协同凝集反应+金葡菌
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医学免疫学实验
• 一、凝集试验、吞噬试验 • 二、沉淀试验、溶血反应 • 三、免疫标记技术；
免疫细胞的分离； 细胞免疫功能测定
实验一
• （一）凝集试验 • 1、直接凝集反应（ABO血型鉴定） • 2、间接凝集反应（类风湿因子测定） • 3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验 • （二）吞噬试验（示教）（310室） • 1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬） • 2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）
• 一、 抗原抗体的检测→凝集试验 • 二、 免疫细胞数量、功能的检测
→吞噬试验
• 三、其他，如细胞因子的检测
回顾几个概念：
1、[抗原，Ag]能诱导免疫系统产生特异性免
疫应答（抗体和效应T细胞）的异物。 2、[抗体， Ab]特异性蛋白质，由抗原诱导，
通过特异性免疫应答产生（B细胞分化为浆 细胞分泌）。与抗原一一对应 3、抗原抗体反应的特异性 4、免疫系统的免疫应答或特异性免疫应答
12
①在抗原抗体比例合适时形成大的可见抗原抗体复合物 ②抗原抗体的结合是可逆的
Free antigen
-
Free antibody
+
-
+
-
-
Immune complex
Antibody Equivalence excess zone zone
Antigen excess zone
Antigen added
•
Ag-AD~CDRs-Ab
7
（抗体）
如何检测抗原或抗体？（基本原则）
抗原 ＋ 抗体
抗原抗体反应现象
（抗原抗体结合反应的高度特异性）
？ ＋ 抗体
有现象 （有相应抗原） 无现象 （无相应 抗原）
抗原 + ?
有反应现象 （有相应 抗体) 无反应现象 （无相应抗体）
抗原抗体反应的可见性：
Ag＜＜Ab：
免疫系统（通过产生抗体或效应T细胞）清除异物 的过程
• AD: antigenic determinant of Ag, epitope
• CDR( of Ab ):complementarity determining region，a shape complementary to
corresponding AD
Ab
Ag
Ab ，游离Ab
Ab
Ag＋Ab → Ag－Ab → Ag、Ab比
(unvisible)
例合适：
Ab Ag Ab
Ag－Ab Ag Ab (visible)
Ab
（凝集或沉淀）
Ag＞＞Ab： Ag Ag ，游离Ag Ab
抗原抗体反应的可见性与抗原抗体比例： （形成可见的大抗原抗体复合物合适条件：）
13
抗原抗体反应特点： 1）特异性 2）可见性 阶段性与可见性 比例性与可见性 3）可逆性
【凝集反应】： （1）概念：
颗粒性Ag＋Ab
（细菌、细胞）
→ Ab Ag Ab
Ag－Ab Ag Ab（凝集块）
Ab
（凝集反应）
可溶性Ag＋Ab
（蛋白质、多糖）
→ Ab Ag Ab Ag－Ab Ag Ab
（沉淀物） （沉淀反应）
2. 取白瓷板1块，将抗A、抗B分型试剂分别滴加1滴于 白瓷板的两个圆孔内。
3. 用毛细吸管吸取血球悬液，在白瓷板的两个圆孔内 各加1滴。 4.将白瓷板前后左右不停地摇动，使其充分混匀，5～ 10min后观察血球有无凝集发生。如有凝集，可见红细 胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。
5. 记录受检者红细胞凝集情况，根据ABO血型鉴定表 ，判断受检者的血型。
Bilateralis of the ring finger tip
（一）2、血清类风湿因子测定
• 正向间接凝集反应、血球凝集试验：
可溶性Ag－载体 ＋ Ab
凝集
人IgG-红细胞 类风湿因子
（致敏红细胞） （待测）
（半定量）
（效价）
• 效价（滴度）：以出现明显抗原抗体反应
现象（＋＋及以上）的最高稀释度作为待检 抗原（或抗体）的效价，可反应待检物含量。
A A抗原
＋
－
B B抗原
－
＋
AB 有A、B
＋
＋
O 无A、B
－
－
实验步骤：
• 1、制备红细胞悬液。 • 2、加抗A或抗B。 • 3、加红细胞悬液。 • 4、结果观察。 • • （2人/组）
