大肠菌群最可能数(MPN)检索表1
食品中大肠菌群的测定含MPN检索表
⾷品中⼤肠菌群的测定含MPN检索表实验六⾷品中⼤肠菌群的测定⼀、概述(⼀)⼤肠菌群的定义及范围根据国家1994年颁布的⾷品卫⽣检验⽅法微⽣物学部分，⼤肠菌群(coliform bacteria)系指⼀群在37℃、24h能发酵乳糖，产酸、产⽓，需氧和兼性厌氧的⾰兰⽒阴性⽆芽胞杆菌。
⼤肠菌群主要是由肠杆菌科中四个菌属内的⼀些细菌所组成，即艾希⽒菌届、拘橼酸杆菌属、克雷伯⽒菌属及肠杆菌属，其⽣化特性分类见表5-4。
表5-4 ⼤肠菌群⽣化特性分类表注：+，表⽰阳性；—，表⽰阴性；+/-，表⽰多数阳性，少数阴性。
由上表可以看出，⼤肠菌群中⼤肠艾希⽒菌I型和Ⅲ型的特点是，对靛基质、甲基红、v-P和拘橼酸盐利⽤四个⽣化反应分别为“⼗⼗⼀⼀”，通常称为典型⼤肠杆菌；⽽其他类⼤肠杆菌则披称为⾮典型⼤肠杆菌。
(⼆)⼤肠菌群的测定意义1、粪便污染的指标细菌早在1892年，沙尔丁格(Schardinger)⽒⾸先提出⼤肠杆菌作为⽔源中病原菌污染的指标菌的意见，因为⼤肠杆菌是存在于⼈和动物的肠道内的常见细菌。
⼀年后，塞乌博⽿德“斯密斯(Theobold．Smith)⽒指出，⼤肠杆菌因普遍存在于肠道内，若在肠道以外的环境中发现，就可以认为这是由于⼈或动物的粪便污染造成的；从此，就开始应⽤⼤肠杆菌作为⽔源中粪便污染的指标菌。
据研究发现，成⼈粪便中的⼤肠菌群的含量为：108个／g⼀109个／g。
若⽔中或⾷品中发现有⼤肠菌群，即可证实已被粪便污染，有粪便污染也就有可能有肠道病原菌存在。
根据这个理由，就可以认为这种含有⼤肠菌群的⽔或⾷品供⾷⽤是不安全的。
所以⽬前为评定⾷品的卫⽣质量⽽进⾏检验时，也都采⽤⼤肠菌群或⼤肠杆菌作为粪便污染的指标细菌。
当然，有粪便污染，不⼀定就有肠道病原菌存在，但即使⽆病原菌，只要被粪便污染的⽔或⾷品，也是不卫⽣的，不受⼈喜欢的。
2．粪便污染指标菌的选择作为理想的粪便污染的指标菌应具备以下⼏个特性，才能起到⽐较正确的指标作⽤。
大肠菌群技术应知应会试题精选全文
可编辑修改精选全文完整版大肠菌群技术应知应会试题1、大肠菌群：在一定培养条件下能够（）、（）的需氧和兼性厌氧的革兰氏（）菌。
_________________________________2、VRBA平板计数范围：（）CFU，最低稀释度平板低于（）CFU的记录具体菌落数;_________________________________3、在大肠菌群检测第一法（）法中，如用到双料，则统一用（）进行空白对照；如果用的全部为单料，则统一用（）进行空白对照。
_________________________________4、大肠菌群作业SOP第一法引用的为（），第四法引用的为（）。
_________________________________5、检测过程中，十倍稀释时，手部不要触及（）位置。
_________________________________6、稀释度的选择应严格按照产品质量标准中的限量值进行选择，不得私自进行（）或（）。
_________________________________二、选择题（每题4分）_________________________________1、最可能数MPN是基于泊松分布的一种（D）方法。
A、计算B、计数C、直接计数D、间接计数(正确答案)2、大肠菌群主要来源于（）。
A、人的粪便B、人畜粪便(正确答案)C、粪便D、畜的粪便3、大肠菌群第一法适用于含量（）的食品中大肠的计数。
A、较低(正确答案)B、最低C、较高D、最高4、检样前，确认所检测样品匀液PH是否在（）之间A、6.8-7.8B、6.5-7.0C、6.5-7.5(正确答案)D、6.8-7.25、大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸，在指示剂的作用下形成可计数的（），带有或不带有沉淀环的菌落A、紫红色B、红色或紫色(正确答案)C、紫色D、红色6、培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加（）mlVRBA覆盖平板表面。
大肠菌群检测(MPN法)
大肠菌群 （Coliforms）
一群在36℃培养48h可发酵乳糖产酸产气、需氧或兼性 厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
该菌主要来源自人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品 的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。
并非分类学概念，在生化及血清学方面并非完全一致。 一般认为包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯 氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群计数MPN法流程图
GB 4789.3-2016（第一法）
检样
稀释
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）36±１℃，24~48±2h
不产气
产气 煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） 36±１℃，24~48±2h
不产气 大肠菌群阴性
产气 大肠菌群阳性
报告
初发酵 复发酵
大肠菌群计数MPN法示意图
25g
移1ml
O26等） 侵袭性大肠杆菌（EIEC)——杆菌性痢疾 粘附性大肠杆菌（EAEC)——急慢性腹泻
