实验目的掌握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。
二、实验材料油松、辣椒、一串红、矮牵牛、油茶、油菜等植物的花粉。
三、仪器及药品载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、毛笔、干燥器、小指形管、标签、记号笔、显微镜、天平、烧杯、培养皿、滴管、玻璃棒、量筒、电炉、石棉网、冰箱；凡士林、无水氯化钙、蔗糖、琼脂、蒸馏水、硼酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、碘、碘化钾、氯化二苯基四氮唑（TTC ）。
四、实验原理花粉在低温（0 ～ 2 ℃）、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。
花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低（呼吸）、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。
鉴定花粉生活力的方法很多，概括起来主要有如下几种：1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。
此法最准确，但需时较长，且实验结果易受气候条件的影响。
也可在授粉后隔一定时间切下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。
2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。
此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。
3 ．染色观察法1 ）碘－碘化钾染色法：以碘－碘化钾溶液（0.3g 碘＋1.3g 碘化钾溶于100ml 蒸馏水）染色后于显微镜下观察，花粉被染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力（不太准，比如刚死的花粉）。
花粉生活力检测
植物花粉保存与花粉生活力的测定一、实验目的了解花粉生活力测定的一般方法，并掌握培养法测花粉生活力。
二、实验原理不同的植物成熟花粉的生命力长短不一，在自然状态下，成熟花粉有些存活仅数小时，有的课长达1个多月。
通过在干燥、低温、密封等的条件下保存，花粉的呼吸作用被抑制，生活力得以延长。
进行杂交人工授粉前，常对父母本花粉尤其是经过保存的花粉进行生活力测定。
其方法有：形态鉴定、TTC染色法鉴定、花芽萌芽鉴定等。
（1）形态鉴定除饱满、圆形的正常外，其他都不正常。
（2）TTC染色法鉴定脱氢辅酶存在于活的细胞内，当TTC渗透进入细胞内作为受体被脱氢辅酶上的氢还原，便由无色的TTC变为红色的三苯基甲（TTE)。
当细胞死亡后，NADH会迅速被降解，不会发生相应的颜色反应，故TTC染色法可显示细胞是否存活。
（3）花芽萌发鉴定将花粉置于合适的培养基上进行培养，花粉即可萌发出花粉管，发芽率可作为花粉生活力的检测指标三、实验材料、药品和器具1、实验材料兰花毛豌豆和葛藤正在开放的花2、药品和器具显微镜、凹式载玻片、培养皿、盖玻片、镊子、解剖针、蔗糖硼酸悬浮培养基四、实验内容1、花粉的保存（1）短期保存：低于4°C，冰壶中保存长期保存：（2）长期保存：干燥器中干燥24h，自由水含量低于1%，用石蜡封口，低于1°C的冰箱中保存2、花粉生活力的测定（花粉萌发鉴定法或称培养法）（1）用滴管滴1小滴蔗糖硼酸悬浮培养基于盖玻片上，注意不要滴到边缘，以免与载玻片凹面边缘接触。
(2)取兰花毛豌豆和葛藤正在开放的花的雄蕊，将雄蕊在培养基里反复涂抹几次，让花粉散落在培养基表面。
(3)迅速将盖玻片翻转，放置于凹式载玻片上，让培养基悬浮在凹式载玻片的凹面处，注意不要让培养基接触凹面边缘。
(4)每一个植物做两个重复，放置在显微镜下观察花粉形态。
20min后，观察并花粉发芽状况。
五、实验结果将实验结果填入花粉生活力测定实验记录表处理重复视野Ⅰ视野Ⅱ合计花粉粒数发芽粒数发芽率/%花粉粒数发芽粒数发芽率/%花粉粒数发芽粒数发芽率/%兰花毛豌豆重复Ⅰ70 65 92.8 65 60 92.3 135 125 92.6 重复Ⅱ80 76 95.0 74 70 94.6 154 146 94.8 合计150 141 94.0 139 130 93.5 289 271 93.8葛藤重复Ⅰ40 35 87.5 35 30 85.7 75 65 86.7 重复Ⅱ42 36 85.7 38 31 81.6 80 67 83.8合计82 71 86.6 73 61 83.6 155 137 88.4六、注意事项1、用滴管向盖玻片滴培养基时，要尽量滴在盖玻片中央，要避免液体培养基接触载玻片凹面边缘部分。
