中药莲子心中总生物碱的提取及特征图谱研究资料
莲子心中生物碱的提取工艺研究
提取 ， 并 重 复上述 步 骤 。
１ ． ３ 单 因素 实验 和正 交实验
选 取 乙 醇体 积 分 数 、 微 波功 率 、 微波时间、 料 液 比进行 单 因素 实验 ， 在 单 因素 实验 的基础 上 进 行 正 交 实验 设 计 ， 最 后根 据 正 交 实验 结 果 得 出莲 子 心 中 总 生物碱 的最佳提 取 工艺条 件 。
取 提供 理论 和参 考 。
１ 材 料与方法
１ ． １ 材料 、试 剂及 仪器 外购 莲 子心 ， 在５ ６ ． ７ ℃下 烘 干 ， 用 万 能粉碎 机粉
２ 结果 与分析
２ ． １ 乙醇体 积分 数对 提取 率 的影 响
准确 称 取 ２ ． ０ ｇ 莲 子 心粉 末 ， 在微 波 功率 ３ ０ ０ Ｗ、
ｐ Ｈ至 ８ ， 再次 在 ３ ０ ０ ０ ｒ・ ｍ ｉ ｎ 下离 心 １ ０ ｍｉ ｎ ， 得 到 下
胚芽 ， 具 有清 心安 神 ， 交通心肾， 涩精 止血 之功 效 ， 主
要 产于湖南 、 湖北 、 福建 、 江苏、 浙江等地 ， 其 内含有
黄酮 、 生物碱 、 叶绿素、 有 机 酸及 微 量 元 素等 多种 化 学成分， 同时含 有莲 心碱 、 异 莲心 碱 、 甲基莲 心碱 、 荷 叶碱及 莲 心季胺 碱 等多 种生 物碱 。研究 表 明莲 子心
Ｆ Ｗ１ １ ７中草药 粉碎机 ， 低 速离 心机 等 。
１ ． ２ 试 验 方法
由图 １ 可知 ， 随着 乙醇体积分 数的增加 ， 莲子
心生 物 碱 的提 取 率先 增 加 后 减少 ， 乙醇 体 积分 数 为 ６ ５ ％ 时提 取率 最 大 ， 可 能是 由于 莲子 心 中生 物 碱 的
莲子心水提液体外抗氧化活性的研究
莲子心水提液体外抗氧化活性的研究
张敏;郑铁松;陶锦鸿;陈静
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2008(029)008
【摘要】本实验研究了莲子心水提液对氧自由基的清除作用及其对脂质过氧化反应(LPO)的抑制作用.结果表明:莲子心水提液对Fenton体系产生的羟自由基和邻苯三酚自氧化产生的超氧阴离子均有清除作用,半数清除量(IC50)分别为0.218g/ml 和0245g/ml;对小鼠肝、肾匀浆自发性过氧化反应有较好的抑制作用,IC50分别为3.038mg/ml和3.577mg/ml.通过紫外分光光度法测定了莲子心中抗坏血酸含量为1.132mg/g.用NBT法测定了水提取液中SOD总活性为2062.7U/g.
【总页数】4页(P83-86)
【作者】张敏;郑铁松;陶锦鸿;陈静
【作者单位】南京师范大学食品科学与营养系,江苏,南京,210097;南京师范大学食品科学与营养系,江苏,南京,210097;南京师范大学食品科学与营养系,江苏,南
京,210097;南京师范大学食品科学与营养系,江苏,南京,210097
【正文语种】中文
【中图分类】R151.3
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1.甜荞不同器官水提液体外抗氧化活性 [J], 张以忠;李晶;邓琳琼
2.莲子心乙醇提取液体外抗氧化活性的研究 [J], 陈静;张敏;郑铁松;陶锦鸿
3.串叶松香草水提液的体外抗氧化活性研究 [J], 张薇;张惠展;袁勤生
4.莲子心中酚性与非酚性生物碱体外抗氧化活性比较 [J], 杨小青;宋金春;谢顺岚;郝好华
5.串叶松香草水提液的体外抗氧化活性研究 [J], 张薇; 张惠展; 袁勤生
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莲子心化学成分及其提取、药理作用的研究进展
莲子心化学成分及其提取、药理作用的研究进展
赵秀玲;党亚丽
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2018(39)23
【摘要】莲子心(Nelumbinis Plumula)是睡莲科植物莲(Nelumbo nucifera Gaertn.)的成熟种子中的干燥幼叶及胚根,具有清心安神、止咳化痰、降血脂、止血抗炎、抗氧化、抗艾滋病、抗血栓、保护肝肺肾、保护中枢神经系统等功效.莲子心中的化学成分主要为生物碱类,此外还有黄酮类、多糖类和挥发油等成分.本文对莲子心的主要化学成分的提取方法进行了综述,并总结了国内外对莲子心化学成分的结构及药理作用的研究进展,以期为莲子心资源的开发利用提供参考.
【总页数】8页(P329-336)
【作者】赵秀玲;党亚丽
【作者单位】黄山学院生命与环境科学学院,安徽黄山 245021;宁波大学海洋学院,浙江宁波 315211
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.2
【相关文献】
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3.白及化学成分、药理作用和白及多糖提取工艺的研究进展 [J], 孔伟华;徐建波;崔琦;盛振华;袁强;张春椿;李石清
4.栀子的化学成分、药理作用及提取工艺的研究进展 [J], 周新新;崔悦;朱鹤云;朴光春;冯波
5.栀子的化学成分、药理作用及提取工艺的研究进展 [J], 周新新;崔悦;朱鹤云;朴光春;冯波
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莲子心有效成分及其药理作用研究进展
Ｌｅ 逆转 内皮 素 所 致 ［Ｈ］Ｔ１ 入 量 增 ｉ ｎ能 （ Ｒ参
多 ，阻 止血 管 平 滑 肌 细 胞 由静 止 期 进 入 Ｄ Ａ合 Ｎ 成 期 和有 丝 分裂 期 ，并 能 逆 转 内皮 素 引 起 的 Ｃ—
ｆｓ —ｍ ｃ —ｓ 原 癌 基 因 相 关 抗 原 及 ｍ Ｎ ｏ ，Ｃ ｙ ，Ｃ ｉ ｓ Ｒ Ａ
致 。潘 竞先 等 又从 莲 子心 中分离 得 到 ２个 新 化合 物 ，经 鉴别 分别 为 Ｓ—Ｎ一甲基 乌 药 碱 （ Ｓ—Ｎ—
ｍ ｔ ｉ ｃｃ ｕｉ ）及 ｄ 一杏 黄 罂 粟 碱 （ １ ｅ ｙＩ ｓ ｏｌ ｒ ｅ ｈ ｏ ａ ｎ ｌ ｄ一
表 达 增强 ，Ｐ ３抑癌 基 因 相关 抗 原 及 ｍ Ｎ ５ Ｒ Ａ表 达
性 昧苦寒 ，有 清 心去 热 之 功效 。 本文 就其 有效 成 分及 药理 作 用 研 究 综 述 国 内 学 者 的 主 要 研 究 成
果。
及 慢反 应 内 向 电流 有影 响 ，可浓 度 依赖 性 地 降低 离体 兔 窦 房结 起搏 细 胞慢 反 应跨 膜 电位 ０相 幅 度 （ Ｐ ０和最 大 上 升速 度 （ ｍ ｘ ，延 长 窦 性 心 动 ＡＡ Ｖ ａ） 周 期 （Ｃ ） Ｓ Ｌ ，增 大 离 体 兔 窦 房 结 起 搏 细 胞 及 高
醇 一３ —０一ｌ一Ｄ一葡 萄 糖 甙 等 ７个 化 合 物 。 其 ３
中 ，ｌ ３ 一谷 甾醇 正 辛 烷 酸 酯 及 ｌ一谷 甾醇 棕 榈 酸 ３
酯 系首 次 自该 植物 中分得 。除此 之 外 ，莲子 心 中
还 含有 水溶 性 多 糖 成 分 及 锌 、铜 、铁 、钙 、镁 、 钠 、钾 、镍 、锰 、镉 等微 量 元 素 。 ２ 药理 作用 ２ １ 莲 心碱 的药 理作 用 Ｌ ｊ ． ３ ：莲 心碱 （ ｉ ）有 Ｌｅ ｎ 较 好 的抗心 律 失 常作 用 。可 显著 对 抗乌 头碱 诱 发
