脂肪酸甲酯化方法
脂肪酸甲酯化方法
一、主题内容与适用范围本标准适用于所有的动植物油脂和脂肪酸。
二、目的油脂及脂肪酸(特别是12 碳以上的长碳链脂肪酸) 一般不直接进行气相色谱分析，其原因是脂肪酸脂肪酸及油脂的沸点高，高温下不稳定，易裂解，分析中易造成损失。
因此，对脂肪酸及油脂的脂肪酸组分分析时，先将脂肪酸或油脂与甲醇反映，制备脂肪酸甲酯，降低沸点，提高稳定性，然后进行气相色谱分析。
三、BF3甲酯化法1、仪器(1)50ml及100ml磨口圆底烧瓶(2)回流冷凝器(长度20〜30cm,有磨口连接，与烧瓶配套)( 3) 250ml 分液漏斗( 4)滴管( 5)带磨口玻璃塞的试管( 6) 10ml 移液管( 7)沸石2、试剂( 1 )正庚烷，色谱纯(2)轻汽油(沸程40〜60 C)( 3)无水硫酸钠，分析纯( 4) 0.5M 的氢氧化钠甲醇溶液(不用标定) ，配制如下：称取2g NaOH溶于100ml甲醇中(甲醇的含水量不得超过0.5%<m/m>)，该溶液放置一段时间后会出现白色沉淀，这不影响脂肪酸甲酯化制备。
(5)12〜25%( m/m ) BF3的甲酯溶液；(6)饱和的NaCI水溶液(7)甲基红指示剂：用60%的乙醇配置0.1%的甲基红溶液( 8)氮气：含氧量低于5mg/kg3、操作方法，(1)取大约350mg油样加入50ml烧杯中，移取6ml 0.5M的NaOH于油样中，并加入几粒沸石，连接回流装置，开始加热回流，回流过程中要不断摇动烧瓶。
(2)当烧瓶内的油珠消失，溶液变得透明时(大约需要5〜10分钟)，从冷凝器上端加7ml BF3甲醇溶液于烧杯内(用移液管移取)，然后继续回流1分钟。
(3)然后从冷凝管上端加入2〜5ml 正庚烷后，再回流 1 分钟。
(4)撤离火源，取出烧瓶，向烧瓶中加入一定量的饱和NaCI溶液，轻轻上下颠倒数次后，静置分层。
(5)从烧杯内的上层溶液中取出约1ml 转移到磨口试管中，并加入适量的无水硫酸钠，以去除痕量的水分，得到的此甲酯化样品以备气相色谱分析用。
甲酯化方法
一、主题内容与适用范围本标准适用于所有的动植物油脂和脂肪酸。
二、目的油脂及脂肪酸（特别是12碳以上的长碳链脂肪酸）一般不直接进行气相色谱分析，其原因是脂肪酸脂肪酸及油脂的沸点高，高温下不稳定，易裂解，分析中易造成损失。
因此，对脂肪酸及油脂的脂肪酸组分分析时，先将脂肪酸或油脂与甲醇反映，制备脂肪酸甲酯，降低沸点，提高稳定性，然后进行气相色谱分析。
三、BF3甲酯化法1、仪器（1）50ml及100ml磨口圆底烧瓶（2）回流冷凝器（长度20～30cm，有磨口连接，与烧瓶配套）（3）250ml分液漏斗（4）滴管（5）带磨口玻璃塞的试管（6）10ml移液管（7）沸石2、试剂（1）正庚烷，色谱纯（2）轻汽油（沸程40～60℃）（3）无水硫酸钠，分析纯（4）0.5M的氢氧化钠甲醇溶液（不用标定），配制如下：称取2g NaOH溶于100ml甲醇中（甲醇的含水量不得超过0.5％<m/m>），该溶液放置一段时间后会出现白色沉淀，这不影响脂肪酸甲酯化制备。
（5）12～25％（m/m）BF3的甲酯溶液（6）饱和的NaCl水溶液（7）甲基红指示剂：用60％的乙醇配置0.1％的甲基红溶液（8）氮气：含氧量低于5mg/kg3、操作方法，（1）取大约350mg油样加入50ml烧杯中，移取6ml 0.5M的NaOH于油样中，并加入几粒沸石，连接回流装置，开始加热回流，回流过程中要不断摇动烧瓶。
（2）当烧瓶内的油珠消失，溶液变得透明时（大约需要5～10分钟），从冷凝器上端加7ml BF3甲醇溶液于烧杯内（用移液管移取），然后继续回流1分钟。
（3）然后从冷凝管上端加入2～5ml正庚烷后，再回流1分钟。
（4）撤离火源，取出烧瓶，向烧瓶中加入一定量的饱和NaCl溶液，轻轻上下颠倒数次后，静置分层。
（5）从烧杯内的上层溶液中取出约1ml转移到磨口试管中，并加入适量的无水硫酸钠，以去除痕量的水分，得到的此甲酯化样品以备气相色谱分析用。
气相色谱测定牦牛骨中脂肪酸的甲酯化方法比较
气相色谱测定牦牛骨中脂肪酸的甲酯化方法比较刘文媛;贾伟;吴婷;张春晖;李侠;陈雪峰【摘要】利用气相色谱(GC)技术,采用酸水解提取脂质,比较了6种甲酯化法(乙酰氯-甲醇法、H2SO4-甲醇法、HCl-甲醇法、KOH-甲醇法、KOH-甲醇+H2SO4-甲醇法和KOH-甲醇+HCl-甲醇法)对脂肪酸测定的影响,优选牦牛骨中脂肪酸测定的最佳方法.37种脂肪酸标准样品在0.28 ～ 250.00 mg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99(除C4∶0外).碱酯化法和酸碱结合法几乎无法测出牦牛骨中的脂肪酸,其测得的总脂肪酸含量小于0.20 g/100g.乙酰氯-甲醇法测得的总脂肪酸含量(13.61 g/100g)显著高于H2SO4-甲醇法(总脂肪酸含量为11.68 g/100 9)和HCl-甲醇法(总脂肪酸含量为3.18 g/100 9)测得的结果.