大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的关系
EIEC
ETEC
EHEC
O157：H7；O104：H4等
食品卫生学意义
是评价卫生质量的重要指标，作为食品中的粪便污染指标。 食品中检出大肠菌群，表明该食品有粪便污染，粪便中既有正常肠道菌，也可能
注意事项
归纳总结
目前很多产品大肠菌群标准要求单位为MPN/100mL（g），同2010版检测结果单位 MPN/100mL（g）不一致。中华人民共和国卫生部公告 2009第16号正式公告：现行食品标准 中规定的大肠菌群指标以“MPN/100克或MPN/100毫升”为单位的，适用《食品卫生微生物学 检验大肠菌群测定》（GB/T 4789.3-2003）进行检测；以“MPN/克或MPN/毫升”、“CFU/ 克或CFU/毫升”为单位的，适用《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》（GB/T 4789.3-2008） 进行检测。
实验七 大肠杆菌检测
≤5个/100ml
五、实验报告
（一）、列表记录并计算实验结果 （二）、思考题 1、怎样判断分离到的微生物是大肠杆菌？ 2、接种了微生物的培养皿为什么要倒置
培养？
实验准备（2个样品/组）
培养皿：10套/组 无菌水：10支（9毫升/支） 乳糖胆盐发酵培养基： 100ml 18支试管、5ml/支 伊红美蓝琼脂培养基（EMB）:
实验七 大肠菌群的测定
一 实验目的
1、掌握大肠杆菌的鉴定和计数 方法
2、 巩固无菌操作技术
二 大肠杆菌鉴定原理
大肠菌群：一群能发酵乳糖、产酸产气、需 氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该 菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污 染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中 有否染肠道致病菌的可能。
0
3
150
1
0
70
10
1
1
110
30
1
2
150
1
3
190
2
0
110
30
2
1
150
2
2
200
2
3
240
3
0
160
3
1
200
3
2
240
95%可信限
上限
90
130
200 210
230 360
360
2
0
0
90
10
360
2
0
1
140
30
370
2
0
2
200
2
0
3
260
2
1
0
150
30
440
水中细菌总数和大肠杆菌检测
3
2,890
271 60
2.2 27，100 27，000或2.7×104
4
不可计 4，650 513
— 513，000 510，000或5.1 ×105
5
27 11 5 —
270
270或2.7 ×102
6
不可计 305 12
— 30，500 31，000或3.1 ×104
7
不可计 不可计 不可计 —
大肠菌群：一群能发酵乳糖、产酸产气、需 氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该 菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污 染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中 有否染肠道致病菌的可能。
样品中大肠菌群系以100mL（g）检样内大 肠菌群最大可能数（MPN)表示。
细菌学检验程序
细菌总数
水样稀释或不稀释
板 牛肉膏蛋白胨培养基:150ml，6个平板
10-3无法计数
菌落计数的报告:
菌落数
报告结果
1、 30~300 之间
平均菌落数 X 稀释倍数
2、 (若有两个稀释度) 在30~300之间
求比值 > 2 取较小稀释倍数 < 2 取平均数
3、 > 300 最高稀释度平均菌落数 X 最高稀释倍数
4、 < 30 最低稀释菌度平均落数 X 最低稀释倍数
5、 > 300 < 30
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置 36℃±1℃温箱内，培养18h—24h，然后取出，观察菌 落形态并做革兰氏染色和证实试验。
4.证实试验
在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1—2个进行革兰 氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36℃±1℃的温箱内培 养24h±2h，观察产气情况。
大肠菌群最可能数(MPN)检索表
阳性管数MPN95%可信限阳性管数MPN95%可信限0.10.010.001上限下限0.10.010.001上限下限000<3.0——9.522021 4.542 001 3.00.159.6221288.794 010 3.00.1511222358.794 011 6.1 1.218230298.794 020 6.2 1.218231368.794 0309.4 3.63830023 4.694 100 3.60.1718301388.7110 1017.2 1.3183026417180 10211 3.638310439180 1107.4 1.3203117517200 11111 3.63831212037420 12011 3.64231316040420 12115 4.5423209318420 13016 4.54232115037420 2009.2 1.43832221040430 20114 3.642323********* 20220 4.542330********* 21015 3.742331460902000 21120 4.54233211001804100 212278.794333>1100420——注 1：本表采用 3 个稀释度【 0.1g(mL) 、 0.01g(mL)注 2：表内所列检样量如改用1g(mL) 、0.1g(mL) 和表内数字应相应提高10 倍，其余类推。
