植物体内可溶性糖和淀粉的测定

可溶性总糖、蔗糖和淀粉测定

蔗糖、可溶性总糖和淀粉联合测定一、原理CH2O+蒽酮试剂——蓝绿色物质，在含糖5-80µg显色稳定，重现性好，在620nm下测定消光值。

稀碱与糖溶液共热时，可破坏还原糖，而蔗糖不被破坏；淀粉经酸水解后与蒽酮试剂显色。

注意：硫酸含水量、反应温度、显色时间均影响显色度，测定时应严格控制反应条件，使显色温度和时间与做标准曲线时一致。

二、仪器与试剂仪器：分析天平（0.001g）、分光光度计、水浴锅、离心机（4000转/分）、离心管（10ml）、移液管（1、2、5、10ml）、容量瓶（50、100、1000ml）、试管试剂：（1）蒽酮试剂：84ml浓硫酸+16ml蒸馏水=88%硫酸；0.15g蒽酮溶于100ml 88％硫酸（现配现用，棕色瓶中冷藏室内可存3-5天）（2）30％KOH：称取30g KOH，溶解后定容至100ml（3）9.2N高氯酸：741ml 12.4N的高氯酸定容至1000ml（4）标准蔗糖、葡萄糖溶液（1mg/ml）：取分析纯0.1000g溶于蒸馏水定容至100ml三、测定步骤1、茎、叶、柄中的可溶性总糖和淀粉提取（1）准确称取烘干样品0.1000g置10ml离心管中，加蒸馏水6-7ml，置沸水浴中加热提取20分钟，取出冷却，离心5-10分钟（4000r/min），转移上清液于50ml容量瓶中，同样方法重复提取两次，合并上清液于50ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀（此为A液，供蔗糖和可溶性总糖测定）。

（2）向沉淀中加水4ml，加入2ml 9.2N高氯酸，沸水浴中提取20分钟；取出冷却，离心5-10分钟，其上清液转移于50ml容量瓶。

再向沉淀中加水5ml，加入1ml9.2N高氯酸，沸水浴中提取20分钟；取出冷却，离心5-10分钟，其上清液转移于50ml容量瓶。

然后用水洗沉淀1-2次，全部转移于容量瓶中，并定容至刻度，摇匀（此为B液，供淀粉测定）。

2、块根中的可溶性总糖和淀粉提取（1）准确称取烘干样品0.1000g置10ml离心管中，加乙醇（80%）5ml，置80℃水浴中加热提取20分钟，取出冷却，离心5-10分钟（4000r/min），转移上清液于50ml容量瓶中，同样方法重复提取两次，合并上清液于50ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀（此为A液，供蔗糖和可溶性总糖测定）。

淀粉的国标测定方法

淀粉的国标测定方法公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]淀粉的国标测定方法测定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法（酶-直接法）一、酶水解法1.原理样品经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。

2.适用范围，适用于所有含淀粉的食物。

3.仪器（1）回流冷凝器（2）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。

（1）乙醚（3）碘溶液：称取 g碘化钾溶于20 ml水中，加入 g碘，溶解后加水稀释至100 ml。

（4） 85 %乙醇。

（5）其余试剂同《蔗糖测定方法》5.操作方法样品处理称取2～5 g样品，置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用50 ml乙醚分5次洗除脂肪（注：如果脂肪含量少，此步骤可免），再用约100 ml85 %乙醇洗去可溶性糖类（注：此步骤目的是去除可溶性糖），将残留物移入250 ml烧杯内，并用50ml水洗滤纸及漏斗，洗液并入烧杯内，将烧杯置沸水浴上加热15 min，使淀粉糊化，放冷至60 ℃以下，加20ml淀粉酶溶液，再55～60 ℃保温1h，并时时搅拌（注：温度过高，淀粉酶的活性破坏）。

然后取1滴此液加1滴碘溶液，应不现兰色，若显兰色，再加热糊化并加20ml淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显兰色为止。