2种HPLC检测器测定莲子心中3种酚性生物碱含量的比较
（ ． 京 巾 医药 大 学 药 用 菌 与 中药 生 物 技术 研 究 所 ， 苏 南 京 ２ ０ ２ ； ． 京 中 医药 大 学 药 学 院 ， 苏 南 京 ２ ０ ２ １南 江 １０ ９２ 南 江 １０ ９ ３ 南 京 中医 药 大 学 江 苏省 中药 炮 制 重 点 实 验 室 ， 苏 南 京 ２ ０ ２ ） ． 江 １ ０ ９
摘要 ： 目的 建 立反 相 ＨＰ Ｃ一 Ｌ 荧光 检 测 （ｌｏ ｅｃ ｎ ｅｄ ｔ ｔ ｒＦ ） ， 定 中药 莲 子 心 中莲 心碱 （ｉ ｓｎ ｅ Ｌ ｅ ） 异 莲 ｆ ｒ ｓｅ ｃ ｅｅ ｏ ， Ｄ 法 测 ｕ ｃ １ ｎ ｉｉ ， ｉ 、 ｅ ｎ ｎ 心碱 （ｓ ｌ ｎ ｉｉｅ Ｉ ） 甲基 莲 心碱 （ ｅｅｉｅ Ｎｅ） ３ 酚 性 生 物 碱 的 含 量 ， 与 ＨＰ Ｃ一 ｉ ｉ ｓ ｎ ，ｓ 和 ｏｅ ｎ ｏ ｎ ｆｒ ， ｆ等 种 ｎ 并 Ｌ 紫外 检 测 器 （ ｌ ａ ｉｌ ｉ ｕｔ ｖ ｅ ｖｓ ｒ ｏ ｔ ｉ
Ｃｏ ｐ ｒ ｓ ｎ ｏ ｒ ｅ Ｐｈｅ ｌｃ Ａｌ ｌ ｉ ｓ Ｃｏ ｅ ｎＰｌ ｍ ｕ ａ Ｎｅ ｕ ｂｉ ｙ Ｕｓ ｎｇ Ｔｗｏ Ｈ ＰＬＣ ｔ ｃ ｏ ｓ ｍ ａ ｉ ｏ ｆ Ｔｈ ｅ ｎｏ ｉ ｋａ ｏ ｄ ’ ｎｔ ｎｔ ｉ ｕ ｌ ｌ ｍ ｎｉｂ ｉ Ｄｅ ｅ ｔ ｒ
ＯＢＪ ＥＣＴＩ ＶＥ Ｔ ｏ ｅ ｔ ｂ ｉｈ ａ Ｒ Ｐ— ＰＬＣ ｅ ｈ ｄ ｔ ｔ ｒ ｉ ｈｅ ｃ ｎｔ ｎ ｓ ｏｆｔ ｅ ｓ ａ ｌｓ Ｈ ｍ ｔ ｏ ｏ ｄｅ ｅ ｍ ｎｅｔ ｏ ｅ ｔ ｈｒ ｅｐｈｅ ｏｌ ｌ ａ ｏｄｓ．ｉｎｓ ｎ ｉ ａ ｋ ｌ ｉ １ｅ ｉ ｃ
南 京 中 医药 大 学 学 报 ２ １ 年 １ 第 ２ 卷 第 １期 ０１ 月 ７
莲心总碱的提取工艺初探
我 国莲 子心 资 源丰 富 ，尽 管 莲子 心 富有 保 健 、 医药 价值 ， 但 迄 今 为 尚未 充分 利 用 和有 效开 发 。因
口渴 、 吐血 、 遗精 、 口舌生疮 、 目赤肿 幼 叶及 胚 根 ， 又 名称 薏 、 苦薏 、 莲薏 、 莲 心等 。 现 代 研究 表 明 ， 莲 子 心生 物 碱类 成 分 具 有显 著
主要 的活性成 分 。 莲子 心含 有 多种 生物 碱成 分 ， 分 为非 酚 性 生物 碱 和 酚性 生 物碱 。迄 今 为止 ， 从 莲 子
恒 温水 浴 锅 ， 型号 ： Ｈ Ｈ一 ６ ， 国华 电器有 限公 司 ；
旋转蒸发仪 ， Ｅ Ｙ Ｅ Ｙ Ａ， 型号 ： Ｎ 一 １ ０ ０ １ ， 上海爱朗仪器 有 限公 司 ； 循 环 式 正空 泵 ， 型号 ： Ｓ Ｈ ２ 一 Ｉ Ｉ Ｉ 型， 巩 义予
研 发 的热 点圈 。
子心生物碱主要活性成分 ， 具有各种药理作用。 莲 子 心 是药 食 两 用 的常 见 中药 ， 中 医学 认 为其
性 味苦 寒 ， 人心 、 肺、 肾三 经 ， 具 有 清心 安 神 、 交 通心 肾、 涩 精止 血 之 功效 。主 治热 人 心 包 、 神 昏谵 语 ， 心 肾不 交 、 失眠遗精 ， 血热吐血 ； 亦 可用 来 治 疗 心烦 、
华 仪器 有 限责任 公 司 ；低温 冷却 液循 环 泵 ， Ｓ Ｈ ２ 一 Ｉ Ｉ Ｉ
型， 巩义予华仪器有限责任公司 ； （ ０ ． ０ ０ ０ ０ ０ １ ｇ ） ， Ｍ ｅ ｔ — ｔ ｉ ｅ ｒ ｔ ｏ ｌ ｅ ｄ ｏ ， 瑞典 。
１ ． ２ 试 药
薄 层色 谱 硅胶 Ｇ：青 岛海 洋 化 工 厂分 厂 生 产 ； 三 氯 甲烷 ： 分析纯 ， ２ ０ １ １ ０ ８ ２ ０ ， 云 南汕 滇 化 学试 剂 有 限公 司 ； 乙酸 乙 酯 ： 分析纯 ， ２ ０ １ ０ ０ １ ２ ８ ， 天 津 致 远 化
莲子心中酚性与非酚性生物碱体外抗氧化活性比较
莲子心中酚性与非酚性生物碱体外抗氧化活性比较杨小青;宋金春;谢顺岚;郝好华【摘要】Objective To compare the antioxidant activity between phenolic and nonphenolic alkaloids in Nelumbo Nucifera Gaertn.in vitro. Methods DPPH, ABTS, hydroxyl radical scavenging, super oxygen anion from oxidation, reducing power and beta carotene bleaching test methods were used to evaluate the antioxidant activity of the alkaloids. Results Half maximalinhibitory concentration ( IC50 ) of DPPH among total alkaloid, phenolic alkaloids and nonphenolic alkaloids was 21.89, 27.10 and 32.87μg·mL-1 , respectively;IC50 of ABTS free radicals was 14.25, 20.55,25.94μg·mL-1;The hydroxyl radical scavenging IC50 was 0.03, 0.03, 0.08μg·mL-1; The auto-oxidation rate of super oxygen was 8.72×10-4,5.87×10-4,6.68× 10-4;The total alkaloid had the best reducing power, while the non-phennolic alakloids had the worst; Lipid inhibition rate of three alkaloids were 89.63%, 85.85% and 83.78% respectively. Conclusion Phenolic alkaloids are better than non-phenolic alkaloids in hydroxyl radical scavenging, reducing power and anti-lipid peroxidation, resulting in a promising prospect.%目的比较莲子心中酚性生物碱与非酚性生物碱的体外抗氧化活性. 方法采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)-二铵盐(ABTS)、羟基自由基清除、超氧阴离子自氧化,还原力及β-胡萝卜素漂白测试等方法评估莲子心中生物碱的抗氧化活性. 结果总生物碱、酚性生物碱、非酚性生物碱对DPPH自由基的半数清除浓度( IC50 )分别为21.89, 27. 10, 32. 87 μg · mL-1;对 ABTS 自由基的 IC50分别为 14. 25, 20. 55, 25.94 μg·mL-1;对羟基自由基清除IC50分别为0.03,0.03,0.08 μg·mL-1;超氧阴离子自氧化速率分别为8.72×10-4, 5.87×10-4,6.68×10-4;还原力大小:总生物碱>酚性生物碱>非酚性生物碱;脂质抑制率分别为89.63%,85.85%,83.78%.结论莲子心中酚性生物碱对自由基的清除活性、还原力、抗脂质过氧化活性强于非酚性生物碱,具有广阔的应用前景.【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2015(034)012【总页数】5页(P1579-1583)【关键词】莲子心;酚性生物碱;非酚性生物碱;抗氧化活性;体外【作者】杨小青;宋金春;谢顺岚;郝好华【作者单位】武汉大学人民医院药学部,武汉 430060;武汉大学人民医院药学部,武汉 430060;武汉大学药学院,武汉 430072;武汉大学人民医院药学部,武汉 430060【正文语种】中文【中图分类】R285.5在环境、年龄、心理、生理疲劳等多种因素共同作用下，体内的活性氧会产生一系列的病理作用，例如引起DNA损伤、致癌、细胞功能衰退导致机体老化等[1]。
