培养基配制作业指导书
染色法、培养基和(微生物检验)试剂配制作业指导书
修改记录单染色法、培养基和（微生物检验）试剂配制作业指导书1 目的对染色法、培养基和试剂配制方法作出明确规定，为检测结果的准确性提供最基本的保证。
2 范围适用于微生物检验。
3 职责3.1微检人员负责培养基、试剂配制。
3.2微检人员掌握微生物的染色方法。
4 培养基和试剂配制名称、用途5 具体内容5.1革兰氏染色法5.1.1革兰氏染色液5.1.1.1结晶紫染色液成份：结晶紫 1.0g95%乙醇20.0ml1%草酸铵水溶液80.0ml 5.1.1.2革兰氏碘液成份：碘 1.0g碘化钾 2.0g蒸馏水300.0ml5.1.1.3 95%乙醇5.1.1.4沙黄复染液成份：沙黄0.25g95%乙醇10.0ml蒸馏水90.0ml5.1.2染色法5.1.2.1将涂片在火焰上固定。
5.1.2.2初染：滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。
5.1.2.3媒染：滴加革兰氏碘液，作用1 min，水洗。
5.1.2.4脱色：滴加95%乙醇脱色，水洗；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s，水洗。
5.1.2.5复染：滴加沙黄复染液，染1min，水洗，待干，镜检。
5.1.2.6结果判定：革兰氏阳性菌呈紫色；革兰氏阴性菌呈红色。
5.2一般培养基和专用培养基5.2.1营养琼脂5.2.1.1用途：用于一般细菌培养及细菌总数测定。
5.2.2.2成份（g/L）：蛋白胨10.0牛肉粉 3.0氯化钠 5.0琼脂15.0PH7.3±0.15.2.2.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121℃15 min高压灭菌备用。
5.2.2.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。
5.2.2孟加拉红培养基5.2.2.1用途：用于粮食、食品、饮料中霉菌、酵母菌计数。
5.2.2.2成份（g/L）：蛋白胨 5.0葡萄糖10.0磷酸二氢钾 1.0硫酸镁0.5孟加拉红0.03氯霉菌0.1琼脂15.05.2.2.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121℃20 min 高压灭菌备用。
培养基配置
1000ml
自然 pH
实验器材
牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂，1mol/LNaOH, 1mol/LHCl，KNO3，K2HPO4·3H2O， MgSO4·7H2O，FeS04·7H2O，马铃薯，蔗糖等。
试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙， pH 试纸(pH 5.5~9.0)，
pH 值调到一定的范围。 牛肉膏蛋白胨培养基配方
牛肉膏 蛋白胨
3.0 g 10.0g
NaCl
5.0g
水
1000mL
pH
7.4~7.6
高氏 I 号培养基配方
可溶性淀粉 20g
NaCl 0.5g
KNO3 1g K2HPO4·3H2O MgSO4·7H2O FeSO4·7H2O 琼脂 15—25g
0.5g 0.5g 0.01g
水 1000mL
pH 7.4~7.6
马铃薯培养基配方
马铃薯（去皮）
200g
葡萄糖（或蔗糖）
20g
琼脂 水
15~25g 1000ml
自然 pH 察氏培养基配方
蔗糖
30g
NaNO3
2g
K2HPO4
1g
KCl
0.5g
MgSO4· 7H2O
0.5g
FeSO4· 7H2O 琼脂
0.01g 15~25g
蒸馏水
以上熔化成液体，而在 45℃左右开始凝固成固体。在配制培养基时，根据各类微生物的特 点，就可以配制出适合不同种类微生物生长发育所需要的培养基。
培养基除了满足微生物所必需营养物质外，还要求有一定的酸碱度和渗透压。霉菌和酵
母菌的 pH 偏酸；细菌、放线菌的 pH 为微碱性。所以每次配制培养基时，都要将培养基的
培养基的配置方法
培养基的配置方法
1. 准备所需的化学试剂和溶剂：如氨基酸、葡萄糖、盐类、维生素、磷酸盐缓冲液等。
2. 将所需化学试剂按照配方比例称量或称取。
3. 将溶剂（通常为蒸馏水）加热至适当温度，然后将化学试剂逐一加入，并充分搅拌使其充分溶解。
4. 调节溶液的pH 值至合适的范围，通常为7.0。
5. 滤过溶液以去除悬浮物和异物。
6. 将溶液分装至培养皿或试管中。
7. 最后，对培养基进行高温灭菌，以杀灭可能存在的微生物污染。
需要注意的是，不同生物、不同细胞株所需的培养基成分、比例和条件可能会有所不同，因此在配置培养基时需要根据具体需求进行调整。
培养基配制记录范文
培养基配制记录范文实验目的：配制适合细菌生长的培养基，用于细菌的培养和研究。
实验材料和仪器：1.水槽2.称量器3.锅4.毛细管/试管5.营养物质：葡萄糖、纯化可溶淀粉、氨溶液、酵母粉、碱式天然脲酶6.培养物：细菌培养物实验步骤：1.准备工作：a.清洗水槽和锅，并用去离子水冲洗干净。
b.准备所需的营养物质和培养物。
2.配制培养基：a.取一定量的葡萄糖放入试管中，加入适量的去离子水，摇匀使其溶解。
b.同样地，取一定量的可溶淀粉放入试管中，并加入适量的去离子水，摇匀溶解。
c.分别取适量的氨溶液、酵母粉和碱式天然脲酶，溶解在试管中的去离子水中，摇匀使其溶解。
d.将以上配制好的试管溶液分别倒入锅中。
e.将锅放入水槽，加入一定量的去离子水，使其浸没在水中。
f.开始加热水槽中的水，将锅中的试管溶液均匀加热至沸腾。
g.注意观察配制过程中的变化，避免煮沸过程中的溢出。
3.加热溶液至沸腾：a.将锅中的试管溶液均匀加热，直到出现沸腾的现象。
b.保持锅中试管溶液的沸腾状态，以消除残余的微生物。
4.煮沸持续时间：a.将试管溶液沸腾持续一段时间，通常为15-20分钟，以确保杀灭所有的微生物。
b.煮沸时间结束后，关闭加热源。
5.微生物的过滤和倒装：a.倒一小部分培养基液体入孔口的培养皿。
b.使用过滤纸将剩余的培养基液体过滤，以除去杂质和微生物。
c.将过滤后的培养基液体倒入清洁的培养皿中。
6.存储：a.将制备好的培养基密封保存在冰箱中，可长期保存。
实验注意事项：1.在配制和操作过程中要注意无菌操作，避免细菌的污染。
2.配制培养基时要确保所有的配制物质溶解充分均匀。
3.在煮沸和过滤过程中要注意安全操作，避免烫伤和溅射。
4.实验结束后，要清洗实验仪器和设备，保持实验室的整洁。
总结：通过以上步骤，我们成功配制了适合细菌生长的培养基，并将其保存在冰箱中，以备之后的实验使用。
配制培养基是细菌研究的基础工作，对于细菌的培养和研究具有重要的意义。
作业指导书--洁净室(无尘车间)微生物检测指引 含试剂培养基配制实验原始记录表,无尘车间菌量检测报告表
