花粉生活力测定
花粉生活力测定
实验九花粉生活力测定一、实验目的1．学习和了解植物花粉生活力测定方法及原理。
2．初步掌握稻、麦的花粉生活力测定方法。
二、内容说明农业常规育种工作中，为了进行人工辅助授粉和杂交授粉，尤其是杂交育种工作，为解决亲本花期不一致和远距离杂交的问题，通常需要早期采集和储藏花粉。
不同类群植物花粉在自然条件下的寿命，花粉的储藏条件，以及花粉生活力的测定有所区别，这一是由花粉本身的特征决定的，二是由贮藏条件决定的。
一般来说，禾谷类作物花粉的寿命较短，自花授粉植物花粉的寿命尤其短，如小麦在花药开裂后30min，花粉即由鲜黄色变为深黄色，此时己有大量花粉丧失活力。
在许多特殊条件下，花粉生活力的差异对于研究花粉-柱头的相互作用，作物改良与育种操作，基因库的保持，不亲和性与受精关系，生理调节对花粉萌发的影响和基因流等，均有非常重要的实践意义。
因此，对于外地采集来的花粉的短暂贮藏、花粉的生物学研究、自交或远缘杂交分析结实率或不结实原因、鉴定雄性不育系时，花粉生活力的测定显得很重要。
花粉生活力有很多表述法，为了方便起见，现将各种表述方法列表如下(表9-1)，以供参考。
表9-1 花粉生活力的各种表述法花粉生活力的测定方法较多，通常可分为萌发测定和不萌发测定两大类，常用的有：（1）形态鉴定法是一种简便的鉴定新采集花粉的方法。
可通过直接观察花粉在形态上有明显差异来鉴定花粉有无生活力。
发育不正常的花粉，内含物不充实而空秕，形状也不规则，大小参差不齐。
而正常花粉内含物充实饱满，形状规则，大小整齐。
因内部含有较多淀粉粒而遇1%I-IK溶液呈深紫色反应，遇水易涨而破裂。
一般适用于不育系及远缘杂交后代花粉形态和育性的鉴定。
（2）染色鉴定法（FCR法）用不同的化学试剂如双乙酸荧光素(fluorescein diacetate)、联苯胺茶酚等快速鉴定花粉生活力。
双乙酸荧光素是一种荧光染料，其本身不产生荧光，无极性，可以自由地透过完整的原生质膜。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法花粉是植物生殖过程中非常重要的一环，其生活力的测定对于植物繁殖和生长具有重要意义。
花粉生活力测定方法是通过一系列的实验和观察，来评估花粉的生长和发育能力，从而为植物的繁殖提供科学依据。
本文将介绍几种常见的花粉生活力测定方法，希望能够对相关领域的研究者和爱好者有所帮助。
首先，传统的花粉生活力测定方法是通过染色观察花粉管的生长情况。
首先，将采集到的花粉悬浮在含有营养液的培养基中，然后观察花粉管在一定时间内的生长情况，通过显微镜观察花粉管的长度和形态，从而评估花粉的生活力。
这种方法简单直观，但需要显微镜等设备，且操作较为繁琐。
其次，现代的花粉生活力测定方法中，常用的是荧光显微镜观察法。
通过将花粉与特定的荧光染料结合，使花粉在荧光显微镜下呈现出特定的荧光信号，从而可以清晰地观察花粉管的生长情况。
这种方法操作简便，观察效果明显，对于大规模的花粉生活力测定具有很大的优势。
另外，还有一种常见的花粉生活力测定方法是通过花粉萌发率来评估花粉的生活力。
这种方法是将采集到的花粉悬浮在含有营养液的培养基中，然后观察一定时间内花粉的萌发情况，通过统计萌发的花粉数量来评估花粉的生活力。
这种方法简单易行，可以在较短的时间内获取较为准确的结果。
除了上述几种方法外，还有一些新兴的花粉生活力测定方法，如分子生物学技术的应用、电子显微镜的观察等，这些方法在花粉生活力测定领域也取得了一些重要的进展。
综上所述，花粉生活力测定是植物繁殖和生长研究中的重要内容，而花粉生活力的准确测定则需要科学、准确的方法。
不同的方法各有优劣，研究者可以根据具体的实验目的和条件选择适合的方法进行花粉生活力的测定，从而为植物繁殖和生长研究提供可靠的数据支持。
希望本文介绍的几种常见的花粉生活力测定方法对相关领域的研究者和爱好者有所帮助，也希望在未来的研究中能够有更多更准确的花粉生活力测定方法被发展和应用。
实验四花粉生活力的测定
实验四、花粉生活力的测定一、实验目的：通过实验掌握花粉生活力测定的具体技术和方法;二、实验原理：花粉生活力是指在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力;花粉生活力测定在杂交工作中很重要,尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时,花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程,因此在杂交前应检验花粉的生活力,以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败;三、实验材料：苹果花粉四、实验用具与试剂：指形管、显微镜、载玻片、盖玻片、凹式载玻片、滴瓶、培养皿、天平、烧杯、玻璃棒、微波炉、滤纸、水浴锅、计数器、镊子；碘化钾KI、碘、蓝墨水、蒸馏水、蔗糖、琼脂、硼酸等;五、实验步骤常用的测定花粉生活力的方法：形态观察法、碘-碘化钾染色法、蓝墨水染色法和培养基发芽法;1. 形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态,根据花粉的典型性如具有正常的大小、形状、色泽等判断花粉的生活力,即形态正常的花粉有生活力,而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力;具体方法：将花粉置于载玻片上,在显微镜下观察3个不同视野,要求被检查的花粉粒总数达到100粒以上,计算正常花粉粒占总数的比率;此法简便易行但准确性差,一般只用于测定新鲜花粉的生活力;2. 