花粉生活力测定
花粉萌发率变化图
冰箱保存 常温保存
天数
5
10
15
20
25
30
35
精品资料
六 结论(jiélùn)
柱状图：不同温度保存相同时间下，冰箱保 存的萌发(méngfā)率高于常温保存
随时间增长两者萌发(méngfā)率都呈下降趋 势
折线图：3-6天内冰箱保存萌发(méngfā)率 下降较快
出现平缓的趋势，可能是实验存在误差 没有达到预期的效果，冰箱保存应该生活力
精品资料
4、镜检 在显微镜下隔一定时间检查(jiǎnchá)一次（花粉发芽快的
经过几个小时即可观察到已经发芽，慢的需24小时以上），若 发现花粉已发芽时，就随机地在显微镜下取5个视野，记录花粉 粒总数和发芽数，算出平均值，将观察结果填入表内。
花粉发芽的标准，以花粉管伸长超出花粉直径为准。若花 粉发芽率在5%以下，为极弱，不能采用。 （花粉发芽率=发芽 花粉总数\花粉总数）培养过程要密切观察，不可使花粉管萌发 的太长，否则难以计数。
★ 培养基法能够统计出百分率，准确度高 ，但是操作相对复杂(fùzá)，而且花粉发芽 条件与实际不完全相符易受培养基配方的 影响导致结果的偏差。
精品资料
配置培养基（ 100ml水+1g+琼脂+0.01g硼酸+ 5-20g糖 ） 煮沸溶化
用玻棒分装与凹玻片中 播撒花粉
置于培养皿中20-25℃恒温培养数小时 保持(bǎochí)湿度
同期花粉萌发(méngfā)率对比图
萌发率
花粉生活力变化图
常温
冰箱 80.00%
60.00%
40.00%
20.00%
0.00% 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 时间
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法花粉生活力是指花粉颗粒在一定条件下保持生活状态并完成受精的能力。
花粉生活力的测定对于植物的繁殖和育种具有重要意义。
下面将介绍几种常用的花粉生活力测定方法。
1. 离体培养法。
离体培养法是一种常用的花粉生活力测定方法。
首先需要收集新鲜花朵，取出花药，然后将花药中的花粉颗粒悬浮在含有营养物质的培养基上进行培养。
在适宜的温度和湿度条件下，观察花粉颗粒的萌发和生长情况，从而判断花粉的生活力。
这种方法简单易行，能够直观地观察花粉的生活状态。
2. 着色法。
着色法是另一种常用的花粉生活力测定方法。
该方法使用活性染料或染色剂对花粉颗粒进行染色，然后观察染色后的花粉颗粒对染色剂的反应情况。
通过观察染色颗粒的颜色变化和形态特征，可以判断花粉颗粒的生活力。
这种方法操作简便，结果直观，适用于大规模的花粉生活力测定。
3. 离体染色法。
离体染色法是一种较为精细的花粉生活力测定方法。
该方法首先将花粉颗粒置于含有染色剂的培养基中进行染色，然后观察染色颗粒的颜色变化和形态特征。
通过观察染色颗粒的反应情况，可以准确地判断花粉颗粒的生活力。
这种方法需要较为精细的操作和观察，但结果准确可靠。
4. 离体培养-染色法。
离体培养-染色法是一种结合了离体培养和染色法的花粉生活力测定方法。
该方法首先将花粉颗粒进行离体培养，然后在培养基中加入染色剂进行染色，最后观察染色颗粒的反应情况。
通过结合离体培养和染色的方法，可以更准确地判断花粉颗粒的生活力。
这种方法需要较为复杂的操作，但结果具有较高的准确性。
总结。
花粉生活力的测定对于植物的繁殖和育种具有重要意义，而不同的测定方法各有优劣。
离体培养法简单易行，适用于初步的花粉生活力测定；着色法操作简便，适用于大规模的花粉生活力测定；离体染色法结果准确可靠，适用于精细的花粉生活力测定；离体培养-染色法结合了离体培养和染色的优点，结果具有较高的准确性。
选择合适的花粉生活力测定方法，可以为植物的育种工作提供有力的支持。
油茶“三华系列”花粉活力测定及花粉保存
2020，42（1）DOI ：10.13836/j.jjau.2020014Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis http ://江西农业大学学报油茶“三华系列”花粉活力测定及花粉保存陈雅1，2，袁德义1，2*，李葵3，杨颖慧1，2，金亦佳1，2，林铭浩1，2，邹锋1，2（1.中南林业科技大学林学院，湖南长沙410004；2.经济林育种与栽培国家林业局重点实验室，湖南长沙410004；3.湖南省怀化市林业科学研究所，湖南怀化418000）摘要：【目的】为筛选“三华系列”（‘华硕’、‘华金’、‘华鑫’）花粉活力适宜的检测方法及贮藏条件。