工作指引名称:无尘车间微生物检测指引1 适用范围适用于无尘车间工作台面,工人手,沉降菌,浮游菌和纯化水的微生物检测工作.2 参考文件2.1 GB/T 16293~16294 医疗工业洁净(室)区浮游菌和沉降菌的测试方法2.2 中华人民共和国药典2015年版二部附录XIJ 微生物限度检查法2.3 GB 15980 一次性使用医疗用品卫生标准2.4 COP09 菌量监控程序3 定义3.1 浮游菌:悬浮在空气中的活的微生物粒子,使用专用的仪器,通过专门的培养基,在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌活数.3.2 沉降菌:空气中的活的微生物粒子,通过专门的培养基,在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌活数.3.3 CFU:菌落形成单位colony-forming unit.4 职责4.1 实验工程师:熟悉测试,指导实验员测试,检查测试报告.4.2 实验员:负责按照指引执行微生物采样工作并出具报告.5 指引5.1 试剂/培养基的配制5.1.1 根据采样数量,按规定要求配制好培养基;5.1.2 将配制好的培养基分装到三角瓶中密封用白纸包好;将平皿用白纸包好,所有物品经121℃高压蒸气灭菌30min;5.1.3 灭菌结束后将培养基冷却至45～50℃后倾注到无菌平皿中,凝固,倒置,置36±1℃培养18～24小时,不得有菌生长;5.1.4 根据采样数量,用量筒分装0.9%生理盐水10ml至试管中密封用白纸包好,将相应数量的平皿,移液管,试管,带塞三角瓶,棉拭子用白纸包好,所有物品经121℃高压蒸气灭菌30min;5.1.5 灭菌结束后将培养基置于60～70℃的恒温水浴中,生理盐水管待冷却后可到无尘车间进行采样;5.2 实验员每周对生产车间进行微生物检测,采样点的数量如下:5.2.1 无尘车间微生物检测的采样点共27个;工作指引名称:无尘车间微生物检测指引具体采样点为: 沉降菌5个; 浮游菌3个; 工作桌面8个,工人手8个,为工人桌面采样点的相应点; 更衣室1个; 纯化水2个;生产车间采样点的数量仅供参考,可根据生产车间的生产情况进行更改.5.3 工作台面微生物采样按以下步骤进行:5.3.1 先将灭菌生理盐水管标记好测试位置和序号;5.3.2 实验员带上无菌手套,用75%酒精将手,定位架和剪钳进行消毒,必要时用酒精灯烧灼定位架和剪钳,加速酒精挥发;5.3.3 选定采样位置,固定好定位架;5.3.4 取出灭菌棉拭子,打开灭菌生理盐水管塞子,将棉拭子浸入灭菌生理盐中,待棉拭子湿透后,在试管壁上轻压数下,除去过多的水分;5.3.5 用棉拭子在定位架内来回涂抹10次;5.3.6 将棉拭子与手接触的部份剪去,棉拭子头放入灭菌生理盐水管中送检;5.3.7 每对一个采样点采样结束后,应用75%酒精对手,定位架和剪钳进行消毒.5.4 工人手微生物采样按以下步骤进行:5.4.1 将灭菌生理盐水管作好标记,与工作台面的采样标记相对应;5.4.2 用75%酒精对手进行消毒,取出灭菌棉拭子,打开灭菌生理盐水管塞子,将棉拭子浸入灭菌生理盐中,待棉拭子湿透后,在试管壁上轻压数下,除去过多的水分;5.4.3 要求被检人五指并拢,将浸有灭菌生理盐水的棉拭子在右手指曲面,从指尖,甲沟至指端来回涂擦10次;5.4.4 将棉拭子与手接触的部份剪去,棉拭子头放入灭菌生理盐水管中送检;5.4.5 每对一个采样点采样结束后,应用75%酒精对手剪钳进行消毒.5.5 沉降菌采样步骤如下:5.5.1 将培养皿按采样位置作好标记;5.5.2 布置采样点时,应尽量避开尘粒较集中的回风口;5.5.3 将培养皿放置在离地0.8～1.5m左右的工作桌面上,揭开培养皿盖子,使培养基暴露在空气中采样30min;5.5.4 全部采样结束后,将培养皿盖上并倒置.5.5.5 培养皿在用于检测时,为避免培养皿运输或搬动过程造成的影响,应同时进行阴性对照试验,每次或每个区域取1个对照皿,与采样皿同法操作但不需暴露采样,然后与采样后的培养皿一起放入培养箱内培养,结果应无菌落生长.工作指引名称:无尘车间微生物检测指引5.6 浮游菌采样步骤如下:5.6.1 采样前,先用75%酒精清洗采样器的顶盖,转盘及罩子的内外面;5.6.2 开启浮游菌采样器,使仪器中的残余消毒剂蒸发,时间不少于5min,并检查流量并根据采样量调整设定采样时间,每个采样点采样500L;5.6.3 布置采样点时,采样点位置应离地0.8～1.5m左右,送风口测点位置应离开送风面30cm左右;5.6.4 用75%酒精对手进行消毒后,将培养皿放入转盘内,盖上多孔取样头盖子,揭开保护盖,开启浮游菌采样器进行采样;5.6.5 采样结束后,对已采样的培养皿作上标记;5.6.6 全部采样结束后,用75%酒精轻轻喷射仪器内罩子的内壁和转盘;5.6.7 培养皿在用于检测时,为避免培养皿运输或搬动过程造成的影响,应同时进行阴性对照试验,每次或每个区域取1个对照皿,与采样皿同法操作但不需暴露采样,然后与采样后的培养皿一起放入培养箱内培养,结果应无菌落生长.5.7 纯化水采样步骤如下:5.7.1 打开水龙头,让水自流10min后,用已灭菌的带塞三角瓶取样100ml,作样品1;5.7.2 同法操作,作样品2;5.7.3 采样结束后,将瓶口密封,样品送至实验室进行检测.5.8 采样后的微生物检测5.8.1 以培养皿采样的,将培养皿倒置,于36±1℃培养24～48小时,计数;5.8.2 以采样管采样的,将采样管在调速振荡器上振打30min, 混匀后在洁净工作台上稀释成10-1或10-2的倍数浓度;用已灭菌的移液管吸取1ml各稀释度溶液注入无菌平皿中,立即倾注培养基,混匀,凝固,置36±1℃培养24～48小时,计数;5.8.3 纯化水中微生物的检测步骤如下:5.8.3.1 取供试品10ml,用PH7.0无菌气化钠-蛋白胨缓冲液稀释成1:10,1:102,1:103等稀释级的供试液;5.8.3.2 取相应稀释级的供试液1ml置无菌平皿中,立即倾注培养基,混匀,凝固,倒置培养,每稀释级每种培养基至少制备2个平皿;5.8.3.3 另取试验用的稀释液1ml置无菌平皿中,注入培养基,混匀,凝固,倒置培养,作阴性对照,每种计数用的培养基各制备2个平皿,均不得有菌生长;5.8.3.4 除另有规定外,细菌培养3天,霉菌,酵母菌培养5天,逐日观察菌落生长情况,必要时,可适当延长培养时间到7天进行菌落计数并报告;工作指引名称:无尘车间微生物检测指引5.8.3.5 细菌,酵母菌宜选取平均菌落数小于300cfu, 霉菌宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级,作为菌数报告(取两位有效数字)的依据.以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告1ml供试品中所含的菌数.5.9 结果判定5.9.1 工作台面菌量应≦250cfu/cm2;5.9.2 工人手菌量应≦300 cfu/hand;5.9.3 沉降菌数10 000级应≦3个/皿,100 000级应≦10个/皿;5.9.4 浮游菌浓度10 000级应≦100个/m3,100 000级应≦500个/m3;5.9.5 纯化水菌量应≦100cfu/ml;5.10 如以上的检测结果有菌量超标时,实验员应立即通报相关部门并按COP14.03的要求发出内部纠正行动要求表作出跟踪及纠正改善行动.5.11 注意事项5.11.1 所有样品采样结束后应于1小时内送至实验室进行检测,当天采样的样品必须在当天完成检测;5.11.2 如样品不能立即检测,必须放入冰箱内冷藏(约4℃).5.12 检测报告编号规则M-FF-XXX-YYYYFF: 设备编号XXX: 测试报告流水号YYYY: 年份6 文件保存期限:相关检测报告保存五年.7 附录7.1 试剂/培养基配制实验原始记录7.2 无尘车间菌量检测报告工作指引名称:无尘车间微生物检测指引附录7.1试剂/培养基配制实验原始记录工作指引名称:无尘车间微生物检测指引附录7.2 无尘车间菌量检测报告(英文)工作指引名称:无尘车间微生物检测指引附录7.2 无尘车间菌量检测报告(中文)工作指引名称:无尘车间微生物检测指引修订履历。
微生物培养基配制及菌种管理作业指导书草稿
**HB-CZ******环境监测站培养基配制及标准菌种的管理作业指导书HB-CZ-085制定人：批准人：批准日期：实施日期：培养基配制及标准菌种的管理作业指导书1适用范围本作业指导书适用于无菌实验室培养基配制和标准菌种、参照菌种的管理。
2内容2.1培养基配制2.1.1实验室中各种培养基按实验需要进行配制，每次配制应有记录。