染色法1 碘-碘化钾染色法①原理：正常的花粉积累淀粉较多,而不正常的花粉则少;据此,可用化学物质染色,根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别;通常正常花粉用I-KI染色后呈蓝色,而发育不良畸形花粉则不积累淀粉,当I-KI染色时呈黄褐色;②I-KI溶液：取g KI溶于5～10mL蒸馏水中,然后加入g I2待全部溶解后,再加蒸馏水至200mL,贮于棕色瓶中备用;③具体方法：取少量花粉撒于载玻片上,加一滴蒸馏水,用镊子使花粉散开,再加一滴I-KI溶液,盖上盖玻片置于显微镜下观察;凡被染色呈蓝色表示具有生活力,呈黄褐色者为发育不良生活力弱的花粉;为了保证实验的准确性,要求观察不同的3个视野,求其平均值,统计花粉生活力;2 蓝墨水染色法①蓝墨水溶液：正常购买的蓝墨水稀释10倍;②具体方法：取少量花粉撒于载玻片上,加一滴蒸馏水,用镊子使花粉散开,再加一滴蓝墨水溶液,盖上盖玻片置于显微镜下观察;凡被染色呈无色时表示具有生活力,呈蓝黑色者为发育不良生活力弱的花粉;为了保证实验的准确性,要求观察不同的3个视野,求其平均值,统计花粉的生活力;3. 培养基发芽法：人为的创造适合于花粉发芽的环境条件,以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱;1 培养基的制作与接种10%蔗糖+%硼酸+1%琼脂,溶于蒸馏水中,加热煮沸即可;将配好的培养基保持在40℃的水浴锅中保温,即不凝固;用玻璃棒蘸一滴培养基滴在载玻片的凹玻片内,然后用头发沾少量花粉条播;将载玻片放在垫有湿润滤纸的培养皿内或倒扣在培养皿上,并贴上标签花粉品种名称、姓名和日期,将培养皿放于25℃暗培养24h后统计发芽率;2 观察记数在显微镜下观察,每品种观察不同的3个视野,每个视野花粉粒数目≥20粒,求平均值,统计花粉的发芽率;花粉发芽的标准,以花粉管伸长超出花粉直径为准;四、作业1．绘出花粉发芽前、后的形态特征图;2．统计碘-碘化钾染色法和蓝墨水染色法测定花粉生活力的结果,并填写表1;3. 统计培养基发芽法测定花粉生活力的结果,并填写表2;4. 比较花粉生活力测定的不同方法,并分析引起花粉生活力差异的具体原因;表1 染色法测定花粉生活力结果统计表表2 培养基发芽法测定花粉生活力结果统计表。
花粉活力测定的3种办法
精心整理实验16?花粉活力的测定在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。
掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。
一、花粉萌发测定法【原理】水放???????1.用。
2.20℃条???????1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
???2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。
3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。
二、碘-碘化钾染色测定法多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。
发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。
因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。
【器材与用具】???显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
???【试剂】-KI300ml。
???I2～3张片??基四氮唑）还原成红色的TTF（三苯基甲??）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC 的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力。
【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
【试剂】0.5%TTC溶液：称取0.5gTTC放入烧杯中，加入少许95%酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100ml。
溶液避光保存，若发红时，则不能再用。
采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中，10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。
观察2~3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法花粉生活力测定方法是一种评估人们对花粉过敏的程度和生活质量的指标。
它通过采用定量和定性的方法来测定人体对花粉的反应和影响，以便为患者提供相应的治疗和干预措施。
下面我将详细介绍花粉生活力测定方法的原理和步骤。
首先，花粉生活力测定方法需要进行花粉源的采集和制备。
花粉源可以是空气中的自然环境采集或人工培养的花粉。
采集后，需要将花粉样本进行处理和制备，包括去除杂质和保持花粉的活力。
其次，花粉生活力测定方法中常用的技术是皮试和血清学检测。
皮试是一种常用的检测方法，主要通过在患者皮肤表面划一道小口，然后将一定浓度的花粉溶液滴在皮肤上，观察皮肤是否出现过敏反应，如红肿、瘙痒等。
这种方法简单快捷，可以初步筛查患者的过敏反应。
血清学检测是通过采集患者的血液样本，检测血清中花粉特异性IgE抗体水平来评估过敏反应的程度。
常用的检测方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光试验（IFA），这些方法可以检测到血液中特定花粉过敏原的抗体水平，并根据抗体浓度的高低来评估患者的过敏程度。
除了皮试和血清学检测，还可以进行生活质量评估。
这是一种主观的方法，通常通过问卷调查的方式，询问患者对花粉过敏的影响程度和日常生活质量的变化。
问卷通常包括患者的症状、疾病活动、工作和学习能力、社交活动和睡眠质量等方面的评估，以便评估花粉过敏对患者生活的影响。
最后，花粉生活力测定方法可以通过统计分析和数据处理来得出评估结果。