加热至沸，冷后移入250ml容量瓶中，并加水至刻度，混匀，过滤。

（注：此时淀粉已水解成双糖，过滤可去除残渣和纤维素）弃去初滤液，取50 ml滤液，置于250ml锥形瓶中，加5 ml 6 mol/L盐酸，装上回流冷凝器，在沸水浴中回流1h，冷后加2滴甲基红指示剂，用5mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，溶液转入100 ml容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗液并入100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀备用。

（淀粉在沸水浴条件下糊化是淀粉水解的第一步反应，然后在淀粉酶的作用下，分解成短链淀粉、糊精、麦芽糖等低聚合的糖，所以在淀粉酶解后需用酸进一步水解得到葡萄糖。

植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量测定

植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定摘要：目的通过标准曲线的绘制，测定白菜、芹菜、菠菜中可溶性蛋白和可溶性糖的含量，了解可溶性糖和可溶性蛋白的测定方式。

方式别离用蒽酮法和考马斯亮蓝染色法来测定植物体内可溶性糖和可溶性蛋白的含量。

结论关键词：白菜；芹菜；菠菜；可溶性蛋白含量；可溶性糖含量；蒽酮法；考马斯亮蓝染色法1 引言植物体内的可溶性糖和可溶性蛋白含量是重要的生理生化指标。

在作物的碳素营养中，作为营养物质主若是指可溶性糖和淀粉。

它们在营养中的作用要紧有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸进程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各类合成进程和各类生命活动提供了所需的能量。

由于碳水化合物具有这些重要的作用，因此是营养中最大体的物质，也是需要量最多的一类。

可溶性蛋白是植物体内氮素存在的要紧形式，其含量的多少与植物的代谢和衰老有紧密的关系，同时它与植物体维持渗透压抗脱水也有专门大关系。

白菜是叶用蔬菜，味道鲜美可口，营养丰硕，素有“菜中之王”的美称，为广大群众所喜爱。

芹菜属植物，富含蛋白质、碳水化合物、胡萝卜素、B族维生素、钙、磷、铁、钠等，同时，具有有平肝清热，祛风利湿，清肠利便、润肺止咳、降低血压、健脑镇定的功效。

菠菜一年生草本植物，菠菜含有丰硕的维他命A、维他命C及矿物质，它对各类贫血症和糖尿病、肺结核、高血压、风火赤眼等诸多疾病可起辅助医治作用。

2 材料与方式植物体内可溶性糖含量的测定材料新鲜的白菜、芹菜、菠菜叶片（剪碎后各取—）试剂葡萄糖标准溶液（200ug/ml)、蒽酮试剂仪器设备。

淀粉的国标测定方法

淀粉的国标测定方法测定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法（酶-直接法）一、酶水解法1.原理样品经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。

2.适用范围GB5009.9-85，适用于所有含淀粉的食物。

3.仪器（1）回流冷凝器（2）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。

（1）乙醚（2）0.5 % 淀粉酶溶液：称取淀粉酶（Sigma公司，E.C3.2.1.1）0.5 g，加100ml水溶解，加入数滴甲苯或三氯甲烷，防止长霉，贮于冰箱中。

（注：配成溶液的淀粉酶破坏很快，最好邻用现配。

）（3）碘溶液：称取3.6 g碘化钾溶于20 ml水中，加入1.3 g碘，溶解后加水稀释至100 ml。

（4）85 %乙醇。

（5）其余试剂同《蔗糖测定方法》5.操作方法5.1 样品处理称取2～5 g样品，置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用50 ml乙醚分5次洗除脂肪（注：如果脂肪含量少，此步骤可免），再用约100 ml85 %乙醇洗去可溶性糖类（注：此步骤目的是去除可溶性糖），将残留物移入250 ml烧杯内，并用50ml水洗滤纸及漏斗，洗液并入烧杯内，将烧杯置沸水浴上加热15 min，使淀粉糊化，放冷至60 ℃以下，加20ml淀粉酶溶液，再55～60 ℃保温1h，并时时搅拌（注：温度过高，淀粉酶的活性破坏）。

然后取1滴此液加1滴碘溶液，应不现兰色，若显兰色，再加热糊化并加20ml淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显兰色为止。