2.1.2配制好的培养基，不宜存放过久，以少量勤配为宜，存放于0～4℃，可保存7天。
2.2标准菌种的管理2.2.1实验室内保存的标准菌种必须从认可的收集途径获得。
2.2.2标准菌种必须进行确认试验。
2.2.3菌种传代从供应商处购买的冷冻干燥的菌种为第0代，冷冻干燥的原始菌种开启后转种后为第1代，直至到第3代为工作菌种。
按菌种说明书要求复溶所转菌种并转接于适当的营养琼脂培养基内，作为第一代。
经菌种特性鉴定后，挑取纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管，作为第二代。
将第二代保存，另取1支第二代冷冻保存管转种于平板和斜面培养基上，平板上的菌种制成冷冻保存管（第三代）；斜面养基适当温度培养后作为工作用菌种（第三代）。
将（第三代）菌种冷冻或低温保存用于试验。
应及时进行菌种传代，避免菌种失活老化。
当工作菌种代数小于5时，可直接用上代工作菌种转接下代工作用菌种。
转接第四代，直至四代转为五代。
标准菌种的传代次数不得超过5代。
2.2.4菌种确认每次传代中至少要对菌种进行形态学观察和革蓝染色检查，必要时应做菌种鉴定试验，所有被确认受到污染的菌种应及时销毁，不得用于常规实验。
用于总大肠菌群和粪大肠菌群项目检验的大肠埃希菌的特性如下：2.2.4.1形态特征： G-直短杆状杆菌、无芽胞、有周身鞭毛，能运动。
有菌毛。
2.2.4.2培养特性：兼性厌氧，营养要求不高，普通营养琼脂培养基上生长良好，形成较大的圆形、光滑、湿润、灰白色的菌落。
2.2.4.3分离培养：伊红美兰培养基（EMB平板）上呈现深紫黑色，具有金属光泽的菌落；紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落；淡紫红色，中心色较深的菌落。
实训指导-培养基的制备.
实训指导——培养基的制备【实验目的】1．掌握培养基制备的基本过程。
2．熟悉常用培养基的原理、种类及其用途。
【实验材料】1．试剂氯化钠、蛋白胨、琼脂粉、抗凝兔血、牛肉膏、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。
2．器材锥形瓶、量筒、吸管、精密pH试纸、无菌试管、硅胶塞、天平、高压蒸气锅、血清凝固器、脱脂棉、滤纸、漏斗、无菌平皿。
【实验方法】1．培养基制备的基本过程包括调配成分、溶解、校正pH、澄清过滤、分装、灭菌、质量检查和保存。
(1) 调配成分：在锥形瓶或大容量烧瓶中，加定量蒸馏水，按培养基处方用量准确称取各种成分，使其充分混合。
(2) 溶解：将调配好的混合物在沸水浴中，使其完全溶解。
(3) 校正pH：一般将培养基的pH调至7.2~7.6左右。
经高压灭菌后其pH可发生0.1~0.2变动。
若用NaOH校正，高压蒸汽灭菌后pH下降0.1~0.2；若用NaCO3校正，高压蒸汽灭菌后pH升高0.1~0.2。
(4) 滤过澄清：自配的培养基通常有一些混浊或沉淀，需滤过澄清后方可使用。
液体或半固体培养基常用滤纸过滤，固体培养基在熔化后趁热以绒布或双层纱布加脱脂棉过滤。
(5) 分装：①基础培养基：一般分装于容量为500ml锥形瓶灭菌后备用，以便随时分装倾注平板或配制营养培养基等；②琼脂斜面：通常在融化后分装于试管，量约为试管高度的1/4~1/3，加塞后灭菌，趁热摆成斜面，斜面长度约为试管长度的2/3，且保持试管下端有1cm柱高；③半固体培养基：分装量为试管容量的1/4~1/3，加塞灭菌后趁热直立凝固；④琼脂平板：先将灭菌琼脂融化后冷却至50℃左右，以无菌操作倾注于灭菌平皿内，待琼脂凝固后将平皿翻转，置4℃保存备用。
(6)灭菌：①由耐热物质配制成的培养基(如普通营养琼脂等)常用高压蒸汽灭菌，条件为103.43kPa，15~20min；含糖培养基以68.95kPa，10~15min为宜，以免破坏糖类物质；②不耐高热的物质配制成的培养基，如糖类、明胶和牛乳等常用流通蒸汽灭菌，方法是加温80~100℃30min，每天1次，连续3天；③富含蛋白质的培养基(如含血清或鸡蛋清的培养基)需用血清凝固器灭菌，方法是将配制好的培养基摆放在血清凝固器内(一般做成斜面)，第1天75℃、30min，第2天80℃、30min，第3天85℃、30min，在3次灭菌的间隙将培养基取出，置35℃孵箱中过夜；④对高营养液态的不耐热培养基，如血清、细胞培养液等，则可用滤过除菌。
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本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！== 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ ==培养基作业指导书篇一：培养基配制操作作业指导书德信诚培训网培养基配制作业指导书1、目的：建立培养基配制的基本操作，为培养基配制人员提供正确的操作规程。
2、引用标准：GB4789.2 附录A。
3、范围：本标准适用于微生物限度检查用培养基的配制。
4、责任人：QC微生物检验员、对本标准的实施负责。
5内容：5.1.本规程中配制所用培养基均为脱水干燥商品培养基。
5.2.微生物检查用培养基的配制5.2.1配制用具：电热手提式压力蒸汽灭菌器、电热炉、搪瓷缸、玻璃棒、三角瓶、棉塞、细绳子、牛皮纸、天平、砝码、药匙、量筒。
5.2.2根据配制量称取干燥培养基基质，置搪瓷缸中。
5.2.3根据培养基瓶上标签说明，加入适量纯化水，使溶解。
5.2.4将搪瓷缸放到电热炉上煮沸。
5.2.5根据培养基瓶上标签说明，调节pH值，使灭菌后pH值达到规定的要求。
更多免费资料下载请进：好好学习社区篇二：培养基配制作业指导书(SOP)培养基配制作业指导书(SOP)作者：检验天空论坛会员宝马篇三：作业指导书金华龙鼎检测技术有限公司作业指导书文件编号：JHLD/ZD-201X编制：检测部、质管部审批：受控状态：分发号：版本号：第A版持有部门：公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定 GB/T 18204.1-201X1、定义 1.1、撞击法采用撞击式空气微生物采用器采用，通过抽气动力作用，使空气通过狭缝或小孔而产生高速气流，从而使悬浮在空气中的带菌粒子撞击到营养琼脂平板上，经37℃、48h培养后，计算每立方米空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。
1.2、自然沉降法直径9cm的营养琼脂平板在采样点暴露5min，37℃、48h培养后，计数生长的细菌菌落的采样测定方法。
3操作步骤3.1 设置采样点时，应根据现场的大小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点。
实验三 培养基的制备及玻璃器皿的包扎灭菌 实训指导书
实验三培养基的制备及玻璃器皿的包扎灭菌【目的要求】1、掌握培养基的制备方法。
2、掌握高压蒸气灭菌技术。
3、熟悉玻璃器皿的包扎方法。
【材料和用品】1、溶液或试剂10%HCl、10%NaOH、营养琼脂、蒸馏水、可溶性淀粉、葡萄糖、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、KNO3、NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O。