乙酰氯-甲醇法和H2SO4-甲醇法的日内和日间精密度分别为0.27％～ 8.60％和0.34％～ 2.64％,两种方法中脂肪酸的回收率为83.06％～105.54％.结果表明,酸水解-乙酰氯-甲醇法是牦牛骨中脂肪酸测定的最佳方法.C18:1n9c、C16:0、C18:0和共轭亚油酸(CLA)是牦牛骨的主要脂肪酸,其总和达脂肪酸总量的85％以上,饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸含量比值约为1:2.牦牛骨中脂肪酸的研究为骨资源脂质的有效利用提供了重要依据.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2016(034)011【总页数】7页(P1113-1119)【关键词】气相色谱;甲酯化;脂肪酸;牦牛骨;方法验证【作者】刘文媛;贾伟;吴婷;张春晖;李侠;陈雪峰【作者单位】陕西科技大学食品与生物工程学院,陕西西安710021;中国农业科学院农产品加工研究所,北京100193;中国农业科学院农产品加工研究所,北京100193;中国农业科学院农产品加工研究所,北京100193;中国农业科学院农产品加工研究所,北京100193;中国农业科学院农产品加工研究所,北京100193;陕西科技大学食品与生物工程学院,陕西西安710021【正文语种】中文【中图分类】O658骨由骨髓和矿化骨组织组成,富含蛋白质、矿物质和脂肪[1],随着畜禽养殖规模和肉类消费量的逐年增长,骨资源的开发利用逐渐引起人们的关注。
几种脂肪酸甲酯化方法的比较
几种脂肪酸甲酯化方法的比较脂肪酸甲酯化方法是将脂肪酸与甲醇反应，生成相应的脂肪酸甲酯。
脂肪酸甲酯的应用广泛，常用于制备生物柴油、乳化剂、护肤品等。
下面将对几种常用的脂肪酸甲酯化方法进行比较。
1.酸催化甲酯化酸催化甲酯化是最常见的脂肪酸甲酯化方法之一、它通过在反应体系中加入酸催化剂，促进脂肪酸与甲醇的酯化反应。
常见的酸催化剂有硫酸、硫酸氢钠、硫酸铵等。
该方法具有操作简单、反应速度较快、成本较低等优点。
然而，酸催化条件下易产生酸水解反应和酸催化剂的脱水反应，会降低脂肪酸的收率和质量。
2.酶催化甲酯化酶催化甲酯化是一种绿色、高效、具有较高反应选择性的脂肪酸甲酯化方法。
常用的酶催化剂有脂肪酶、酶和蛋白酶等。
酶具有良好的催化活性、高化学稳定性和多次重复使用的能力。
相比于其他方法，酶催化甲酯化更环保，不会产生有毒废物和大量的反应副产物。
然而，酶催化甲酯化的反应速度较慢，酶催化剂价格较高，对反应温度和pH值较为敏感。
3.碱催化甲酯化碱催化甲酯化是一种常用的酯化方法。
它通过在反应体系中加入碱催化剂，如氢氧化钠、氢氧化钾等，促进脂肪酸与甲醇的酯化反应。
碱催化甲酯化反应速度快、转化率高，并且生成脂肪酸甲酯的收率高。
然而，碱催化甲酯化会形成大量的碱皂，需要进行酸化处理和中和，产生大量废液，增加了生产成本。
4.带电催化甲酯化带电催化甲酯化是一种新兴的脂肪酸甲酯化方法。
它是利用带电催化剂催化脂肪酸与甲醇的酯化反应，不需要加入酸或碱催化剂。
带电催化剂在反应体系中不断进行离子交换，从而提高反应速率和产率。
该方法具有催化效率高、废液产生少的优点。
然而，带电催化剂的合成和回收较为困难，仍需要进一步的研究和改进。
二、总结不同的脂肪酸甲酯化方法各有优点和限制。
酸催化甲酯化方法操作简单、成本低，但容易产生酸水解反应和产生废弃物。
酶催化甲酯化方法具有高效、选择性好、环保等特点，但反应速度较慢，酶催化剂价格较高。
碱催化甲酯化反应速度快、转化率高，但会产生大量废液和碱皂。
气质联用仪脂肪酸甲酯化方法
脂肪酸甲酯化方法：称取60 mg油脂样致具塞试管中。
用移液管或移液器移取4 ml异辛烷溶解试样，必要时可以微微加热使试样溶解。
用微量移液器加入200 ul氢氧化钾甲醇溶液，盖上玻璃塞猛烈震摇30 s，后静置至澄清。
向溶液中加入约1 g硫酸氢钠，猛烈震摇，中和氢氧化钾。
待盐沉淀后，将含有甲酯的上层溶液倒入4 ml玻璃瓶中，得到的异辛烷溶液中甲酯含量约为15 mg/mL。
直接取液态上清样品（过膜）注入气象色谱-质谱仪中分析。
氢氧化钾甲醇溶液：约2 mol/L。
将13.1 g氢氧化钾溶于100 mL无水甲醇中，可轻微加热，加入无水硫酸钠干燥，过滤，即得澄清溶液。
溶液存放一段时间后，可能会形成少量沉淀，用上清液测定不影响测定。
仪器：
1具塞试管：4/8根
2移液管或移液器、微量移液器加入200 ul
试剂：
1异辛烷
2氢氧化钾甲醇溶液：约2 mol/L（将13.1 g氢氧化钾溶于100 mL无水甲醇中，可轻微加热，加入无水硫酸钠干燥，过滤，即得澄清溶液）
3无水硫酸钠1g
4硫酸氢钠1g。
_植物油脂肪酸甲酯化方法比较与含量测定
钟左右的效果为最佳。
