花粉生活力萌发试验
花粉活力测定的3种办法
精心整理实验16?花粉活力的测定在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。
掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。
一、花粉萌发测定法【原理】水放???????1.用。
2.20℃条???????1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
???2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。
3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。
二、碘-碘化钾染色测定法多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。
发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。
因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。
【器材与用具】???显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
???【试剂】-KI300ml。
???I2～3张片??基四氮唑）还原成红色的TTF（三苯基甲??）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC 的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力。
【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
【试剂】0.5%TTC溶液：称取0.5gTTC放入烧杯中，加入少许95%酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100ml。
溶液避光保存，若发红时，则不能再用。
采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中，10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。
观察2~3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
实验一 花粉生活力的测定
2 染色观察法 （1）碘-碘化钾染色法 先称取0.3g碘和1.3g碘化钾溶于100mL的蒸馏水 中，即成碘-碘化钾溶液。取少量花粉振播到用棉 球擦净的普通载玻片上，然后加水一滴，使花粉 散开，再加一滴碘-碘化钾溶液，盖上盖玻片，置 于显微镜下观察不同的三个视野，凡花粉粒被染 成蓝色的表示具有生活力，呈黄褐色为缺少生活 力的花粉（淀粉遇碘变蓝是淀粉的特性）。 （2）氯化三苯基四氮唑（TTC）法 凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有 氧化还原作用，而无生活力的花粉则无此反应， 因此当TTC渗入有生活力的花粉时，其脱氢酶在 催化去氢过程中与TTC结合，使无色的TTC变成 TTF而成红色。
通常花粉的形态、花粉中酶的活性以及积 累淀粉（淀粉质花粉）的多少与花粉生活 力密切相关，因此可以利用花粉的形态观 察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀 扮的含量以及在人工培养基上花粉管萌发 的情况作为确定花粉生活力高低的标准。
【实验材料、主要仪器及试剂】 1 实验材料 各种园林植物的花粉。如百合、牡丹、凤仙花、 柳树、菊花、月季、凤仙花、紫茉莉等植物的花 粉。 2 主要仪器 载玻片、凹玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、棉球、 显微镜、恒温温箱、瓷盘、镊子、培养皿、玻璃 棒、玻璃铅笔、凡士林、标签、冰箱。 3主要试剂 碘-碘化钾、氯化三苯基四氮唑、 Na2HPO4· 2H2O、KH2PO4、蔗糖或葡萄糖溶液、 H3BO3，Ca（NO3）2，MgSO掌握用形态法、染色法、发芽 法测定花粉生活力的具体技术和方法。 2 观察花粉在人工配制的培养基上的萌 发情况，认识花粉萌发形成花粉管的 外形和伸长过程，为理解植物的生殖 过程奠定基础。
【实验原理】 花粉的生活力因植物种类不同而差异很大。在自 然条件下，大多数植物的花粉从花药散出后只能 存活几小时，几天或几个星期。一般木本植物花 粉的寿命比草本植物的长，如在干燥、凉爽的条 件下，柑桔花粉能存活40～50天，椴树45天，苹 果10～70天，樱桃30～100天，麻栎一年。而在 草本植物中，如棉属花粉采下后24小时存活只有 65％，超过24小时很少存活；多数禾本科植物的 存活时间不超过一天，如玉米1～2天，水稻花粉 在田间条件下经3分钟就有50％丧失生活力，5分 钟后几乎全部死亡，是寿命最短的例子。花粉粒 的类型和生活力也表现了相关性，通常三胞花粉 的寿命较二胞花粉短，如水稻等禾本科植物为三 胞花粉，寿命都是比较短的。
花粉的体外萌发实验2