加热至沸，冷后移入250ml容量瓶中，并加水至刻度，混匀，过滤。

（注：此时淀粉已水解成双糖，过滤可去除残渣和纤维素）弃去初滤液，取50 ml滤液，置于250ml锥形瓶中，加5 ml 6 mol/L盐酸，装上回流冷凝器，在沸水浴中回流1h，冷后加2滴甲基红指示剂，用5mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，溶液转入100 ml容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗液并入100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀备用。

实验植物组织中可溶性糖含量的测定

实验方案一、实验目的通过实验，掌握测定萝卜品质的方法（一）萝卜外部形态的测定1、实验材料取鲜样3个∕小区直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸2、实验方法．用自来水将各组萝卜洗净后，再用蒸馏水洗涤，擦干表面水分．每个小区取3个重复，用电子天平称量每株的鲜重，用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长，取平均值作为指标值实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。

蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。

当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。

上述特定的糖类物质，反应较稳定。

该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。

三、材料、仪器及试剂1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器：分光光度计；恒温水箱； 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。

（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。

在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡2.称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。

实验24 植物组织中可溶性糖与淀粉的测定

实验24 植物组织中可溶性糖与淀粉的测定植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。

一、苯酚法测定可溶性糖【原理】植物体内的可溶性糖主要指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。

苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10～100μg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。

苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。

【仪器与用具】分光光度计；电炉；铝锅；20ml刻度试管；刻度吸管5ml 1支，1ml 2支；记号笔；吸水纸适量。

【试剂】1．90%苯酚溶液称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10ml溶解，在室温下可保存数月；2．9%苯酚溶液取3ml 90%苯酚溶液，加蒸馏水至30ml，现配现用；3．浓硫酸（比重1.84）；4．1%蔗糖标准液将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。

加少量水溶解，移入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度；5．100μg/ml蔗糖标准液精确吸取1%蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水定容。

【方法】1．标准曲线的制作取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。

表24-1 各试管加溶液和水的量然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。

比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。

然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。

2．可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份，或干材料。

可溶性糖、淀粉、蛋白质

植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定一、目的从一份植物样品中系统分离和测定可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质等多种成分，不仅对研究植物体内碳、氮代谢，了解植物的生长发育状况有重要意义，亦可以作为鉴定其品质的重要指标，而且也有助于训练基本操作技能。

二、原理（一）分离提取原理在80~85%的乙醇中，植物组织中的还原糖、蔗糖以及游离氨基酸和叶绿素等溶解，而淀粉及蛋白质沉淀，再用9.2mol/L高氯酸溶解淀粉（蛋白质沉淀），最后用0.1mol/L氢氧化钠溶解蛋白质，然后选用适当的方法测定各个提取液中相应物质的含量。

（二）测定原理1．蒽酮比色法——可溶性糖含量测定碳水化合物及其衍生物经浓硫酸处理，生成糠醛，再与蒽酮脱水缩合而生成蓝绿色化合物，在一定范围内其颜色深浅与碳水化合物含量成线性关系。

蒽酮反应的颜色深浅，随温度条件和加热时间而变化，葡萄糖显色高峰在100℃时，加热10min后出现，而核糖在相同温度下，加热3min后出现。

此法灵敏度高，糖含量达30μg即可测定。

2．茚三酮比色法——氨基酸含量测定氨基酸的游离氨基与水合茚三酮作用后，产生二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，在570nm下有最大光吸收。

在一定范围内，其颜色深浅与氨基酸的含量呈正比。

3．考马斯亮蓝G-250结合法——蛋白质含量测定考马斯亮蓝在游离状态时呈红色，当与蛋白质结合后变为蓝色，后者最大光吸收在595nm，在一定范围内（0~1000μg/mL），其颜色深浅与蛋白质的含量呈正比。

此法快速灵敏，反应在2min内即达到平衡，室温1h内颜色稳定，而且干扰物也少。

三、实验用品（一）实验材料：植物样品。

（二）器皿：1.25mL刻度试管×8，15mL试管×20；2.10mL离心管×2；3.容量瓶：50mL×1，25mL×1；4.移液管：5mL×2；2mL×4，1mL×2，0.1mL×2；5.恒温水浴锅；6.离心机；7.电子天平；8.分光光度计。