莲心碱研究进展
莲心碱的研究进展一、莲子心介绍莲为睡莲科莲属多年生宿根水生草本植物，具有极高的药用价值。
其叶（荷叶）、叶柄或花柄（荷梗）、叶基部（荷叶蒂）、花蕾（莲花）、花托（莲房）、雄蕊（莲须）、肥大根茎（藕）、根茎节部（藕节）、老熟的果实（石莲子）和成熟种子中的幼叶及胚芽（莲子心）都供中医药用，为少见的一身皆供药用的植物。
其中，莲成熟种子的绿色胚芽为莲子心，干燥的莲心略成棒状，长1.2～1.6厘米。
顶端膏绿色，有2个分歧，一长一短，先端反折，紧密互贴，用水浸软后展开，可见2片盾状卷曲的幼叶。
中央的胚芽直立，长约2毫米。
基部胚根黄绿色，略呈圆柱形，长2～4毫米。
质脆，易折断，断面有多数小孔。
气无，味苦。
以个大、色青绿。
未经煮者为佳。
它是一味常用中药，功能包括清心、祛热、止血、涩精，用于治疗心烦、口渴、吐血、遗精、目赤肿痛等症，被2005年版中华人民共和国药典收载。
酚性生物碱如莲心碱( liensinine)、甲基莲心碱(neferine，Nef) 和异莲心碱(isoliensinine，Isolien) 等是莲子心的主要活性成分。
近年来对莲子心生物活性物质具有的药理作用研究较多。
二、莲心碱的结构与性质莲心碱(liensinine)为白色无定形粉末，化学式为C37H42N206，相对分子质量611.3121，熔点96～98 ℃，不溶于水，易溶于有机溶剂。
其分子是由单醚键将2个苄基异喹啉结构连接起来 ,化学结构如下图所示莲心碱是一种双苄基异喹啉类生物碱，它是一类在植物界分布局限、结构类型多样、生理活性广泛的天然二聚生物碱。
这类生物碱分子中的苄基碳处于氮原子的β位，易被氧化剂(如高锰酸钾)氧化或在O2存在、紫外灯照射下发生光氧化；在H2O2作氧化剂时，氮原子会质子化，产物一般是N2氧化物的混合物；此产物又可以在6%的H2SO3或锌粉作用下，还原为原生物碱；当金属钠/液氨作为还原剂时可使醚键断裂发生还原裂解反应；在非质子溶剂条件下，苯硫酚钠可使生物碱的氢卤酸盐转化为原生物碱。
大孔吸附树脂分离纯化莲心中莲心总碱的研究
相对湿 度 （ ％）
［ ３］ 李奉勤 ， 韩月芝 ， 范文成 ， 正交 试验研究 仙方 活命 胶 等． 囊 的 最 佳 生 产 工 艺 ［ ］ 中 国 实 验 方 剂 学 杂 志 ，０ ７ １ Ｊ． ２ ０ ，３
２ ０
辞
一
４ ０ 。。 ２ ｏ
１ ０
誉
［１ 黄夏敏 ， 中芳． ］ 彭 白芍 在中成 药生 产过 程 中芍药 苷含量 变 化 的 研 究 ［ ．中 药 新 药 与 临 床 药 理 ， ９ ８， Ｊ］ １９ ９
（ ４）：３ ． ２ ６
［ 李淑芝 ， ２］ 郭亚键． 不同煎 煮条件对 芍药苷 煎出量 的影 响 ［ ］ 中 成 药 ，９ ９ ２ （ ） １５ Ｊ． １９ ，１ ３ ：１ ．
粉 重 量 ×１０ ０ ％
一
进风 温度 、 浸膏 比重 、 口温度 ； 水分均有显著影响 。 出 对
进 风 温度 对 喷 雾 干燥 效 果 影 响 最 大 ， 方 活 命 胶 仙 囊喷雾 时进 风以 １０Ｃ为宜 ， ９￣ 如果 太高 粉末 易焦 化 、 颜 色 变 深 ； 低 容 易 粘 壁 ， 时 效 率 低 成 本 高 ， 过 验 证 太 同 经 。 本工艺能满足 大生 产需 要 ， 而且产 品质量稳定 。 喷 雾 干 燥 时浸 膏 的 相 对 密 度 以 １ １ 选 择 为 宜 ， ．０的 ０ 中药浸膏 由于成 分复 杂 ， 并且 大 多含有 粘 液质 、 、 糖 淀 粉， 密度高 、 粘稠度就大 ， 易造 成雾 化器阻 塞 ， 化时形 雾 图 １ 吸 湿 率 曲 线 图 成的粒径也 大 ， 干燥 速 度慢 ， 且形 成 的粉 末 含水 量 而 易粘壁 ， 如果相对密度 太低 ， 蒸发 水分量 增加 ， 消耗 ３ ３ 临界相 对湿度 测定 取最 佳工 艺验 证 的 ２号 样 品喷雾 粉 ， 干至 恒 高 ， ． 烘 较多能源 ， 增加生产成 本 ， 效率也低 。 重， 分成 ６份 ， 每份约 ５ｇ置称量瓶 中 ， ， 精密称定 ， 开瓶盖 ， 打 放人相 对湿度 通过对临界相 对 湿度 的测 定 ， 大生 产提 供参 考 为 分别 为 ２ ％ ，３ ，２ ８ ， ９ ７ ，５ ３ ，４ ３ ，２ ５ 的 环境 中 于 ０ ３％ ４ ．％ ５ ．％ ７ ．％ ８．％ ９． ％ 依据， 同时也对选择包 材和贮 存条件提供依据 。 ２￣ ５Ｃ条件下放置 １０ｈ 计算 吸湿率 ， 后 以吸湿 率为纵 坐标 ， ２ ， 然 以相对 湿度 为 横 坐 标 作 曲线 ； 出 喷雾 粉 吸 湿 的 临 界 相 对 湿 度 为 ５ ％ 。结 果 见 图 ２ 参考 文献 ： 找 ６ 。
正交实验法优选莲子心生物碱的提取工艺
３００ ） ５０３
摘 要 ： 的 优选莲子心生物碱的最佳提取工艺。方法 以紫外分光光度法测定生物碱的含量， 目 采用正交实验法对莲子
心 的提 取 工 艺进 行优 选 。结 果 最佳 提 取 工 艺为 ： 材 粉 碎 成 粗 粉 ， １ 量 的 甲 醇 进 行 回 流 提 取 。结 论 最 佳提 取 工 药 用 ０倍 艺 可 以有 效 地提 取 莲 子 心 中的 生 物碱 ， 艺操 作 简单 、 理 。 工 合
正 交 实 验 法 优 选 莲 子 心 生 物 碱 的 提 取 工 艺
曾建伟 ，熊 学敏 ，吴锦 忠 ，
（． １ 江西 省 中医药研 究 院中药所 ， 江西 南 昌 ３ ０ ７ ； ３ ０ ７ ２ 中国人 民解放 军第二 军 医大 学药 学院 ， ． 上海 ２０ ３ ； ３福 建 中医学 院 ， ０４ ３ ． 福建 福 州
Ｍｅ ｉｉ ， ｕｈ ｕ。 ｕｉｎ３ ０ ０ Ｃ ｉａ） ｄｃｎ Ｆ ｚ ｏ Ｆ ｊ ５ ０ ３， ｈｎ ｅ ａ
Ａｂ ｔａ ｔＯｂｅｔ ｅＴ ｐｉｉ ｅｅｔ ｃｉ ｒ ｅｓｏ ｌａ ｉ ｒ ｌｍ ｌ ｅ ｍ ｉｉ Ｍｅｈ ｄ ｌａｉｅ ｓｅｔ ｐ ｏ ｓｒ ｃ ： ｊｃｉ ｏｏｔ ｚ ｔ ｘ ａｔ ｇｐｏ ｓ ｆ ｋｌ ｄ ｆ ｍ ｐｕ ｕａｎｌ ｂ ｓ ｖ ｍ ｅｈ ｒ ｎ ｃ ａ ｏｓ ｏ ｕ ｎ ｔｏ ｓＵｔ ｖ ｌ ｐ ｃｏ ｈ－ ｒ ｏｔ ｒ