三、花粉的体外萌发实验一、实验目的：1.学习花粉粒的培养方法2.探究不同植物在不同培养基上花粉萌发率3.了解花粉萌发的影响因素及不同植物花粉的活力4．学习单玻片悬滴培养法二、实验原理：正常的成熟花粉粒具有较强的活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直接观察计算其萌发率硼能够促进花粉粒的萌发和花粉管的伸长，蔗糖提供萌发时所需营养三、材料与用品1.实验材料：不同植物的花粉2.实验用品：蔗糖，0.01%硼酸，1%碘-碘化钾溶液，蒸馏水，恒温培养箱，大培养皿，棉球，盖玻片若干，凹载玻片若干，凹载玻片支架四、实验步骤：1.前期准备：2%蔗糖：取2g蔗糖，加水溶解，移至100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
5%蔗糖：取5g蔗糖，加水溶解，移至100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
10%蔗糖：取10g蔗糖，加水溶解，移至100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
15%蔗糖：取15g蔗糖，加水溶解，移至100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
20%蔗糖：取20g蔗糖，加水溶解，移至100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
25%蔗糖：取25g蔗糖，加水溶解，移至100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
0.01%硼酸：根据实验室具体情况，进行稀释2.培养液：取培养液a=蒸馏水、b=0.01%硼酸、c=2%蔗糖+0.01%硼酸、d=5%蔗糖+0.01%硼酸、e=10%蔗糖+0.01%硼酸、f=15%蔗糖+0.01%硼酸、g=20%蔗糖+0.01%硼酸、h=25%蔗糖+0.01%硼酸,各1滴3.单玻片悬滴培养法：将培养液滴于盖玻片上并铺展开，将花粉粒均匀散在培养液上，每种培养液上的花粉量应保持大致相同，将盖玻片翻转放于凹载玻片上，将载玻片放在支架上，周围放几个浸透清水的湿棉球，加盖密封，至于恒温培养箱中，在25℃条件下培养1~2h（视具体情况而定）4.镜检和统计：取出盖玻片，在每处培养液上加1滴1%碘-碘化钾溶液，扣置于载玻片上，显微镜观察。
花粉生活力鉴定.pptx
六、计算
花粉生活力 （%）= 有活力的花粉数量/花粉总数 100%
➢ 计算结果取均值，即为样品花粉的活力值。
判断该批花粉的使用价值
一、准备
花粉
化学试剂
生化培养箱
生物显微镜
二、配制培养基
• 固体培养基：蔗糖、硼酸、琼脂、蒸馏水
三、花粉播种
将培养基点在载玻片 凹面处
播种花粉
（分散均匀-多做几次）
难点
置于 培养皿
四、培养
• 设置培养温度：20~25℃
五、镜检与计数
重点
➢ 达到培养时间时，在显微镜下观察花粉萌发情况。 ➢ 选有代表性、便于统计的5个视野，分别计数。
探秘花粉
——花粉生活力鉴定
∆ 导入：为什么进行花粉活力鉴定？
➢ 花粉——有性繁殖的基础 ➢ 能否孕育生命？
活力
鉴定方法 形态 染色
萌发试验
人工授粉
花粉萌发试验——原理
➢ 有活力的花粉在适宜的培养条件下，能萌发出花 粉管。
花粉萌发试验——步骤
准备材料配制 培养基难点播种计算
重点
镜检 计数
培养
花粉萌发试验方法
花粉萌发试验方法1.花粉萌发率和花粉管长度的测定：花粉培养采用固体培养基。
培养基组分为：1%琼脂、10%蔗糖、0.01%硼酸、0.03%硝酸钙，pH为6．5。
将花粉播种到培养基上后，在25℃、100％空气湿度、避光条件下培养6 h后，在显微镜下观察花粉的萌发和生长情况。
100ml：1 g琼脂，10 g蔗糖，0.01g硼酸，0.03g硝酸钙。
2.培养基的制备：在烧杯中加入100 mL蒸馏水，再加入1％琼脂，在酒精灯上加热，使之完全熔解，然后加入15％蔗糖，制成15％的糖液。
本实验加入了100 mg／L硼酸，以促进花粉的萌发。
2.测定花粉萌发率的培养基按蔗糖15％、硼酸15mg/L、琼脂0.5％制备，经高压灭菌后置冰箱内保存，使用时加热熔化为液体培养基待用。
花粉培养与萌发率测定时，用无菌滴管吸两滴液体培养基于载玻片的两处，用毛笔蘸花粉撒播于培养基上，将载玻片放人垫有湿滤纸的培养皿中，于室温下培养和镜检。
花粉播种后4小时镜检萌发情况，在10×10倍视野下计取3—5个视野的花粉萌发数和花粉总数，计算花粉萌发百分率[3‘5】。
以花粉管长度大于花粉粒直径的1／2为花粉萌发的标准，花粉数以3—5个视野的花粉粒总数超过100个为宜[3。
7】。
3.参照程中平等的方法，采用含10％蔗糖和0．8％琼脂的培养基。
注意：在熬制时要用玻璃棒不断搅拌，使其融化均匀，还可加入微量柱头渗出液、维生素等以形成花粉粒发芽的最适环境条件。
然后集中放在一个大的瓷盘中，用纱布覆盖后加盖，放于25℃的温箱内培养。
实验表明：花粉在播8 h后，发芽数不再有明硅增加。
在播后12 h在低倍显微镜下检查发芽情况，直至花粉粒发芽数不再增加为止，记载花粉发芽数，以明确不同仡粉的发芽速度和发芽进程。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉是植物生殖的重要组成部分，其生活力的测定对于植物繁殖和种子生产具有重要意义。
本文将介绍几种常用的花粉生活力测定方法，希望能够对相关领域的研究者和生产者有所帮助。
首先，最常见的花粉生活力测定方法是离体培养法。
这种方法首先需要收集新鲜的花药，然后在适当的培养基上进行培养，观察花粉的萌发情况来判断其生活力。
离体培养法的优点是操作简单，结果可靠，因此被广泛应用于植物育种和种子生产中。
其次，荧光显微镜法也是一种常用的花粉生活力测定方法。
这种方法利用荧光显微镜观察花粉颗粒的形态和结构，通过判断其内部结构的完整性来评估花粉的生活力。