【方法】
1. 用酒精棉球消毒被检者的耳垂或手指尖端，以采血 针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出，滴1～2滴血液 于含有生理盐水的试管内，摇匀，使成为血球悬液。 用灭菌干棉球止血。
9 10
1.稀释液
2.待检血清 （1：10） （Ab?）
50ul 50 50 50ul
50ul 50
50 50 50 50
50 50
50 50 50ul +ve 50ul
50
50 弃去50
Ab稀释度 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560
Ab
Ag＜＜Ab：
Ag
Ab ，游离Ab
Ab
Ag＋Ab → Ag－Ab → Ag、Ab比
(unvisible)
例合适：
Ab Ag Ab
Ag－Ab
Ag
Ab
(visible)
Ab
（凝集或沉淀）
Ag＞＞Ab： Ag Ag ，游离Ag Ab
Fra Baidu bibliotekVisible)
Ab excess
Ag excess Equivalence – Lattice formation
凝集块（直接凝集反应）
？ ＋已知Ab 一定条件
凝集（有对应Ag） 无凝集（无对应Ag）
② Ag ＋ 金葡菌－Ab 凝集块（协同凝集反应）
？＋金葡菌－已知Ab 一定条件 凝集（有对应Ag）
无凝集（无对应Ag）
（一）1、ABO血型鉴定
直接凝集反应：
颗粒性抗原 + 抗体
RBC
抗A或抗B
凝集块 凝集块
血型 RBC抗原 抗A 抗B
（2）类型
颗粒性Ag＋Ab 一定条件
凝集块（直接凝集反应）
可溶性Ag－载体 ＋ Ab → 凝集块（间接凝集反应）
（细胞、细菌等）
（正向间接凝集反应）
可溶性Ag ＋ 载体－Ab → 凝集块（反向间接凝集反应）
Ag ＋ 金葡菌－Ab
（致敏载体?）
凝集块（协同凝集反应）
（3）凝集试验检测原理
一定条件
①颗粒性Ag＋Ab
• （一）凝集试验 • 1、直接凝集反应（ABO血型鉴定） • 2、间接凝集反应（类风湿因子测定） • 3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验
（什么是凝集试验或直接、间接、协同凝集试验？）
免疫学检测技术
• 利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子 （抗体、补体、细胞因子和粘附分子等） 及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。
• 一、凝集试验、吞噬试验 • 二、沉淀试验、溶血反应 • 三、免疫标记技术；
免疫细胞的分离； 细胞免疫功能测定
实验一
• （一）凝集试验 • 1、直接凝集反应（ABO血型鉴定） • 2、间接凝集反应（类风湿因子测定） • 3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验 • （二）吞噬试验（示教）（310室） • 1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬） • 2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）
• 一、 抗原抗体的检测→凝集试验 • 二、 免疫细胞数量、功能的检测
→吞噬试验
• 三、其他，如细胞因子的检测
回顾几个概念：
1、[抗原，Ag]能诱导免疫系统产生特异性免
疫应答（抗体和效应T细胞）的异物。 2、[抗体， Ab]特异性蛋白质，由抗原诱导，
通过特异性免疫应答产生（B细胞分化为浆 细胞分泌）。与抗原一一对应 3、抗原抗体反应的特异性 4、免疫系统的免疫应答或特异性免疫应答
12
①在抗原抗体比例合适时形成大的可见抗原抗体复合物 ②抗原抗体的结合是可逆的
Free antigen
-
Free antibody
+
-
+
-
-
Immune complex
Antibody Equivalence excess zone zone
Antigen excess zone
Antigen added
•
Ag-AD~CDRs-Ab
7
（抗体）
如何检测抗原或抗体？（基本原则）
抗原 ＋ 抗体
抗原抗体反应现象
（抗原抗体结合反应的高度特异性）
？ ＋ 抗体
有现象 （有相应抗原） 无现象 （无相应 抗原）
抗原 + ?