根据皮试和血清学检测的结果、生活质量评估和患者的症状表现等，可以综合评估花粉过敏的程度和生活质量的变化。
这些评估结果可以帮助医生为患者制定个性化的治疗方案，包括药物治疗、免疫疗法和生活调整等。
综上所述，花粉生活力测定方法是评估人们对花粉过敏的程度和生活质量的一种指标。
通过采用皮试和血清学检测、生活质量评估等方法，可以全面分析患者的过敏反应和生活质量的变化，为患者提供针对性的治疗和干预措施。
这种方法对于花粉过敏的预防和管理具有重要的临床意义。
2实验二、花粉生活力测定
前 言
花粉生活力测定在育种 力 2．雄性不育系的鉴定
实验目的：
学习并初步掌握作物花粉生 活力测定的常用方法
测定方法:
（一）I-KI染色鉴定
（二）TTC染色鉴定
（三）花粉粒发芽鉴定
实验方法 I-KI染色鉴定：
正常的成熟花粉粒体积较大， 并含有大量的淀粉粒，遇I-KI 呈紫黑色，不正常的花粉粒体 系较小、有时畸形、染色浅或 不染色。
实验方法 TTC染色鉴定：
具有生活力的花粉中含有 脱氢酶，它能催化引物使脱下 的氢与TTC结合，生成红色化 合物甲替。凡有生活力的花粉 呈红色，生活力弱的呈浅红色， 无生活力的不显色或成黄色。
实验方法
花粉粒发芽鉴定：
在人工培养基上进 行发芽试验，可以比较 准确地判断花粉的生活 力。
实验步骤
I-KI染色鉴定：
2 ．准备 TTC 染色和发芽试验的材料， 置培养箱保温； 3．调试显微镜，I-KI染色鉴定； 4．TTC染色鉴定、发芽率调查。
作业
实验三、作物花粉生活力测定 1．测定方法和原理： （一）I-KI染色鉴定：正常的成熟花粉粒体积较大，并含有大量的淀粉 粒，遇I-KI呈紫黑色，不正常的花粉粒体系较小、有时畸形、染色浅或 不染色。 （二）TTC染色鉴定：具有生活力的花粉中含有脱氢酶，它能催化底物 使脱下的氢与TTC（氯化三苯基四氮唑）结合，生成红色化合物甲替。 凡有生活力的花粉呈红色，生活力弱的呈浅红色，无生活力的不显色或 成黄色。 （三）花粉粒发芽鉴定：在人工培养基上进行发芽试验，可以比较准确 地判断花粉的生活力。 2．实验结果： 材料 I-IK染色率% TTC染色率% 发芽率%
用镊子夹一个花药于载玻片 上滴上一滴1%I-KI溶液 用镊子将花药夹碎并把碎片 去干净盖上盖玻片置显微 镜下观察。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉是植物生殖的重要组成部分，其生活力的测定对于植物繁殖和种子生产具有重要意义。
本文将介绍几种常用的花粉生活力测定方法，希望能够对相关领域的研究者和生产者有所帮助。
首先，最常见的花粉生活力测定方法是离体培养法。
这种方法首先需要收集新鲜的花药，然后在适当的培养基上进行培养，观察花粉的萌发情况来判断其生活力。
离体培养法的优点是操作简单，结果可靠，因此被广泛应用于植物育种和种子生产中。
其次，荧光显微镜法也是一种常用的花粉生活力测定方法。
这种方法利用荧光显微镜观察花粉颗粒的形态和结构，通过判断其内部结构的完整性来评估花粉的生活力。
荧光显微镜法对花粉的观察更加直观，能够提供更多的信息，但需要专业的设备和操作技能。
另外，还有一种叫做染色法的花粉生活力测定方法。
这种方法通过在花粉颗粒上涂抹特定的染料，然后观察染色情况来判断花粉的生活力。
染色法简单易行，可以快速得到结果，但对染料的选择和浓度有一定要求。
除了上述方法，还有一些新兴的花粉生活力测定方法，比如电子显微镜法、流式细胞仪法等。
这些方法在技术上更加先进，能够提供更为精细的数据，但也需要更高的成本和专业的操作技能。
综上所述，花粉生活力的测定对于植物育种和种子生产具有重要意义，而不同的方法各有优劣。
在选择具体的测定方法时，需要根据实际情况和研究目的进行综合考虑，以便选择最适合的方法。
希望本文介绍的内容能够对相关领域的研究者和生产者有所启发，推动相关领域的科研工作和生产实践取得更好的成果。
实验：园艺植物花粉生活力测定
天竺葵柱头上的花粉粒
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
蒂氏荚蒾花粉（灰色) 其中一个已开始萌发
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
勿忘草的花粉 最小的花粉粒之一，直径只有0.005毫米
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
花锦葵属植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
桦树的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
柳树花粉粒
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
染色者为发育不良、生活力弱的花粉。观察3~4个视野，
五、方法步骤：
（三）花粉生活力试验
3.取另一载玻片，加少量同种待测花粉，然后在花
粉上滴试剂Ⅰ和试剂Ⅱ各一滴，仔细搅匀，盖上盖
玻片，用镊子轻轻压实。经3～4分钟后，放在显微
镜下检查。
有生活力的花粉呈红色或玫瑰色，无生活力的 花粉为黄色或无色，连续观察3～4个视野，分别记 录有生活力及无生活力的花粉数。
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
凤梨科植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉生活力是指花粉颗粒的活力和生长能力，是衡量植物繁殖成功的重要指标。
花粉生活力测定方法是一种用来评估花粉质量和活力的技术手段，对于植物繁殖和种子生产具有重要意义。
传统的花粉生活力测定方法主要包括花粉染色观察法、花粉萌发率测定法和花
粉活力染色法。
花粉染色观察法是将花粉染色后在显微镜下观察其形态和数量，从而评估花粉的活力和质量。
花粉萌发率测定法则是将花粉培养在适宜的培养基上，观察其萌发情况以评估花粉的活力。
花粉活力染色法则是利用染色技术来观察花粉内部的活力指标，如线粒体和细胞核的活跃程度。