Ｋ ｅ ｏ ｄｓ Ｐｕ ｌ Ｍ ； Ａ ｋ ｌｉｓ Ｏ ｔｏ ｏ ａ ｅ ｔ ｙ ｗ ｒ ： ｌｍｕａ，Ｚｍ６ｎ ｅ ｌａｏｄ ； ｒｈ ｇ ｎ Ｔ ｓ； Ｅｘｒｃｉｎ Ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｌ ｔ ｔ ｅｈ ｏｏ 眦ｃ ａＧ ｅ ｎ 的成熟种子 干 ， 渣 用 １ ｅ ｍｂ ｕ ｒ ａ￣ ． 残 ％盐 酸 ５ １ 溶 解 ， 滤 ， 液用 浓 氨 水 调 ｐ 至 ９ ０ｍ 使 过 滤 Ｈ 中的干燥幼叶及胚根 。《 本草纲 目》 载其性 味苦寒 ， 心肺 １ ； 记 归 ０ 再用氯仿萃取 ２次 ，０ｍｌ次 ； 并氯仿 层 ， 移 到 １０ｍ ４ ／ 合 转 ０ ｌ 并用氯仿定容至刻度 。 肾三经 ， 具清心去热 ， 固精止血之功效 。现代研究证明 ， 莲子心具 容量瓶中 ， 有降血压 、 抗心律失常 、 抗血小板聚集等心血 管药理活性 ， 与其 所 表 １ 因素 水 平 含生 物 碱 成 分 有 关 ， 如 莲 心 碱 （ ｉ ｉ ｎ ） 异 莲 心 碱 （ｓ— 譬 Ｌｅ ｎ ｅ 、 ｓｉ Ｉ ｏ ｌ ｎｉｉｅ 、 ｉ ｓ ｎ ） 甲基 莲 心 碱 （ ｅ ｒ ｅ 、 心季 铵 碱 （ ｏ ｓ ｅ 等 。 这 ｅ ｎ Ｎ￣ ｎ）莲 ｉ Ｌｔ ｉ ） ｕｎ 些生物碱的分子结构 中都含有共轭键 ， 具有很强的紫外吸收。因 此 ， 文 以紫 外 分 光光 度 法 来 测 定 总 生 物 碱 的 含 量 ， 用 正 交 实 本 采 验法对多因素、 多水 平 下 的莲 子 心 的 提 取 工 艺 进 行 优 化 选 择 ， 获 得最佳提取工艺 ， 从而提高莲子心 中生物碱 的提取率。 １ 仪 器 与试 药 ７０ Ｒ ６ Ｃ Ｔ双光束紫外分光光度计 （ 上海精 密科学仪器有 限公 司）Ｋ －５Ｅ超 声清洗 仪 （ ， Ｑ２ ０ 昆山市超 声仪 器 有 限公 司 ） 。氯 仿 （ 上海申博化工有限公司） 甲醇（ ， 上海振兴化工一 厂 ）其 它试剂 ， 均 为分 析 纯 。莲 子心 购 自黄 庆仁 栈 华 氏 大 药 房 ， 鉴 定 为 莲 Ｍ — 经
电喷雾萃取电离质谱法分析莲子中的生物碱
电喷雾萃取电离质谱法分析莲子中的生物碱方菲菲;杜尚广;戴喜末;郭夏丽;陈焕文;罗丽萍【摘要】在无需样品预处理的前提下,直接对莲子醇提液进行电喷雾萃取电离质谱( EESI-MS)检测,并对其中可能存在的生物碱母离子进行串联质谱分析确认,通过主成分分析( PCA)对不同贮藏时间莲子的醇提液进行区分.研究结果表明,电离电压、离子传输管温度和样品进样流速的最佳条件分别为3.5 kV,250℃和5μL/min；串联质谱结果表明莲子醇提液中存在莲心碱、甲基莲心碱、莲心季铵碱、荷叶碱及O-去甲基荷叶碱等生物碱. PCA可将不同贮藏时间的莲子明显区分在二维平面的不同区域.本方法无需样品预处理,可用于复杂基体样品中生物碱的快速鉴定,与化学计量学结合可对不同新陈度的莲子样品进行有效区分.%To identify alkaloids in lotus seeds rapidly and to distinguish fresh and aged lotus seeds, using self-developed extractive electrospray ionization source, ethanol extracts of lotus seeds were directly analyzed by mass spectrometry without any sample pretreatment. The MS were further analyzed using principal component analysis( PCA) . The results showed that optimum conditions of ionization voltage, capillary temperature and sample flow rate were 3.5 kV, 250 ℃, and 5 μL/min, respectively. Liensinine, neferine, lotusine, nucife-rine and O-demethylation nuciferine were found in the ethanol extracts by tandem mass spectrometry, of which signal intensities showed special change trends. Lotus seeds of different storage time and aging degree were clearly distinguishable from each other by PCA. This method is of high sensitivity and high analytical speed, without complex sample pretreatment. The method in this paper is fast and effective to identifyalkaloids in real samples with complicated matrix, and combined with chemometrics, it is also used to distinguish fresh and aged lotus seeds.【期刊名称】《高等学校化学学报》【年(卷),期】2014(000)004【总页数】6页(P730-735)【关键词】电喷雾萃取电离质谱;莲子;主成分分析;生物碱【作者】方菲菲;杜尚广;戴喜末;郭夏丽;陈焕文;罗丽萍【作者单位】南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，生命科学与食品工程学院，南昌330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，生命科学与食品工程学院，南昌330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，生命科学与食品工程学院，南昌330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，生命科学与食品工程学院，南昌330047;东华理工大学江西省质谱科学与仪器重点实验室，南昌330013;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，生命科学与食品工程学院，南昌330047【正文语种】中文【中图分类】O657莲子是莲的种子，含有丰富的多糖、磷脂、生物碱和类黄酮等营养保健成分，是一种食疗佳品及著名的药食同源食物.生物碱为莲的主要生物活性成分，在莲的各部位均可检测到.传统的生物碱鉴定方法是化学降解法，近年来已应用光谱、色谱、质谱和核磁分析等现代分析手段来鉴定生物碱的结构.王嘉陵等［1］从莲心中分离出莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱、前荷叶碱、荷叶碱和莲心季铵碱等;Luo等［2］采用高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD)从莲叶中鉴定出多种生物碱.目前，莲心生物碱已被用于临床制剂［3～5］.然而，基于直接质谱分析对莲生物碱进行快速分析及鉴定目前鲜见报道［6］.