2、仪器或其他用具pH试纸、培养基分装器、高压蒸气灭菌锅、玻璃棒、天平、牛角匙、记号笔、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、量简纱布、棉花、牛皮纸（或报纸）。
【实验内容与方法】（一）培养基的配置1、营养琼脂培养基的配制其配方法如下：按比例配方配制营养琼脂培养基。
（1）称量和溶解按培养基配方逐一称取营养琼脂粉加入烧杯中，再加定量无菌水，用玻棒搅匀，加热溶解，待全部溶解后，加水补足因加热蒸发的水量。
注意：在加热融化时要不断搅拌，避免琼脂糊底烧焦。
（2）调节pH用精密pH试纸测培养基的pH，按pH的要求用质量浓度100g/L NaOH或体积百分数10%HCl调整至所需pH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测试其pH值。
（3）补水至刻度（4）过滤趁热用纱布过滤即可。
如果培养基杂质很少或实验要求不高，可不过滤。
（5）分装、包扎玻棒引流于锥形瓶内，塞上棉塞，用报纸包扎。
注意：在玻棒引流时，避免瓶口沾上培养基而引起杂菌感染2、高压蒸气灭菌的操作过程（1）加水立式锅是直接加水至锅内底部隔板以下1/3处。
有加水口者由加水口加入至止水线处。
（2）装锅把需灭菌的器物放入锅内（请注意：器物不要装得太满，否则灭菌不彻底），加盖时将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。
关严锅盖（对角式均匀拧紧螺旋）。
（3）加热用电源或煤气加热，同时打开排气阀，使水沸腾以排出锅内的冷空气。
待冷空气完全排出后关上排气阀。
让锅内温度随蒸汽压力增加而逐渐上升，当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。
培养基配制SOP
培养基配制SOP1.目的确保各种培养基及稀释液配制过程标准、规范。
2.范围2.1.本SOP适用于pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的配制，pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液可作为供试品稀释液。
2.2.本SOP适用于营养肉汤培养基的配制，营养肉汤培养基用于一般细菌培养。
2.3.本SOP适用于改良马丁培养基的配制，改良马丁培养基用于生物制品无菌试验，检查真菌和腐生菌。
2.4.本SOP适用于改良马丁琼脂培养基的配制，改良马丁琼脂培养基用于生物制品无菌试验，检查真菌和腐生菌。
2.5.本SOP适用于硫乙醇酸盐流体培养基的配制，硫乙醇酸盐流体培养基用于药品及生物制品等的无菌试验，检查需氧菌和厌氧菌。
2.6.本SOP适用于玫瑰红钠琼脂培养基的配制，玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌总数测定。
2.7.本SOP适用于营养琼脂培养基的配制，营养琼脂培养基用于一般细菌培养。
2.8.本SOP适用于胰酪胨大豆肉汤培养基的配制，胰酪胨大豆肉汤培养基用于真菌、需氧菌无菌检查。
2.9.本SOP适用于0.1％蛋白胨水溶液配制，0.1％蛋白胨水溶液可作为供试品稀释液。
2.10.本SOP适用于胰酪胨大豆琼脂培养基的配制，用于一般细菌分离培养。
2.11.本SOP适用于品红亚硫酸钠琼脂培养基的配制，用于饮用水、水源水中总大肠菌群的选择性分离和鉴别。
2.12.本SOP适用于酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基的配制，用于含蜜浆剂酵母菌数测定。
3.定义无4.职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行；4.2.QA、QC组长质量管理部经理负责本规程的审核；4.3.质量总监负责批准本规程；4.4.QA负责本规程执行的监督。
5.引用标准厂家说明书6.材料6.1.pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液（干粉），营养肉汤培养基（干粉），改良马丁培养基（干粉），改良马丁琼脂培养基（干粉），硫乙醇酸盐流体培养基（干粉），玫瑰红钠琼脂培养基（干粉），营养琼脂培养基（干粉），胰酪胨大豆肉汤培养基（干粉），蛋白胨（干粉），胰酪胨大豆琼脂培养基（干粉），酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（干粉），品红亚硫酸钠琼脂（干粉）。
培养基配制作业指导书
文件制修订记录1.0目的规定了培养基配制的基本要求及方法。
2.0范围适用于大肠菌群、细菌总数、霉菌及酵母菌检测时用培养基配制。
3.0术语无4.0职责微生物检验员负责对培养基的正确配制。
5.0工作流程图无6.0内容及要求6.1乳糖胆盐发酵培养基6.1.1 用途：用于测定大肠菌群的乳糖发酵实验；6.1.2 成分（g/l）：蛋白胨（20g）、乳糖（10g）、猪胆盐（5g）、溴甲酚紫（0.01g）；6.1.3 配制方法：称取乳糖胆盐发酵培养基35g，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，115℃高压灭菌15min，备用；6.1.4 注意事项：灭菌后应在无菌环境下操作，出现结块严禁继续使用。
6.1.5储存条件：常温、密封、干燥处。
6.2 平板计数琼脂6.2.1 用途：用于细菌总数测定；6.2.2 成分（g/l）：胰蛋白胨（5g）、酵母浸粉（2.5g）、葡萄糖（1g）、琼脂（15g）；6.2.3 配制方法:称取本品23.5g，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高压灭菌15min后备用；6.2.4 注意事项：灭菌后应在无菌环境下操作，出现结块严禁继续使用。
6.2.5储存条件：常温、密封、干燥处。
6.3 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤6.3.1 用途：用于大肠菌群、大肠杆菌、粪大肠菌群的初发酵试验及大肠杆菌（MPN）计数；6.3.2 成分（g/l）：胰蛋白胨（20g）、月桂基硫酸钠(0.1g)、乳糖（5g）、硫酸氢二钾（2.75g）、氯化钠（5g）、磷酸二氢钾（2.75g）；6.3.3 配制方法:称取本品35.6g，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装到有玻璃小导管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15min后备用；6.3.4 注意事项：灭菌后应在无菌环境下操作，出现结块严禁继续使用。
6.3.5储存条件：常温、密封、干燥处。
6.4煌绿乳糖胆盐肉汤6.4.1用途：用于大肠菌群复发酵试验，（MPN）计数及证实试验。
培养基配方及配制方法
培养基配方1 斜面菌种保存培养基1.1PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸0.5h，纱布过滤，滤液补足1000ml，再加15g葡萄糖和15-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。
1.2麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。
太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的3~4倍加水，搅拌均匀后，37℃左右浸泡1小时，然后缓缓加温至55~63℃（在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温4~6小时（用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。