实验8 植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮比色法)

实验七植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。

蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。

当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。

上述特定的糖类物质，反应较稳定。

该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。

三、材料、仪器及试剂1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器：分光光度计；恒温水箱； 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。

（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。

在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。

置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。

3.糖含量测定用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中，加1ml水和0.5ml 蒽酮试剂。

植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定

实验四植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定一、目的从一份植物样品中系统分离和测定可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质等多种成分，不仅对研究植物体内碳、氮代谢，了解植物的生长发育状况有重要意义，亦可以作为鉴定其品质的重要指标，而且也有助于训练基本操作技能。

二、原理（一）分离提取原理在80-85%的乙醇中，植物组织中的还原糖、蔗糖以及游离氨基酸和叶绿素等溶解，而淀粉及蛋白质沉淀，再用9.2 mol/L高氯酸溶解淀粉（蛋白质沉淀），最后用0.1 mol/L氢氧化钠溶解蛋白质，然后选用适当的方法测定各个提取液中相应物质的含量。

（二）测定原理1.蒽酮比色法——可溶性糖含量测定碳水化合物及其衍生物经浓硫酸处理，生成糠醛，再与蒽酮脱水缩合而生成蓝绿色化合物，在一定范围内其颜色深浅与碳水化合物含量成线性关系。

蒽酮反应的颜色深浅，随温度条件和加热时间而变化，葡萄糖显色高峰在100℃时，加热10 min后出现，而核糖在相同温度下，加热3 min后出现。

此法灵敏度高，糖含量达30 μg即可测定。

2.茚三酮比色法——氨基酸含量测定氨基酸的游离氨基与水合茚三酮作用后，产生二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，在570 nm下有最大光吸收。

在一定范围内，其颜色深浅与氨基酸的含量呈正比。

3.考马斯亮蓝G-250结合法——蛋白质含量测定考马斯亮蓝在游离状态时呈红色，当与蛋白质结合后变为蓝色，后者最大光吸收在595 nm，在一定范围内（0-1000 μg /mL），其颜色深浅与蛋白质的含量呈正比。

此法快速灵敏，反应在2 min内即达到平衡，室温1h内颜色稳定，而且干扰物也少。

三、实验用品（一）实验材料：植物样品。

（二）器皿：1. 25 mL刻度试管⨯8 ，15 mL试管⨯20；2. 10 mL离心管⨯2；3. 容量瓶：50 mL⨯1 ，25 mL⨯1；4. 移液管：5 mL⨯2，2 mL⨯4，1 mL⨯2，0.1 mL⨯2；5. 恒温水浴锅；6. 离心机；7. 电子天平；8. 分光光度计。

大豆籽粒可溶性糖和淀粉含量的初步研究

大豆籽粒可溶性糖和淀粉含量的初步研究摘要：大豆可溶性糖和淀粉是大豆籽粒的重要组成部分，对其含量的遗传变异进行研究，可为大豆籽粒可溶性糖和淀粉遗传育种提供指导。

本研究采用苯酚硫酸法对154份大豆种质的可溶性糖和淀粉含量进行测定，结果表明：154份大豆材料籽粒可溶性糖和淀粉含量的遗传变异分别为51.16%和50.66%，可溶性糖和淀粉含量的均值分别为5.06%和6.53%。

根据测得的表型数据，从中筛选出可溶性糖含量高于10%或淀粉含量高于12%的优异种质8份和12份。

关键词：大豆；可溶性糖；淀粉；含量；遗传变异Keyword：oybean；olubleugar；tarch；content；geneticvariationHartwig等[5]研究表明大豆蛋白质与棉子糖和水苏糖总量之间存在着负相关，但不显著。

赵晋铭[6]应用植物数量性状主基因+多基因分離分析法表明菜用大豆可溶性糖和淀粉含量均由两对主基因控制，同时存在多基因修饰作用，其中主基因遗传率较高达40.4%～85.8%和77.4%～85.4%，而多基因遗传率则相对较低。