参考文献：[1]唐勤学,陶小林,黎司.有机磷农药残留速测仪的研究进展[J].化工时刊,2008,22(9):68[2]蔡建荣,张东升,赵晓联,等.食品中有机磷农药残留的几种检测方法比较[J].中国卫生检验杂志,2002,12(6):750-752[3]袁东,封雪松,付大友,等.饲料中总磷、无机磷和有机磷的含量测定[J].四川轻化工学院学报,2002,15(4):42-46[4]武汉大学等校编.分析化学实验[M].北京:高等教育出版社,1985:21[5]刘德生.环境监测[M].北京:化学工业出版社,2001:176[6]于景荣,陈兵.磷钼蓝光度法测定锰铁矿中的磷[J].理化检验-化学分册,1998,34(12):563-564[7]朱静平,刘兴艳,马建华,等.应用磷钼蓝分光光度法测定红橘中有机磷[J].广西农业科学,2005,36(4):351-352[8]桑宏庆,于秋生.紫外分光光度法测定甜蜜素[J].饮料工业,2006,9(11):27-29收稿日期：2013-12-02植物油脂肪酸甲酯化方法比较与含量测定伍新龄1，2，王凤玲1，2，*，关文强1，2（1.天津市食品生物技术重点实验室，天津300134；2.天津商业大学生物技术与食品科学学院，天津300134）摘要：通过比较不同甲酯化方法、气相色谱升温程序，确定了植物油中脂肪酸成分的气相色谱分析方法，并对5种食用植物油的主要脂肪酸含量进行了分析和比较。
结果表明：三氟化硼-甲醇快速甲酯化法具有操作简单、时间短、甲酯化率高的优点。
利用CP-Sill 88高极性气相色谱柱，优化的升温程序为：初始温度170℃，保持1min ，以10℃/min 升温速率升至200℃，再以1℃/min 升温速率升至220℃，保持3min ，20min 内即可有效分离6种脂肪酸。
用建立的方法测定5种食用植物油6种脂肪酸的含量，标准曲线的相关性好，相关系数范围为0.9994~0.9999，检出限低。
脂肪酸酯化方法
脂肪酸极性很强，是一种热敏性物质，在高温下容易发生聚合、脱羧、裂解等副反应。
直接进行分析，柱温很高，高温固定相难以选择，色谱峰易拖尾，保留时间不重复，有时有假峰出现等。
对脂肪酸的色谱分析，一般都需要进行前处理。
C5以下的脂肪酸可先转变为乙酯、丙酯或苯甲酯，C6以上的脂肪酸可先转变为甲酯，这样除可降低脂肪酸的极性外，还有利于选择固定相和色谱分析操作。
甲酯化方法：
取500mg脂肪酸样品于酯化烧瓶中，加入7mL BF3甲醇溶液（14%BF3甲醇溶液），装上冷凝器，沸腾2分钟后，从冷凝器上部加入5mL己烷，再沸腾1min，停止加热，将酯化瓶取下，加入氯化钠饱和溶液至己烷达到瓶口，取出约1mL己烷溶液于试管中，加入少量的无水硫酸钠，取上层液体直接注入色谱仪。
当样品中有C6及C8脂肪酸时，按上述方法酯化后，加入50mL 氯化钠饱和溶液，盖上瓶塞，振动20次，放置1min后，分离出上层己烷液，在下层中加入5mL己烷，同上操作。
合并己烷溶液，加入无水硫酸钠干燥后，取己烷溶液直接注入色谱仪。
脂肪酸甲酯化验方法
脂肪酸甲酯化验方法
实验材料：
1.涂丙醇。
2.氯仿。
3.甲酸。
4.液态稳定剂。
5.洗涤剂。
实验步骤：
步骤1：收集样本。
收集你要测试的样本。
脂肪酸甲酯化通常用于检测血清或组织样本中的脂肪酸浓度。
你可以使用毛细管或注射器直接收集血液样本，或者使用拉丁方格收集组织样本。
步骤2：加入涂丙醇和氯仿。
将样品移至样品管中，加入2毫升涂丙醇和2毫升氯仿。
然后使用液态稳定剂将液体混合。
步骤3：加入甲酸。
加入0.2毫升甲酸。
覆盖并用手轻轻摇动，使液体混合均匀。
将样品保存在黑暗中静置一段时间。
步骤4：沉淀。
将样品离心，分离下层脂肪酸甲酯。
将它们移到新的样品管中。
步骤5：洗涤。
加入适量的洗涤剂混合均匀，然后再次离心。
分离下层脂肪酸甲酯，
并将其移到新的样品管中。
步骤6：检测。
使用气相色谱仪测量你提取的脂肪酸甲酯，并与标准曲线比较。
标准
曲线将显示不同的脂肪酸甲酯峰的相对强度。
这将允许你确定样品中有多
少脂肪酸。
总之，脂肪酸甲酯化实验方法是一项非常有用的技术，可用于确定不
同样品中的脂肪酸浓度。
使用上述简单步骤可以快速、准确地完成此实验。
脂肪酸甲酯化方法
脂肪酸甲酯化方法1.酸催化法：酸催化法是最常用的脂肪酸甲酯化方法之一、在这种方法中，常用的酸催化剂有硫酸、盐酸、硫酸铵等。
具体操作时，将脂肪酸和甲醇加入反应器中，加入适量的酸催化剂，并加热反应混合物。
随着反应的进行，脂肪酸与甲醇发生酯化反应生成甲酸酯。
最后，通过蒸馏纯化产物即可得到脂肪酸甲酯。
2.碱催化法：碱催化法是另一种常用的脂肪酸甲酯化方法。
在这种方法中，常用的碱催化剂有氢氧化钠、氢氧化钾等。
与酸催化法类似，将脂肪酸和甲醇加入反应器中，加入适量的碱催化剂，并加热反应混合物。
碱催化法的优点是反应速度较快，但在酯化反应结束后，需要采取一系列中和和纯化的步骤来去除催化剂和不溶性的杂质。
3.酶催化法：酶催化法是一种可溶性酶或固定化酶催化的甲酯化反应。
这种方法的优点是选择性高，反应条件温和，并且生成的产物通常不需要进一步纯化。
常见的酶催化剂包括脂肪酶、酵母等。
在酶催化法中，将脂肪酸、甲醇和酶一起置于反应器中，并加入适量的缓冲液进行反应。
