细胞培养基及其配制方法
培养基配制
茎尖培养可看作是这方面较为特殊的一种方式。它采用极其幼嫩的顶芽的茎 尖分生组织作为外植体进行接种。在实际操作中，采用包括茎尖分生组织在内 的一些组织来培养，这样便保证了操作方便以及容易成活。 用靠培养定芽得到的培养物一般是茎节较长，有直立向上的茎梢，扩繁时主要 用切割茎段法，如香石竹、矮牵牛、菊花等。但特殊情况下也会生出不定芽，形 成芽丛。 2）不定芽的发育 在培养中由外植体产生不定芽，通常首先要经脱分化过程，形成愈伤组织的细 胞。然后，经再分化，即由这些分生组织形成器官原基，它在构成器官的纵轴 上表现出单向的极性（这与胚状体不同）。多数情况下它形成芽，后形成根。 另一种方式是从器官中直接产生不定芽，有些植物具有从各个器官上长出不 定芽的能力如矮牵牛、福禄考、悬钩子等。当在试管培养的条件下，培养基中 提供了营养，特别是提供了连续不断植物激素的供应，使植物形成不定芽的能 力被大大地激发起来。许多种类的外植体表面几乎全部为不定芽所覆盖。在许 多常规方法中不能无性繁殖的种类，在试管条件下却能较容易地产生不定芽 而再生，如柏科，松科，银杏等一些植物。许多单子叶植物储藏器官能强烈地 发生不定芽，用百合鳞片的切块就可大量形成不定鳞茎。 在不定芽培养时，也常用诱导或分化培养基。用靠培养不定芽得到的培养物， 一般采用芽丛进行繁殖，如非洲菊、草莓等。
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
（4）配制MS铁盐母液
一般配制成100倍MS铁盐母液。 依次称取 EDTA二钠 3.73g FeSO4·7H2O 2.78g
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 所以MS母液有5种大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐 母液，共8种母液。 激素母液的配制 各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用
培养基配方及配置
培养基配方及配置根据其作用不同，培养基分为：诱导培养基增殖培养基生根培养基根据其营养水平不同，培养基可分为基本培养基和完全培养基。
基本培养基（就是通常称呼的培养基）主要有MS、White、N6、B5 、改良MS、Heller、Nitsh、SH、Miller等。
完全培养基就是基本培养基的基础上，根据试验的不同需要，附加一些物质，如生长调节物质和其他复杂有机物质等。
N6培养基特点：•1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计•成分简单•KNO3 和(NH4)2SO4含量高•广泛应用于小麦、水稻及其它植物的花药培养等White培养基特点：•1943年由Ｗhite为培养番茄根尖而设计的。
1963年又作了改良，称作Ｗhite改良培养基。
•特点：无机盐含量较低•适用：生根培养。
B5培养基特点：•含较低的铵•双子叶植物尤其木本植物组培可选择MS培养基特点：无机盐、离子浓度高，硝酸盐含量较高。
MS培养基是目前应用最多最普遍的培养基。
无机盐的浓度较高，能保证组织培生长所需的矿物质营养。
并且因为离子浓度高，在配制、贮存、消毒过程中，即使有些成分略有出入，也不致影响培养基中的离子平衡培养基配方明细表：培养基成分：一、无机盐：氮枝叶生长需要氮素，缺氮老叶先发黄；氮过量，枝叶过度茂盛。
磷缺磷，植株生长缓慢，老叶暗紫色。
钾促进花卉生长健壮，增强抗性，茎秆挺拔。
缺钾，叶尖、叶缘枯焦，叶片呈皱曲状，老叶发黄或火烧状。
钴缺钴，叶片失绿而卷曲，整个叶片向上弯曲凋枯。