Hou等[7]研究表明大豆种质糖组分及总糖含量存在丰富的遗传变异，可为育种提供丰富的种质资源。

Jeong等[8]对日本种质库保存的6002份材料进行分析，结果表明淀粉含量变幅为2%～7%。

大豆可溶性糖和淀粉作为大豆营养成分的改良组分，相对于大豆蛋白质和油脂来说，研究的相对较少。

本文拟从本课题组保存的大豆资源中抽取154份栽培品种进行分析，筛选出可溶性糖或淀粉含量高的品种，为利用这些品种，培育高可溶性糖或淀粉含量且具有优良性状的大豆新品种提供条件。

1材料与方法1.1供试材料1.2试验方法1.2.1标准曲线的绘制取6支微量离心管，分别加入0.6mg·mL-1葡萄糖标准溶液9.6、14.4、19.2、24、28.8、33.6和36μL，并分别加入蒸馏水稀释到60μL，再滴加180μL显色液，混匀后沸水浴中加热25min并冷却，以不加葡萄糖标准液的为对照，用酶标仪测定490nm吸光度并作标准曲线。

常用样品分析方法--可溶性糖、淀粉、酚类和叶绿素含量的测定

常用样品分析方法——可溶性糖、淀粉、酚类和叶绿素含量测定一、可溶性糖和淀粉含量的测定方法可溶性糖和淀粉含量的测定方法为硫酸---蒽酮比色法。

测定原理为：淀粉是由葡萄糖残基组成的一类多糖物质，在酸性条件下加热可使其水解成单糖葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，单糖葡萄糖可以脱水生成糠醛或羟甲基糠醛类化合物，然后利用蒽酮试剂与糠醛化合物反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，即可比色进行定量测定。

测定步骤如下:1. 标准曲线的制作1.1 100ug/ml葡萄糖标准液的配制将分析纯葡萄糖在80℃下烘干，用0.0001g分析天平精确称取1g葡萄糖，转入50ml烧杯中，然后加入少量蒸馏水搅拌溶解，接着将溶解液转入100ml容量瓶，然后再往烧杯中加入少量蒸馏水润洗，最后将润洗液转入上述100ml容量瓶，重复上述润洗操作三次(注意溶解液和三次润洗液的体积总和控制在80ml 以内，以免超过容量瓶量程)，然后定容至容量瓶刻度线，塞上塞子，上下颠倒5次以，得到10mg/ml的葡萄糖溶液｡用移液枪吸取1ml葡萄糖标准液转入100ml 容量瓶，定容至刻度线，所得溶液即为100ug/ml的葡萄糖标准溶液。

1.2蒽酮乙酸乙酯试剂的配制用0.0001g分析天平精确称取分析纯蒽酮1g溶于50ml乙酸乙酯试剂中，贮藏于棕色瓶中，置于黑暗中保存｡1.3标准曲线制作编号0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1112100ug/ml葡萄糖溶液(ml) 00.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2蒸馏水ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8稀释液葡萄糖浓度（ug/ml）010 20 30 40 50 60注:1 2为一个重复，以此类推｡取13支20ml试管并分别编号为0-12，按照上表加好相应体积的葡萄糖溶液与蒸馏水并混匀后，再依次向每支试管中分别加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，加入浓硫酸时要缓慢以免反应过快液体飞溅，然后小心震荡，将试管放入沸水浴(100℃)1min，取出后自然冷却至室温，以编号为0的试管为空白对照，于620nm波长处测定吸光值，然后以葡萄糖浓度为横坐标，吸光值（OD 值）为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线，并拟合出方程（R2=0.99）。

可溶性糖测量方法

实验 12 植物组织中可溶性糖含量的测定在作物的碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。

它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为 NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。

由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。

Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖一、原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。

该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。

在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。

但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。

此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。

糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。

二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物鲜样或干样。

（二）试剂1. 80 ％乙醇。

2. 葡萄糖标准溶液（ 100 μg/mL ）：准确称取 100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至 100 mL ，使用时再稀释 10 倍（ 100 μg/mL ）。