荧光显微镜法对花粉的观察更加直观，能够提供更多的信息，但需要专业的设备和操作技能。
另外，还有一种叫做染色法的花粉生活力测定方法。
这种方法通过在花粉颗粒上涂抹特定的染料，然后观察染色情况来判断花粉的生活力。
染色法简单易行，可以快速得到结果，但对染料的选择和浓度有一定要求。
除了上述方法，还有一些新兴的花粉生活力测定方法，比如电子显微镜法、流式细胞仪法等。
这些方法在技术上更加先进，能够提供更为精细的数据，但也需要更高的成本和专业的操作技能。
综上所述，花粉生活力的测定对于植物育种和种子生产具有重要意义，而不同的方法各有优劣。
在选择具体的测定方法时，需要根据实际情况和研究目的进行综合考虑，以便选择最适合的方法。
希望本文介绍的内容能够对相关领域的研究者和生产者有所启发，推动相关领域的科研工作和生产实践取得更好的成果。
实验：园艺植物花粉生活力测定
天竺葵柱头上的花粉粒
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
蒂氏荚蒾花粉（灰色) 其中一个已开始萌发
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
勿忘草的花粉 最小的花粉粒之一，直径只有0.005毫米
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
花锦葵属植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
桦树的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
柳树花粉粒
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
染色者为发育不良、生活力弱的花粉。观察3~4个视野，
五、方法步骤：
（三）花粉生活力试验
3.取另一载玻片，加少量同种待测花粉，然后在花
粉上滴试剂Ⅰ和试剂Ⅱ各一滴，仔细搅匀，盖上盖
玻片，用镊子轻轻压实。经3～4分钟后，放在显微
镜下检查。
有生活力的花粉呈红色或玫瑰色，无生活力的 花粉为黄色或无色，连续观察3～4个视野，分别记 录有生活力及无生活力的花粉数。
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
凤梨科植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉生活力是指花粉颗粒的活力和生长能力，是衡量植物繁殖成功的重要指标。
花粉生活力测定方法是一种用来评估花粉质量和活力的技术手段，对于植物繁殖和种子生产具有重要意义。
传统的花粉生活力测定方法主要包括花粉染色观察法、花粉萌发率测定法和花
粉活力染色法。
花粉染色观察法是将花粉染色后在显微镜下观察其形态和数量，从而评估花粉的活力和质量。
花粉萌发率测定法则是将花粉培养在适宜的培养基上，观察其萌发情况以评估花粉的活力。
花粉活力染色法则是利用染色技术来观察花粉内部的活力指标，如线粒体和细胞核的活跃程度。
随着科学技术的发展，现代的花粉生活力测定方法也在不断完善和创新。
比如，利用生物技术手段对花粉进行基因测序和分析，可以更准确地评估花粉的生活力和遗传信息。
同时，利用先进的显微镜和成像技术，可以对花粉的微观结构和形态进行更精细的观察和分析。
花粉生活力测定方法的发展不仅有助于科学家和植物育种者更好地了解植物的
繁殖机制和生长规律，也为农业生产和生态保护提供了重要的技术支持。
通过准确评估花粉的生活力，可以选择出高质量的花粉进行人工授粉或者种子生产，从而提高植物的繁殖成功率和产量。
此外，对花粉生活力的准确测定也有助于保护植物遗传资源，促进植物多样性的保护和利用。
总之，花粉生活力测定方法是一项重要的植物科学技术，它为我们深入了解植
物繁殖机制和提高农业生产效率提供了重要的技术手段和支持。
随着科学技术的不断进步，相信花粉生活力测定方法将会在未来发挥更加重要的作用。
花粉生活力测定(终)
2 TTC法：
TTC即2、3、5-三苯基四唑氯化物。主要原理在于检验花 粉呼吸过程中脱氢酶的活性。2、3、5-氯化三苯基四氮唑 (TTC)的氧化状是无色的，被氢还原时成红色的TTF。
有活力
（1）取少量花粉放在载玻片上，并在花粉上滴上1~2滴配制液， 用玻璃棒混合盖上盖玻片。 （2）将载玻片置于恒温箱中（35~40℃）约15~20分钟。 （3）在显微镜下观察：凡具有生活力的花粉呈红色，部分丧失生 活力的呈淡红色，无色的是死的和不育的花粉粒。 （4）观察和测定结果：每片观察3个视野，并统计具有生活力的 花粉的百分率。
➢花粉发芽率=发芽花粉总数/花粉总数*100
★ 优点：能够统计出百分率，准确度高 ★ 缺点：操作相对复杂，而且花粉发芽条件与实际不完全相 符易受培养基配方的影响导致结果的偏差。
【注意事项】
1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼 酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速 度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素 对花粉活力的影响。
H2O2 + 酚 过氧化氢酶 醌 +H2O
（无色） （红色、玫瑰红色）
将适量花粉置于载玻片上
先滴1滴甲液，再滴1滴乙液
充分反应
显微镜下镜检计数，红色的为有活力的花粉
★优点：染色法用时短，见效快 ★优点：颜色判断易受个人因素影响，导致结果有较大差
别。
【注意事项】
滴加甲液和乙液后，会 产生大量的气泡，待 气泡基本消失后方可 观察。
