实验8 植物可溶性糖的测定

测定蔗糖
不预处理
间苯二酚比色法
测定果糖
葡萄糖氧化酶法
测定葡萄糖

利用实验间隙，观看视频材料：
《用一种生物材料设计一组生物实验的方法》
1、应用此法测得的糖具体包括哪几种糖类？
2、用此法测定时，什么样的材料需要用活性碳脱色？
3、请设计一实验，用本实验获得的同一份提取液在测 定可溶性糖含量的同时，一并测定蔗糖、葡萄糖和果 糖？这种测定方法比分别测定有什么优点？
蒽酮比色法
测定可溶性总糖
同 一 份 乙 醇 抽 提 液
预处理
间苯二酚比色法

实验步骤

1 可溶性糖的提取：
分别取2粒干种子和萌发种子于研 钵中，加80%乙醇少许，磨成匀浆，倒 入大试管中， 再用80%乙醇洗涤，水浴 80℃半小时，冷却后转移至10ml量筒， 并用80%乙醇定容至10ml。过滤，所得 的透明液体即为可溶性糖提取液。
Fra Baidu bibliotek
2 显色及比色：吸取上述糖提取液1ml， 加入5ml蒽酮试剂，沸水浴10 min，冷却后 于625nm处测OD值，从标线取得提取液中 糖的浓度。
表1 不同种子和同一种子萌发前后可溶性糖含量变化
小麦种子 干种子 可溶性 糖含量 萌发种子 萝卜种子 干种子 萌发种 子
注意事项


1 定量实验，且涉及标准曲线绘 制，分光光度计的使用，因此溶 液配制、材料选取等方面必须精 确、仔细，减少误差。 2 实验组、对照组步骤应同步， 使结论准确。
问题：

3 绘制标准曲线：取标准葡萄糖溶液将其 稀释0、20、40、60、80μg/mL系列浓度， 按上述方法分别测其OD值，绘制标准曲线。
计算：





V 为植物样品提取液的体积 C 为提取液糖的浓度 W 为植物样重或为颗粒数 可溶性糖 % = CV/W 同一种子类型之间按每粒种子 计算
实验结果：
实验八
植物可溶性糖的测定
实验原理

糖在硫酸作用下生成糠醛，糠醛再 与蒽酮作用生成绿色络合物，颜色 的深浅与糖含量有关，在625 nm波 长下OD值与糖含量成正比，由于蒽 酮试剂与糖反应的呈色强度随时间 变化，故必须在反应后立即在同一 时间内比色。
实验材料
小麦干种子 小麦萌发种子 萝卜干种子 萝卜萌发种子 均为市售，萌发条件为25℃ 下黑暗萌发3天。