二、有机物碳水化合物：选用种类：蔗糖（或葡萄糖、果糖）等•蔗糖浓度：2%～3%，胚培养为4%～15%•大生产时可用白糖糖在培养基的作用：1）为细胞提供合成新物质的碳骨架2）为细胞的呼吸代谢提供底物和能量3）维持渗透压维生素种类：VB1（盐酸硫胺素）、VB6（盐酸吡哆醇）、VB3（烟酸）、Vc（抗坏血酸浓度：0.1－1.0mg/L作用：VB1 促愈伤组织产生，提高活力VB6 促根生长Vc 防组织褐变VB3 与植物代谢和胚的发育有关系氨基酸：甘氨酸、精氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等等。
培养基的配制 (2)
培养基的配制简介培养基是在实验室中广泛使用的一种生物学培养材料，它提供了生长微生物和其他细胞的所需营养物质和理想的环境条件。
培养基的配制是制备培养基的过程，通过合理的配比和操作，可以获得高质量的培养基。
培养基的组成培养基的组成是根据所培养的微生物或细胞的生理特点和营养需求来确定的。
一般来说，培养基由以下几个组分组成：1.碳源：提供微生物或细胞生长所需的碳质物质，常见的碳源有葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等。
2.氮源：提供微生物或细胞生长所需的氮质物质，常见的氮源有氨基酸、尿素、氯化铵等。
3.磷源：提供微生物或细胞生长所需的磷质物质，常见的磷源有磷酸二氢盐、磷酸氢二钠等。
4.硫源：提供微生物或细胞生长所需的硫质物质，常见的硫源有硫酸铵、硫酸钠等。
5.微量元素：为微生物或细胞提供必需的微量元素，如铁、锰、锌等。
6.维生素：提供微生物或细胞生长所需的维生素，如维生素B群。
7.pH调节剂：维持培养基的理想pH值，如磷酸盐缓冲液。
8.凝胶剂：使液态培养基凝固成凝胶状，常用的凝胶剂有琼脂和洋菜。
培养基的配制步骤1. 准备所需实验器材和试剂在开始培养基的配制之前，需要准备好所需的实验器材和试剂。
常见的实验器材包括量筒、烧杯、移液管、培养皿等；试剂包括碳源、氮源、磷源、硫源、微量元素、维生素等。
2. 确定培养基组成根据所培养的微生物或细胞的生理特点和营养需求，确定培养基的组成，并计算各组分的配比。
3. 配制培养基按照确定的配比，依次称取所需试剂并溶解于适量的去离子水中，然后使用量筒或烧杯调整总体积。
4. 调节pH值使用pH计测量培养基的pH值，并根据需要使用适当的酸碱溶液进行调节，直到达到理想的pH值。
5. 凝胶化培养基（可选）如果需要制备凝胶状的培养基，可以在配制好的液态培养基中加入适量的凝胶剂，并在加热过程中充分混合，待其冷却凝固。
6. 灭菌配制好的培养基需要进行灭菌处理，常见的方法有高温灭菌和滤过灭菌。
高温灭菌通常使用高压高温的压力罐进行，滤过灭菌则需要使用0.22微米的滤膜进行过滤。
培养基及其配制
4、培养皿 规格：9、12cm直径； 适于：游离细胞、 原生质体、花粉等的静置培养、 看护培养、无菌种子的发芽、植物材料的分离等。 5、果酱瓶 规格：200ml罐头瓶，加盖半透明的塑料盖； 特点：成本较低，操作方便，也减少了培养材料的
损伤；缺点是易引起污染。
6、瓶口封塞
要求：要具有一定的通气性和密闭性， 以防止培养基干燥和杂菌污染。
MS salts reduced to 0.47 g. l-1
Some root growth but reduced development of shoots
MS salts increased to 9.52 g. l-1
Shoots developed on upper surface of
Profuse development of roots over the explant upper and lower surface, and few shoots. Some callus
No MS salts
No sign of regeneration from explant
at all.