酶催化法能够在常温下进行，并且不会产生废弃物。
脂肪酸甲酯化反应的影响因素主要包括反应温度、催化剂用量、底物摩尔比等。
较低的反应温度和较高的催化剂用量通常能够提高反应速率和产率。
此外，在脂肪酸甲酯化反应中，质子酸和碱酸催化通常比酶催化产生更高的产率，但酶催化法通常更适用于在温和条件下进行选择性的甲酯化。
在实际应用中，脂肪酸甲酯化反应广泛应用于生物燃料的合成、香料和化妆品的制造等领域。
研究人员也在不断改进脂肪酸甲酯化反应的方法，以提高产率和选择性，并减少催化剂的使用量和反应条件的能耗。
关于脂肪酸甲酯化方法的简化
油脂在碱性条件下皂化和甲酯化， 生成脂肪酸甲酯。
2 试剂和材料
除非另有说明，本文所用试剂均为 分析纯，水为 ＧＢ／Ｔ ６６８２ 规定的一级水。 ２．１ 试剂
氢氧化钾 ＫＯＨ；无水甲醇 ＣＨ３ＯＨ（色 谱纯）；无水硫酸钠（Ｎａ２ＳＯ４）；正庚 烷 ＣＨ３（ＣＨ２）５ＣＨ３）（色谱纯）。 ２．２ 试剂配制
继续回流 ２ ｍｉｎ，用少量水冲洗回流冷 凝器，停止加热后，从水浴上取下烧 瓶，迅速冷却到室温。之后准确加入 １０ ～ ３０ ｍＬ 的正庚烷，振摇 ２ ｍｉｎ， 再加入饱和氯化钠水溶液，静置分层 后吸取上层正庚烷提取液约 ５ ｍＬ，至 ２５ ｍＬ 试管中，加入大约 ３ ～ ５ ｇ 无水 硫酸钠，振摇 １ ｍｉｎ，静置 ５ ｍｉｎ，吸 取上层溶液到进样瓶中上气相色谱仪测 定 ［２］。整个过程，从碱性条件中皂化到 甲酯化，需要很长的时间，不但需要的 试剂和仪器较多，而且检验周期也长。
氢氧化钾的甲醇溶液（２ ｍｏｌ／Ｌ）：
将 １３．１ ｇ 氢氧化钾溶于 １００ ｍＬ 无水 甲醇中，可轻微加热，加入无水硫酸 钠干燥，过滤，即得澄清溶液。 ２．３ 材料
花生油。
3 仪器和设备
漩涡振荡器；电子天平（感量 ０．１ ｍｇ）；气相色谱仪（配有氢火焰离子化 检测器（ＦＩＤ））；毛细管色谱柱（聚二 氰丙基硅氧烷强极性固定相，柱长 １００ ｍ，内径 ０．２５ ｍｍ，膜厚 ０．２ μｍ）。
图 1 脂肪酸气相色谱图
参考文献 [1] 中华人民共和国国家卫生和计划生
育委员会 .GB/T1534-2003 食品安全国家标 准 花生油 [S].北京:国家标准出版社,2003.
[2] 中华人民共和国国家卫生和计 划生育委员会 .GB 5009.168-2016 食 品安全国家标准 食品中脂肪酸的测定 [S]. 北京 : 国家标准出版社 ,2016.
不同脂肪酸甲酯化方法对共轭亚油酸分析的影响
不同脂肪酸甲酯化方法对共轭亚油酸分析的影响一、本文概述共轭亚油酸（Conjugated Linoleic Acid, CLA）是一种具有特殊结构和生理活性的不饱和脂肪酸，因其独特的健康益处，如抗氧化、抗炎、抗癌和降低心血管疾病风险等，而受到了广泛关注。
为了准确地分析和评估CLA的含量及其在各种食品或生物样品中的分布，甲酯化方法的选择显得尤为重要。
甲酯化不仅能提高脂肪酸的分析灵敏度，还能使其更适合于气相色谱或质谱等分析技术的检测。
本文旨在探讨不同脂肪酸甲酯化方法对共轭亚油酸分析的影响。
我们将详细介绍几种常用的甲酯化方法，包括酸催化甲酯化、碱催化甲酯化以及酶催化甲酯化等，并评估它们在CLA分析中的适用性。
我们还将讨论不同甲酯化条件（如温度、时间、催化剂类型和浓度等）对CLA分析结果的影响，并提出优化甲酯化条件的策略。
通过比较不同方法的分析结果，本文旨在为CLA的准确分析提供指导，并为相关领域的研究者提供有益的参考。
二、脂肪酸甲酯化方法概述脂肪酸甲酯化是生物化学分析中的一个重要步骤，尤其在共轭亚油酸（CLA）的分析中显得尤为重要。
通过甲酯化，脂肪酸可以从其原始的甘油酯形式转化为易于分析的甲酯形式，从而便于使用气相色谱（GC）或高效液相色谱（HPLC）等仪器进行检测。
脂肪酸甲酯化的方法主要有酸催化甲酯化、碱催化甲酯化以及酶催化甲酯化等。
酸催化甲酯化方法主要利用硫酸、盐酸等无机酸作为催化剂，通过加热使脂肪酸与甲醇发生酯化反应。
这种方法操作简便，但反应时间较长，且可能产生副反应，导致结果不准确。
碱催化甲酯化则使用氢氧化钠、氢氧化钾等碱性物质作为催化剂，反应条件相对温和，但碱性物质可能对某些仪器产生腐蚀作用，影响分析结果。
近年来，酶催化甲酯化方法逐渐受到关注。
该方法利用脂肪酶或酯酶作为催化剂，具有反应条件温和、副反应少、对仪器无腐蚀等优点。
然而，酶催化甲酯化方法通常需要较高的酶浓度和较长的反应时间，且酶的稳定性也是制约其应用的一个重要因素。
甲酯化方法
甲酯化方法1、精炼纯种油取油样100~250mg左右于25mL容量瓶中，加入（1：1）石油醚：乙醚2mL，振摇，再加入0.4mol/L KOH-甲醇溶液1mL，振摇，放置30min，注水至瓶颈，等待分层，取上清液加入适量无水硫酸钠，微量进样针取1ul上机测试。
2、饲料（参考《饲料脂肪酸组成的分析测定》第13卷增刊）首先，提出粗脂肪。