(实验)可溶性糖及淀粉含量的测定

可溶性糖与淀粉测定的依据在高氮水平下，植物前期疯长耗费土壤中库存水，导致灌浆期干物质积累减少，从而产量降低。

（McDonald，1989）在高氮水平下，前期分蘖增加，灌浆期小的分蘖竞争营养的能力较弱，导致产量降低。

但是灌浆期水分胁迫可以使前期积累的干物质转移效率增加。

（Biddinger et al，1977）高氮水平比低氮水平的可溶性糖含量降低，但是干物质转移效率一般比低氮水平下高。

灌浆期，干旱胁迫导致干物质积累减少，子粒产量的主要来源靠开花前积累的干物质。

干物质的表观转移效率不能准确代表开花前干物质对子粒的贡献率。

（van Herwaarden et al，1998）解决的问题2006年灌浆实验中，为什么N0处理下千粒重比N2处理下高。

2007年的实验结果表明，旱稻297在高氮下干物质转移效率比在低氮下高，但是其他两个品种在高氮下转移效率反而比在低氮下低，原因何在？2007年在W3下，高氮处理为什么比N0下产量低？对于旱稻297来说，2007年干物质转移效率比2006年增加，为什么产量还降低了？只是表面现象吗？植物样品中可溶性糖的测定一、目的通过对植物样品中可溶性糖的测定，初步掌握利用紫外-可见分光光度计进行定量的测定方法和仪器使用技术。

二、原理可溶性糖的测定方法有很多，本实验采用蒽酮比色法。

在强酸条件下，蒽酮与可溶性糖（包括还原性糖和非还原性糖）作用生成蓝绿色糖醛衍生物，该蓝绿色颜色深浅与含糖量成正比，可在625nm下进行比色测定。

三、仪器用具和试剂仪器用具：分光光度计、试管、移液管、离心机等。

试剂：蒽酮：100mg蒽酮溶于50ml浓H2S04（化学纯）中，当天配制当天使用。

蔗糖标准液（1mg/ml已配制好）：精确称取0.1000g蔗糖（分析纯），在小烧杯中加水溶解，定容至100ml，加2-3滴浓H2S04，该溶液可长期保存。

四、测定方法1．样品处理方法：取干粉末样品0.05~0.1g左右, 放入塑料小试管中，加7ml蒸馏水，在沸水浴中煮沸20分钟，取出冷却，3500转/分离心10分钟，取上清，重复提取2次，收集上清，用蒸馏水定容致50 ml，作为待测样品，每个样品重复一次。

植物组织中淀粉含量的测定

植物组织中淀粉含量的测定2007-01-12 08:55Ⅰ蒽酮硫酸法一、原理淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。

二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物材料。

（二）试剂浓硫酸（比重1.84 ）。

9.2mol/L HClO 4 。

2%蒽酮试剂，同实验24 。

（三）仪器设备电子天平，容量瓶：100 mL 4 个、50 mL 2 个，漏斗，小试管若干支，电炉，刻度吸管0.5mL 1 支、 2.0 mL 3 支、 5 mL 4 支，分光光度计，记号笔。

三、实验步骤1. 标准曲线制作取小试管11支从0～10编号，按表24-3加入溶液和蒸馏水。

以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，见方法一或方法二，绘制相应的标准曲线。

表24-3 各试管加入标准液和蒸馏水量管号1～23～46～5．7～89～10淀粉标准液(ml)0.40.81.21.62.0蒸馏水（ml）2.01.61.20.80.4淀粉含量（mg）4080120160200．2. 样品提取称取50 ～100 mg 粉碎过100 目筛的烘干样品，置于15 mL 刻度试管中，加入6 ～7 mL 80 ％乙醇，在80 ℃水浴中提取30 min ，取出离心（3000 rpm ）5 min ，收集上清液。

重复提取两次（各10 min ）同样离心，收集三次上清液合并于烧杯，置于85 ℃恒温水浴，使乙醇蒸发至 2 ～ 3 mL ，转移至50 mL 容量瓶，以蒸馏水定容，供可溶性糖的测定。