花粉生活力的高低直接影响植物授粉、受精乃至坐果。
三、实验材料与用具
1、材料: 正在开花的植株花粉 2、器具:
盖玻片 载玻片 培养皿 滴管 镊子 解剖针 吸水纸 水浴锅 恒温箱 天平 烧杯 玻棒 电炉 普通显微镜
花粉活力测定的3种方法
实验16?花粉活力的测定在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。
掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。
一、花粉萌发测定法【原理】90ml水放???????1.用。
2.20℃条???????1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
???2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。
3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。
二、碘-碘化钾染色测定法多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。
发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。
因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。
【器材与用具】???显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
???【试剂】???I2-KI300ml。
2～3张片??基四氮唑）还原成红色的TTF（三苯基甲??）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC 的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力。
【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
【试剂】0.5%TTC溶液：称取0.5gTTC放入烧杯中，加入少许95%酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100ml。
溶液避光保存，若发红时，则不能再用。
采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中，10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。
观察2~3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉生活力是指花粉颗粒在一定条件下能够完成受精和发育的能力。
花粉生活力的测定对于植物的研究和育种具有重要意义。
下面将介绍几种常用的花粉生活力测定方法。
首先，最常用的方法是离体花粉萌发法。
这种方法是将收集到的花粉在一定的培养基上进行培养，观察花粉颗粒是否萌发。
通过观察花粉管的生长情况和数量，可以初步判断花粉的生活力。
这种方法简单易行，可以在实验室条件下进行。
其次，还有花粉染色法。
这种方法是将花粉颗粒染色后观察其形态和结构，从而判断花粉的生活力。
通过观察染色后的花粉颗粒的形态、颜色和内部结构，可以初步判断花粉的生活力。
这种方法需要借助显微镜进行观察，对实验条件要求较高。
另外，还有花粉活力染色法。
这种方法是利用活性染料对花粉颗粒进行染色，观察染色后的花粉颗粒的颜色和形态，从而判断其生活力。
这种方法对于花粉的活力有较高的敏感性，可以较准确地判断花粉的生活力。
最后，还有花粉酶活性法。
这种方法是通过检测花粉中的酶活性来判断其生活力。
通过测定花粉中的酶活性，可以间接地反映出花粉的生活力。
这种方法需要借助生化实验室进行，对实验条件和仪器设备要求较高。
综上所述，花粉生活力的测定方法有多种，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，可以根据具体的研究目的和实验条件选择合适的方法进行花粉生活力的测定。
通过准确测定花粉的生活力，可以为植物的研究和育种提供重要的参考依据。
花粉生活力检测
植物花粉保存与花粉生活力的测定一、实验目的了解花粉生活力测定的一般方法，并掌握培养法测花粉生活力。
二、实验原理不同的植物成熟花粉的生命力长短不一，在自然状态下，成熟花粉有些存活仅数小时，有的课长达1个多月。
通过在干燥、低温、密封等的条件下保存，花粉的呼吸作用被抑制，生活力得以延长。
进行杂交人工授粉前，常对父母本花粉尤其是经过保存的花粉进行生活力测定。
其方法有：形态鉴定、TTC染色法鉴定、花芽萌芽鉴定等。
（1）形态鉴定除饱满、圆形的正常外，其他都不正常。
（2）TTC染色法鉴定脱氢辅酶存在于活的细胞内，当TTC渗透进入细胞内作为受体被脱氢辅酶上的氢还原，便由无色的TTC变为红色的三苯基甲（TTE)。
当细胞死亡后，NADH会迅速被降解，不会发生相应的颜色反应，故TTC染色法可显示细胞是否存活。
（3）花芽萌发鉴定将花粉置于合适的培养基上进行培养，花粉即可萌发出花粉管，发芽率可作为花粉生活力的检测指标三、实验材料、药品和器具1、实验材料兰花毛豌豆和葛藤正在开放的花2、药品和器具显微镜、凹式载玻片、培养皿、盖玻片、镊子、解剖针、蔗糖硼酸悬浮培养基四、实验内容1、花粉的保存（1）短期保存：低于4°C，冰壶中保存长期保存：（2）长期保存：干燥器中干燥24h，自由水含量低于1%，用石蜡封口，低于1°C的冰箱中保存2、花粉生活力的测定（花粉萌发鉴定法或称培养法）（1）用滴管滴1小滴蔗糖硼酸悬浮培养基于盖玻片上，注意不要滴到边缘，以免与载玻片凹面边缘接触。