电喷雾萃取电离(EESI)技术是一种新兴的离子化技术，可在无需样品预处理的条件下对复杂基体样品进行直接质谱分析，可用于分析液体、气溶胶、固体表面和黏性样品等不同形态的样品［7］.潘素素等［8］分析了马尾松根际土壤溶液中的尿素衍生物;Zhou等［9］采用EESI技术建立了尿液中阿特拉津及其代谢产物的快速分析方法;许柠等［10］采用EESI-MS快速标靶分析氨基酸，将EESI和LTQ-XL质谱仪耦合，在无需样品预处理情况下，建立了多种不同极性氨基酸的快速检测方法.本文利用EESIMS技术，对不同贮藏时间莲子中的生物碱进行了直接质谱分析，对其中的5种生物碱进行确认;基于正离子模式下获得的EESI-MS指纹谱图的差异，采用主成分分析法(PCA)实现了对不同贮藏时间莲子的快速甄别.本方法分析速度快、信息提取准确且识别精度高，对不同贮藏时间的莲子样品质谱数据具有较好的识别效果，为生物碱的直接快速分析提供了参考.1.1 仪器与试剂EESI电离源(东华理工大学研制)［11，12］;LTQ-XL为线性离子阱质谱仪和Xcalibur型数据处理系统(美国Finnigan公司);乙醇(分析纯，上海化工试剂有限公司).莲子品种为太空莲3号，均为去除胚芽(莲心)的通心莲子，由江西省广昌县白莲科学研究科所提供.当年新鲜莲子为2012年8月收获，贮藏的陈年莲子分别于2011，2010和2009年8月收获，均产于广昌县同一种植基地，去种皮、胚芽，烘干后真空包装，避光室温［(23±2)℃］下保存.1.2 莲子醇溶液的制备分别将4年收获的莲子粉碎，过80目筛，称取莲子粉末0.01 g于1.5 mL离心管中，加入1 mL 80%(体积分数)的乙醇溶液，超声提取10 min，以4000 r/min转速离心5 min，取上清液直接进行质谱检测，每种样品平行测试6次.1.3 EESI-MS实验参数线性离子阱质谱(LTQ-MS)在正离子检测模式下工作，质谱扫描范围m/z 50～1000;电离电压3.0 kV;离子传输管温度250℃;ESI溶剂为甲醇;雾化气为氮气(纯度99.999%)，压力为1.2 MPa;EESI溶剂和样品溶液流速分别为3和5 μL/min;2个毛细管喷雾口之间的距离a=1 mm，夹角为60°，到质谱进样口的距离为5 mm，角度为150°;在进行串联质谱分析时，母离子的隔离窗口宽度设定为1.5 Da，碰撞时间为30 ms，碰撞能量为17% ～25%，其它参数由LTQ-MS软件系统自动优化.1.4 主成分分析利用7.0版Matlab软件(美国Mathworks公司)对4个年份的莲子(每年各取60个样本，共240个)进行PCA分析，通过计算特征值、特征向量及累计贡献率，获得少数几个主成分，尽可能完整地保留原始变量的信息，且彼此间不相关，达到简化数据的目的.2.1 EESI-MS质谱条件的优化莲子生物碱具有比较相似的性质，实验选择甲基莲心碱m/z 625作为目标信号物质，对电离电压、离子传输管和样品进样速率等EESI-MS质谱条件进行优化.2.1.1 离子源电压的优化在实验所用离子源中，带电的喷雾溶剂与样品喷雾在离子传输管空间内碰撞，样品中的目标分子被带电喷雾溶剂萃取，进行电荷传递，样品目标分子形成带电离子在检测器中被检测，因此离子源电压对样品目标分子的电离效率有直接影响，对质谱信号的强弱起关键作用.实验考察了离子管温度为250℃，样品流速为0.5 μL/min时，不同离子源电压对m/z 625信号强度的影响(如图1所示)，可见，电压为3.5 kV时，m/z 625信号强度较大;电压低于3.5 kV时，因为带电初级离子数目较少，难以使生物碱电离;而电压大于3.5 kV时，m/z 625信号有所下降，其原因可能是高喷雾电压加大了对其它杂质的电离，使目标分析物m/z 625的信号受到干扰，因此选择3.5 kV作为离子源电压.2.1.2 离子传输管温度的优化在电离电压为3.5 kV，样品流速为0.5 μL/min条件下，离子传输管温度优化结果(图2)表明，当离子传输管温度低于250℃时，m/z 625的信号强度随着温度的上升而增大，说明在250℃以下，升高温度不仅可去除小液滴中的溶剂，还可加快样品中目标分子的运动，获得更多的电离电荷，导致信号强度增大;在250℃以上时，m/z 625的信号强度下降，这可能是由于温度升高导致生物碱分解，或是反应环境的温度较高，生物碱在溶剂喷雾碰撞过程中挥发并扩散到外界环境中，造成目标信号的下降.故选择离子传输管温度为250℃.2.1.3 样品进样速率的优化实验中样品在高压气流(N2)作用下形成喷雾，在电离电压为3.5 kV，离子管温度为250℃的条件下，考察了电喷雾溶剂流速为5 μL/min 时，样品进样速率对质谱信号的影响(见图3).结果表明，样品的最佳速率为5μL/min;速率较低时，目标物质进入质谱的量相应减少，使信号强度降低;而进样速率大于5 μL/min时，可能是因为氮气压力一定的情况下，样品溶液不易雾化而影响电离效果，m/z 625的信号强度下降.因此选择样品进样速率为5 μL/min.经过优化，确定了质谱和离子源的条件为:离子源电压为3.5 kV，离子传输管温度为250℃，样品进样速率为5 μL/min.其它参数设置为默认值.2.2 莲子醇提物的EESI-MS离子流图在优化的实验条件下获得了莲子醇提物的EESI-MS谱图(图4)，m/z 611，625，314，282和296为总离子流(TIC)中的选择离子.由图4可见，选择的离子流与总离子流图的走势一致，离子的丰度随着进样而明显增强，说明样品中存在该质量分数的物质.与文献［13～15］对比发现，选择的5种离子流的质荷比分别与质子化的莲心碱(异莲心碱)、甲基莲心碱、O-去甲基荷叶碱、莲心季铵碱和荷叶碱的质荷比相同，为了确认该系列离子是否为莲子的生物碱，进一步通过串联质谱分析进行验证.2.3 莲子醇提液的EESI-MS串联质谱分析选择m/z 611进行碰撞诱导解离(CID)实验，获得二级质谱图［图5(A)］，其中m/z 593，579，503和489等离子峰是母体离子分别丢失H2O，CH3OH，CH3—C6H5O和CH3—CH2—C6H5O基团所致，这与文献［5］报道的莲心碱二级质谱碎片一致，故可确认m/z 611是质子化莲心碱分子的信号.另外，在二级质谱上还有一定丰度的m/z 192的碎片离子峰，而m/z 192是莲心碱的同分异构体异莲心碱二级质谱的特征碎片［5］，因此莲子醇提取液中可能含有一定量的异莲心碱，但其信号强度要小于莲心碱的特征碎片强度.因而，在莲子醇提取液m/z 611的物质中，莲心碱占有较大比例.不同贮藏时间莲子样品的m/z 611二级质谱图中都含有图5(A)中所示的各种特征离子峰.m/z 625离子的二级质谱［图5(B)］中出现了m/z 607，593，580，489，297和206等离子碎片，其中m/z 607，593，580和489主要由m/z 625分别丢失1个H2O，CH3OH，C2H5O和CH3—CH2—CH2—C6H5O形成，对比文献［5］可以确认m/z 625为甲基莲心碱.甲基莲心碱m/z 625的碎片特征与莲心碱m/z 611较相似，其原因是甲基莲心碱仅在莲心碱羟基位点(—OH)替换成了甲基(—CH3)，相似的结构决定了两者相似的离子断裂方式.母体离子m/z 314的二级质谱图［图5(C)］中最主要的碎片离子峰为m/z 269(M-45)+，由母离子丢失1个H2O形成的m/z 298含量也较高;此外，m/z 107和251与电子轰击质谱(EI-MS)碎片离子及NMR结果一致［15］，因此，推断m/z 314为莲心季铵碱.