随着科学技术的发展，现代的花粉生活力测定方法也在不断完善和创新。
比如，利用生物技术手段对花粉进行基因测序和分析，可以更准确地评估花粉的生活力和遗传信息。
同时，利用先进的显微镜和成像技术，可以对花粉的微观结构和形态进行更精细的观察和分析。
花粉生活力测定方法的发展不仅有助于科学家和植物育种者更好地了解植物的
繁殖机制和生长规律，也为农业生产和生态保护提供了重要的技术支持。
通过准确评估花粉的生活力，可以选择出高质量的花粉进行人工授粉或者种子生产，从而提高植物的繁殖成功率和产量。
此外，对花粉生活力的准确测定也有助于保护植物遗传资源，促进植物多样性的保护和利用。
总之，花粉生活力测定方法是一项重要的植物科学技术，它为我们深入了解植
物繁殖机制和提高农业生产效率提供了重要的技术手段和支持。
随着科学技术的不断进步，相信花粉生活力测定方法将会在未来发挥更加重要的作用。
花粉活力测定的3种方法
欢迎阅读实验16?花粉活力的测定在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。
掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。
一、花粉萌发测定法90ml 水放???????1.用。
2.采集丝瓜、南瓜或其他葫芦科植物刚开放或将要开放的成熟花朵，将花粉洒落在涂有培养基的载玻片上，然后将载玻片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在25℃左右的恒温箱（或室温20℃条件下）中孵育，5~10min 后在显微镜下检查5个视野，统计其萌发率。
????【注意事项】???1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
???2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。
3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。
-KI溶I2??????【试剂】-KI溶液：取300ml。
???I2贮于棕色瓶中备用。
【方法】采集水稻、小麦或玉米可育和不育植株的成熟花药，取一花药于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子将花药捣碎，使花粉粒释放，再加1～2滴I2-KI溶液，盖上盖玻片，在显微镜下观察。
凡是被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。
观察2～3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性。
??【注意事项】此法不能准确表示花粉的活力，也不适用于研究某一处理对花粉活力的影响。
因为三核期退化的花粉已有淀粉积累，遇碘呈蓝色反应。
另外，含有淀粉而被杀死的花粉粒遇I2-KI也呈蓝色。
氯化三苯100ml【方法】?采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中，10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。
花粉活力测定的3种方法
实验16?花粉活力的测定在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。
掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。
一、花粉萌发测定法【原理】90ml水放???????1.用。
2.20℃条???????1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
???2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。
3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。
二、碘-碘化钾染色测定法多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。
发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。
因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。
【器材与用具】???显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
???【试剂】???I2-KI300ml。
2～3张片??基四氮唑）还原成红色的TTF（三苯基甲??）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC 的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力。
【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
【试剂】0.5%TTC溶液：称取0.5gTTC放入烧杯中，加入少许95%酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100ml。
溶液避光保存，若发红时，则不能再用。
采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中，10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。
观察2~3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
花粉生活力测定
精品资料
花粉发芽鉴定：配制一定浓度的蔗糖溶 液等作培养基，在人工控制条件下进行 花粉发芽试验，根据花粉发芽率的高低 衡量(héng liáng)花粉生活力。也可以在 授粉数小时后直接观察柱头花粉萌发伸 长情况。