在糖化过程中，应每小时搅拌一次。
取过滤后的清液，加1.8%琼脂，分装试管，每试管约5-10ml （视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。
2基菌落总数检测2.1平板计数琼脂培养基将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g加入蒸馏水1000ml中，煮沸溶解后，调pH，然后在121℃下灭菌15min，取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。
3志贺氏菌检测3.1 GN增菌液成分：胰蛋白胨：20g，葡萄糖：1g，甘露醇：2g，柠檬酸钠：5g，去氧胆酸钠0.5g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢二钾1.5g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。
pH7.0制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH为7.0，分装，在115℃高压灭菌15min。
3.2 HE琼脂成分：胨：12g，牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆碱20g，氯化钠5g，琼脂18~20g，蒸馏水1000ml0，0.4%溴麝香草酚蓝溶液16ml，Andrade指示剂20ml.，甲液20ml，乙液20ml。
pH7.5 制法：将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液，将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷却至50~55℃，倾注浇平板。
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本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！== 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ ==培养基作业指导书篇一：培养基配制操作作业指导书德信诚培训网培养基配制作业指导书1、目的：建立培养基配制的基本操作，为培养基配制人员提供正确的操作规程。
2、引用标准：GB4789.2 附录A。
3、范围：本标准适用于微生物限度检查用培养基的配制。
4、责任人：QC微生物检验员、对本标准的实施负责。
5内容：5.1.本规程中配制所用培养基均为脱水干燥商品培养基。
5.2.微生物检查用培养基的配制5.2.1配制用具：电热手提式压力蒸汽灭菌器、电热炉、搪瓷缸、玻璃棒、三角瓶、棉塞、细绳子、牛皮纸、天平、砝码、药匙、量筒。
5.2.2根据配制量称取干燥培养基基质，置搪瓷缸中。
5.2.3根据培养基瓶上标签说明，加入适量纯化水，使溶解。
5.2.4将搪瓷缸放到电热炉上煮沸。
5.2.5根据培养基瓶上标签说明，调节pH值，使灭菌后pH值达到规定的要求。
更多免费资料下载请进：好好学习社区篇二：培养基配制作业指导书(SOP)培养基配制作业指导书(SOP)作者：检验天空论坛会员宝马篇三：作业指导书金华龙鼎检测技术有限公司作业指导书文件编号：JHLD/ZD-201X编制：检测部、质管部审批：受控状态：分发号：版本号：第A版持有部门：公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定 GB/T 18204.1-201X1、定义 1.1、撞击法采用撞击式空气微生物采用器采用，通过抽气动力作用，使空气通过狭缝或小孔而产生高速气流，从而使悬浮在空气中的带菌粒子撞击到营养琼脂平板上，经37℃、48h培养后，计算每立方米空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。
1.2、自然沉降法直径9cm的营养琼脂平板在采样点暴露5min，37℃、48h培养后，计数生长的细菌菌落的采样测定方法。
3操作步骤3.1 设置采样点时，应根据现场的大小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点。
植物组织培养技术实验指导书
《植物组织培养技术》实验教学准备工作一、配制母液所需药品、器材1、 Ms成分19种（N6同）2、蔗糖3、琼脂4、激素（NAA、6-BA、IBA、IAA、KT、ZT等）电子天平、（试管）、容量瓶、烧杯、称量瓶、吸水纸、角匙、母液瓶（棕色）、蒸馏水二、无菌室所需物品1、95%酒精、70%酒精、新洁尔灭、甲醛、高锰酸钾、紫外灯、工业酒精2、枪式镊子（16 cm,20cm）、尖镊（16cm）、解剖刀、柄、接种针、手术剪、喷雾器、药棉、纱布、火柴• 3、广口瓶若干、酒精灯、漏斗、无菌培养皿三、学生配制培养基、分装、高压灭菌所需器具1、培养瓶（PP,120ml三角瓶）(15mm*145mm试管)2、电炉3、烧杯（1000ml）移液管（ 10ml、5ml、2ml、1ml）、吸球4、量筒（100ml、50ml）、角匙、天平、剪刀、吸水、纸5、pH值精密试纸（5.4-7）6、氢氧化钠、盐酸（1N）、蒸馏水、牛皮纸、棉绳7、试剂瓶、（激素、酸碱）、滴管、标签、玻棒四、消毒剂（处理外植体）升汞（氯化汞）、酒精、漂白粉、双氧水、次氯酸钠实验一、 Ms培养基的配制、分装和灭菌植物组织培养的成功与否，除培养材料本身的因素外，第二个因素就是培养基。
应根据培养植物的种类和部位，选择适宜的培养基。
另外植物组织培养是在无菌条件下培养植物的技术。
要达到无菌操作和无菌培养，必须有一定的无菌环境（高压灭菌，无菌室，超净工作台等），使用无菌的容器和用具，进行无菌操作，使培养的植物材料在一定的温度、湿度、光照、营养条件下，生长、发育和繁殖。
一、目的要求学习常用培养基母液的配制方法、培养基的分装和灭菌技术二、实验用品1、仪器•高压灭菌锅、天平、电炉2 、玻璃器皿•烧杯、量筒、移液管、、玻棒、吸球、培养瓶、培养皿、500ml三角瓶、角匙、吸水纸3、药品与试剂•Ms母液（见表1-1）氢氧化钠1N、盐酸1N、蔗糖、琼脂、2，4-D（1mg/ml）、NAA（1mg/ml）、蒸馏水三、实验方法（一）、培养基的配制配制培养基前要先配制母液。
培养基的配置操作流程
培养基的配置操作流程
一、准备培养基材料
1.确认所需培养基种类
（1）根据植物种类选择合适培养基
（2）确定所需培养基数量
2.准备培养基原料
（1）购买或准备培养基原料
（2）确保培养基原料质量
二、配置培养基
1.计量原料
（1）确定配方比例
（2）按配方比例称量原料
2.混合原料
（1）将原料放入容器中
（2）均匀混合原料
3.调节湿度
（1）根据需要加入适量水分
（2）混合至适当湿度
三、消毒处理
1.确定消毒方式
（1）选择合适的消毒方法
（2）确定消毒时间和温度
2.进行消毒
（1）将培养基置于消毒设备中
（2）进行消毒处理
四、包装存储
1.包装培养基
（1）将处理好的培养基放入包装袋中（2）封口包装袋
2.存储培养基
（1）将包装好的培养基存放在阴凉干燥处（2）避免阳光直射和潮湿环境。
培养基配制201603-2
实验一：培养基母液配置（8、9）1.清洗器皿（初次使用注意事项）并晾干。
