大黄素的介绍
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方 法：采用微乳液相色谱法 。以 微 乳为 流 动 相，通 过 对影 响分 离度 和保 留 时间 的因素进 行考 察，优化最佳微乳体系 组 成为 2.5％（W/V）十二 烷基 硫酸钠 -0.1 ％（V/V）正 辛烷-8.0％（V/V）正丁醇 0.5％（V/V）三 乙胺（磷 酸调 pH 值至 3.0）；色 谱柱为 Hypersil ODS2（250 mm×4.6 mm，5μm），柱温 为 28 ℃，流 速为 1 mL· min ，检测波长为 254 nm。
实验步骤
分别取虎杖 苷、白藜芦醇、蒽苷B、大黄素和大黄素甲醚对照品适量， 精密称定置于同一10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，混匀 ，制成质量浓度分别为0.444，0.240，0.180，0.403， 0.044g· L－1的溶液 作为混合对照品储备液。
1混合对照品储备溶液的制备
2供试品溶液的制备
取本品粉末（过3号筛）0.1g ，精密称定置50mL微波萃取罐中，精密加入25mL甲醇， 160℃微波萃取10min，放冷，用甲醇补足失重，滤过，取 续滤液用微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
微乳液相色谱法的特点
微乳液相色谱（MELC）法是一项液相色谱新 技术 ，它 不仅存 在常规 色谱的分 离机制 ，还存在 微乳液滴内 外 相 之 间的 分配 。 其与 常规 高 效液 相色 谱（HPLC）法相比 ，具有分 离 效率高和分离速度快的优越性，可用于复杂样品的分离； 血 清、尿液经 过简单的稀释 后便可以直 进样分析，无需 预处理；在梯度洗脱和低紫外波 长（190 nm）检测 方面 也有一 定的优势对于 MELC法的应 用，主 要涉及化学药 品中 多种成 分、药物制 剂以及 生物样 品的分析，而用 于中药成 分的分析 较少。笔 者采用 MELC法同 时测定 了 大黄中 5种蒽 醌类 衍生 物的 含量 ，方法 简便 、准 确 、可靠 ，取得 了满 意结果。
高效毛细管电泳法特点
• 高效液相色谱法用于测定 蒽醌类成分，但 HPLC 法的主 要缺点是 需要对样品进行预 处理 ，操作较为烦琐。 • 本研 究采用高 效毛细管电泳（ HPCE） 法 对大黄中的 2 种蒽醌类成分大黄素和 大黄 酚同时进行定 量分析 该 法具有 对样 品处 理 要求 低、分离 效能高等特点
实验步骤
3 微乳流动相的制备 4 色谱条件
色谱 柱：Hypersil ODS2（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流速 ：1mL· min ；柱温：28 ℃；检测波长：254 nm；流动相：2.5％ W/V）SDS-0.1％（V/V）正辛 烷-8.0％（V/V）正丁 醇-0.5％（V/V ）三乙 胺（磷酸调 pH值至 3.0）；进样量：15 μL。色谱见图 1。 0 5 10 15 20 25 30 35 min ----《微乳液相色谱法同时测定大黄 中5种蒽醌类衍生物的含量》 将SDS、正丁醇、正辛烷及含0.5％ 三乙胺的水溶液按顺序，超声15min，即得透明稳定的微乳，用磷 酸调pH值至3.0，经0.45μm滤膜过滤，备用。
微波萃取-UPLC的特点
本研究的UPLC测定数据与文献中对此5种活 性成分的HPLC含量测定结果 比较基本一致 ，但 分析时间从62min以上缩短到12min以内 大大提高了工作效率；研究中对不同提取方式 进行了比较,按上述色谱条件及样品制备方法 ， 发现微波萃取10min对各成分的提取率明 显高于超声30min，进一步提高了分析效率。 因此, 建立的虎杖多成分同时测定的微波萃取 特别适用于中药复杂体系的成分分析。
三、高效毛细管电泳法
建立高 效毛细管电泳（ HPCE） 法对三黄油擦剂 中 的有效成分大黄素和大黄酚进行 含量测定。 方 法： 采 用石英毛细管柱（ 65 cm × 55 μm，有 效长度 50 cm） ，缓冲体系为 10 mmol· L 硼砂 － 30 mmol· L SDS － 10% 乙醇，pH 值为 9． 8， 分离电压 30 kV，检 测波 长 254 nm。 结 果： 大黄 素和 大黄 酚在 20 min 内得 到很 好 的 分离，分 别在 0． 124 ～ 2． 470 g· L 、0． 104 ～2． 080 g· L 线性关 系良好，平均回收 率分 别为 99． 2% 、98． 6% 。