染色鉴定：用不同的化学试剂如氯化三 苯基四氮唑（2，3，5-triphenyl tetrazolium chloride、C12H15N4Cl， 简称TTC或四唑）、联苯胺茶酚等快速
在显微镜下镜检计数
【注意事项】 1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度(nóngdù)不同，应依植物种类而改 变培养条件。 2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度(nóngdù)，离体时间 ，环境条件等因素对花粉活力的影响。
3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的(葫芦科等)植物花粉 活力的测定。
★ 培养基法能够统计出百分率，准确度高 ，但是操作相对复杂(fùzá)，而且花粉发芽 条件与实际不完全相符易受培养基配方的 影响导致结果的偏差。
精品资料
配置培养基（ 100ml水+1g+琼脂+0.01g硼酸+ 5-20g糖 ） 煮沸溶化
用玻棒分装与凹玻片中 播撒花粉
置于培养皿中20-25℃恒温培养数小时 保持(bǎochí)湿度
同期花粉萌发(méngfā)率对比图
萌发率
花粉生活力变化图
常温
冰箱 80.00%
60.00%
40.00%
20.00%
0.00% 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 时间
精品资料
五 结果(jiē guǒ)与数据分析
育种实验-花粉生活力的测定2011春
三、方法
（二）花粉生活力试验 经贮存的花粉,在使用之前必须作生活力的测定以鉴 定其量。 测定花粉生活力的方法主要有三种。
活体萌发法
离体萌发法
染色法
1、花粉发芽法
人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况 来鉴定花粉生活力的强弱。
（1）培养基的制作与接种
一般采用5～20%蔗糖或葡萄糖加1～2%琼脂，溶于蒸馏水中。 加热煮沸即可，将已配制好的培养基保持在40℃温度即不凝 固，用玻璃棒点一点培养基敷在载玻片的凹坑内，然后用头 发（接种针或解剖针）沾以少量花粉。条播（轻轻振动，使 花粉均匀地撒在培养基上），将载玻片放在垫有湿润棉花培 养皿内或倒扣在培养皿上，并贴上标签写明处理、种类、播 种日期，将培养皿放于(20_25℃)的恒温箱中培养。
表1 花 粉 生 活 力 观 察 记 载 表
种处 类理
花粉发芽率（或染色后具有生活力的花粉百分率） 时间 重复I 重复Ⅱ 重复Ⅲ 总 计
发 发 发 发 花 未 发 花 未 发 花 未 发 芽 芽 芽 芽 播 检 粉 发 芽 粉 发 芽 粉 发 芽 种 查 率 率 率 率 数 芽 数 数 芽 数 数 芽 数 % % % % 发 芽 法 染 色 法
本实验的主要目的是掌握花粉贮藏和花粉生活力测定的 方法。
二、材料及用具
材料：梨的花粉。 用具：显微镜、盖玻片、载玻片、凹式载玻 片、滴瓶、培养皿、天平、烧杯、 玻璃棒、微波炉
试剂：I-KI溶液、蒸馏水、蔗糖、琼脂等。
三、方法
（一）花粉贮藏 从发育良好的植株上采下将开的花朵、取出花药放 在纸上或培养皿中，放于干燥的室内阴干，令其开裂， 花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶或指形管中，口上塞 以棉花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。再把花 粉瓶放于干燥器内，使花粉在空气相对湿度较低的条 件下（一般0～40%）保存；为了减少呼吸作用，可以 放在低温（0～4℃）黑暗的地方贮藏。
花粉生活力检测
植物花粉保存与花粉生活力的测定一、实验目的了解花粉生活力测定的一般方法，并掌握培养法测花粉生活力。
二、实验原理不同的植物成熟花粉的生命力长短不一，在自然状态下，成熟花粉有些存活仅数小时，有的课长达1个多月。
通过在干燥、低温、密封等的条件下保存，花粉的呼吸作用被抑制，生活力得以延长。
进行杂交人工授粉前，常对父母本花粉尤其是经过保存的花粉进行生活力测定。
其方法有：形态鉴定、TTC染色法鉴定、花芽萌芽鉴定等。
（1）形态鉴定除饱满、圆形的正常外，其他都不正常。
（2）TTC染色法鉴定脱氢辅酶存在于活的细胞内，当TTC渗透进入细胞内作为受体被脱氢辅酶上的氢还原，便由无色的TTC变为红色的三苯基甲（TTE)。
当细胞死亡后，NADH会迅速被降解，不会发生相应的颜色反应，故TTC染色法可显示细胞是否存活。
（3）花芽萌发鉴定将花粉置于合适的培养基上进行培养，花粉即可萌发出花粉管，发芽率可作为花粉生活力的检测指标三、实验材料、药品和器具1、实验材料兰花毛豌豆和葛藤正在开放的花2、药品和器具显微镜、凹式载玻片、培养皿、盖玻片、镊子、解剖针、蔗糖硼酸悬浮培养基四、实验内容1、花粉的保存（1）短期保存：低于4°C，冰壶中保存长期保存：（2）长期保存：干燥器中干燥24h，自由水含量低于1%，用石蜡封口，低于1°C的冰箱中保存2、花粉生活力的测定（花粉萌发鉴定法或称培养法）（1）用滴管滴1小滴蔗糖硼酸悬浮培养基于盖玻片上，注意不要滴到边缘，以免与载玻片凹面边缘接触。
(2)取兰花毛豌豆和葛藤正在开放的花的雄蕊，将雄蕊在培养基里反复涂抹几次，让花粉散落在培养基表面。
(3)迅速将盖玻片翻转，放置于凹式载玻片上，让培养基悬浮在凹式载玻片的凹面处，注意不要让培养基接触凹面边缘。
(4)每一个植物做两个重复，放置在显微镜下观察花粉形态。
20min后，观察并花粉发芽状况。