2.配置N6培养基等母液（每种母液体积100ml）3.培养皿（每组10个）清洗、晾干、报纸包裹、线绳捆扎、灭菌烘干4.蒸馏水灭菌天平的用法：水平调节；称重时需要关好天平所有玻璃窗。
药品内部的塑料盖，记得盖上，如果不明，擦拭干净再盖上。
定容：先称2/3体积水，然后顺序加试剂，前一试剂溶解后，加另一试剂，最后用滴定瓶定容。
值日：清洁桌面、地面；所有物品使用后归位（天平盖上罩子）；座椅归位；不迟到早退，需要的克数=（0.166g/147g）*165g摩尔浓度=0.166/147=x/1651）N6培养基母液（实际使用为20x）：本次实验做100ml 10xKNO3 2.830gCaCl2·2H2O 0.166gMgSO4·7H2O 0.135gKH2PO40.400g(NH4)2SO40.463g注：配制时按表中所列顺序逐一添加，每种成分溶解后再溶解另外一种成分。
2）B5微量母液：本次实验做：1000ml (100倍)含KI 0.0750gH3BO30.3000gMnSO4·H2O 1.0000gZnSO4·7H2O 0. 2000gNa2MoO4·2H2O 0.0250gCuSO4·5H2O 0.0025gCoCl2·6H2O 0.0025g注：本次实验各试剂用量过少，精确度不够，可全班3个组先做1000X，再平均分成3份给每个组。
天平用万分之一天平。
3）B5有机母液：烟酸（Nicotinic acid）1mg/ml盐酸吡哆醇(VB6)1mg/ml盐酸硫胺素(VB1)10 mg/ml肌醇(myo-Inositol) 10 mg/ml4)铁盐：本次实验做：100ml (100倍)FeSO4·7H2O 0.278gNa2EDTA·2H2O 0.373g注：配制顺序如下1.称取0.278g FeSO4·7H2O溶解于20ml去离子水中（A）。
培养基配制作业指导书(SOP)
6、用法
将采取的血液标本，以无菌手续注入培养瓶中（血液1ml，培养液10ml），置35℃培养箱内，每天1次取出观察结果。如有细菌生长，可出现数种不同的表现，应随时作分离培养，可选用血琼脂、伊红美蓝琼脂及巧克力琼脂平板等。无细菌生长表现的培养瓶，需连续观察7d，仍无细菌生长方可弃去。在观察的过程中，至少应作两次分离培养。
4、该作业指导书变动程序
本作业指导书程序的改动，可由任一使用本作业指导书的工作人员提出，并报经下述人员审核、批准和签字：专业主管、科主任。
5、工作程序
5.1蛋白胨(或月示胨)10g，氯化钠5g，肉浸液（或心浸液）1L，葡萄糖3g，枸橼酸钠3g，5g/L对氨基苯甲酸水溶液10ml，1mol/ L硫酸镁溶液20ml，青霉素酶1000 U。
5工作程序51蛋白胨或月示胨10g氯化钠5g肉浸液或心浸液1l葡萄糖3g枸橼酸钠3g5gl对氨基苯甲酸水溶液10ml1mol硫酸镁溶液20ml青霉素酶100052将蛋白胨氯化钠混合于肉浸液中加热溶解再加入葡萄糖枸橼酸钠对氨苯甲酸及硫酸镁继续煮沸5min并补足失水调整ph至78
培养基配制作业指导书(SOP)
编制/日期
*****/2005.01.20
审核/日期
*****/2005.01.20
批准/日期
*****/2005.02.20
注:
⑴枸橼酸钠为抗凝剂，可使血液加入培养基中不凝固。
⑵对氨基苯甲酸主要中和血液中磺胺类药物的抑菌作用。
培养基的成分和配制方法
培养基的成分和配制方法培养基的成分和配制方法1.营养肉汤培养基牛肉膏 0.3克蛋白胨 1.0克NaCl 0.5克水 100毫升pH 7.0～7.2在烧杯中加水，称取牛肉膏、蛋白胨和NaCl，加热溶化后，调节pH值至7.0～7.2。
分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。
常用于培养细菌。
2.营养琼脂培养基在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。
常用于培养细菌。
3.肉汁蛋白胨液体培养基牛肉 500克蛋白胨 10克NaCl 5克pH 7.1～7.2取新鲜牛肉500克，去净脂肪、筋腱后，绞碎或剁碎，加水1000毫升浸泡，15℃下放置12小时或50℃下放置半小时。
用纱布将肉汁过滤，补足失水。
向肉汁中加入蛋白胨和食盐。
将肉汁加热，放入苏打（碳酸钠）至红色，调整pH值。
分装，高压蒸汽灭菌。
将上述已灭菌的培养基用棉花滤去凝集的蛋白质，制成液体培养基，如需制成固体培养基，可在每100毫升液体中加入2克琼脂，加热溶化后，分装，再次进行高压蒸汽灭菌。
常用于培养细菌。
4.高氏一号培养基（淀粉琼脂培养基）可溶性淀粉 2克K2HPO4 0.05克MgSO4·7H2O 0.05克KNO3 0.1克NaCl 0.05克FeSO4 0.001克琼脂 2克水 100毫升pH 7.2～7.4在烧杯中加水95毫升，加热至沸腾，取可溶性溶粉2克，用5毫升水调成糊状，倒入沸水中和匀。
再称取其它药品，陆续加入烧杯内（待一种药品溶解后，再加入第二种药品）。
待全部药品溶解后，停止加热，补足失水，调pH值至7.2～7.4。
分装后，高压蒸汽灭菌。
本培养基常用于培养放线菌。
5.马铃薯蔗糖培养基马铃薯 200克蔗糖 10克琼脂 20克水 1000毫升自然pH称取200克马铃薯片，加水1000毫升，煮沸半小时，用纱布过滤，补足失水。
在上述滤汁中加入10克蔗糖、20克琼脂，加热使琼脂熔化。
分装后，高压蒸汽灭菌。
常用于培养酵母菌。
6.麦芽汁培养基将从啤酒厂买来加有啤酒花的麦芽汁，装入锥形瓶中，加塞高压蒸汽灭菌。
培养基处方本2
尿素培养基成份：蛋白胨0．1克氯化钠0．5克磷酸二氢钾0．2克尿素0．2克（或10%2毫升）葡萄糖0．01克（或10%葡萄糖0．1毫升）H2O 100毫升酚红（0．2%）0．4毫升制法：1除葡萄糖，尿素外把其它药品称好放入水中煮沸，使溶解，调PH7．2过滤，15磅高压灭菌15分钟．2配制尿素（灭菌）液：每100毫升基液内加2毫升．3配制10%葡萄糖（灭菌）每100毫升加0．1毫升．4分装小试管待用．标准：1灭菌试验合格．2接种变形杆菌24小时呈红色．用途：鉴定变形杆菌用．胆盐中性红琼脂成份：蛋白胨琼脂PH7．2-7．4 5000毫升胆盐2．5克乳糖5．0克对氨基苯甲酸25毫克1%中性红溶液25毫升制法：将胆盐，对氨基苯甲酸，乳糖趁热加入已灭菌之蛋白胨琼脂中，待冷至50-60℃时，加入1%中性红液2．5毫升，混合后即倾注平皿，凝固待用．*：1%中性红：1克中性红加酒精60毫升，加水40毫升丙二酸盐培养基（缩苹果酸钠）成份：丙二酸钠0．3克酵母浸膏0．1克Nacl 0．2克硫酸铵0．2克K2HPO4 0．06克KH2PO4 0．04克水100毫升PH6．8，高压灭菌备用．0．2%溴麝香酚兰乙醇1．25毫升制法：与枸椽酸盐利用试验相类似，是测定细菌能否利用丙二酸盐与碳源．无机铵盐为氨源而生长，生长者使培养基变成碱呈兰色．鉴定：克氏杆菌（+）赫夫尼亚（+）沙门氏菌（—）痢疾杆菌（—）苯丙氨酸培养基成份：酵母浸液1．5克DL--苯丙氨酸1克磷酸氢二钠（无水）0．5克（或L-苯丙氨酸0．5克）氯化钠2．5克琼脂6克水500毫升PH7．4制法：1 将上述成份加热溶解，分装于12*125mm口径的试管中，每管约4毫升．2 高压灭菌15磅10分钟，趁热使试管斜置凝固后备用．3 接种时划斜面．用途：鉴定沙门氏菌用．苯丙氨酸脱氨酶试验沙门氏菌阴性．双抗培养基成份：蛋白胨10克牛肉膏5克氯化钠5克无水亚硫酸钠3克柠檬酸钠10克蔗糖10克琼脂粉20克水1000毫升制法：1将上物称好，加热溶于水中．2调PH8．2—8．43 分装高压灭菌后备用．倾注平板前先加热溶解琼脂等冷至50℃左右，按无菌操作加入多、庆抗菌素充分摇匀，倾注平板，凝固后备用．（庆大霉素：150u/毫升，多粘菌素：1500u/毫升, 2毫升加至1000毫升培养基内，此相当于庆大霉素0.3u/毫升, 多粘菌素3u/毫升）O2培养基保存液：（文—腊氏液）A液：硼酸12．