然后，取100~250mg左右于25mL容量瓶中，加入（1：1）石油醚：乙醚2mL，振摇，再加入0.4mol/L KOH-甲醇溶液1mL，振摇，放置30min，注饱和盐水至瓶颈，等待分层，取上清液加入适量无水硫酸钠，微量进样针取1ul上机测试。
3、磷脂取样品100~250mg左右于25mL容量瓶中，加入正己烷2mL，振摇溶解，再加入0.4mol/L KOH-甲醇溶液1mL，振摇，放置30min，注饱和盐水至瓶颈，等待分层，取上清液加入适量无水硫酸钠，微量进样针取1ul上机测试。
4、溶血磷脂第一种方法：取样品100~250mg左右于25mL容量瓶中，加入正己烷2mL，振摇溶解，再加入0.4mol/L KOH-甲醇溶液1mL，振摇，放置30min，注饱和盐水至瓶颈，等待分层，取上清液加入适量无水硫酸钠，微量进样针取1ul上机测试。
第二种方法：取样品100~250mg左右于25mL容量瓶中，加入0.5mol/L氢氧化钠甲醇溶液4mL，70℃水浴10min，趁热加入14%三氟化硼甲醇溶液5mL，70℃水浴10min，趁热加入正己烷2mL，取出容量瓶，加入适量饱和盐水，振摇，继续加入至瓶颈，静置分层。
取上清液加入适量无水硫酸钠，微量进样针取1ul上机测试。
警告：1、三氟化硼有毒，试验必须在通风厨进行，且带上防护口罩、防护手套、穿大白褂。
2、玻璃器具用后，应立即用水冲洗。
5、鱼油取油样100~250mg左右于25mL容量瓶中，加入正己烷2mL，振摇，再加入0.4mol/L KOH-甲醇溶液2mL，振摇，放置30min，注饱和盐水至瓶颈，等待分层，取上清液加入适量无水硫酸钠，微量进样针取1ul上机测试。
甲酯化方法
甲酯化方法方法1：适用对象：所有油脂样品，适合高酸值油脂。
取油约30～50mg（1滴）于50ml圆底烧瓶中，加入0.5M的KOH甲醇溶液2ml，置于70℃水浴回流皂化反应约10分钟，反应过程不时振荡，至油脂溶解，适当冷却2分钟，然后加入3ml BF3甲醇溶液，置于70℃水浴回流反应5分钟，使甲酯化完全。
然后冷却，加入2～3ml正己烷或石油醚，轻轻摇荡以促进甲酯在正己烷中的溶解。
然后加入饱和食盐水使正己烷上升至瓶口，稍等约1分钟，吸取上层正己烷相（淡黄色）于装有少量无水Na2SO4（目的是脱水）的样品瓶（管）中待用。
本方法准确度较高。
方法2：适用对象：酸值小于3，最好酸值小于0.5的油脂取油约50mg在具塞离心管中溶解于5ml正己烷中，然后加入2M的KOH甲醇溶液0.5ml，室温（25℃或以上）振荡，反应5min，于离心机中离心，直接取上层正己烷相进样。
本方法适用于简单分析。
方法3：适用对象：游离脂肪酸取油约30～50mg（1滴）于50ml圆底烧瓶中，加入5ml BF3甲醇溶液，置于70℃水浴回流反应5分钟，使甲酯化完全。
然后冷却，加入2～3ml正己烷或石油醚，轻轻摇荡以促进甲酯在正己烷中的溶解。
然后加入饱和食盐水使正己烷上升至瓶口，稍等约1分钟，吸取上层正己烷相（淡黄色）于装有少量无水Na2SO4（目的是脱水）的样品瓶（管）中待用。
BF3甲醇溶液：一份BF3乙醚加2份甲醇，该混合为放热反应，各物质要提前冷冻并控制混合速度。
BF3为白色烟雾有毒性，请注意勿吸入，通常闻到BF3甲醇溶液的气味为低毒性的乙醚。
长期放置的BF3容易出怪峰，BF3宜低温保存。
脂肪酸甲酯衍生化方法
·仪器信息网上下载的关于脂肪酸甲酯化的方法！ -|mysoybean 发表于 2009-1-13 20:11:00推荐一、主题内容与适用范围本标准适用于所有的动植物油脂和脂肪酸。
二、目的油脂及脂肪酸（特别是12碳以上的长碳链脂肪酸）一般不直接进行气相色谱分析，其原因是脂肪酸及油脂的沸点高，高温下不稳定，易裂解，分析中易造成损失。
因此，对脂肪酸及油脂的脂肪酸组分分析时，先将脂肪酸或油脂与甲醇反映，制备脂肪酸甲酯，降低沸点，提高稳定性，然后进行气相色谱分析。
三、 BF3甲酯化法1、仪器（1）50ml及100ml磨口圆底烧瓶（2）回流冷凝器（长度20～30cm，有磨口连接，与烧瓶配套）（3）250ml 分液漏斗（4）滴管（5）带磨口玻璃塞的试管（6）10ml移液管（7）沸石2、试剂（1）正庚烷，色谱纯（2）轻汽油（沸程40～60℃）（3）无水硫酸钠，分析纯（4）0.5M的氢氧化钠甲醇溶液（不用标定），配制如下：称取2g NaOH溶于100ml甲醇中（甲醇的含水量不得超过0.5％<m/m>），该溶液放置一段时间后会出现白色沉淀，这不影响脂肪酸甲酯化制备。
（5）12～25％（m/m）BF3的甲酯溶液（6）饱和的NaCl水溶液（7）甲基红指示剂：用60％的乙醇配置0.1％的甲基红溶液（8）氮气：含氧量低于5mg/kg3、操作方法（1）取大约350mg油样加入50ml烧杯中，移取6ml 0.5M的NaOH于油样中，并加入几粒沸石，连接回流装置，开始加热回流，回流过程中要不断摇动烧瓶。
（2）当烧瓶内的油珠消失，溶液变得透明时（大约需要5～10分钟），从冷凝器上端加7ml BF3甲醇溶液于烧杯内（用移液管移取），然后继续回流1分钟。
（3）然后从冷凝管上端加入2～5ml正庚烷后，再回流1分钟。