(2)取兰花毛豌豆和葛藤正在开放的花的雄蕊，将雄蕊在培养基里反复涂抹几次，让花粉散落在培养基表面。
(3)迅速将盖玻片翻转，放置于凹式载玻片上，让培养基悬浮在凹式载玻片的凹面处，注意不要让培养基接触凹面边缘。
(4)每一个植物做两个重复，放置在显微镜下观察花粉形态。
20min后，观察并花粉发芽状况。
五、实验结果将实验结果填入花粉生活力测定实验记录表处理重复视野Ⅰ视野Ⅱ合计花粉粒数发芽粒数发芽率/%花粉粒数发芽粒数发芽率/%花粉粒数发芽粒数发芽率/%兰花毛豌豆重复Ⅰ70 65 92.8 65 60 92.3 135 125 92.6 重复Ⅱ80 76 95.0 74 70 94.6 154 146 94.8 合计150 141 94.0 139 130 93.5 289 271 93.8葛藤重复Ⅰ40 35 87.5 35 30 85.7 75 65 86.7 重复Ⅱ42 36 85.7 38 31 81.6 80 67 83.8合计82 71 86.6 73 61 83.6 155 137 88.4六、注意事项1、用滴管向盖玻片滴培养基时，要尽量滴在盖玻片中央，要避免液体培养基接触载玻片凹面边缘部分。
实验三花粉的贮藏和生活力测定
实验三花粉的贮藏和生活力测定一、目的和要求在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生活力。
花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。
从生产上来看，在选择相互授粉的品种时，也应考虑到品种的花粉发芽能力，凡是花粉发育不全的品种，其花粉的发芽率都很低。
因此不适宜做授粉品种。
本实验的主要目的是掌握花粉贮藏和花粉生活力测定的方法。
二、花粉及用具材料：桃或苹果树的花粉。
用具：显微镜、天平、盖玻片、凹式载玻片、培养皿、干燥器、试管、滴瓶、蒸馏水、凡士林、蔗糖、氯化钙、琼脂、联苯胺、α-奈酚、碳酸钠、过氧化氢等。
三、方法（一）花粉贮藏从发育良好的植株上采下将开的花朵、取出花药放在纸上或培养皿中，放于干燥的室内，令其开裂，花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶或指形管中，口上塞以棉花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。
再把花粉瓶放于干燥器内，使花粉在空气相对湿度较低的条件下（一般0～40%）保存；为了减少呼吸作用，可以放在低温（0～4℃）黑暗的地方贮藏。
（二）花粉生活力试验1、花粉发芽法人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱，此法的缺点是花粉发芽条件与实际不完全相符，所得的结果与实际有一定的差异，但操作方便，能测定出相对发芽率来。
（1）培养基的制作与接种一般采用5～20%蔗糖或葡萄糖加1～2%琼脂，溶于蒸馏水中。
加热煮沸即可，将已配制好的培养基保持在40℃温度即不凝固，用玻璃棒点一点培养基敷在载玻片的凹坑内，然后用接种针或解剖针沾以少量花粉。
轻轻振动，使花粉均匀地撒在培养基上，将载玻片放在垫有湿润棉花培养皿内或倒扣在培养皿上，并贴上标签写明处理、种类、播种日期，将培养皿放于20℃的恒温箱中培养。
（2）观察记数在显微镜下隔一定时间检查一次（花粉发芽快的经过几个小时即可观察到已经发芽，慢的需24小时以上）若发现花粉已发芽时，便按一定方向，就同一视野中用记数器记录花粉粒总数和发芽数，观察记录3～5个显微镜视野的数字，求其平均数，即得出花粉发芽百分率。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉是植物繁殖的重要媒介，其生活力的测定对于植物繁殖和生长具有重要意义。
近年来，随着科学技术的不断发展，花粉生活力测定方法也得到了不断的改进和完善。
传统的花粉生活力测定方法主要包括离体花粉萌发试验、花粉染色观察、花粉活力染色观察等。
这些方法虽然可以初步判断花粉的生活力，但存在着操作繁琐、结果不稳定、时间周期长等问题，限制了其在实际应用中的发展。
近年来，随着生物技术和显微镜技术的不断进步，新型的花粉生活力测定方法逐渐被引入。
比如，利用荧光显微镜观察花粉萌发情况，结合数字图像处理技术进行分析，可以快速、准确地测定花粉的生活力。
另外，利用生物标记技术对花粉进行标记，然后观察其在植物受精过程中的行为，也可以对花粉的生活力进行评估。
除了显微镜技术和生物标记技术，分子生物学技术在花粉生活力测定中也发挥了重要作用。
通过分析花粉中的基因表达情况、蛋白质组成等，可以更直观地了解花粉的生活力情况，为植物繁殖提供更准确的数据支持。
综上所述，随着科学技术的不断发展，花粉生活力测定方法也在不断完善和创新。
新型的测定方法不仅提高了测定的准确性和稳定性，同时也为植物繁殖和生长研究提供了更多的可能性。
相信随着科学技术的不断进步，花粉生活力测定方法将会更加完善，为植物繁殖和生长研究带来更多的突破和进展。
花粉活力测定实验报告
花粉活力测定实验报告
实验目的：
本实验旨在测定花粉活力，探究花粉活力与种子萌发率的相关性，并为进一步了解植物繁殖提供基础数据。
实验材料：
需要用到的材料有：钟形筛、山梨酸钠、花粉液、蒸馏水、苏木素、石蜡、显微镜、玻片、载玻片等。
实验步骤：
1.取50个种子，分别放置在两个装有10mL山梨酸钠液的钟形筛中，浸泡12小时，使其吸满山梨酸钠液，为后续实验做准备。