405克KCL 14．912克水1000毫升取A液250毫升0．8%NAOH 133．5毫升NACL 20克水1000毫升分装高压灭菌．硝酸盐胨水成份：蛋白胨1克硝酸钾（无NO2）0．1克H2O 100毫升PH7．4，高压灭菌分装备用．（如无硝酸钾也可用硝酸钠0．02克，NACL0．05克，H2O100毫升）用途：硝酸盐还原试验用．原理：测定细菌能否还原硝酸盐为亚硝酸盐，后者在酸性条件下与a—萘胺和对氨基苯磺酸发生重氮反应，生成红色的1-萘-4偶氮苯对磺酸．制法：试剂甲液A对氨基苯磺酸0．8克溶于5N的醋酸100毫升．B：乙液a-萘酚0．5克溶于5N的醋酸100毫升中将细菌接种于硝酸盐水中37℃培养24--96小时，加入甲液0．1毫升，再加入乙液数滴，立即呈现红或紫色为阳性king氏培养基（能促进绿脓菌绿色素产生）成分：蛋白胨2克K2SO4 1克甘油1克MGCL2 0.14克琼脂 1.5克H2O 100毫升KING氏培养基（能促进绿脓菌荧光色产生）成分：蛋白胨2克甘油1克K2SO4 0.15克MGSO4 4.7克H2O 0.15克琼脂 1.5克H2O 100毫升调PH7.2 15磅20分钟消毒后使成斜面备用．七叶苷水解试验原理：粪链球菌能分解七叶苷（Escalin）其代谢产物与铁离子结合产生黑色沉淀，使培养基变黑．方法：将菌种接种在七叶苷或琼脂上37℃18小时，观察结果，培养基变黑色，其他链球菌能生长但不变黑色，肺炎链球菌不长．成分：七叶苷0.1克胰胨 1.5克枸橼酸铁0.2克琼脂 2.0克（0.5克/50毫升）胆汁 2.5毫升H2O 100毫升PH7.0分装小试管内高压灭菌后备用（10磅20分钟）七叶苷又名桑树皮甙，七叶灵，Aesclin Escnlim Bicolorin等．为白色针状结晶．水溶液兰色荧光．）葡萄糖氧化发酵培养基（O/F）成份：蛋白胨2．7克氯化钠5．0克0．2%溴麝香酚兰0．03克琼脂3克KH2PO4 0．3克葡萄糖10．0克水1000毫升制法：以上成份除糖外，溶解调PH7．0，10磅高压灭菌20分钟后备用．方法：挑取少量培养物接种两管，其中一管接种后加液体石腊不少于1厘米厚，两管同时35℃，培养过夜，观察颜色的变化，若无颜色变化，需继续观察七天，每日观察刺层型别．用途：适用于微球菌科和非发酵菌的鉴定．麦康凯培养基成份：蛋白胨20克氯化钠5克乳糖10克琼脂20克H2O 1000毫升1%中性红溶液3--4毫升1%结晶紫0．1毫升PH7．4除中性红临时用时加入外，其余均高压灭菌备用．邻硝基酚半乳糖甙（ONPG）酶试验缓冲液：Na2H2PO4 6．9克溶于40DW中，用5NNOH调PH7．0，再加水到50毫升，冰箱保存．用前若有结晶可稍加温，溶解后再用．ONPG液：称取ONPG（邻硝基酚--B--D半乳糖苷）80毫克，溶于15毫升D.W中，再加上缓冲液5毫升，放入冰箱中保存．此液不稳定，如出现黄色即不能用．鉴别：脑膜炎球菌和乳糖球菌及沙门氏菌属与枸橼酸菌属及亚利桑那氏菌属．脑膜炎球菌和沙门氏菌属为阳性．乳球菌，枸橼酸菌属和亚利桑那菌属为阳性．半固体培养基成份：牛肉膏3克蛋白胨10克氯化钠5克琼脂2．5--4克水1000毫升校正PH7．4，15磅高压15分钟．倾注平板，厚度约4mm，冷藏备用．氨基酸脱羟试验培养基成份：L-氨基酸0．5克蛋白胨0．5克牛肉膏0．5克葡萄糖0．05克吡多醛0．5克水100毫升2%溴甲酚紫乙醇液0．5毫升2%甲酚红0．25毫升制法：除指示剂及氨基酸外，溶解，PH6．0，然后加入氨基酸（必要时重新调PH）及指示剂，混匀分装1毫升/管加10毫米厚石蜡油，高压10--15磅10--15分钟灭菌备用．注意：1 使用DL型AA时量加倍．2 最好同时接种空白管（即不含有AA的同样培养基）作对照．3 培养基超过24小时可出现假阳性．葡萄糖酸盐培养基成份：蛋白胨1．5克酵母浸液1克K2HPO4 1克葡萄糖酸钾40克DW 1000毫升溶解过滤分装，高压10磅15分钟．结果：加班氏试剂，加热观察结果．黄-橙色为阳性．无颜色变化为阴性．阿拉伯糖（单糖）液体培养基成份：蛋白胨1克氯化钠0．5克DW 100毫升（调PH7．6）1．6%溴甲酚紫乙醇溶液0．1毫升阿拉伯糖1克菌种保存培养基成份：琼脂10克DW 1000毫升浸10分钟加热溶解后，再加牛肉膏5克蛋白胨10克氯化钠3克Na2HPO4.12H2O 2克本培养基出自上海进出口商品检验局之处方，其最大优点为：细菌保存4年后，其形态菌属特点，生化反应，血清学试验等无变化．厌氧培养基（GAM肉汤）成份：大豆胨3克口胨10克消化血清粉13．5克酵母浸膏5克牛肉膏2．2克牛肝膏（粉）1．2克葡萄糖3克KH2PO4 2．5克可溶性淀粉5克L-半胱氨酸盐0．3克硫乙醇酸钠0．3克肉汤（牛心汤）1000毫升调PH7．2--7．4，10磅高压灭菌15分．用途：用于厌氧菌培养，是一般培养基的基础，此培养基营养最丰富，用时无需加血，可用于各类厌氧菌增菌用．GMA琼脂成份：蛋白胨10克大豆胨3克口胨10克消化血清粉13．5克酵母浸液5克牛肉膏2．2克牛肝膏1．2克葡萄糖3克KH2PO4 2．5克氯化钠3克可溶性淀粉5克L-半胱胺酸盐酸盐0．3克硫乙醇酸钠0．3克琼脂1．5克DW 1000毫升调PH7．2--7．4，10分钟高压灭菌．注意：1可溶性淀粉加热易成糊状凝块，最好先用水少许将淀粉混匀，再加沸水使成糊状，备用．2此培养基营养丰富，无需加促进物质．用途：用于分离培养厌氧菌．硫乙醇酸盐半固体琼脂成份：L-半胱氨酸0．25克葡萄糖6克胰蛋白胨17克大豆胨3克硫乙醇酸钠0．1克氯化钠2．5克亚硫酸钠0．1克琼脂0．7克DW 1000毫升调PH7．6，11磅高压15分钟．附：V—KL添加剂：液体培养基0．1ug/毫升或0．1单位/毫升．固体培养基最终浓度10ug/毫升，冷却后再加VitKL．淋球菌培养基：基础琼脂3．4克无菌抗凝羊血10毫升20%葡萄糖溶液1毫升万古霉素0．2毫升多粘菌素B 0．0375毫升水90毫升用法：1取基础琼脂浸泡于水中，加热煮沸溶解，121℃高压灭菌20分钟．2加入羊血和葡萄糖，于90℃水浴中加热，不时摇动使成咖啡色．3冷却至60℃，加入万古霉素和多粘菌素B溶液，摇匀倒入平板，凝固备用．醋酸铅试纸培养基（测H2S）成份：蛋白胨10克胱氨酸0．1克硫酸钠0．1克水1000毫升PH7．0-7．4 ，115℃高压灭菌20分钟．滤纸剪成0．5-1CM宽，用5%-10%的醋酸铅浸透，烘干，置平皿备用．厌氧培养基1 液体培养基多价蛋白胨20% 胰蛋白胨1%酵母浸出汁0．5% 氯化钠0．5%牛肉膏5% 半胱胺酸0．04%氯化血红素0．5% 溶剂（牛肉浸出液）溶解调PH7．42固体培养基：加琼脂粉2．25%作血平板．LISTER（100毫升）液体用：蛋白胨2% 牛肉膏5%氯化钠5% 酵母浸0．5%牛心浸液作溶剂琼脂粉0．8%调PH7．4，每瓶25-30毫升分装．固体用：同上，加温后加右旋糖苷20毫升或60℃左右加入明胶15%．指示剂1 NaOH 溶液：0．1N NaOH 6毫升DW 1000毫升2 0．015%美兰溶液：0．5%美兰3毫升DW 1000毫升3 6%葡萄糖溶液：葡萄糖6克DW 1000毫升以上1、2、3种溶液等量混合即成．指示剂硼酸二钠（10H2O）2．5克硫乙醇酸钠2．4克美兰25毫升DW 650毫升郭氏培养基成份：牛心浸液10毫升葡萄糖1克酚红（0．4%）1．3毫升1%乙酸铊2毫升调PH8．2-8．3 108℃20分钟．分装时加血清或血浆（灭活）20毫升，0．1%美兰适量．鞭毛染色法玻片处理：将玻片用洗衣粉煮沸10分钟，水洗，再用清洁液浸泡，加温10分钟，水洗，再放入95%酒精脱脂，同时取出凉干，可制成涂片．染色液的配制：20%的鞣酸溶液（加温溶解）2毫升钾明矾饱和液2毫升石碳酸饱和液5毫升10%碱性复红无水乙醇溶液1．5毫升将上述各液混合后放置2-3日，过滤后备用，此液使用不得超大型过5周．染色步骤：将细菌接种在琼脂平板上，培养8-18小时，（35-37℃），用无水乙醇浸泡过的而且干燥的新玻片加一滴无菌DW，用接种环挑取菌落，置DW液面上，然后自然干燥．滴加染色液染1-2分钟，水洗干后镜检．结果：鞭毛染成红色．。