（4）撤离火源，取出烧瓶，向烧瓶中加入一定量的饱和NaCl溶液，轻轻上下颠倒数次后，静置分层。
（5）从烧杯内的上层溶液中取出约1ml转移到磨口试管中，并加入适量的无水硫酸钠，以去除痕量的水分，得到的此甲酯化样品以备气相色谱分析用。
稻谷脂肪酸值的测定
稻谷中脂肪酸的测定可以通过以下步骤进行：
1. 样品准备：将需要测定的稻谷样品进行研磨，以获得均匀的粉末样品。
2. 脂肪提取：使用适当的溶剂（如正己烷）将脂肪从稻谷样品中提取出来。
可以采用常见的萃取方法，如Soxhlet提取或者超声波辅助提取。
3. 脂肪酸甲酯化：将提取得到的脂肪溶解于甲醇中，然后加入适量的碱（如氢
氧化钠），进行甲酯化反应。
这个步骤将脂肪酸转化为相应的甲酯形式，便于后续分析。
4. 脂肪酸分析：采用气相色谱法（Gas Chromatography, GC）或液相色谱法（Liquid Chromatography, LC）对脂肪酸甲酯进行分析。
在气相色谱法中，通常
使用具有高分辨率和分离能力的毛细管柱，并通过检测器检测脂肪酸的相对含量。
在液相色谱法中，可以使用逆相色谱柱或者亲水色谱柱进行分离，并通过紫外检测器或荧光检测器进行定量分析。
5. 数据处理：根据脂肪酸的相对峰面积或峰高，计算出每种脂肪酸的相对含量或绝对含量。
可以使用标准品进行定量校正。
需要注意的是，脂肪酸的测定方法可能会因实验室的设备和分析要求而有所不同。
因此，在进行具体实验之前，建议查阅相关文献或咨询专业的分析实验室以获取最新的方法和建议。
脂肪酸甲酯化和定量分析方法
脂肪酸甲酯化和定量分析方法三氟化硼甲酯化法1 试剂BF3－甲醇溶液正己烷2 两步法（1）苯—石油醚（1：1）1ml溶解脂肪，加14％BF3－甲醇溶液2ml，水浴100℃，维持35min（主要甲酯化PC、PE、PI等），水浴前需充氮气保护（2）取出，加入2ml苯＋2ml甲醇（主要融解胆固醇酯，游离脂肪酸），继续加热35min，同样需充氮气保护3 提取脂肪酸甲酯1～2ml正己烷，加蒸馏水平衡离心管重。
充分振荡后离心，重复两次。
3000转/min， 10min 4 加内标及浓缩加入内标物（0.1g脂肪+0.3ml内标物），旋转蒸发浓缩样品。
注意:（1）1ml试剂融解4～16mg脂肪，本试验中最大体积6ml，脂肪不超过0.1g （2）水浴甲酯化时，特富龙管不能倾斜（否则会丢失甲醇，增加BF3浓度，从而破坏PUFA）（3）加热时间过长，将导致PUFA被破坏（4）适用于脂肪和冷冻干燥样品的分析参考文献：Morrison W R and Smith L M, 1964 j.lipid research 5:600-608酸法更适合于游离脂肪酸的分析1％硫酸－甲醇酯化法此方法适用于游离脂肪酸和脂肪及水分含量较高的样品进行直接分析（寇秀颖于国萍2005 脂肪和脂肪酸甲酯化方法的研究食品研究与开发 26（2）：46～48）1 称取油脂或脂肪酸50mg，加入1％硫酸－甲醇2ml于80℃水浴60min2 冷却后加入2ml正己烷，再加蒸馏水5ml，离心，后取出上清夜，再用1ml正己烷重复提取脂肪酸甲酯，再次离心，后合并上清夜，待测。
3 加内标及浓缩加入内标物0.2～0.3ml（10mg/ml，0.1g脂肪加内标0.3ml），旋转蒸发至1ml左右2.5mol硫酸－甲醇化法称取油脂或脂肪酸50mg，加入2.5mol/L硫酸－甲醇1.0ml，于70℃水浴30min，加入2ml正己烷提取甲酯化产物，取出上清液，再次加入1ml正己烷洗涤，上清夜合并后待测参考文献同上。
5种脂肪酸甲酯化方法的酯化效率研究
5种脂肪酸甲酯化方法的酯化效率研究将碳数为4～18的脂肪酸甲酯化，是有机合成中重要的方法，也是一种重要的工业体系。
脂肪酸甲酯化反应可以通过多种方法进行，如酯化缩合（主要是以金属氧化物、氢氧化物和碱为催化剂）、多原子甲基化和富勒烯双轴改性，其中酯化缩合是目前最为普遍的方法。
由于不同的酯化缩合反应催化剂具有不同的活性和选择性，因此，选择合适的催化剂和条件是决定酯化效率高低的关键。
本文探讨了5种主要的脂肪酸甲酯化反应，即催化碱、烷基硅烷（TMS）、乙酸乙酯（Grignard）、月桂酸钠（NaO）和维氏钠（NaV）。
首先，通过经典试验检验碱催化脂肪酸甲酯化反应的效率。
碱在-20°C和25°C的温度下，以正丁醇（MEOH）和正辛醇（MEP）作为溶剂组成催化剂体系，分别用乙酸钠（NaHCO3）和碳酸钠（Na2CO3）作为催化剂测定脂肪酸甲酯化反应。
实验结果表明，由于反应温度和醇的种类不同，催化碱催化甲酯化反应的速度不同，但大部分脂肪酸的酯化率都较高，可达到90％以上。
接着，采用TMS烷基硅烷进行催化缩合，以改变脂肪酸的光学性质，测量酯化反应的酯化效率。
TMS烷基硅烷的催化酯化反应以正丁醇（MEOH）作为溶剂，以乙酸乙酯（Grignard）为催化剂，TMS烷基硅烷酯化反应的速率大于碱酯化反应，但大部分脂肪酸的酯化率仍较低。