向沉淀中加蒸馏水3 mL ，搅拌均匀，放入沸水浴中糊化15 min 。

冷却后，加入2 mL 冷的9.2 mol/L 高氯酸，不时搅拌，提取15 min 后加蒸馏水至10 mL ，混匀，离心10 min ，上清液倾入50 mL 容量瓶。

再向沉淀中加入2 mL 4.6 mol/L 高氯酸，搅拌提取15 min 后加水至10 mL ，混匀后离心10 min ，收集上清于容量瓶。

可溶性糖测量方法

实验 12 植物组织中可溶性糖含量的测定在作物的碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。

它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为 NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。

由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。

Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖一、原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。

该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。

在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。

但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。

此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。

糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。

二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物鲜样或干样。

（二）试剂1. 80 ％乙醇。

2. 葡萄糖标准溶液（ 100 μg/mL ）：准确称取 100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至 100 mL ，使用时再稀释 10 倍（ 100 μg/mL ）。

植物组织中可溶性糖和淀粉含量的测定

植物组织中可溶性糖和淀粉含量的测定一、原理淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。

二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料：红薯块根。

（二）试剂1、浓硫酸（比重1.84）。

2、9.2mol/L高氯酸。

3、80%酒精4、葡萄糖标准液（称取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖100mg，配制成100ml 溶液，既得1mg/ml的标准液）；5、蒽酮试剂：[100mg蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸加水至100ml）]。

（三）仪器设备电子天平，容量瓶（100mL、50 mL），漏斗，小试管若干支，恒温水浴锅，刻度吸管（0.5mL、2.0mL、5 mL），分光光度计，记号笔。

三、实验步骤1. 标准曲线制作。

取标准糖溶液将其稀释成一系列0-100μg/μl的不同浓度的溶液中，按上述方法分别测定OD625nm值，然后绘制标准曲线。

管号0 1 2 3 4 5葡萄糖标准液（μL）0 20 40 60 80 100 糖含量（μg）0 20 40 60 80 100加入的水(μL) 100 80 60 40 20 0蒽酮试剂（mL） 1 1 1 1 1 1 OD62502. 样品提取（1）可溶性糖含量测定称取 50～100mg粉碎过100目筛的烘干样品，置于15mL刻度试管中，加入6～7mL 80％乙醇，在80℃水浴中提取30min，取出离心（3000rpm）5min，收集上清液。

重复提取两次（各10 min）同样离心，收集三次上清液合并于烧杯，置于85℃恒温水浴，使乙醇蒸发至2～3mL，转移至50mL容量瓶，以蒸馏水定容。

吸取上述上清液1ml，加入5ml蒽酮试剂混合，沸水浴10min,取出冷却。

在625nm处测定OD值，从标准曲线上得到提取液中糖的含量（ug）。

（2）淀粉含量的测定向沉淀中加蒸馏水3 mL，搅拌均匀，放入沸水浴中糊化15min 。

可溶性糖及淀粉含量的测定

可溶性糖与淀粉测定的依据在高氮水平下，植物前期疯长耗费土壤中库存水，导致灌浆期干物质积累减少，从而产量降低。

（McDonald，1989）在高氮水平下，前期分蘖增加，灌浆期小的分蘖竞争营养的能力较弱，导致产量降低。

但是灌浆期水分胁迫可以使前期积累的干物质转移效率增加。

（Biddinger et al， 1977）高氮水平比低氮水平的可溶性糖含量降低，但是干物质转移效率一般比低氮水平下高。

灌浆期，干旱胁迫导致干物质积累减少，子粒产量的主要来源靠开花前积累的干物质。

干物质的表观转移效率不能准确代表开花前干物质对子粒的贡献率。

（van Herwaarden et al，1998）解决的问题2006年灌浆实验中，为什么N0处理下千粒重比N2处理下高。

2007年的实验结果表明，旱稻297在高氮下干物质转移效率比在低氮下高，但是其他两个品种在高氮下转移效率反而比在低氮下低，原因何在2007年在W3下，高氮处理为什么比N0下产量低对于旱稻297来说，2007年干物质转移效率比2006年增加，为什么产量还降低了只是表面现象吗植物样品中可溶性糖的测定一、目的通过对植物样品中可溶性糖的测定，初步掌握利用紫外-可见分光光度计进行定量的测定方法和仪器使用技术。