【方法】研究采用FDA 荧光染色法，I 2-KI 法以及离体萌发法研究不同贮藏温度（室温，4℃，-30℃，-80℃）条件下“三华系列”（‘华硕’、‘华金’、‘华鑫’）的花粉活力。
【结果】（1）3种检测方法所得“新鲜花粉”活力值各不相同，其中I 2-KI 法检测花粉无活力，采用FDA 荧光染色法和离体萌发法测定的花粉生活力值差异显著。
‘华鑫’的新鲜花粉活力最高，‘华硕’次之，‘华金’花粉活力最低；（2）低温有利于花粉贮藏，花粉活力随贮藏时间的延长总体呈下降趋势。
“三华系列”花粉品种间的适宜贮藏温度基本无显著差异，室温条件下，“三华系列”花粉活力下降速度最快，贮藏时间最短。
室温下贮藏至13周后，“三华系列”花粉完全失去活力。
4℃贮藏条件下，贮藏至第5周时，“三华系列”花粉活力40%~70%；-80℃适宜于花粉的长期贮藏（26周），其贮藏效果优于-30℃，贮藏至第26周时花粉活力在30%~40%，近似为-30℃贮藏条件下的2倍，花粉活力；（3）在通过对FDA 荧光染色法与离体培养基法两种花粉活力检测方法进行相关性分析，发现FDA 荧光染色法在4种不同贮藏温度下的测定结果与离体培养法有极显著强相关，相关系数大于0.9。
【结论】I 2-KI 法不适宜作为油茶花粉活力检测方法，而FDA 荧光染色法可作为跟踪和测定油茶花粉活力变化的方法来表征油茶花粉潜在活力，是开展授粉工作前快速检测花粉活力的好方法；低温有利于油茶花粉的贮藏，短期内（5周）贮藏“三华系列”花粉最适宜条件是4℃低温贮藏，“三华系列”花粉活力在40%~70%；长期（26周）贮藏“三华系列”花粉的最适宜条件是-80℃低温冷冻贮藏，花粉活力在30%~40%。
三种忍冬属(Lonicera)植物花粉贮藏及生活力的测定
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关键 词 ： 冬 属 ； 粉 ；
文献标识码
Ａ
文章 编 号
１０ ７３ （０ ９ ０ ９ ０ ０７— ７ １ ２ ０ ）７— ０— ２
植物花粉的贮藏与花粉生活力测定
为保持花粉的生活力，最好将装好的花粉放入冰箱内或放入装有无水氯化钙的干燥器中，如没有以上设备，也可把装有花粉的小瓶放入盛有石灰的箱子里，保持湿度25%以下，放在阴凉、干燥黑暗处，这样可短时期内贮藏。
原理：花粉在贮藏期间的稳定性与花粉壁外层的性质和贮藏期花粉原生质的代谢有关。贮藏期内花粉可溶性糖类和有机物消耗少，则能在较长时期内保持生活力。影响花粉生活力的外界因子主要是相对湿度、温度和气体环境及花粉本身的含水量。在贮藏花粉时需要创造一个干燥、低温、低氧的环境，使得花粉处于几乎不活动或休眠的状态。
六、花粉生活力的测定
直接测定方法
1. 将花粉直接授在同种植株的雌蕊柱头上，并做好隔离工作，然后观察结实情况；如发育正常收到种子，即证明花粉有生活力。
2. 花粉在柱头上发芽 （1）将花粉直接授在清洁的同种植株的雌蕊柱头上，并做好隔离工作，隔1至3天采集已授过花粉的柱头，用FAA固定液或60℃温水中固定15分钟以上。（2）染色制片 将固定的花柱取出，用1%的苯胺兰水溶液（将1克苯胺兰溶于100毫升蒸馏水中）染色24小时，把花柱撕开，放在载玻片上，盖上盖玻片，用大拇指轻压、镜检、观察、若花粉有生活力，即可见染成蓝色的花粉管深入柱头组织，若花粉无生活力则看不到花粉管深入柱头组织现象。
间接测定法（此法是借人为创造条件使得花粉发芽来鉴别是否有生活力）
1. 培养基法 100毫升蒸馏水加入1至2克琼脂加热溶解，在加入葡萄糖或蔗糖制成5%、10%、15%、20%浓度的培养基趁热分别倒入培养皿中，冷凝后呈固体培养基，然后用解剖针粘取少量的花粉，均匀撒在培养基上。将播种好的培养基放在20~25℃恒温箱中，24小时或更长一点时间即可镜检观察其发芽情况。
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实验三花粉的贮藏和生活力测定
一、目的和要求
在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生活力。
花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。
从生产上来看，在选择相互授粉的品种时，也应考虑到品种的花粉发芽能力，凡是花粉发育不全的品种，其花粉的发芽率都很低。
因此不适宜做授粉品种。
本实验的主要目的是掌握花粉贮藏和花粉生活力测定的方法。
二、花粉及用具
材料：桃或苹果树的花粉。
用具：显微镜、天平、盖玻片、凹式载玻片、培养皿、干燥器、试管、滴瓶、蒸馏水、凡士林、蔗糖、氯化钙、琼脂、联苯胺、α-奈酚、碳酸钠、过氧化氢等。
三、方法
（一）花粉贮藏