此外，经月桂酸钠（NaO）催化的脂肪酸甲酯化反应，大部分脂肪酸的酯化效率与催化碱和TMS烷基硅烷的酯化效率相比较较低，可达到约80％。
最后，研究了以梳状碱（NaV）为催化剂的脂肪酸甲酯化反应，实验结果表明，采用NaV催化剂，大部分脂肪酸的酯化效率可达到90％以上，这一测试数据达到了既定的要求，酯化反应酯化效率比其他催化剂高。
因此，从上述5种脂肪酸甲酯化反应体系中可以看出，以维氏钠（NaV）为催化剂的脂肪酸甲酯化反应效率最高，可达到超过90％的要求，因此，维氏钠（NaV）作为催化剂，可以应用于高性能的脂肪酸甲酯化反应中。
甲酯气相色谱法测定脂肪酸组成
甲酯气相色谱法测定脂肪酸组成
甲酯气相色谱法是一种常用的测定脂肪酸组成的分析方法。
其基本原理是将脂肪酸样品或其甲酯化产物在高温下蒸发，并通过气相色谱仪进行分离和定量。
下面是甲酯气相色谱法测定脂肪酸组成的步骤：
1. 样品制备：将脂肪酸样品溶解在有机溶剂中，并进行酯化反应，得到脂肪酸甲酯产物。
2. 色谱柱选择：选择合适的色谱柱，常用的是具有极性的聚酯柱或聚醚柱。
3. 样品注射：将甲酯化样品注入气相色谱仪的样品口，一般采用进样器自动进样。
4. 色谱程序设置：通过调节色谱仪的温度程序和适宜的载气流速，使样品中的脂肪酸甲酯在柱上进行分离。
5. 定量测定：使用检测器测量柱上分离的各个脂肪酸甲酯的峰面积，并通过峰面积比或标准曲线法进行脂肪酸组成的定量。
6. 数据分析：根据不同脂肪酸甲酯的峰面积，可以计算得到脂肪酸组成的相对含量或百分比。
需要注意的是，甲酯气相色谱法只能分析脂肪酸甲酯并不适用于测定游离脂肪酸的含量。
另外，样品制备过程中需注意保持
反应条件的稳定性，以避免产生不可控的甲酯化产物，从而准确测定脂肪酸组成。
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一、主题内容与适用范围
本标准适用于所有的动植物油脂和脂肪酸。
二、目的
油脂及脂肪酸（特别是12碳以上的长碳链脂肪酸）一般不直接进行气相色谱分析，其原因是脂肪酸脂肪酸及油脂的沸点高，高温下不稳定，易裂解，分析中易造成损失。
因此，对脂肪酸及油脂的脂肪酸组分分析时，先将脂肪酸或油脂与甲醇反映，制备脂肪酸甲酯，降低沸点，提高稳定性，然后进行气相色谱分析。
三、BF3甲酯化法
1、仪器
（1）50ml及100ml磨口圆底烧瓶
（2）回流冷凝器（长度20～30cm，有磨口连接，与烧瓶配套）
（3）250ml分液漏斗
（4）滴管
（5）带磨口玻璃塞的试管
（6）10ml移液管
（7）沸石
2、试剂
（1）正庚烷，色谱纯
（2）轻汽油（沸程40～60℃）
（3）无水硫酸钠，分析纯
（4）0.5M的氢氧化钠甲醇溶液（不用标定），配制如下：
称取2g NaOH溶于100ml甲醇中（甲醇的含水量不得超过0.5％<m/m>），该溶液放置一段时间后会出现白色沉淀，这不影响脂肪酸甲酯化制备。
（5）12～25％（m/m）BF3的甲酯溶液;
（6）饱和的NaCl水溶液
（7）甲基红指示剂：用60％的乙醇配置0.1％的甲基红溶液
（8）氮气：含氧量低于5mg/kg
3、操作方法，
（1）取大约350mg油样加入50ml烧杯中，移取6ml 0.5M的NaOH于油样中，并加入几粒沸石，连接回流装置，开始加热回流，回流过程中要不断摇动烧瓶。
（2）当烧瓶内的油珠消失，溶液变得透明时（大约需要5～10分钟），从冷凝器上端加7ml BF3甲醇溶液于烧杯内（用移液管移取），然后继续回流1分钟。
（3）然后从冷凝管上端加入2～5ml正庚烷后，再回流1分钟。
（4）撤离火源，取出烧瓶，向烧瓶中加入一定量的饱和NaCl溶液，轻轻上下颠倒数次后，静置分层。
（5）从烧杯内的上层溶液中取出约1ml转移到磨口试管中，并加入适量的无水硫酸钠，以去除痕量的水分，得到的此甲酯化样品以备气相色谱分析用。
4、注解;
（1）BF3有毒，因此该试验应在通风厨中进行，同时，用后的所有玻璃仪器应立即清洗；
（2）如果待测脂肪酸或构成油脂的脂肪酸含有2个以上的双键，建议反应的烧杯中先充氮处理；
（3）若样品为纯脂肪酸，则试验可省去皂化，直接取一定量的脂肪酸，加入适
量的BF3甲醇溶液，煮沸2分钟，然后同上方法的3、4、5、6步骤操作；（4）BF3甲醇溶液货架期短，一般现配现用，或者置于冰箱中储藏，否则会使GLC中分析中出现怪峰，甚至造成多不饱和酸的损失；
（5）BF3甲酯化法适用于AV>2的油脂或脂肪酸；
（6）若待测脂肪酸中不含有二十碳及二十碳以上的成分，则可用正己烷代替正庚烷；
（7）应尽可能快的分析这些已甲酯化的样品，否则应将他们保存在充氮气带磨塞的瓶内，可在2℃下存放24小时。
四、碱式甲酯化——适用于AV<2的油脂
1、仪器
（1）100ml磨口锥形或圆底烧瓶
（2）与烧瓶配套的回流冷凝器
（3）50ml锥形瓶
（4）150ml或250ml 的分液漏斗
（5）电热磁力搅拌器
（6）沸石
2、试剂;
（1）正庚烷，色谱纯
（2）甲醇（含水量不得超过0.5％<m/m>）
（3）无水硫酸钠，分析纯)
（4）1M的KOH甲醇溶液（不用标定），配制如下：