二、原理可溶性糖的测定方法有很多，本实验采用蒽酮比色法。

在强酸条件下，蒽酮与可溶性糖（包括还原性糖和非还原性糖）作用生成蓝绿色糖醛衍生物，该蓝绿色颜色深浅与含糖量成正比，可在625nm下进行比色测定。

三、仪器用具和试剂仪器用具：分光光度计、试管、移液管、离心机等。

试剂：蒽酮：100mg蒽酮溶于50ml浓H2S04（化学纯）中，当天配制当天使用。

蔗糖标准液（1mg/ml已配制好）：精确称取0.1000g蔗糖（分析纯），在小烧杯中加水溶解，定容至100ml，加2-3滴浓H2S04，该溶液可长期保存。

四、测定方法1．样品处理方法：取干粉末样品~0.1g左右, 放入塑料小试管中，加7ml蒸馏水，在沸水浴中煮沸20分钟，取出冷却，3500转/分离心10分钟，取上清，重复提取2次，收集上清，用蒸馏水定容致50 ml，作为待测样品，每个样品重复一次。

水稻植株可溶性总糖及淀粉的测定

水稻植株可溶性总糖测定一、器材准备：25ml容量瓶、10ml离心管、25ml刻度管、96孔酶标板、定量加液器2个。

二、实验过程：1、提取：称样0.1（0.0991-0.1009）克，加8ml浓度为80%的乙醇于10ml离心管中，搅拌。

80℃水浴30分钟，3000rpm离心10min，倒出上清液于25ml 容量瓶中，加8ml（可适量降低ml数，以防润洗过量，后期定容时已超过刻度线）80%乙醇，80℃水浴30分钟，3000rpm离心10min，倒出上清液，共提取三次。

定容25ml。

2、测定：吸出提取液0.1ml于25ml刻度管，加5ml硫酸蒽酮溶液，90℃煮15分钟，冷水浴冷却后，可使用分光光度计或酶标仪在620nm下比色，切记比色的溶液冷却后要摇匀。

三、溶液配制：蒽酮硫酸溶液：150毫克蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸加入30ml水中，）；建议使用500ml 98%的硫酸加入197.5ml蒸馏水，散热到手可触碰时及时加入0.9868g的蒽酮。

80%的酒精：8瓶500ml的酒精中加入1L蒸馏水，摇匀。

四、标准曲线制定葡萄糖105℃6小时烘干，称取0.2g溶于1L蒸馏水，即为200ppm（μg/ml），移液枪吸取溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1ml于25ml刻度管，加水1、0.9、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml，即各溶液补齐到均为1ml，由此各刻度管中溶液的葡萄糖浓度分别为：0、20、40、80、120、160、200μg/ml；加5ml硫酸蒽酮溶液，90℃煮15分钟，冷水浴冷却后在620nm下比色。

建议三次重复！！！每个浓度下3个重复的OD值求平均值，而后以横坐标为葡萄糖浓度梯度，纵坐标为OD值绘制标准曲线，一般线性拟合后R2可达0.99以上。

五、计算方法可溶性总糖含量（%）=[(C*V/A)/(W*106)]*100C—从标准曲线查得的糖量（μg）V—样品提取液的总体积（ml）A—显色时取用的样液量（ml）W—样品干重（g）106—g变μg 100—计算的是百分比%可溶性总糖%=[C*25/0.1/(m*1000000)] *100（测可溶性总糖后）总淀粉（非结构性碳水化合物）的测定一、器材准备：25ml容量瓶、10ml离心管、25ml刻度管、96孔酶标板、定量加液器3个二、实验过程：1、提取：将测糖剩余的样品在烘箱里烘干（或在80℃水浴锅中加热），待样品中的酒精散去。