五、实验结果将实验结果填入花粉生活力测定实验记录表处理重复视野Ⅰ视野Ⅱ合计花粉粒数发芽粒数发芽率/%花粉粒数发芽粒数发芽率/%花粉粒数发芽粒数发芽率/%兰花毛豌豆重复Ⅰ70 65 92.8 65 60 92.3 135 125 92.6 重复Ⅱ80 76 95.0 74 70 94.6 154 146 94.8 合计150 141 94.0 139 130 93.5 289 271 93.8葛藤重复Ⅰ40 35 87.5 35 30 85.7 75 65 86.7 重复Ⅱ42 36 85.7 38 31 81.6 80 67 83.8合计82 71 86.6 73 61 83.6 155 137 88.4六、注意事项1、用滴管向盖玻片滴培养基时，要尽量滴在盖玻片中央，要避免液体培养基接触载玻片凹面边缘部分。
实验二 花粉生活力的测定
实验二花粉生活力的测定一实验目的掌握花粉生活力鉴定的方法和原理二实验材料羽衣甘蓝、矮牵牛、三色堇等植物的花粉三仪器及药品载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、标签、记号笔、显微镜、天平、烧杯、培养皿、玻璃棒、滴管、量筒、电炉、石棉网、烘箱蔗糖、琼脂、蒸馏水、磷酸二氢钾、磷酸二钠、TTC四实验原理花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少通常与其生活力密切相关，因此可利用花粉的形态观察过氧化物酶、脱氢酶活性的高低、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。
鉴定花粉生活力的方法很多，主要有1 直接鉴定法2 形态观察法3 染色观察法4 培养基发芽法五实验步骤花粉生活力的测定染色观察法——TTC染色1 配置TTC染色液，称取0.5gTTC溶于100ml磷酸盐缓冲液中，装入棕色瓶2 制片：取少量花粉于载玻片上，滴入1~2滴0.5%TTC染色液，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，于35~40°C条件静置15~20min。
3 观察统计：在显微镜下观察三个不同视野。
凡被染成红色或玫瑰色都是有生活力的花粉.培养基发芽法——固体培养基1 配制培养法：取1g琼脂，5g蔗糖，量94ml蒸馏水，装入烧杯，加热使琼脂溶化，配成5%浓度培养基。
同法配置10%、15%、20%浓度的培养基。
2 制片：用滴管吸取少量培养基，趁热滴在载玻片上，使放置凝固。
3播种花粉：少量的花粉均匀撒播4培养与观察：将制好的片子放在垫有湿润滤纸的培养皿内，于20—22℃温箱中培养。
待花粉萌发后于显微镜下观察，并统计发芽率，观察是每片随机取三个视野，统计花粉总数，计算平均发芽率。
六作业及思考题同种植物材料培养基法测得的花粉生活力较低染色法测得的花粉生活力较高原因：因为用染色法时，只要是有活力的花粉粒就会被染上颜色，而有活力的花粉粒却不一定会萌发。
花粉生活力测定
（三）TTC法：（染色法） TTC即2、3、5-三苯基四唑氯化物。主要原理在于检验花 粉呼吸过程中脱氢酶的活性。2、3、5-氯化三苯基四氮唑 (TTC)的氧化状是无色的，被氢还原时成红色的TTF。 具有活力的花粉呼吸作用较强，由于呼吸作用产生的氢能 使TTC还原成TTF，因此花粉便染成红色；而无生命的花 粉没有呼吸代谢活力，TTC不被还原，因而不着色。所以， 可根据花粉染不染成红色来判断有无生命力，从而测定花 粉生活力。
（二）联苯胺法：（染色法）
具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。此酶能利 用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色， 依据颜色可知花粉有无活性。实验中甲液成分为联苯胺， α-萘酚、碳酸钠，乙液成分为过氧化氢。
H2O2 + 酚
（无色）
过氧化氢酶
醌 + H2O
（红色、玫瑰红色）
1、配制药液 a．0.2克联苯胺溶于100毫升50%的酒精溶液； b．0.15克a-萘酚溶于100毫升50%酒精溶液； c．0.25克的碳酸钠溶解在100毫升的蒸馏水中。 以上三种溶液分别放入棕色瓶中备用 d.使用时将这三种溶液等量配成“甲液”，放入棕色滴瓶中 备用， e.将过氧化氢用蒸馏水稀释成0.3%的溶液作为“甲液”，随 配随用。 2、观察 取花粉少许撒入凹型载玻片，然后在花粉上滴“甲液”一滴， 片刻后，再滴入“乙液” 一滴，仔细搅匀，盖上盖玻片。 经3～5分钟后，再放在显微镜下检查。 有生活力的花粉呈红色或玫瑰红色，不着色者为无生活力的 花粉。为了确定具有生活力的花粉百分率，要连续观察3～5 个视野，求其平均值，将观察结果填入表内。
配置培养基（ 100ml水+1g+琼脂+0.01g硼酸+ 5-20g糖 ） 煮沸溶化 用玻棒分装与凹玻片中 播撒花粉 置于培养皿中20-25℃恒温培养数小时 保持湿度 在显微镜下镜检计数
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法花粉生活力是指花粉颗粒在一定条件下保持生活状态并完成受精的能力。
花粉生活力的测定对于植物的繁殖和育种具有重要意义。
下面将介绍几种常用的花粉生活力测定方法。
1. 离体培养法。
离体培养法是一种常用的花粉生活力测定方法。
首先需要收集新鲜花朵，取出花药，然后将花药中的花粉颗粒悬浮在含有营养物质的培养基上进行培养。
在适宜的温度和湿度条件下，观察花粉颗粒的萌发和生长情况，从而判断花粉的生活力。
这种方法简单易行，能够直观地观察花粉的生活状态。
2. 着色法。
着色法是另一种常用的花粉生活力测定方法。
该方法使用活性染料或染色剂对花粉颗粒进行染色，然后观察染色后的花粉颗粒对染色剂的反应情况。
通过观察染色颗粒的颜色变化和形态特征，可以判断花粉颗粒的生活力。
这种方法操作简便，结果直观，适用于大规模的花粉生活力测定。
3. 离体染色法。
离体染色法是一种较为精细的花粉生活力测定方法。
该方法首先将花粉颗粒置于含有染色剂的培养基中进行染色，然后观察染色颗粒的颜色变化和形态特征。
通过观察染色颗粒的反应情况，可以准确地判断花粉颗粒的生活力。
这种方法需要较为精细的操作和观察，但结果准确可靠。
4. 离体培养-染色法。
离体培养-染色法是一种结合了离体培养和染色法的花粉生活力测定方法。