和 0.001g(mL)] ，每个稀释度接种0.01g(mL) 时，表内数字应相应降低3 管。
10 倍；如改用0.01g(mL)、0.001g(mL)0.0001g(mL)时，则一种微生物活菌数快速检测方法，其特征在于包括以下步骤：ａ）样品的选择：检测样品分为固体样品和液体样品；ｂ）采样样品的制备：通过无菌操作取一定量溶液样品进行离心处理后，取上清液，再以更高的速度离心处理，弃去上清液，用移液器取出底部少量溶液；ｃ）微生物活菌数的检测：将移液器取出的底部溶液，涂在载玻片上，经干燥固定，用美兰染色，冲洗后用生物显微镜镜检，记录被美兰染色且呈现空心状态的图像的个数来计数微生物数量。
大肠菌群检测作业标准书ok
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
5.操作方法
5.1仪器：
5.1.1冰箱：0℃-4℃
下限
上限
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
2
3
＜30
30
60
90
＜5
90
0
0
0
0
1
1
1
1
0
1
2
3
30
60
90
120
＜5
130
0
0
0
0
2
2
2
2
0
1
2
3
60
90
120
160
0
0
0
0
3
3
3
3
0
1
2
3
90
130
160
190
1
1
1
1
0
0
0
0
0
1
2
3
40
70
110
150
＜5
10
200
210
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
2
3
70
110
150
5.4.1.2用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1∶100的稀释液。
乳与乳制品微生物检验食品中大肠菌群的检测
乳与乳制品微生物检验食品中大肠菌群的检测YLNB 3.21、引用依据：GB/T4789.3-20032、术语和定义大肠菌群：指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN表示。
3、仪器及器材3.1恒温培养箱：36 ± 1C；3.2 冰箱：0-4 C；3.3恒温水浴锅：46 ± 1C；3.4天平；3.5显微镜；3.6均质器或乳钵；3.7 灭菌平皿：直径90mm3.8 灭菌试管：18X 180 和20X 200；3.9灭菌吸管：1 ml和10 ml ；3.10灭菌广口瓶或三角烧瓶：容量为500ml ；3.11灭菌玻璃珠：直径约5mm 3.12载玻片；3.13酒精灯；3.14试管架；3.15灭菌刀、剪子、灭菌镊子等4、培养基和试剂4.1乳糖胆盐发酵管；4.2伊红美兰琼脂平板；4.3乳糖发酵管；4.4生理盐水；4.5革兰氏染色液。
5、检验程序6、方法6.1检样稀释6.1.1 以无菌操作将检样25ml （或g）放于装有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1: 10的均匀稀释液。
固体检样最好用均质器，以8000〜10000r/min 的速度处理1min，做成1: 10的均匀稀释液。
6.1.2 用1ml灭菌吸管吸取1: 10稀释液1ml,注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1: 100的稀释液。
6.1.3另取1ml灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用一支1ml灭菌吸管。
6.1.4根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。
6.2乳糖发酵实验：（通常所说的假定试验：其目的在于检查样品中有无发酵产生气体的细菌）将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。
肉制品中大肠菌群的检验—第一法大肠菌群MPN计数法
菌海砂或玻璃砂研磨，磨碎后加入灭菌水225mL，混匀后即为1:10稀释
液。或用均质器以8000~10000r/min，均质1min，做成1:10稀释液。
一、样品的采集和处理
大
肠
4.2 鲜、冻家禽检样的处理
菌
群
先将检样进行表面消毒，再用无菌剪子取检样深层肌肉25g（一般可从
MPN
胸部或腿部剪取）。其他处理同生肉。带毛野禽去毛后，同家禽检样处理。
MPN
1.2 采样过程遵循无菌操作程序，防止一切可能的外来污染。
计 数
2. 采样方案
法
2.1 根据检验目的、食品特点、批量、检验方法、微生物的危害
程度等确定采样方案。
2.2 采样方案分为二级和三级采样方案。二级采样方案设有n、
c和m 值,三级采样方案设有n、c、m 和M 值。
一、样品的采集和处理
大
第一法：大肠菌群MPN计数法
目录页
样品的采集和处理 设备和材料 培养基和试剂
大肠菌群MPN计数检样程序 大肠菌群MPN计数检样操作步骤
样品的采集和处理
一
1. 采样原则和采样方案 2. 采样用品 3. 样品的采取和送检 4. 检样的处理