2.将钟形筛里的山梨酸钠液倒出，并加入2mL的花粉液，然后用提供的细铁丝轻轻将花粉液和种子混合均匀，将盖在钟形筛口上的细网状皮纸去掉，取下筛分别晾干。
3.取约4g石蜡，烧入沸水，制成石蜡板。
4.取刚才的花粉和种子混合物，用丙酮水溶液进行固定处理，将处理后待测物制成薄层切片，厚度约为5µm，并在普通显微镜下以40倍目镜下进行测定。
5.在测定器上，取一端已蒸发完的种子粘贴于载玻上，于另一角上滴几滴蒸馏水，将另一玻片压上，以便能观察到花粉在萌发过程中对种子萌发的影响。
实验结果：
通过实验，我们发现在花粉液与山梨酸钠液比例为1:10时，花粉萌发的能力较高。
实验结果表明，萌发率与花粉活力呈正比关系。
同时，我们还观察到花粉对萌发过程产生了显著的影响，使种子萌发率提高了约20%。
结论：
通过本次实验，我们深入了解了花粉活力测定的方法和实验步骤，比较水平地掌握了实验操作技术，得到了可靠的实验结果。
我们还发现花粉具有显著的萌发促进作用，为深入探究植物繁殖乃至生物学领域提供了重要参考数据，对于加深我们对植物学的认识也具有一定意义。
园艺植物育种学实验二花粉发芽试验和生活力测定
二、花粉发芽试验和生活力测定（一）实验目的花粉质量的好坏，关系到杂交的成功与否，通过实验操作，掌握花粉生活力测定的技术。
（二）实验要求根据以下实验操作，完成一份花粉生活力结果测定的实验报告1.准备材料与用具（1）材料：本地常见园艺植物的花粉，蔗糖、琼脂、蒸馏水、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化三苯基四氮唑（T.T.C）、氯化钙、凡士林、纸袋、大头针、纸牌。
（2）用具：分析天平、托盘天平、载玻片、盖玻片、烧杯、镊子、电炉、石棉网、玻棒、试剂瓶（含棕色瓶）、标签、量筒、冰箱、干燥器、玻璃杯（直径1cm、高0.5cm）。
凹玻片、指形管。
2.花粉的采集与贮藏（1）花粉的采集为了保证父本花粉的纯洁性，在授粉前1-2天，对绽蕾的花朵事先套袋隔离，当花粉成熟撒出时即落在纸袋中，也可将花枝或花朵剪下，在室内阴干或放入恒温箱内，保持10℃左右，待花粉散出后，装入指形管中备用。
（2）花粉的贮藏有性杂交工作中，常用杂交亲本组合的花期不遇或亲本植株相距较远或异地，必须事先收集父本花粉，将收集的花粉阴干，以不粘为度，除去杂质，分别装入指形管或小瓶内（以容器的1/5为宜），用双层纱布扎封瓶口，并在容器贴上标签，注明品种采集地点和时间，然后将容器放于（盛有无水氯化钙等吸水剂）干燥器内，置阴凉处或0-2℃冰箱内贮存，可以较长时间地保持生活力。
3.花粉生活力测定（1）配药A．磷酸盐缓冲液：在100毫升的蒸馏水中，溶解0.832克的磷酸氢二钠和0.273克的磷酸二氢钾，pH值为7.17B．T.T.C溶液：称取0.02-0.05克的T.T.C溶液在10毫升的磷酸盐缓冲液中，溶液配好后，装入棕色滴瓶内置于暗处备用。
（2）操作步骤A．取少量花粉放在载玻片上，并在花粉上滴上1-2滴T.T.C溶液，用镊子尖端搅拌液滴使花粉均匀散开，盖上盖玻片B.将此载玻片放入35-40℃的恒温箱中加热，时间大约15-20分钟。
C．在显微镜下（10×10）观察：凡具有生活力的花粉粒呈红色，部分失去生活力的呈淡红色，不染色的为死的和不育的花粉粒。
花粉活力测定实验报告
一、实验目的1. 了解花粉活力测定的原理和方法。
2. 掌握花粉采集、处理和观察的基本技能。
3. 通过实验，了解不同条件下花粉活力的变化规律。
二、实验原理花粉活力是指花粉在正常条件下萌发的能力，是植物杂交、育种和生产的重要指标。
花粉活力测定方法主要有染色法和萌发法。
本实验采用萌发法测定花粉活力。
三、实验材料1. 植物材料：番茄、小麦、玉米等。
2. 试剂：TTC染色液、盐酸、蒸馏水等。
3. 仪器：显微镜、培养皿、移液器、酒精灯等。
四、实验步骤1. 花粉采集在植物开花期，选择花药饱满、颜色鲜亮的植株，用镊子轻轻取出花药，放入培养皿中。
2. 花粉处理将花药置于酒精灯火焰附近，用镊子轻轻敲打花药，使花粉散落。
用移液器将花粉收集到盛有盐酸的试管中，置于酒精灯上加热，使花粉与盐酸混合均匀。
3. 花粉染色将处理好的花粉溶液滴加到载玻片上，用移液器滴加TTC染色液，使花粉染色。
将载玻片置于显微镜下观察。
4. 花粉萌发将染色后的花粉载玻片置于适宜温度和湿度的培养箱中，观察花粉萌发情况。
以花粉管长度超过花粉粒直径为标准，记录萌发花粉的数量。
5. 数据处理计算萌发花粉的百分比，分析不同条件下花粉活力的变化规律。
五、实验结果与分析1. 不同植物花粉活力比较实验结果表明，不同植物花粉活力存在差异。
例如，番茄花粉活力较高，小麦花粉活力较低。
2. 不同处理方法对花粉活力的影响实验结果表明，加热处理、盐酸处理等对花粉活力有一定影响。
加热处理可以使花粉活力降低，盐酸处理可以使花粉活力提高。
3. 不同条件下花粉活力的变化规律实验结果表明，温度、湿度等因素对花粉活力有显著影响。
在一定范围内，温度升高，花粉活力降低；湿度增加，花粉活力提高。
六、实验结论1. 本实验通过萌发法测定了不同植物花粉的活力，了解了不同条件下花粉活力的变化规律。
2. 实验结果表明，不同植物花粉活力存在差异，加热处理、盐酸处理等对花粉活力有显著影响。
3. 温度、湿度等因素对花粉活力有显著影响，在一定范围内，温度升高，花粉活力降低；湿度增加，花粉活力提高。
实验一 花粉生活力的测定
【思考题】 1 用染色法计算花粉生活力（3个视野）。用 发芽法计算花粉生活力（3个视野）。 2 同一品种花粉用不同方法测定时其生活力 高低的结果分析。
通常花粉的形态、花粉中酶的活性以及积 累淀粉（淀粉质花粉）的多少与花粉生活 力密切相关，因此可以利用花粉的形态观 察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀 扮的含量以及在人工培养基上花粉管萌发 的情况作为确定花粉生活力高低的标准。