该方法首先将花粉颗粒进行离体培养，然后在培养基中加入染色剂进行染色，最后观察染色颗粒的反应情况。
通过结合离体培养和染色的方法，可以更准确地判断花粉颗粒的生活力。
这种方法需要较为复杂的操作，但结果具有较高的准确性。
总结。
花粉生活力的测定对于植物的繁殖和育种具有重要意义，而不同的测定方法各有优劣。
离体培养法简单易行，适用于初步的花粉生活力测定；着色法操作简便，适用于大规模的花粉生活力测定；离体染色法结果准确可靠，适用于精细的花粉生活力测定；离体培养-染色法结合了离体培养和染色的优点，结果具有较高的准确性。
选择合适的花粉生活力测定方法，可以为植物的育种工作提供有力的支持。
花粉的贮藏和生活力测定
实验三花粉的贮藏和生活力测定一、目的和要求在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生活力。
花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。
从生产上来看，在选择相互授粉的品种时，也应考虑到品种的花粉发芽能力，凡是花粉发育不全的品种，其花粉的发芽率都很低。
因此不适宜做授粉品种。
本实验的主要目的是掌握花粉贮藏和花粉生活力测定的方法。
二、花粉及用具材料：桃或苹果树的花粉。
用具：显微镜、天平、盖玻片、凹式载玻片、培养皿、干燥器、试管、滴瓶、蒸馏水、凡士林、蔗糖、氯化钙、琼脂、联苯胺、α-奈酚、碳酸钠、过氧化氢等。
三、方法（一）花粉贮藏从发育良好的植株上采下将开的花朵、取出花药放在纸上或培养皿中，放于干燥的室内，令其开裂，花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶或指形管中，口上塞以棉花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。
再把花粉瓶放于干燥器内，使花粉在空气相对湿度较低的条件下（一般0～40%）保存；为了减少呼吸作用，可以放在低温（0～4℃）黑暗的地方贮藏。
（二）花粉生活力试验1、花粉发芽法人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱，此法的缺点是花粉发芽条件与实际不完全相符，所得的结果与实际有一定的差异，但操作方便，能测定出相对发芽率来。
（1）培养基的制作与接种一般采用5～20%蔗糖或葡萄糖加1～2%琼脂，溶于蒸馏水中。
加热煮沸即可，将已配制好的培养基保持在40℃温度即不凝固，用玻璃棒点一点培养基敷在载玻片的凹坑内，然后用接种针或解剖针沾以少量花粉。
轻轻振动，使花粉均匀地撒在培养基上，将载玻片放在垫有湿润棉花培养皿内或倒扣在培养皿上，并贴上标签写明处理、种类、播种日期，将培养皿放于20℃的恒温箱中培养。
（2）观察记数在显微镜下隔一定时间检查一次（花粉发芽快的经过几个小时即可观察到已经发芽，慢的需24小时以上）若发现花粉已发芽时，便按一定方向，就同一视野中用记数器记录花粉粒总数和发芽数，观察记录3～5个显微镜视野的数字，求其平均数，即得出花粉发芽百分率。
花粉生活力测定
不同时间萌发率图
时间 冰箱保存 3 6 65.60% 49.60%
平均萌发率
常温保存 48.90% 39.40%
9 12
15 18 21 24 27 30
47% 45.40%
37% 30.10% 26.90% 22% 16.20% 10.20%
33.20% 29.50%
29.30% 21.50% 15.20% 10.30% 9.60% 8.23%
三、实验用品
1、材料 正在开花的植株花粉（大樱桃 美早） 2、器具 盖、载玻片 凹式载玻片 培养皿 滴管 镊子 吸 水纸 恒温箱 天平 烧杯 玻棒 电炉 普通显微镜 3、药品 蒸馏水 硼酸 蔗糖 琼脂 六偏磷酸钠
四、内容与方法（花粉萌发）
（一）培养法： 1、配置培养基 取100ml蒸馏水中，加1~2g（即1%~2%）琼脂煮开， 使之溶解，然后再加入一定量的蔗糖或葡萄糖和0.01g 硼酸，制成不同浓度（5%、10%、15%、20%）的蔗 糖琼脂培养基。 2、制片 用玻棒蘸少许培养基，趁热滴入凹形载玻片，放置片 刻，待凝固后，撒上少许花粉粒。注意要均匀，不可 过多，否则，在显微镜下，不易分清数目。 3、培养 将制好的玻片放于培养皿，下面垫有滤纸，加入少量 水，以保持湿度。将培养皿盖好，置于20~25℃恒温 箱中。22 ℃
谢谢大家！
六 结论
柱状图：不同温度保存相同时间下，冰箱 保存的萌发率高于常温保存 随时间增长两者萌发率都呈下降趋势 折线图：3-6天内冰箱保存萌发率下降较快 出现平缓的趋势，可能是实验存在误差 没有达到预期的效果，冰箱保存应该生活 力时间更长
六 实验的不足之处
文献查阅检准率和检全率不够 试验方案不完备 存放花粉时存在外围环境影响 试验时散花粉太多，计数时误差太大 数据记录不规范
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实验九花粉生活力测定
一、实验目的
1．学习和了解植物花粉生活力测定方法及原理。
2．初步掌握稻、麦的花粉生活力测定方法。
二、内容说明
农业常规育种工作中，为了进行人工辅助授粉和杂交授粉，尤其是杂交育种工作，为解决亲本花期不一致和远距离杂交的问题，通常需要早期采集和储藏花粉。
不同类群植物花粉在自然条件下的寿命，花粉的储藏条件，以及花粉生活力的测定有所区别，这一是由花粉本身的特征决定的，二是由贮藏条件决定的。
一般来说，禾谷类作物花粉的寿命较短，自花授粉植物花粉的寿命尤其短，如小麦在花药开裂后30min，花粉即由鲜黄色变为深黄色，此时己有大量花粉丧失活力。
在许多特殊条件下，花粉生活力的差异对于研究花粉-柱头的相互作用，作物改良与育种操作，基因库的保持，不亲和性与受精关系，生理调节对花粉萌发的影响和基因流等，均有非常重要的实践意义。
因此，对于外地采集来的花粉的短暂贮藏、花粉的生物学研究、自交或远缘杂交分析结实率或不结实原因、鉴定雄性不育系时，花粉生活力的测定显得很重要。
花粉生活力有很多表述法，为了方便起见，现将各种表述方法列表如下(表9-1)，以供参考。