母体离子m/z 282的二级质谱图［图5(D)］表明，特征碎片离子m/z 264和250分别是母体离子丢失H2O和CH3OH基团所形成的，根据文献［11］由HPLC-MS对荷叶中生物碱的鉴定，可以推断母体离子主要为O-去甲基荷叶碱.母体离子m/z 296的二级质谱图［图5(E)］中有较强的离子特征碎片为m/z 265和104，相似的离子断裂方式已经在荷叶中荷叶碱的检测中得到验证［13］，因此推断m/z 296为荷叶碱.5种生物碱的结构如图6所示.以上结果表明，通心莲子中生物碱种类丰富，不仅含有莲心中的莲心碱、甲基莲心碱及莲心季铵碱，还含有在荷叶中较常见的荷叶碱及O-去甲基荷叶碱等.丰富的生物碱组成是莲子作为药用食物的重要因素.2.4 不同贮藏时间的莲子生物碱组成的差异对不同贮藏时间莲子的醇提取液进行EESI-MS分析发现，莲子醇提液中5种生物碱含量依次为:O-去甲基荷叶碱＜莲心碱＜甲基莲心碱＜莲心季铵碱＜荷叶碱.各种生物碱的质谱信号在不同年份的样品中存在差异，表明不同陈化度莲子的生物碱含量不同.图7分别为2009～2012年莲子中 m/z 611，625，282，314和296等5种离子峰的强度变化趋势图，在一定程度上表示了莲心碱、甲基莲心碱、莲心季铵碱、O-去甲基荷叶碱和荷叶碱的含量变化.由图7可见，莲心碱、甲基莲心碱和O-去甲基荷叶碱在储藏过程中信号强度变化较小;莲心季铵碱的信号强度随储藏时间延长先下降后上升;荷叶碱信号强度差异较大，先上升后下降.2.5 不同贮藏时间的莲子醇提物EESI-MS谱图的PCA分析将4个年份的莲子共32个样本(每个年份8个样品)在正离子模式下所获得的EESI-MS指纹谱图信息导入Matlab中进行PCA数据处理与分析，分别得到二维的PCA得分结果.由PCA的二维平面图［图8(A)］可见，4种莲子被明显区分;由图8(B)可见，能用于区分不同年份莲子的物质较多，主要为m/z 705和176等在莲子中含量较多的物质.为了验证生物碱的质谱特征信息对不同年份莲子的区分有无贡献，对m/z 611，625，282，314和296等生物碱质谱特征信息再次进行PCA分析，结果如图8(C，D)所示.由图8(C)可见，通过对生物碱信息进行PCA 分析，不同年份的莲子被明显区分，区分效果贡献率最大的为m/z 314.综上所述，在优化条件下对未经样品预处理的莲子醇提液进行了EESI-MS分析.结果表明，通心莲子中含有莲心碱、甲基莲心碱、O-去甲基荷叶碱、莲心季铵碱和荷叶碱等生物碱.不同贮藏时间的莲子生物碱的信号强度变化趋势表明，莲心碱和甲基莲心碱含量较稳定，而荷叶碱的含量变化较大，且先上升后下降，可能在储存初期逐步积累，然后随着莲子的陈化逐步降解.采用PCA分析不同贮藏时间莲子醇提液的EESI-MS谱图发现，莲子在贮藏过程中醇提液部分物质发生显著变化，不同年份的莲子可被明显区分在PCA二维平面图的不同区域.本文首次采用EESI-MS 对通心莲子样品中的生物碱进行多级串联质谱鉴定，该方法快速、准确且无需复杂的样品预处理，不仅可用于复杂基体样品中生物碱的快速鉴定，结合化学计量学还可对不同陈化度的莲子样品进行有效区分.［1］ Wang J.L.，Hu X.M.，Yin W.H.，Cai H.S.，Journal of Chinese Medicinal Materials，1991，14(6)，36—38(王嘉陵，胡学民，尹武华，蔡鸿生.中药材，1991，14(6)，36—38)［2］ Luo X.B.，Chen B.，Liu J.J.，Yao S.Z.，Anal.Chim.Acta，2005，538(1)，129—133［3］Chen W.Z.，Ling X.Z.，Ding G.S.，Acta Pharmaceutica Sinica，1962，9，277—279(陈维洲，凌秀珍，丁光生.药学学报，1962，9，277—279)［4］ Pan Y.，Cai B.C.，Yang G.M.，Cao L.，Shen A.Q.，Journal of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，2005，21(4)，243—244(潘扬，蔡宝昌，杨光明，曹亮，沈爱琴.南京中医药大学学报，2005，21(4)，243—244) ［5］ Wu S.H.，Sun C.R.，Cao X.J.，Zhou H.，Hong Z.，Pan Y.J.，J.Chromatogr.A，2004，1041(1)，153—162［6］ Luo L.P.，Zhao Z.F.，Dai X.M.，Zhang X.，Liu Y.L.，Zhang X.L.，Zhang W.J.，Ouyang Y.Z.，Trans.Chin.Soc.Agri.Engi.，2013，29(7)，261—266(罗丽萍，赵占锋，戴喜末，张茜，刘亚丽，张兴磊，章文军，欧阳永中.农业工程学报，2013，29(7)，261—266)［7］ Jia B.，Zhang X.L.，Ding J.H.，Yang S.P.，Chen H.W.，Chin.Sci.Bull.，2012，57，1918—1927(贾滨，张兴磊，丁健桦，杨水平，陈焕文.科学通报，2012，57，1918—1927)［8］ Pang S.S.，Zhao N.，Ouyang Y.Z.，Huang K.K.，Ding J.H.，ChenH.W.，Yuan L.，Wang X.X.，Chem.J.Chinese Universities，2013，34(6)，1379—1384(潘素素，赵娜，欧阳永中，黄科科，丁健桦，陈焕文，袁龙，王兴祥.高等学校化学学报，2013，34(6)，1379—1384)［9］ Zhou Z.Q.，Jin M.，Ding J.H.，Zhou Y.M.，Zheng J.，Chen H.W.，Metabolomics，2007，3(2)，101—104［10］ Xu N.，Zhu Z.Q.，Yang S.P.，Wang J.，Gu H.W.，Zhou Z.，Chen H.W.，Chin.J.Anal.Chem.，2013，4，523—528(许柠，朱志强，杨水平，王姜，顾海巍，周振，陈焕文.分析化学，2013，4，523—528)［11］ Chen H.，Zenobi R.，Nature Protocols，2008，3(9)，1467—1475 ［12］ Zhu L.，Hu Z.，Gamez G.，Law W.S.，Chen H.W.，Yang S.P.，Chingin K.，Balabin R.，Wang R.，Zhang T.T.，Zenobi R.，Anal.Bioanal.Chem.，2010，398(1)，405—413［13］ Kunitomo J.，Journal of Pharmacy(Japanese)，1964，84(11)，1141—1142(国友顺一. 药学杂志(日)，1964，84(11)，1141—1142)［14］ Kunitomo J.，Yoshikawa Y.，Tanaka S.，Imori Y.，Isoi K.，Phytochem.，1973，12(3)，699—701［15］ Pan Y.，Yang G.M.，Cai B.C.，Ding G.，Chinese Traditional and Herbal Drugs，2004，35(5)，501—503(潘扬，杨光明，蔡宝昌，丁岗.