培菌工指导书
实验一牛肉膏蛋白胨培养基的制备一．准备材料及器材1 配制药品：牛肉膏、蛋白胨、琼脂条、NaCl；2 调PH值用试剂：2mol/L NaOH、2mol/L HCl；3 玻璃器皿：试管、三角瓶、烧杯、量筒、漏斗；4 仪器：电炉、天平、高压立式蒸汽灭菌锅；5 其他：纱布、棉花、牛皮纸、棉绳、pH试纸；二．方法与步骤1 称量牛肉膏1.5g、蛋白胨5g、琼脂条7.5~10g、NaCl 2.5g、水500ml；注：①牛肉膏用玻璃棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
②蛋白胨易吸湿，称量时要迅速。
2 溶解烧杯中加入约400ml水，加热约80℃，加入牛肉膏、蛋白胨、NaCl，使其溶解。
琼脂在溶液沸腾后加入。
融化过程中不断搅拌，注意火力，不要将培养基烧焦或溢出。
溶好后，补足所需水分。
3 调pH用2mol/l NaOH或2mol/l HCl把pH调至7.0~7.2。
4 过滤趁热用多层纱布过滤。
如无特殊要求可省去此步骤。
5 分装试管：将试管放于试管架上，插入玻璃漏斗，缓慢倾倒培养基，分装高度以试管高度的1/4~1/5（试管架底二层栏板处）左右为宜；三角瓶：玻璃漏斗插入三角瓶，装入一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜；注意：分装时勿使培养基沾染在容器口上，以免沾污棉塞引起污染。
6 加棉塞分装完毕后，在试管口、三角瓶口塞上棉塞。
7 包扎棉塞上包一层牛皮纸，扎紧，在牛皮纸上注上姓名，即可灭菌。
8 灭菌将上述培养基12l℃，高压蒸汽灭菌20min。
9 搁置斜面将刚灭过菌的试管培养基（趁热）管口端搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
图1 搁置斜面思考题：说明配制培养基应注意哪些问题?实验二干热灭菌及高压蒸汽灭菌一、目的要求(1)掌握干热灭菌及高压蒸汽灭菌的原理和应用范围(2)熟练掌握干热灭菌及高压蒸汽灭菌的操作方法二、实验材料及仪器玻璃器皿：1ml吸量管、培养皿、试管、三角瓶仪器：电热鼓风干燥箱、电热干燥箱、立式高压蒸汽灭菌锅试剂：牛肉膏蛋白胨培养基。
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0 0 2011-02-14 A 1 2012-05-25 修订 A 2 2013-07-25 增加6.9营养琼脂
版本:A/2
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1.0目的
规定了培养基配制的基本要求及方法。
2.0范围
适用于大肠菌群、细菌总数、霉菌及酵母菌检测时用培养基配制。
3.0术语
无
4.0职责
微生物检验员负责对培养基的正确配制。
5.0工作流程图
无
6.0内容及要求
6.1乳糖胆盐发酵培养基
6.1.1 用途：用于测定大肠菌群的乳糖发酵实验；
6.1.2 成分（g/l）：蛋白胨（20g）、乳糖（10g）、猪胆盐（5g）、溴甲酚紫（0.01g）；
6.1.3 配制方法：称取乳糖胆盐发酵培养基35g，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸溶解，
分装于有倒立发酵管的试管中，115℃高压灭菌15min，备用；
6.1.4 注意事项：灭菌后应在无菌环境下操作，出现结块严禁继续使用。
6.1.5储存条件：常温、密封、干燥处。
6.2 平板计数琼脂
6.2.1 用途：用于细菌总数测定；
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6.2.2 成分（g/l）：胰蛋白胨（5g）、酵母浸粉（2.5g）、葡萄糖（1g）、琼脂（15g）；
6.2.3 配制方法:称取本品23.5g，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高
压灭菌15min后备用；
6.2.4 注意事项：灭菌后应在无菌环境下操作，出现结块严禁继续使用。
6.2.5储存条件：常温、密封、干燥处。
6.3 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤
6.3.1 用途：用于大肠菌群、大肠杆菌、粪大肠菌群的初发酵试验及大肠杆菌（MPN）计
数；
6.3.2 成分（g/l）：胰蛋白胨（20g）、月桂基硫酸钠(0.1g)、乳糖（5g）、硫酸氢二钾
（2.75g）、氯化钠（5g）、磷酸二氢钾（2.75g）；
6.3.3 配制方法:称取本品35.6g，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装到有玻璃小
导管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15min后备用；
6.3.4 注意事项：灭菌后应在无菌环境下操作，出现结块严禁继续使用。
6.3.5储存条件：常温、密封、干燥处。
6.4煌绿乳糖胆盐肉汤
6.4.1用途：用于大肠菌群复发酵试验，（MPN）计数及证实试验。
6.4.2成分：蛋白胨10g,牛胆粉20g，乳糖10g，煌绿0.0133g.
6.4.3配制方法：称取本品40克，加入1000ML蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装到有玻璃小
导管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15min后备用；
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6.4.4 注意事项：灭菌后应在无菌环境下操作，出现结块严禁继续使用。
6.4.5储存条件：常温、密封、干燥处。
6.5 EC肉汤
6.5.1用途：用于大肠菌群、大肠杆菌、粪大肠菌群的初发酵试验及大肠杆菌（MPN）计
数；
6.5.2成分：胰蛋白胨（20g）、三号胆盐(1.5g)、乳糖（5g）、硫酸氢二钾（4g）、氯化
钠（5g）、磷酸二氢钾（1.5g）；
6.5.3配制方法：称取本品37克，加入1000ML蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装到有玻璃小
导管的试管中，每管8ml，121℃高压灭菌15min后备用；
6.5.4 注意事项：灭菌后应在无菌环境下操作，出现结块严禁继续使用。
6.5.5储存条件：常温、密封、干燥处。
6.6 虎红琼脂
6.6.1用途：用于霉菌及酵母菌的计数；
6.6.2成分：蛋白胨（5g）、磷酸二氢钾（1g）、葡萄糖（10g）、孟加拉红（虎红）
（0.033g）、硫酸美（0.5g）、琼脂（18.5g）、氯霉素（0.1g）；
6.6.3配制方法：称取本品35克，加入1000ML蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高
压灭菌,20min后备用；
6.6.4 注意事项：灭菌后应在无菌环境下操作，出现结块严禁继续使用。
6.6.5储存条件：常温、密封、干燥处。