培养基的配制 PPT

操作步骤
1、称量及溶化 2、调pH 3、加琼脂、溶化、定容、（过滤） 4、分装、加塞、包扎 5、灭菌 6、摆斜面
称量与溶化：
操作步骤 (continued)
注意：
1）牛肉膏的称取：用玻璃棒蘸取适量牛 肉膏，抹于称量纸上，勿取过量，不足时， 再蘸取少量，逐步添加；然后将牛肉膏连 同称量纸放入水中，稍等片刻牛肉膏即从 称量纸上脱落，用玻璃棒将纸捞出即可。
1、装入待灭菌物品
2、升温 接通电源，加热升温至160-170℃。
3、恒温 保持160-170℃ 2小时。
4、降温 切断电源，自然降温。
5、开箱取物 待烤箱温度降到70℃以下以后， 方可打开箱门，取出物品。箱内温度高于70℃， 切勿自行打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。
培养基的配制
实验目的
1、了解培养基的概念、种类和用途，明确培养基 的配制原理。 2、学习掌握培养基配制的一般方法和步骤。 3、掌握高压蒸汽灭菌的方法步骤。
实验原理
培养基(culture medium)是指人工配制的、适合 微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。
自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之 实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不 同种类的培养基一般都应含有微生物生长所需的碳 源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养 要素，且各成分比例应合适。
99 mL无菌水 装三角瓶 6 瓶 9 mL无菌水 试管装 12 支 1 mL 吸管 15 支 牛肉膏蛋白胨固体培养基 斜面 5支
牛肉膏蛋白胨培养基配方：
牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 pH
3g 10g 5g 15-20g 1000ml 7.4-7.6
淀粉琼脂培养基（高氏培养基） ：
可溶性淀粉 20 g
为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求， 还必须控制培养基合适的pH。
牛肉膏蛋白胨培养基
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最 普通的细菌基础培养基，含有牛肉膏、蛋白胨和 NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷 酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素， 而NaCL提供无机盐。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，在40℃时凝 固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼 脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不 同。
硝酸钾
1g
磷酸氢二钾 0.5 g
NaCl
0.5 g
硫酸镁
0.5g
硫酸亚铁 0.01克
琼脂
15-20g
水
1000ml
pH
7.2-7.4
马铃薯蔗糖琼脂培养基：
把马铃薯洗净去皮，取200克切成小 块，加水1000毫升，煮沸半小时后， 补足水分。在滤液中加入15克琼脂， 煮沸溶解后加蔗糖20克补足水分 pH值调到7.2～7.4
实验原理 (continued)
紫外线灭菌—— 紫外线波长在200-300 nm,具有杀菌作用，
其中以265-266 nm杀菌力最强。 无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线灯照射
灭菌。
实验内容及实验步骤 1、干热灭菌
2、压力蒸汽灭菌 干热灭菌
电烤箱
干热灭菌
实验内容及实验步骤 (continued)
称量与溶化：
操作步骤 (continued)
注意：
2）蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅 速。另外，称药品时严防药品混杂，一把 牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后， 洗净，擦干，再称取另一药品．瓶盖也不 要盖错。
调pH值：
操作步骤 (continued)
在未调pH值前，先用精密pH试纸测量培养 基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基 中逐滴加入1 mol/L NaOH边加边搅拌，并 随时用pH试纸测其pH，直至pH达要求。反 之，用1mol/L HCl进行调节。
火焰烧灼 热空气灭菌
加 热
压力蒸汽灭菌
法
间歇灭菌
湿热法
煮沸灭菌 巴斯德消毒
滤膜过滤器的滤膜是一 种多孔纤维素，孔径一般为 0.45um，过滤时，液体和 小分子物质通过，细菌被截 流在滤膜上。
过滤除菌——
许多材料，如血 清、糖溶液等，用 一般加热消毒灭菌 方法，均会被热破 坏，应采用过滤除 菌。
应用最广的过滤 器有蔡氏(Seitz)过 滤器和膜过滤器。
分装：
操作步骤 (continued)
1）装量： 液体——试管高度的1/4左右
固体——试管高度的1/5 ，灭菌后摆斜面
半固体——一般为试管高度的1/3，灭菌后垂 直放置
棉塞制作方防止外界微生物进入培养基内造成 污染，并保证有良好的通气性能。
包扎：
操作步骤 (continued)
摆斜面：
◇ 成扎摆放，不需将每支试管单独摆放 ◇ 最好待培养基冷至60℃时摆斜面，以免形 成大量冷凝水
无菌检查：
将灭菌的培养基放在37℃温箱中培养24-48小 时，以检查灭菌是否彻底。
二 消毒与灭菌
实验目的
1、了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理。 2、学习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。
实验原理 干热法
加琼脂、溶化、定容、（过滤）
操作步骤 (continued)
琼脂一般应在调好了pH后加入，琼脂的加入 不会影响培养基的pH。
琼脂加入后应煮沸数分钟，以使其完全溶化， 否则易出现分布不均，导致部分斜面不凝固或过 软，另外部分则琼脂过多。
加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积 减小，应补充水分至所需量。
◇加塞后，试管通常每7支一起，包上一层牛皮纸或两 层报纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。
◇以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。
◇用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实 验组。
灭菌时包牛皮纸
灭菌：
操作步骤 (continued)
◇ 培养基灭菌一般采用压力蒸汽灭菌
◇ 通常灭菌条件为1.05kg/cm2, 121℃灭菌20 分钟；含糖量高的培养基，则为 0.56kg/cm2,115℃灭菌30分钟。
常用培养基： 牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养； 高氏一号培养基用于培养放线菌； 马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。 常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为 1.5%-2%；半固体培养基琼脂加量为0.5%-0.8%。
实验分组安排
4-5人一组 配制牛肉膏蛋白胨固体培养基 400 mL
马铃薯糖琼脂培养基 200 mL 淀粉琼脂培养基（高氏培养基）200 mL 平皿30个