中草药，2004，35(5)，501—503【相关文献】［1］ Wang J.L.，Hu X.M.，Yin W.H.，Cai H.S.，Journal of Chinese Medicinal Materials，1991，14(6)，36—38(王嘉陵，胡学民，尹武华，蔡鸿生.中药材，1991，14(6)，36—38)［2］ Luo X.B.，Chen B.，Liu J.J.，Yao S.Z.，Anal.Chim.Acta，2005，538(1)，129—133 ［3］ Chen W.Z.，Ling X.Z.，Ding G.S.，Acta Pharmaceutica Sinica，1962，9，277—279(陈维洲，凌秀珍，丁光生.药学学报，1962，9，277—279)［4］ Pan Y.，Cai B.C.，Yang G.M.，Cao L.，Shen A.Q.，Journal of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，2005，21(4)，243—244(潘扬，蔡宝昌，杨光明，曹亮，沈爱琴.南京中医药大学学报，2005，21(4)，243—244)［5］ Wu S.H.，Sun C.R.，Cao X.J.，Zhou H.，Hong Z.，Pan Y.J.，J.Chromatogr.A，2004，1041(1)，153—162［6］ Luo L.P.，Zhao Z.F.，Dai X.M.，Zhang X.，Liu Y.L.，Zhang X.L.，Zhang W.J.，Ouyang Y.Z.，Trans.Chin.Soc.Agri.Engi.，2013，29(7)，261—266(罗丽萍，赵占锋，戴喜末，张茜，刘亚丽，张兴磊，章文军，欧阳永中.农业工程学报，2013，29(7)，261—266)［7］ Jia B.，Zhang 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Herbal Drugs，2004，35(5)，501—503(潘扬，杨光明，蔡宝昌，丁岗.中草药，2004，35(5)，501—503 (Ed.:I，K)。
莲子心总生物碱及总生物碱高氯酸盐对MG63细胞迁移和迁移体生成的影响
莲子心总生物碱及总生物碱高氯酸盐对MG63细胞迁移和迁移体生成的影响林立男;熊梅;曾建伟;周芬;蔡雯;许仲坤;黄美雅;蔡良知;黄云梅【期刊名称】《福建中医药》【年(卷),期】2024(55)1【摘要】目的研究莲子心总生物碱(TAL)和总生物碱高氯酸盐(TALP)对MG63细胞迁移及迁移体生成的影响,探讨其治疗骨肉瘤的作用机制。
方法将对数生长期的MG63细胞,分为空白组、TAL组和TALP组,空白组不加药物,TAL组和TALP组以10、20、40、60、80、100μg/mL TAL和TALP培养液分别干预24、48 h后采用CCK8法检测各组细胞增殖率;根据CCK8实验结果,取24 h IC_(50)的一半剂量约为50.0μg/mL稀释成不同浓度的含药培养基来干预细胞,即2组实验组分别加入50.0、25.0、12.5、6.25μg/mL TAL和TALP干预24 h后采用划痕实验检测各组细胞迁移率,并计算迁移抑制率为50%的药物浓度;MG63细胞传代培养15~20 h后采用激光共聚焦显微镜、透射电镜观察细胞迁移体的生成和形态结构;将细胞分成空白组、TAL组和TALP组,后2组根据划痕实验结果,取细胞迁移抑制率约为50%时的药物浓度进行干预15~20 h,计算并比较各组迁移体生成的数量变化。
结果与空白组比较,20、40、60、80、100μg/mL TAL和40、60、80、100μg/mL TALP干预后细胞增殖率均显著下降(P<0.05);TAL和TALP的12.5、25.0、50.0μg/mL组细胞迁移率显著下降(P<0.05),迁移抑制率为50%的药物浓度分别为TAL 15.05μg/mL,TALP 20.16μg/mL;激光共聚焦显微镜观察显示MG63细胞迁移过程中尾部可见膨大的囊泡,透射电镜下观察到囊泡为迁移体石榴样结构;与空白组比较,TAL 15μg/mL组和TALP20μg/mL组迁移体生成的数量显著减少(P<0.05)。
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本科毕业设计（论文）中药莲子心中总生物碱的提取及特征图谱研究学院轻工化工学院专业制药工程年级班级2011级（3）班学号3211001806学生姓名练利芳指导教师郑俊霞2015年6 月中药莲子心中总生物碱的提取及特征图谱研究练利芳轻工化工学院梁华杰轻工化工学院摘要目的：本实验是对莲子心药材中的化学成分进行初步分离，并对所得到的总生物碱成分进行HPLC分析，根据特征图谱来确定莲子心总生物碱的种类以及成分。
相信随着科学技术的进一步发展，也会有越来越多的相关研究，能够早日实现其最大的药用价值。
方法：经过前期查阅文献从而确定本次实验方案，本实验将莲子心药材（10.5 kg）粉碎，加12倍80%乙醇，回流提取3次，每次2 h。
合并提取液，浓缩至无醇味，浓缩液用1%盐酸调至pH = 3，纱布过滤；滤液加氨水调PH至9，二氯甲烷萃取，浓缩萃取液，得到暗黄色沉淀200 g，即为莲子心总生物碱部分。
对莲子心总生物碱部分进行HPLC分析，探索总生物碱的HPLC分析条件，确定了最优的分析条件。
在最优的分析条件下，建立了HPLC特征图谱。
结果：结合所得的特征图谱发现莲子心中所含生物碱成分远远多于文献报道的十几个化合物。
这表明其中包含有大量结构未知的生物碱类化合物，需要进一步系统研究。
结论：通过此次实验所得到的实验数据，可以为莲子心总生物碱成分的探索和技术开发提供理论基础，为日后研究莲子心总生物碱的药理作用奠定基础。
关键词：莲子心，总生物碱，特征图谱。
AbstractObjective：This experiment is to preliminary separate the chemical composition of Plumula，and HPLC analysis the total alkaloids，which make sure the kind and composition of total alkaloids separate from separate. I believe that with the further development of science and technology , there will be more and more relevant research , as early as possible to achieve its maximum medicinal value.Method: After a preliminary literature review to determine this experimental program , This experiment crushed the Plumula（10.5 kg），added 12 times 80% ethanol to the powder，refluxed and extracted them three times，each time two hours.And combined the extract,concentrated