表9-1 花粉生活力的各种表述法
花粉生活力的测定方法较多，通常可分为萌发测定和不萌发测定两大类，常用的有：（1）形态鉴定法是一种简便的鉴定新采集花粉的方法。
可通过直接观察花粉在形态上有明显差异来鉴定花粉有无生活力。
发育不正常的花粉，内含物不充实而空秕，形状也不规则，大小参差不齐。
而正常花粉内含物充实饱满，形状规则，大小整齐。
因
内部含有较多淀粉粒而遇1%I-IK溶液呈深紫色反应，遇水易涨而破裂。
一般适用于不育系及远缘杂交后代花粉形态和育性的鉴定。
（2）染色鉴定法（FCR法）用不同的化学试剂如双乙酸荧光素(fluorescein diacetate)、联苯胺茶酚等快速鉴定花粉生活力。
双乙酸荧光素是一种荧光染料，其本身不产生荧光，无极性，可以自由地透过完整的原生质膜。
当此种染料进入原生质后，即被酯酶作用而形成一种能产生荧光的极性物质—荧光素，并且这种物质不能自由出入原生质膜，而只在细胞内积累，所以，可以根据花粉产生荧光的情况判断花粉的生活力。
此方法可同时反映出酶活和质膜情况两个指标。
（3）花粉发芽测定法配制一定浓度的蔗糖溶液等作培养基，在人工控制条件下进行花粉发芽试验。
根据花粉发芽率的高低衡量花粉生活力。
也可以在授粉数小时后直接观察柱头花粉萌发伸长情况。
三、材料仪器药品
1．材料当天采集的稻、麦任一种作物的新鲜花粉。
2．仪器用具冰箱、荧光显微镜、普通显微镜、恒湿箱、载玻片、盖玻片、培养皿、滴管、镊子、解剖针、吸水纸、滤纸、标签、铅笔等。
3．药品KNO3、NaOH、MgSO4、MnSO4、Ca(N03)2、H3BO3、1%I-IK溶液、双乙酸荧光素、丙酮、乳酸、苯酚、甘油、棉蓝、苯胺蓝、冰醋酸、蔗糖、琼脂、马铃薯淀粉、蒸馏水。
四、方法步骤
花粉的育性和生活力可由浅入深按以下顺序观察鉴定：外形观察→I-IK测定内含物的充实度→染色法鉴定花粉酶学性质→花粉发芽试验→观察花粉在柱头上萌发和伸长情况。
（一）形态鉴定
1．将少量正常的稻、麦的新鲜花粉用解剖针播于一般载玻片上，于低倍显微镜下观察花粉形态。
根据形态特征，判断花粉的生活力状况。
一般来说，畸形、皱缩、小型化等均为无生活力花粉，而有光泽、饱满、具有本品种花粉典型特征等性状的均为有生活力花粉。
将观察的结果统计一下填写表格9-2。
2．与形态观察相同。
但在有花粉的载玻片上滴1滴1%I-IK，再观察花粉是否染色和染色深浅情况，以判断花粉内含物的充实度。
正常花粉应有较多的淀粉粒，遇I-IK呈紫黑色，不正常的染色浅或不染色。
（二）FCR测定法（荧光染料反应法)
荧光染色法可根据细胞质膜完整性判断花粉的生活力。
迅速简便，与萌发测定有相
关性，对亲本与F1代的鉴别非常有效。
由于花粉细胞质膜的完整性不同，经过荧光素双乙酸反应，活细胞发出绿色荧光，死细胞无荧光，可统计花粉细胞存活率((FCR值)。
1．试剂配制
（1）母液1(SSl)的配制称取1.75 mol/L蔗糖，3.32 mmol/L H3BO3，3.05 mmol/L Ca(N03)2，3.33 mmol/L MgSO4，1.98 mmol/L KNO3，然后蒸馏水定容。
为了避免由渗透压引起的花粉管破裂，可以增加蔗糖浓度，若想得到更强的荧光反应还可加大盐的浓度。
（2）母液2（SS2）的配制7.21 mmol/L双乙酸荧光素溶于丙酮中，放于4℃冰箱保存。
（3）工作液取8~12滴SS2于10 ml SS1中，混匀直到此混合液变为轻乳状。
2．染色取已成熟尚未开花的水稻或小麦花粉5~10个，切断花药两端，放入小烧杯中，加FCR工作液，使花药完全浸入反应液中
3．压片镜检取出花药，置于载玻片上，用解剖针压出花粉，去掉花药药壁组织，盖上盖玻片，2 min后在荧光显微镜镜检观察，取5个视野，统计荧光花粉百分率。
将观察的结果统计一下填写表格9-2。
（三）花粉发芽鉴定
1．配制培养基
⑴水稻称取马铃薯淀粉6 g、蔗糖20g、H3BO3 0.01g，加100ml蒸馏水，煮沸呈糊状，然后置温箱内保温保湿，备用。
⑵小麦称取蔗糖10g、琼脂3.5 g 、H3BO3 0.02g，加100ml蒸馏水，加热熔化后置温箱内保温保湿，备用。
以上培养基pH5.2~6.0。
2．置床发芽
将配制好的培养基，乘未凝结时均匀地在载玻片上涂一薄层，制成发芽床，置室温（27~29℃）下5min后，用毛笔蘸取刚开花的花粉，轻轻地将花粉弹落在床上，密度要稀而均匀，使花粉发芽力保持正常均一，也便于观察统计。
3．镜检观察
花粉置发芽床后，把载玻片放入铺有湿润滤纸的培养皿中，加盖。
水稻在27~29℃下保温保湿5min；小麦于22~26℃下1~2h；然后镜检观察。
凡花粉管伸长超过花粉粒直径的即为发芽的花粉。
统计花粉发芽率填写表格9-2。
（四）花粉萌发观察
花粉萌发率是衡量花粉生活力状况的主要标志，同时花粉管长度亦在一定程度上反
映花粉的生活力状况。
一般根据花粉在柱头上的萌发率判断其生活力。
1．棉蓝染色法取授粉后一定时间（水稻授粉后10~3 min、小麦授粉后2~4h）的整个雌蕊，放在载玻片上，滴几滴棉蓝溶液（按乳酸：苯酚：甘油：蒸馏水：棉蓝为25：25：25：25：0.8配制），盖上盖玻片。
在盖玻片上一侧滴入40%甘油，在另一侧用滤纸将染料吸去。
如此重复进行，直至盖玻片下部为甘油所浸透，然后置显微镜下观察，花粉管为蓝色，而柱头组织无色或淡蓝色。
注意染色时间不宜过长。
.
2．荧光显微镜观察
⑴固定取水稻开花授粉后10~15min、小麦2~4h的整个雌蕊，用卡诺固定液固定，2h后移入70%酒精中保存，备用。
⑵软化制片前，水稻、小麦的材料用8 mol/L NaOH软化10min（煮沸）。
然后水洗去碱。
⑶镜检将染色的材料置于载玻片上，盖上盖玻片，压片后置荧光显微镜下观察。
以BG12为激发光源(蓝紫光)和0515为激光滤片。
在此光源下，花粉粒呈暗红色，花粉管呈淡黄色荧光，组织背景黑色。
五、实验作业
1．测定花粉生活力的意义有哪些?
2．观察荧光显微制片，比较不同作物花粉管伸长情况。
3．用不同的方法测定花粉生活力，填写表9-2，并对测定结果做出分析比较。
表9-2。