肌醇：使用浓度一般为100mg／L 氨基酸：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收
利用，常用甘氨酸。
4、植物生长调节物质
1）生长素类： 作用：诱导愈伤组织形成、根的分化和促进细
胞分裂、伸长生长。 IAA(indo acetic acid吲哚乙酸) NAA(naphthalene acetic acid萘乙酸) IBA(indolebutyri acid吲哚丁酸) 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸) 作用的强弱顺序：2,4-D > NAA > IBA >IAA
培养基配方及配置
培养基配方及配置
一般来说，培养基的配方包含基础培养基、添加剂和调节剂。
基础培养基是指提供生物体基本生长必需的基本成分，包括能源物质、有机和无机原料、氮源、矿质元素和缓冲物质等。
常用的基础培养基有
LB培养基、MS培养基等。
添加剂是指用于满足特定实验需求的成分，如抗生素、抗菌剂、激素、维生素等。
添加剂的种类和浓度根据实验目的的不同而有所差异。
调节剂是指用于调节培养基pH值、渗透压、表面张力等物理化学性
质的成分，如缓冲液、pH调节剂等。
以下是一个常用的细菌培养基LB的配方及配置：
1.基础培养基成分：
- 水：900ml
-蛋白胨：10g
-酵母提取物：5g
-NaCl：5g
2.添加剂：（可根据实验需求进行必要的添加）
- 抗生素（如氨苄青霉素）：100μg/ml
- 抗菌剂（如氯霉素）：25μg/ml
3.配制方法：
-将蛋白胨、酵母提取物和NaCl加入水中，并搅拌混合均匀。
- 将培养基溶液倒入容量瓶中，加水至1000ml，并混合均匀。
-调节pH值至7.0-7.2（一般使用缓冲液进行调节）。
-用自制滤纸过滤器滤过，将溶液分装至培养皿或试管中。
-如需添加抗生素或抗菌剂，将相应的药物加入培养基中，并充分溶解。
-培养基装瓶后可以高温高压灭菌，或使用滤器过滤进行无菌处理。
以上是一个简单的LB培养基的配方和配置流程，不同实验需要可能
会有所调整和变化。
在设计培养基配方时，需要结合具体实验目的和生物
体的特性来确定合适的成分和浓度，并注意配制和保管过程中的无菌操作，以确保培养基的质量和有效性。
各种培养基配方范文
各种培养基配方范文培养基是一种用于微生物培养的基础物质，能够为微生物提供所需的营养和环境条件。
不同的微生物在其生长过程中需要不同的养分和环境条件，因此培养基的配方需要根据微生物的需求来进行调整。
下面是几种常见的培养基配方。
1.大肠杆菌液体培养基配方：-蛋白胨或复合氮源：10g-酵母浸出物：5g-葡萄糖：1g-NaCl：5g-K2HPO4：2g-MgSO4：0.2g-pH调节至7.0后加水至1000mL2.牛心提取物琼脂糖培养基配方：-牛心提取物：3g-高级琼脂糖：15g-葡萄糖：10g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL3.玉米浸出物琼脂糖培养基配方：-玉米浸出物：4g-高级琼脂糖：15g-酵母浸出物：1g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL4.LB琼脂糖培养基配方：-液体LB培养基：10mL-高级琼脂糖：15g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL 5.血寒养基配方：-羊血：50mL-肉浸出物：3g-酵母浸出物：3g-肉汤培养基：1L-红细胞素：5g-高级琼脂糖：3g-pH调节至7.0后加水至1000mL6.厌氧培养基配方：-肉浸出物：5g-酵母浸出物：5g-NaCl：5g-蒸馏水：900mL- 加入0.1%的L-cysteine：10mL-pH调节至7.0后用氮气替换空气注意事项：-培养基中的成分应严格按照配方比例加入，并保持无菌。
-配制好的培养基需要高温高压灭菌以保证无菌。
-不同的微生物可能对一些成分非常敏感，需要根据实际情况进行微调。
-培养基的pH值应根据微生物环境要求进行调整，一般在7.0左右。
-配好的培养基应存放在4℃的冰箱中，避免阳光直射以防止成分分解。
这只是一些常见的培养基配方，不同的微生物有不同的需求，可以根据具体的情况进行配方的调整。
在实际使用中，还需要根据微生物的特性和实验目的来选择合适的培养基。