it until we could’t smell the taste of alcohol, the concentrate was adjusted to pH=3 with 1% hydrochloric acid, then filtered with gauze. The filtrate was adjusted to pH=9 with ammonia, the solvent extraction with dichloromethane,concentrated the extracts, we got 200g dark yellow precipitate., which was the total alkaloids of plumula. After a HPLC analysis to the total alkaloids, explored the analytical conditions of HPLC, made sure the best of the analytical conditions of HPLC.The characteristic spectrum was bulit in the best of the analytical conditions of HPLC.Results: It was found that the kind of alkaloids in Plumula contained far more than reported in the literature through the result of characteristic spectrum.It indicated that the Plumula contains a large number of unknown structure of alkaloids.Conclusion:The experimental data obtained in this experiment may provided a theoretical basis for the exploration and technology odevelopment of Plumula total alkaloids, and lay the foundation for future study of the pharmacological effects .Keywords : Plumula, total alkaloids, the characteristic spectrum.目录1 绪论 (1)2 理论基础 (2)2. 1 植物莲的简介 (2)2.1.1 莲子的药食同源 (3)2. 2 莲子心的研究简介 (3)2.2.1 莲子心的植物基源 (4)2.2.2 莲子心的鉴别 (4)2.2.3 莲子心的化学成分 (4)2.2.4 莲子心的临床运用 (4)2.2.5 莲子心的发展瞻望 (6)2.3 莲子心总生物碱研究 (6)2.3.1 生物碱 (6)2.3.2 莲子心的生物碱 (7)2.3.3 莲子心生物碱的药理作用 (8)2.3.4 莲子心总生物碱的提取 (9)3 实验部分 (13)3.1 药材 (13)3.2 化学试剂 (13)3.3 仪器原理介绍 (13)3.3.1 超声清洗器 (13)3.3.2 旋转蒸发仪 (14)3.3.3 高效液相色谱仪 (14)3.4 实验操作 (15)3.4.1莲子心总生物碱的提取 (15)3.4.2总生物碱HPLC的分析的研究 (16)4 结果与分析 (16)4.1总生物碱HPLC的分析的研究 (16)4.1.1探究总生物碱HPLC的特征图谱检测波长选择的结果 (16)4.1.2探究优化总生物碱HPLC的分析条件的结果 (16)4.2总生物碱特征图谱的结果 (18)4.3展望 (18)参考文献 (21)致谢 (23)1. 绪论随着人们生活水平提高，保健意识增强，莲子心作为天然保健品已走入了寻常百姓家，用量急剧增加。
据相关部门对中国30个城市中药材、保健品、食品三个市场调查显示，从1999年至2015年，莲子心市场需求逐年增加，价格连年上涨。
我国莲子总产量10万吨左右，从中所得莲子心据初步估算约1 500 t[1]。
据目前研究报道的莲子心主要成分有生物碱、生物碱类化合物、甾醇类、此外莲子心中还含有水溶性多糖成分及锌、铜、铁、钙、镁、钠、钾、镍、锰、镉等微量元素。
通过现代药理的研究，可以发现莲子心具有清心安神，交通心肾，涩精止血等疗效，用于治疗热入心包，神昏谵语，心肾不交，失眠遗精，血热吐血的症状。
莲子心自被发现可入药以来，凭借其药效显著，就一直在中药中占据着非常重要的地位。
在历史的医书药典中，因其具有非常高的营养活性和药用价值而被广泛应用。
近一个世纪以来，随着科技的日益发达，学者们对莲子心生物碱类成分进行了大量的生物活性和体内药物学等方面的研究。
为进一步探明莲子心中主要化学成分的类型及结构，也可以为莲子心生物碱类成分的探索和技术开发提供坚实的基础，为日后研究总生物碱的药理学提供支持，实现莲子心药用价值的最大化。
由于莲子心产地又遍布全国各地，因此确定其产量相对较大的地区作为产品开发的药材资源提供了便利的条件。
本试验是对莲子心药材中的化学成分进行初步分离，对莲子心总生物碱部分进行HPLC分析。
通过探索总生物碱的HPLC分析条件，确定了最优的分析条件：甲醇（A）-水（1‰氨水）（B）梯度洗脱：0-5-15-40-50 min，40-50-60-80-100 A%。
并在最优的分析条件下，对总生物碱部分建立HPLC特征图谱进行分析，结果发现莲子心中所含生物碱成分远远多于文献报道的十几个化合物。
这表明其中包含有大量结构未知的生物碱类化合物，需要进一步系统研究。
为早日实现莲子心的药用价值最大化提供研究基础，造福百姓。
2.理论基础2.1植物莲的简介我国莲栽培约有3 000年历史，自生或栽培于池塘内，至今在南北各地均有种植。
莲(Nelumbo nucifera Gaertn)为睡莲科莲属多年生水生草本，原产印度和中国。
莲生于水泽、池塘、湖沼或水田内，有野生或栽培。
长江流域以“清明”前后最适宜。
北方4月下旬均可栽培。
若用莲子种植，5到7月也可种植。
栽植地必须保持每天有10小时以上的光照。
此外，荷花易被草类等鱼类吞食，因此在种植前，应先清除湖塘中的有害鱼类，并用围栏加以围护，以免鱼类侵入。
我国莲资源丰富，分布广泛，种类繁多，开发潜力巨大。
我国莲的主要品种有：湖南安乡的湘莲；福建建宁的建莲；江西鄱阳的红花和白花子莲；江苏吴江的青莲子等。
莲的部位分莲子、荷叶、莲子心，荷梗、藕节、莲须、还有石莲子等。
莲通身都可入药，夏季的常用药就有荷叶、莲子肉、藕节、莲子心等等。
（1）荷叶的采收与功效荷叶为莲的叶，是生水生草本植物。
6～7月花未开放时采收，除去叶柄，晒至七八成，对折成半圆形，晒干。
夏季亦用初生嫩叶或鲜叶。
荷叶具有清热解暑，升发清阳，凉血止血的功效，用于暑热烦渴，脾虚泄泻，暑湿泄泻，便血崩漏。
荷叶炭可以收涩化瘀止血，治疗多种出血症及产后血晕，是临床上必不可少的常用药。
此外，源于荷叶可以去除体内蓄存的痰湿，从而达到排毒轻身的效果，具有的减脂轻身的功效，更是深受女性朋友和“三高”人群的青睐。
（2）莲肉的形状与功效在夏末初秋的时节，街头小巷买到的新鲜的莲蓬，掰开墨绿色的莲蓬抠出嫩绿色的莲子，再剥开那层嫩绿色的外皮就是莲子肉了。