从发育良好的植株上采下将开的花朵、取出花药放在纸上或培养皿中，放于干燥的室内，令其开裂，花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶或指形管中，口上塞以棉花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。
再把花粉瓶放于干燥器内，使花粉在空气相对湿度较低的条件下（一般0～40%）保存；为了减少呼吸作用，可以放在低温（0～4℃）黑暗的地方贮藏。
（二）花粉生活力试验
1、花粉发芽法
人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱，此法的缺点是花粉发芽条件与实际不完全相符，所得的结果与实际有一定的差异，但操作方便，能测定出相对发芽率来。
（1）培养基的制作与接种
一般采用5～20%蔗糖或葡萄糖加1～2%琼脂，溶于蒸馏水中。
加热煮沸即可，将已配制好的培养基保持在40℃温度即不凝固，用玻璃棒点一点培养基敷在载玻片的凹坑内，然后用接种针或解剖针沾以少量花粉。
轻轻振动，使花粉均匀地撒在培养基上，将载玻片放在垫有湿润棉花培养皿内或倒扣在培养皿上，并
贴上标签写明处理、种类、播种日期，将培养皿放于20℃的恒温箱中培养。
（2）观察记数
在显微镜下隔一定时间检查一次（花粉发芽快的经过几个小时即可观察到已
经发芽，慢的需24小时以上）若发现花粉已发芽时，便按一定方向，就同一视
野中用记数器记录花粉粒总数和发芽数，观察记录3～5个显微镜视野的数字，
求其平均数，即得出花粉发芽百分率。
花粉发芽的标准，以花粉管伸长超出花粉
直径为准。
2．染色法
（1）过氧化物酶测定法
原理：具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。
此酶能利用过氧化物使各
种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色可知花粉有无活力。
+2H2O
对二萘氧基联苯胺（紫红色）
a．0.2克联苯胺溶于100毫升50%的酒精溶液；
b．0.15克a-萘酚溶于100毫升50%酒精溶液；
c．0.25克的碳酸钠溶解在100毫升的蒸馏水中。
以上三种溶液分别放入棕色瓶中备用，使用时将这三种溶液等量配成试剂
Ⅰ，放入棕色滴瓶中备用，在使用前准备好0.3%的过氧化氢水溶液作为试剂Ⅱ。
使用时，先在载玻片上加少量待测花粉，然后在花粉上滴试剂Ⅰ和试剂Ⅱ各
一滴，仔细搅匀，盖上盖玻片，经3～4分钟后，再放在显微镜下检查，有生活
力的花粉呈红色或玫瑰色，无生活力的花粉为黄色或无色，为了确定具有生活力
的花粉百分率，要连续观察3～5个视野，求其平均值，将观察结果填入表内。
（2）碘-碘化钾染色法
原理：正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花粉则少。
据此，可用化学物
质染色，根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别。
通常正常花粉用I-KI染色后呈蓝色，而发育不良畸形花粉则不积累淀粉，当I-KI染色时呈黄褐色。
步骤和方法：取花粉撒于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子使花粉散开，再加一滴I-KI溶液，盖上盖玻片置于显微镜下观察，凡被染色呈蓝色表示具有生活力，呈黄褐色者为发育不良生活力弱的花粉。
（3）氯化三苯基四氮唑（TTC）法
原理：凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的花粉则无此反应，因此当TTC渗入有生活力的花粉时，花粉中的脱氢酶在催化去氢过程中与TTC结合，使无色的TTC变成三苯基甲（TTF）而呈红色。
试剂配制：
I．磷酸盐缓冲液在100ml的蒸馏水中，溶解0.832克Na2HPO4·2H2O和0.273克KH2PO4，调整pH值为7.17。
Ⅱ．TTC溶液称取0.02～0.05克TTC,溶解在10ml的磷酸盐缓冲液中,放入橡色滴瓶内,置于暗处。
TTC为有毒物质,操作时应注意安全。
步骤和方法：取少量花粉放在载玻片上，在花粉上滴1～2滴TTC溶液，用镊子使其混匀后，盖上盖玻片。
将此载玻片上置于恒温箱中（35～40℃）约15～20分钟，在显微镜（100倍）下观察。
凡有生活力的花粉粒呈红色，其次呈淡红色，失去生活力的和不育的花粉粒表现无色。
四、作业
1．绘出花粉发芽前后形态图。
2．统计几种测定方法花粉发芽率。
3．将发芽法与染色法测定的结果作一比较，分析其差异原因。
表2-1 花粉生活力观察记载表
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