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法实验室中常用的培养基有很多种，包括通用培养基、选择性培养基、富集培养基等。
下面以常用的LB培养基和M9培养基为例，介绍它们的配制方法。
1. LB培养基（Luria-Bertani agar）LB培养基是一种通用培养基，适用于许多不同类型的细菌。
它由三种主要成分组成：蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。
配方如下：-蛋白胨：10克-酵母提取物：5克-NaCl：10克-精制水：1000毫升步骤如下：1)在一个大容量烧杯中加入蛋白胨、酵母提取物和NaCl。
2)加入适量的精制水，搅拌溶解。
3) 将溶液移至一个继续器中，并用精制水补足至1000ml。
4)蓄满培养基的瓶子，盖上盖子，并使用自动压力灭菌器进行高压灭菌，或者将瓶子放入高压灭菌器中，将压力调至15磅（每平方英寸）。
2.M9培养基M9培养基是一种无机盐培养基，常用于细菌的生长和培养。
它的配方相对简单，由无机盐、葡萄糖和维生素B1组成。
配方如下：-Na2HPO4：6克-KH2PO4：3克-NaCl：0.5克-NH4Cl：1克-葡萄糖：0.4克-维生素B1：0.1克-精制水：1000毫升步骤如下：1)在一个大容量烧杯中加入Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和NH4Cl。
2)加入一部分的精制水，搅拌溶解。
3)加入葡萄糖和维生素B1，搅拌均匀。
4) 将溶液移至一个继续器中，并用精制水补足至1000ml。
5)蓄满培养基的瓶子，盖上盖子，并使用自动压力灭菌器进行高压灭菌，或者将瓶子放入高压灭菌器中，将压力调至15磅（每平方英寸）。
以上是LB培养基和M9培养基的配制方法的简要介绍。
当然，实验室中还有很多其他种类的培养基，它们的配制方法也各有不同，需要根据具体的实验目的和细菌类型进行调整。
在培养基配制过程中，应当注意严格按照配方比例配制，保持清洁卫生，避免污染，并注意高压灭菌的操作安全。
一种NK细胞无血清培养基及其配制方法[发明专利]
![一种NK细胞无血清培养基及其配制方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/a0aa5b164a35eefdc8d376eeaeaad1f3469311fe.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610634228.5(22)申请日 2016.08.04(71)申请人 英普乐孚生物技术（上海）有限公司地址 201304 上海市浦东新区临港海基六路218弄4号楼(72)发明人 武宁 谢志明 (51)Int.Cl.C12N 5/0783(2010.01)(54)发明名称一种NK细胞无血清培养基及其配制方法(57)摘要本发明的高效NK细胞无血清培养基，将培养基分成两个独立包装的组分，在细胞培养的不同阶使用，从而将NK细胞培养过程分为诱导阶段和增殖阶段，提高培养效果的同时将细胞诱导培养过程简化，即在培养过程中不需要额外再添加其它细胞诱导因子等。
本发明的NK细胞无血清培养基中还加入了聚肌胞，更适合高效培养NK细胞，提高增殖倍数。
权利要求书1页 说明书5页 附图2页CN 106222140 A 2016.12.14C N 106222140A1.一种高效NK细胞无血清培养基，其特征在于包括两个独立包装的诱导培养基组分和扩增培养基组分。
诱导培养基组分和扩增培养基组分都以DME F12培养基为基础培养基，添加白蛋白、重组人转铁蛋白、重组人胰岛素、胆固醇、乙醇胺、抗坏血酸、硫酸庆大霉素、硫酸铜、硫酸锌、和氯化锰，并调节pH值为6.8-7.5。
诱导培养基组分还含有CD2单抗、CD16单抗、CD335单抗、IL-2、IL-12、IL-18、IL-21、IL-15、聚肌胞。
扩增培养基组分还含有IL-2、IL-12、IL-18、IL-21、IL-15。
2.如权利要求1所述的一种高效NK细胞无血清培养基，其特征在于所述培养基中白蛋白的浓度为0.001-0.5mmol/L、重组人转铁蛋白的浓度为0.1-500mg/L、重组人胰岛素的浓度为0.1-100mg/L、胆固醇的浓度为0.1-20mg/L、乙醇胺的浓度为0.1-20mg/L、抗坏血酸的浓度为0.1-100mg/L、硫酸庆大霉素的浓度为1×103-1×106IU/L、硫酸铜的浓度为0.0001-0.01mg/L、硫酸锌的浓度为0.01-10mg/L、氯化锰的浓度为0.0001-0.001mg/L。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