【实验材料、主要仪器及试剂】 1 实验材料 各种园林植物的花粉。如百合、牡丹、凤仙花、 柳树、菊花、月季、凤仙花、紫茉莉等植物的花 粉。 2 主要仪器 载玻片、凹玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、棉球、 显微镜、恒温温箱、瓷盘、镊子、培养皿、玻璃 棒、玻璃铅笔、凡士林、标签、冰箱。 3主要试剂 碘-碘化钾、氯化三苯基四氮唑、 Na2HPO4· 2H2O、KH2PO4、蔗糖或葡萄糖溶液、 H3BO3，Ca（NO3）2，MgSO4，KNO3。
（2）培养基发芽法 a．培养基的制备：在250 mL的烧杯中加 入90 mL蒸馏水，再加入1g的琼脂，在酒精 灯上加热，使之完全熔解，然后加入10g蔗 糖，制成10％的糖液（如有可能，可配置 同含糖量的培养基，进行比较试验）。 注意用玻璃棒不断搅拌，使其融化均匀， 有条件时还可加入微量柱头渗出液、维生 素等以形成花粉粒发芽的最适环境条件。
2 染色观察法 （1）碘-碘化钾染色法 先称取0.3g碘和1.3g碘化钾溶于100mL的蒸馏水 中，即成碘-碘化钾溶液。取少量花粉振播到用棉 球擦净的普通载玻片上，然后加水一滴，使花粉 散开，再加一滴碘-碘化钾溶液，盖上盖玻片，置 于显微镜下观察不同的三个视野，凡花粉粒被染 成蓝色的表示具有生活力，呈黄褐色为缺少生活 力的花粉（淀粉遇碘变蓝是淀粉的特性）。 （2）氯化三苯基四氮唑（TTC）法 凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有 氧化还原作用，而无生活力的花粉则无此反应， 因此当TTC渗入有生活力的花粉时，其脱氢酶在 催化去氢过程中与TTC结合，使无色的TTC变成 TTF而成红色。
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实验二花粉生活力的测定―――悬滴培养法
一、实验目的：掌握了解花粉生活力测定的意义和方法。
二、实验材料：二月兰花粉
三、实验仪器及药品：凹玻片、盖玻片、解剖针、镊子、纱布、标签、铅笔、显微镜、恒温
箱、蔗糖、蒸馏水、硼酸、凡士林。
四、实验原理：花粉是植物自然授粉和人工杂交的主要物质基础，花粉生活力的大小是保证
杂交成功的关键。
在有性杂交育种中，常因父母本花期的不同，作为父本的花粉必须经过贮藏直到母本植株开花时再用于授粉（花粉在低温0－2℃、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低。
花粉贮藏的原理就是创造代谢强度低的环境，以延长花粉的寿命）；或者双亲不在同一个地方，必须由外地邮寄花粉供应。
经过贮藏或外地邮寄的花粉是否已经丧失生活力，必须经过测定才能确定。
鉴定花粉生活力的方法主要有四种：一是将待测花粉直接授粉，然后统计结实率和结子数。
此法的缺点是需要的时间较长，且实验的结果易受气候条件的影响。
二是将待测花粉授到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微镜下检查花粉的萌发情况。
根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。
三是在培养基上进行花粉的人工萌发，检查待测花粉萌发率的高低。
后两种方法都是根据花粉的萌发率来反映生活力的高低，有一定的参考价值。
但是萌发的不一定都能受精，特别是人工萌发还受许多条件的限制，所以也只有相对的可靠性。
四是用染色方法来鉴定花粉的生活力。
其原理是在活的花粉内有过氧化氢酶的存在，它可以促进过氧化物（如H2O2）放氧分解。
这些刚被放出的活性氧很容易使还原剂氧化，常用无色联苯胺、α－萘酚等还原剂做指示剂，这些还原剂被氧化后表现红色或玫瑰红色。
如果花粉是活的，那么会很快被染成红色或玫瑰红色，如果花粉是死的，则这一反应迟迟不能进行，花粉保持原色。
此法优点是比较快捷，但是比较间接。
本试验采用悬滴培养法鉴定花粉生活力。
五、实验步骤：
1.配培养液：用蒸馏水和蔗糖分别配成5％、10%、15％的蔗糖溶液，并在各培养液
中加少量硼酸。
2.取盛开的正在散粉的二月兰花朵。
3.播花粉：在凹玻片的凹点滴一滴清水。
在盖玻片中央滴一滴培养液，用镊子轻轻夹
取二月兰的花药，在培养液中央轻轻蘸一下，使花粉均匀的分散在培养液的球面上。
在盖玻片的四角涂抹少量的凡士林，用镊子夹住盖玻片在上提的过程中迅速把它翻
转过来，小心放在凹玻片上，使培养液处在盖玻片和凹点形成的小密室中。
每个凹
玻片分别做蔗糖溶液的三个浓度，并用蒸馏水做对照。
4.培养：做好的凹玻片上贴好标签，注明花粉种类、培养液的浓度以及时间，然后小
心放到铺有湿润滤纸的培养皿中，放到22－24℃的恒温箱中培养5h。
5.观察：从恒温箱中取出凹玻片，在低倍镜下随机观察三个视野，计算花粉的萌发率。
以花粉管长度达到花粉粒径的2倍及以上视为萌发。
六、结果分析
1.分析花粉萌发率高或低的原因。
2.本实验关键性步骤总结及实验中所存在问题的讨论。
七、作业
1.绘制一幅花粉粒萌发形态图。
2.花粉生活力测定在杂交育种中的重要意义？测定花粉生活力的方法有哪些？
一般2核花粉粒较3核花粉粒高，对不适宜环境
（温度、湿度、辐射化学处理）抵抗力强。
原因：1、营养消耗2、代谢旺盛3、外壁薄等
花粉生活力的研究对于农业、林业来说，具有很重要的理论及生产实践意义。
它为植物的育种、培育、栽培，为进行人工授粉和杂交授粉，提供理论依据。
一般来讲，花粉生活力的长短，即决定于植物的遗传性，又受环境因素的影响。