实验步骤
1混合对照品溶液制备
取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素 、大黄酚和大黄素甲醚对照品各适量，精密称定，置于50mL容量瓶 中，加适量甲醇超声溶解，再加甲醇至刻度，摇匀，即得混合对照 品溶液。临用前用0.45μm滤膜过滤，取续滤液进样。
2供试品溶液制备
取干燥后的各大黄药材粉末（过四号筛 ），精密称定，置具塞烧瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，加 热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足失重，摇匀，滤过。精 密量取续滤液5mL，置烧瓶中，挥去溶剂，加8％盐酸溶液10mL， 超声使溶解，再加氯仿10mL，加热回流1h，放冷，转移至分液漏 斗中，用少量氯仿分次洗涤烧瓶，洗液并入分液，分取氯仿层，酸 液再用氯仿提取3次，每次10mL，合并氯仿液，挥去溶剂，残渣加 少量甲醇使溶解，定量转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀 ，即得供试品溶液。临用前用0.45μm滤膜过滤，取续滤液进样。
二、 微波萃取-UPLC 法
方法：采用MDS-8型多通量密闭微 波化学工作站，以甲醇为溶剂， 160℃微波萃取制备供试品溶液； UPLC分析条件为 WatersAcquityHClassUPLC系统， BEHC 色谱柱（2.1mm×100mm，1.7 μ m）乙腈水为流动相梯度洗脱 流 速0.5mL·min－1, 柱温30℃, 检测波长226nm 。
大黄素
大黄素的理化性质
为橙色针状结晶(乙醇或12毫米下减压升华),熔点256～
257°。具有蒽源自文库的特殊反应。几乎不溶于水，溶于乙
醇及碱溶液，溶解度25℃(g/100ml饱和液)：乙醚0.140 、氯仿0.071、苯0.041、四氯化碳0.01。溶于苛性碱水 溶液、碳酸钠水溶液，氨溶液中显樱红色。
一、微乳液相色谱法
3标准曲线：将混合对照品储备液分别用甲醇稀释至2
，4，8，16，32，64倍，精密吸取上述稀释6份，每份约 0.1g，精密称定，分别照供试品溶液制液及储备液各1μL进 样，测定。分别以峰面积A为纵坐标，以进样浓度X（g· L ）为横坐标绘制工作曲线，计算回归方程。 __《微 波萃取-UPLC 同时测定虎杖中 5 种主要活性成分的含量》
实验步骤
分别取虎杖 苷、白藜芦醇、蒽苷B、大黄素和大黄素甲醚对照品适量， 精密称定置于同一10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，混匀 ，制成质量浓度分别为0.444，0.240，0.180，0.403， 0.044g· L－1的溶液 作为混合对照品储备液。
1混合对照品储备溶液的制备
2供试品溶液的制备
取本品粉末（过3号筛）0.1g ，精密称定置50mL微波萃取罐中，精密加入25mL甲醇， 160℃微波萃取10min，放冷，用甲醇补足失重，滤过，取 续滤液用微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
微乳液相色谱法的特点
微乳液相色谱（MELC）法是一项液相色谱新 技术 ，它 不仅存 在常规 色谱的分 离机制 ，还存在 微乳液滴内 外 相 之 间的 分配 。 其与 常规 高 效液 相色 谱（HPLC）法相比 ，具有分 离 效率高和分离速度快的优越性，可用于复杂样品的分离； 血 清、尿液经 过简单的稀释 后便可以直 进样分析，无需 预处理；在梯度洗脱和低紫外波 长（190 nm）检测 方面 也有一 定的优势对于 MELC法的应 用，主 要涉及化学药 品中 多种成 分、药物制 剂以及 生物样 品的分析，而用 于中药成 分的分析 较少。笔 者采用 MELC法同 时测定 了 大黄中 5种蒽 醌类 衍生 物的 含量 ，方法 简便 、准 确 、可靠 ，取得 了满 意结果。
高效毛细管电泳法特点
• 高效液相色谱法用于测定 蒽醌类成分，但 HPLC 法的主 要缺点是 需要对样品进行预 处理 ，操作较为烦琐。 • 本研 究采用高 效毛细管电泳（ HPCE） 法 对大黄中的 2 种蒽醌类成分大黄素和 大黄 酚同时进行定 量分析 该 法具有 对样 品处 理 要求 低、分离 效能高等特点
实验步骤