【DMEM专题】DMEM细胞培养基（二）配制方法及注意事项
配制方法：
（1）在一个尽可能接近总体积的容器中加入比预期培养基总体积少5％的双蒸水。
（2）在室温（20℃到30℃）的水中加入干粉培养基，轻轻搅拌，不要加热。
（3）水洗包装袋的内部，转移全部的痕量干粉到容器内。
（4）加NaHCO3到培养基中。
（5）用双蒸水稀释到想要的体积，搅拌溶解。
注意不要过分搅拌。
（6）通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值，由于pH值在过滤时会上升0.1到0.3，因而调节pH值使它比最终想要的pH值低0.2到0.3。
培养基在过滤前要保持密封。
配制培养基要注意以下问题：
●认真阅读说明书。
说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。
这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。
●配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质都要等培养基完全溶解之后才能添加。
●配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。
●所用器皿应严格消毒。
●配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。
●液体培养基主要是为了科研工作的方便而设计的培养基，它是一种灭菌后保证无菌的溶液，必要时可制成无内毒素等的溶液，可节省科研人员的工作量。
DMEM各种成分都有什么作用
一般的基础培养基包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物。
（1）无机盐：对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的。
（2）氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸(L型)都是细胞用以合成蛋白质的必需氨基酸，不能由其他氨基酸或糖类转化合成。
除此之外，还需要谷氨酰胺(glutamine)。
谷氨酰胺具有特殊的作用，对细胞的培养特别重要，能促进各种氨基酸进入细胞膜；它所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶的来源，还是合成—磷酸腺苷、二磷酸腺甘和三磷酸腺苷的原料。
细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏可导致细胞生长不良甚至死亡。
在配制各种培养液中都应补加一定量的谷氨酰胺。
值得注意的是：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中最好单独配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培养液中。
（3）维生素：是维持细胞生长的一种生物活性物质，在细胞中大多形成酶的辅基或辅酶，对细胞代谢有重大影响。
（4）碳水化合物：是细胞生命的能量来源，有的是合成蛋白质和核酸的成分。
体外培养动物细胞时，几乎所有培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。
（5）葡萄糖和谷胺酰胺：体外培养条件下，葡萄糖主要经糖酵解降解，产生过量的乳酸。
减少乳酸生产最常用的方法是限制培养基中葡萄糖的含量，但葡萄糖含量过低可造成细胞营养供应不足，细胞生长抑制。
在目前常用的培养基中，葡萄糖和谷胺酰胺是体外培养动物细胞的主要能源，其能量代谢通路与体内完全不同，表现为葡萄糖主要经糖酵解途径为细胞提供能量，谷胺酰胺大部分通过不完全氧化途径，另一小部分通过完全氧化为细胞供能。
（6）除了以上与细胞生长有关的物质以外，培养基中一般还要加入酚红（当溶液酸性时pH 小于6.8呈黄色；当溶液碱性时pH大于8.4呈红色），一种pH指示剂。