一般情况下，花粉生活力的长短依种而异，大多数植物的花粉只能活几个小时、几天或几个星期。
一般来看：木本植物>草本植物
2胞花粉>3胞花粉
影响花粉生活力的主要环境因素有：温度、湿度及空气。
现在延长花粉生活力的措施主要有：超低温（-192℃的液态空气，-196℃的液态氮）、真空、降低氧分压、快速冷冻干燥等方法贮存。
影响花粉粒生活的因素主要
一般低温（1—50c），低湿（相对湿度20/100--50/100）低氧。
正常情况，液态氮进行超
低温保存，如：水稻100C，85/100的湿度24小时；玉米50C90/100的湿度8—9天。
但禾本科要求高湿。
研究花粉储藏对解决花期不遇问题相当重要。
：(１)植物盛花期采集发育良好的花粉；(２)将花粉干燥至适宜贮藏的含水量，封装在耐低温容器内；(３)经预冷处理或直接置于低温、超低温条件下贮藏；(４)根据需要，随时取出封存花粉的容器进行缓慢或快速升温解冻，使花粉复苏；(５)采用花粉染色法、萌发法、授粉结实法鉴定花粉生活力；(６)具有生活力的花粉用于育种。
实验十七花粉活力的测定
在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。
掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。
一、花粉萌发测定法
【原理】
正常的成熟花粉具有较强的活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直接观察计算其萌发率，以确定其活力。
【器材与用具】
载玻片；显微镜；玻棒；恒温箱；培养皿；滤纸。
【试剂】
培养基(10％蔗糖，10Mg／L硼酸，05％的琼脂)：称10g蔗糖、1Mg硼酸、05g 琼脂与90Ml水放入烧杯中，在100℃水浴中溶化，冷却后加水至100Ml备用。
【方法】
1.将培养基熔化后，用玻棒蘸少许，涂布在载玻片上，放入垫有湿润试纸的培养皿中，保湿备用。
2.采集丝瓜、南瓜或其他葫芦科植物刚开放或将要开放的成熟花朵，将花粉洒落在涂有培养基的载玻片上，然后将载玻片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在25℃左右的恒温箱(或室温20℃条件下)中孵育，5～10Min后在显微镜下检查5个视野，统计其萌发率。
【注意事项】
1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度、离体时间、环境条件等因素对花粉活力的影响。
3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。
二、碘—碘化钾染色测定法
【原理】
多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。
发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。
因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。
【器材与用具】
显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
【试剂】
I2-KI溶液：取2gKI溶于5～10Ml蒸馏水中，加入1g I2，待完全溶解后，再加蒸馏水300Ml。
贮于棕色瓶中备用。
【方法】
采集水稻、小麦或玉米可育和不育植株的成熟花药，取一花药于载玻片上，加1滴蒸馏水，用镊子将花药捣碎，使花粉粒释放，再加1～2滴I2-KI溶液，盖上盖玻片，在显微镜下观察。
凡是被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。
观察2～3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性。
【注意事项】
此法不能准确表示花粉的活力，也不适用于研究某一处理对花粉活力的影响。
因为三核期退化的花粉已有淀粉积累，遇碘呈蓝色反应。
另外，含有淀粉而被杀死的花粉粒遇I2-KI 也呈蓝色。
三、氯化三苯基四氮唑(TTC)法
【原理】
具有活力的花粉呼吸作用较强，其产生的NADH2或NADPH2可将无色的TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)还原成红色的TTＦ（三苯基甲）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力。
【器材与用具】
显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
【试剂】
05％TTC溶液：称05g TTC放入烧杯中，加入少许95％酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100Ml。
溶液避光保存，若发红时，则不能再用。
【方法】
采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1～2滴05％TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中，10～15Min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。
观察2～3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
【思考题】
1.上述每一种方法是否适合于所有植物花粉活力的测定
2.哪一种方法更能准确反映花粉的活力。