称取5.6g KOH溶于100ml甲醇中。
（5）氮气：含氧量低于5mg/kg
3、操作方法:
（1）取约4g油样于圆底或锥形烧瓶中；
（2）称取40ml甲醇及0.5ml 1M KOH甲醇溶液于油样中，并加入几粒沸石，连接回流装置，开始加热回流，回流过程中要不断摇动烧杯，直至溶液澄清透明为止（大约需5～10分钟）；
（3）撤离热源，取出烧瓶，并在冷水中冷却；
（4）将烧瓶的内容物转移到分液漏斗中，并用20ml正庚烷洗涤烧瓶，将此洗涤液一并转移到分液漏斗中，并向分液漏斗中加入40ml蒸馏水，摇动，静置分层，上层为酯层，下层为水层，下层溶液用20ml正庚烷萃取，萃取的上层溶液与酯层合并，得到的脂肪酸酯的正庚烷溶液再用蒸馏水进行多次洗涤直至废水呈中性为止，分离出酯层；
（5）得到的酯层溶液用无水硫酸钠干燥后，过滤蒸发，得到约20ml的脂肪酸甲酯的正庚烷溶液，以备分析用
4、注解
（1）所取油样不必局限为10mg，液可以取样量少一点；
（2）所制备出来的脂肪酸甲酯液，若不马上进行GLC分析，可充N2放入冰箱保存，也可加入一定量的抗氧化剂低温保存；
（3）若进行红外色谱分析时，必须将溶液完全去除；但是在去除溶剂时不能将操作步骤拖的太长，也不能将氮气吹的太猛，否则会造成某些易挥发酯类的损失。
五、酸催化甲酯化——适用于AV>2的油脂或脂肪酸
1、仪器
（1）250ml磨口锥形或圆底烧瓶
（2）与烧瓶配套的回流冷凝器
（3）50ml锥形瓶
（4）150ml或250ml 的分液漏斗!
（5）电热磁力搅拌器
（6）沸石7
2、试剂
（1）正庚烷，色谱纯
（2）无水硫酸钠，分析纯
（3）甲醇钠溶液（不用标定），配制如下：
称取1g NaOH溶于100ml甲醇中（甲醇的含水量不得超过0.5％<m/m>）
（4）甲基红指示剂：用60％的乙醇配置0.1％的甲基红溶液
（5）氮气：含氧量低于5mg/kg
（6）1M HCl甲醇溶液（无水，不需标定）
3、操作方法
（1）取约4g油样于烧杯中；
（2）移取40ml甲醇钠溶液于烧瓶中，并加入几粒沸石，连接回流装置，开始加热回流，回流过程中要不断摇动烧瓶，直至溶液澄清透明为止（大约需要10～15分钟），在加入50ml 1 M得HCl甲醇溶液于烧瓶中，再煮沸10分钟；
（3）撤离热源，取出烧瓶，并在冷水中冷却烧瓶；
（4）于烧瓶中加入100ml蒸馏水，然后将烧瓶内的内容物转移到分液漏斗中，并加入30ml正庚烷后，剧烈摇动分液漏斗，静置分层，将放出的下层溶液用30ml 正庚烷萃取，萃取的上层溶液倒回分液漏斗中，用蒸馏水对分液漏斗内的脂肪酸酯的正庚烷溶液进行多次洗涤，直至废水层呈中性为止；
（5）得到的酯层溶液用无水硫酸钠干燥后，过滤，蒸发得到约20ml的脂肪酸甲酯的正庚烷溶液，以备分析用。
4、注解
（1）若待分析样为脂肪酸时，则可直接取约4g脂肪酸，加入50ml HCl甲醇溶液及沸石，加热回流10分钟，其余同3、4、5。
（2）若脂肪酸含有2个以上的双键，则可通氮气处理；
（3）也可用0.5M的H2SO4甲醇溶液做催化剂。
六、简易碱法甲酯化（一）
1、仪器
（1）10ml带塞磨口试管；
（2）5ml移液管（最小刻度0.1ml）；
（3）0.2ml移液管；
（4）小型离心机
2、试剂
（1）正己烷，色谱纯；
（2）0.5M的甲醇钠（不需标定）：1.15g钠溶于100ml甲醇中（甲醇的含水量不得超过0.5％<m/m>）；
（3）无水硫酸钠
3、操作方法
20mg左右得油样溶于2.5ml得正己烷中（试管中），加入0.1ml得0.5M甲醇钠
溶液，室温下轻摇5分钟，然后加入少量无水硫酸钠，静置1小时后于2000～3000rpm下离心2～3分钟，上层清液可用于GLC分析。
4、注解
（1）油样量不必准确称取；
（2）本试验也可省略离心分离一步，放置1小时后，直接取上层清液，进行GLC 分析即可；
（3）本方法不适用于含特殊脂肪酸的油脂，同时不适用于脂肪酸的甲酯化，适用于含杂少，酸价低的油脂。
七、简易甲酯化法（二）
1、BF3-甲醇快速甲酯化法：称取150mg油样移入50ml容量瓶中，加入0.5mol/L 的氢氧化钠甲醇溶液4ml使之溶解，待溶液呈透明状后，置水浴上沸腾5min，油脂基本上溶化，冷却后，加入5ml BF3－甲醇溶液，再置于水浴上沸腾2min，加入足量饱和氯化钠溶液，上层有黄色液体，加1ml石油醚，振荡，静置，取上层溶液进行色谱分析。
2、室温下脂肪酸快速甲酯化法：称取100mg油样，置于具塞试管中，加入1～2ml石油醚（30～60℃）与苯（1＋1）混合液，振摇使油脂溶解后，加入1～2ml 0.4M的KOH-甲醇溶液，混匀后在室温下静置5～10分钟，加入12ml水，振摇，静置，取上层清液，即可进行色谱分析。
油料样品同样液可以用此法直接进行甲酯化，但是样品量要多些，250～500mg，将样品用乳钵粉碎后，即可按上述步骤操作。
【备注】BF3溶液的制备：40g市售三氟化硼乙醚复合物[BF3-O(C2H5)2]和100g 无水甲醇混合而成。