有反应现象 （有相应 抗体) 无反应现象 （无相应抗体）
抗原抗体反应的可见性：
Ag＜＜Ab：
免疫系统（通过产生抗体或效应T细胞）清除异物 的过程
• AD: antigenic determinant of Ag, epitope
• CDR( of Ab ):complementarity determining region，a shape complementary to
corresponding AD
Ab
Ag
Ab ，游离Ab
Ab
Ag＋Ab → Ag－Ab → Ag、Ab比
(unvisible)
例合适：
Ab Ag Ab
Ag－Ab Ag Ab (visible)
Ab
（凝集或沉淀）
Ag＞＞Ab： Ag Ag ，游离Ag Ab
抗原抗体反应的可见性与抗原抗体比例： （形成可见的大抗原抗体复合物合适条件：）
13
抗原抗体反应特点： 1）特异性 2）可见性 阶段性与可见性 比例性与可见性 3）可逆性
【凝集反应】： （1）概念：
颗粒性Ag＋Ab
（细菌、细胞）
→ Ab Ag Ab
Ag－Ab Ag Ab（凝集块）
Ab
（凝集反应）
可溶性Ag＋Ab
（蛋白质、多糖）
→ Ab Ag Ab Ag－Ab Ag Ab
（沉淀物） （沉淀反应）
2. 取白瓷板1块，将抗A、抗B分型试剂分别滴加1滴于 白瓷板的两个圆孔内。
3. 用毛细吸管吸取血球悬液，在白瓷板的两个圆孔内 各加1滴。 4.将白瓷板前后左右不停地摇动，使其充分混匀，5～ 10min后观察血球有无凝集发生。如有凝集，可见红细 胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。
5. 记录受检者红细胞凝集情况，根据ABO血型鉴定表 ，判断受检者的血型。
Bilateralis of the ring finger tip
（一）2、血清类风湿因子测定
• 正向间接凝集反应、血球凝集试验：
可溶性Ag－载体 ＋ Ab
凝集
人IgG-红细胞 类风湿因子
（致敏红细胞） （待测）
（半定量）
（效价）
• 效价（滴度）：以出现明显抗原抗体反应
现象（＋＋及以上）的最高稀释度作为待检 抗原（或抗体）的效价，可反应待检物含量。
A A抗原
＋
－
B B抗原
－
＋
AB 有A、B
＋
＋
O 无A、B
－
－
实验步骤：
• 1、制备红细胞悬液。 • 2、加抗A或抗B。 • 3、加红细胞悬液。 • 4、结果观察。 • • （2人/组）
【方法】
1. 用酒精棉球消毒被检者的耳垂或手指尖端，以采血 针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出，滴1～2滴血液 于含有生理盐水的试管内，摇匀，使成为血球悬液。 用灭菌干棉球止血。
9 10
1.稀释液
2.待检血清 （1：10） （Ab?）
50ul 50 50 50ul
50ul 50
50 50 50 50
50 50
50 50 50ul +ve 50ul
50
50 弃去50
Ab稀释度 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560
Ab
Ag＜＜Ab：
Ag
Ab ，游离Ab
Ab
Ag＋Ab → Ag－Ab → Ag、Ab比
(unvisible)
例合适：
Ab Ag Ab
Ag－Ab
Ag
Ab
(visible)
Ab
（凝集或沉淀）
Ag＞＞Ab： Ag Ag ，游离Ag Ab
Fra Baidu bibliotekVisible)
Ab excess
Ag excess Equivalence – Lattice formation
凝集块（直接凝集反应）
？ ＋已知Ab 一定条件
凝集（有对应Ag） 无凝集（无对应Ag）
② Ag ＋ 金葡菌－Ab 凝集块（协同凝集反应）
？＋金葡菌－已知Ab 一定条件 凝集（有对应Ag）
无凝集（无对应Ag）
（一）1、ABO血型鉴定
直接凝集反应：
颗粒性抗原 + 抗体
RBC
抗A或抗B
凝集块 凝集块
血型 RBC抗原 抗A 抗B
（2）类型
颗粒性Ag＋Ab 一定条件
凝集块（直接凝集反应）
可溶性Ag－载体 ＋ Ab → 凝集块（间接凝集反应）
（细胞、细菌等）
（正向间接凝集反应）
可溶性Ag ＋ 载体－Ab → 凝集块（反向间接凝集反应）
Ag ＋ 金葡菌－Ab
（致敏载体?）
凝集块（协同凝集反应）
（3）凝集试验检测原理
一定条件
①颗粒性Ag＋Ab
• （一）凝集试验 • 1、直接凝集反应（ABO血型鉴定） • 2、间接凝集反应（类风湿因子测定） • 3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验
（什么是凝集试验或直接、间接、协同凝集试验？）
免疫学检测技术
• 利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子 （抗体、补体、细胞因子和粘附分子等） 及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。