一、样品的采集和处理
大 肠
1. 采样原则
菌 群
1.1 样品的采集应遵循随机性、代表性的原则。
群
样品,
MPN
若5个样品的检验结果均小于或等于m 值(≤100CFU/g),则这种情况是允许的;
计 数
若≤2个样品的结果(X)位于m 值和M 值之间(100CFU/g<X≤1000CFU/g)，
法
则这种情况也是允许的;
若有3个及以上样品的检验结果位于m 值和M 值之间,则这种情况是不允许的；
(完整)16大肠菌群的检验作业指导(发酵法)
参照《食品检验与分析》第一版P773-776参照《食品卫生国家标准汇编(3）》第一版GB 4789。
3—941。
原理大肠菌群系指一群在37℃下24h内能发酵乳糖产酸、产气的需氧或兼厌氧性革兰氏阳性无芽孢杆菌。
该菌群主要来自人粪便,以此作为粪便污染指标,来评价食品卫生质量具有广泛的卫生学意义。
食品中的大肠杆菌群数是以每100ml（g）检样内大肠杆菌群最近似数（M.P.N）来表示。
据此含义,所有食品卫生标准中所规定的大肠菌群的最小样品限量（即大肠菌值)为报告标准。
2.设备和材料2。
1温箱:37±1℃2.2 冰箱：0～4℃2.3 恒温水浴：44.5±0.5℃2.4 天平2.5 载玻片2.6 吸管2.7 广口瓶或三角瓶:容量瓶500ml2.8 玻璃珠：直径约5mm2。
9 平皿:直径为90mm2。
10 试管2。
11 显微镜2。
12 酒精灯2。
13 载玻片3。
培养基和试剂3.1乳糖发酵管:按GB 4789.28中4。
9规定。
3。
2伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4。
25规定。
3.3乳糖发酵管：按GB 4789.28中4.10规定。
3.4 EC 肉汤:按GB 4789.28中4。
11规定.3。
5磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中3.22规定。
3。
6生理盐水。
3。
7革兰氏染色液：按GB 4789。
28中2.2规定。
4。
检验程序大肠菌群检验程序如下：5。
方法及步骤 5。
1 检样稀释及培养5。
1。
1 以无菌操作,将检样25g （或25ml ）剪碎放于含有225ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。
固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中以8000～10000r/min 的速度处理1min ，做成1：10的均匀稀释液.5。
1。
2 用1ml 灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml ，沿管壁徐徐入含有9ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管，混合均匀,做成1:100的稀释液。
实验三 多管发酵法检测水中的大肠菌群
实验三多管发酵法检测水中的大肠菌群（一）实验目的1. 了解饮用水和水源水大肠菌群的原理和意义2．学习检测水中大肠菌群的方法（二）实验原理大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标，也是反映水体被生活污水污染的一项重要监测项目。
大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌（Escherichia coli）为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48小时内发酵乳糖并产酸产气。
我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过三个。
多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。
乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。
1．初发酵试验水样接种于发酵管内，37℃下培养，24小时内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群，为阳性结果。
48小时后仍不产气的为阴性结果。
2．平板分离初发酵管24至48小时内产酸产气的均需在复红亚硫酸钠琼脂（远藤氏培养基，Endo′s medium）或伊红美蓝琼脂（eosin methylene blue agar,EMB agar）平板上划线分离菌落。
3．复发酵试验以上大肠菌群阳性菌落，经涂片染色为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，通过此试验再进一步证实。
原理与初发酵试验相同，经24小时培养产酸产气的，最后确定为大肠菌群阳性结果。
（二）实验器材1.水样自来水2．试剂乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小套管），伊红美蓝或复红亚硫酸钠琼脂平板，革兰氏染液。
3．仪器及其它用品载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管，灭菌试管，革兰氏染液，显微镜，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，灭菌三角瓶等。
（四）实验方法1．水样的采取水源水2．初发酵试验取16支发酵管，其中10支用移液管加入10ml一倍的乳酸蛋白胨培养液，5支加入5ml 三倍乳糖蛋白胨培养液，1支加入9ml自然水。