3 微乳流动相的制备 4 色谱条件
色谱 柱：Hypersil ODS2（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流速 ：1mL· min ；柱温：28 ℃；检测波长：254 nm；流动相：2.5％ W/V）SDS-0.1％（V/V）正辛 烷-8.0％（V/V）正丁 醇-0.5％（V/V ）三乙 胺（磷酸调 pH值至 3.0）；进样量：15 μL。色谱见图 1。 0 5 10 15 20 25 30 35 min ----《微乳液相色谱法同时测定大黄 中5种蒽醌类衍生物的含量》 将SDS、正丁醇、正辛烷及含0.5％ 三乙胺的水溶液按顺序，超声15min，即得透明稳定的微乳，用磷 酸调pH值至3.0，经0.45μm滤膜过滤，备用。
微波萃取-UPLC的特点
本研究的UPLC测定数据与文献中对此5种活 性成分的HPLC含量测定结果 比较基本一致 ，但 分析时间从62min以上缩短到12min以内 大大提高了工作效率；研究中对不同提取方式 进行了比较,按上述色谱条件及样品制备方法 ， 发现微波萃取10min对各成分的提取率明 显高于超声30min，进一步提高了分析效率。 因此, 建立的虎杖多成分同时测定的微波萃取 特别适用于中药复杂体系的成分分析。
三、高效毛细管电泳法
建立高 效毛细管电泳（ HPCE） 法对三黄油擦剂 中 的有效成分大黄素和大黄酚进行 含量测定。 方 法： 采 用石英毛细管柱（ 65 cm × 55 μm，有 效长度 50 cm） ，缓冲体系为 10 mmol· L 硼砂 － 30 mmol· L SDS － 10% 乙醇，pH 值为 9． 8， 分离电压 30 kV，检 测波 长 254 nm。 结 果： 大黄 素和 大黄 酚在 20 min 内得 到很 好 的 分离，分 别在 0． 124 ～ 2． 470 g· L 、0． 104 ～2． 080 g· L 线性关 系良好，平均回收 率分 别为 99． 2% 、98． 6% 。
实验步骤
1混合对照品溶液制备
取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素 、大黄酚和大黄素甲醚对照品各适量，精密称定，置于50mL容量瓶 中，加适量甲醇超声溶解，再加甲醇至刻度，摇匀，即得混合对照 品溶液。临用前用0.45μm滤膜过滤，取续滤液进样。
2供试品溶液制备
取干燥后的各大黄药材粉末（过四号筛 ），精密称定，置具塞烧瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，加 热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足失重，摇匀，滤过。精 密量取续滤液5mL，置烧瓶中，挥去溶剂，加8％盐酸溶液10mL， 超声使溶解，再加氯仿10mL，加热回流1h，放冷，转移至分液漏 斗中，用少量氯仿分次洗涤烧瓶，洗液并入分液，分取氯仿层，酸 液再用氯仿提取3次，每次10mL，合并氯仿液，挥去溶剂，残渣加 少量甲醇使溶解，定量转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀 ，即得供试品溶液。临用前用0.45μm滤膜过滤，取续滤液进样。
二、 微波萃取-UPLC 法
方法：采用MDS-8型多通量密闭微 波化学工作站，以甲醇为溶剂， 160℃微波萃取制备供试品溶液； UPLC分析条件为 WatersAcquityHClassUPLC系统， BEHC 色谱柱（2.1mm×100mm，1.7 μ m）乙腈水为流动相梯度洗脱 流 速0.5mL·min－1, 柱温30℃, 检测波长226nm 。
大黄素
大黄素的理化性质
为橙色针状结晶(乙醇或12毫米下减压升华),熔点256～
257°。具有蒽源自文库的特殊反应。几乎不溶于水，溶于乙
醇及碱溶液，溶解度25℃(g/100ml饱和液)：乙醚0.140 、氯仿0.071、苯0.041、四氯化碳0.01。溶于苛性碱水 溶液、碳酸钠水溶液，氨溶液中显樱红色。
一、微乳液相色谱法
3标准曲线：将混合对照品储备液分别用甲醇稀释至2
，4，8，16，32，64倍，精密吸取上述稀释6份，每份约 0.1g，精密称定，分别照供试品溶液制液及储备液各1μL进 样，测定。分别以峰面积A为纵坐标，以进样浓度X（g· L ）为横坐标绘制工作曲线，计算回归方程。 __《微 波萃取-UPLC 同时测定虎杖中 5 种主要活性成分的含量》