大肠菌群平板计数法

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大肠菌群检测(MPN法)

大肠菌群检测(MPN法)大肠菌群检测(MPN法)是一种常用的微生物学技术，可用于检测土壤、水源、食品等中的大肠菌群进行水质和食品安全监测。

本文将介绍大肠菌群及其检测方法-最可能数法(MPN法)。

一、大肠菌群概述大肠菌群是以肠道菌属为主体的一类细菌，包括肠道埃希菌、沙门氏菌、志贺菌、伤寒杆菌等成员，它们可以在人类和动物的肠道中生存并繁殖。

在自然界中，大肠菌群也是广泛存在的微生物家族，如彗星菌、副肠杆菌、耶尔森氏菌等都属于大肠菌群。

1.菌落计数法该方法主要是利用琼脂平板培养皿在水培的条件下，大肠菌群在培养基上经不同时间的生长，形成菌落来进行菌数计数。

缺点是容易受到其他微生物的干扰，只能算出概略的数值，一定误差，没有国家标准。

2. 硝酸德钠试剂法将测样加硝酸德阳试剂进行加热，最终乳黄色的镜检测前进行比色，得出含大肠菌群的细菌群落达标后延迟显色的时间。

该方法已被最可能数(MPN)法所替代。

3. 最可能数法(MPN法)该方法先将测量的样品分别稀释到不同浓度下，再将每一份稀释液添加到以琼脂平板固化培养基为基础的不同培养液中，观察哪一份培养液出现大肠菌群的生长，最后通过MPN表格计算每85ml或100ml的水样中最可能含有的大肠菌群数量，计算公式为：10^x = n / 联合效价（即dilution rate的倒数）其中，x代表最可能数，n代表测量到大肠菌群的样品数。

在实际工作中，MPN法检测显示出了较好的结果，优点是用固定方法，可重复性好，而且可以通过相关将分析获得定量值，便于与相关的标准进行比较。

三、大肠菌群的检测范围1. 水源：大肠菌群检测是办公室里检测饮用水可能携带的最佳方法。

一般情况下，检测过程是检测水中的微生物是否合乎标准。

2.食品：由于食品生产经常存在卫生要求，因此食品也是大肠菌群检测重要的一环。

例如，必须检测火腿或肉类制品中的大肠菌群是否合格以确保食品安全。

3. 其他领域：大肠菌群检测可以用于医学、农业、环境和建筑等领域，如医院污水浑浊度的检测和土壤中大肠菌群的检测。

粪便中大肠菌群总数

粪便中大肠菌群总数
摘要：
一、大肠菌群总数的定义
二、大肠菌群总数的检测方法
1.平板计数法
2.免疫磁珠法
三、大肠菌群总数与健康关系
1.与肠道菌群平衡的关系
2.与粪便卫生质量的关系
四、大肠菌群总数的参考值
正文：
大肠菌群总数是指在一定条件下，粪便中所含大肠菌群的数目。

它是一个重要的卫生指标，用于评估人体肠道中菌群平衡状态，以及粪便的卫生质量。

大肠菌群总数的检测方法主要有平板计数法和免疫磁珠法。

平板计数法是测定大肠菌群总数的最常用方法。

它通过将粪便样品均匀涂布在含有抗生素的培养基上，然后在特定条件下培养一定时间后，对菌落进行计数。

免疫磁珠法是一种快速、灵敏的检测方法。

它通过抗体与目标菌结合，然后用磁珠捕获结合的细菌，最后通过计数磁珠的数量来推算大肠菌群总数。

大肠菌群总数与健康关系密切。

正常情况下，肠道内存在大量微生物，形成一个稳定的菌群平衡。

大肠菌群总数的变化可能影响肠道菌群的平衡，进而影响人体健康。

此外，大肠菌群总数还可以反映粪便的卫生质量。

若大肠菌群
总数过高，可能表明粪便中存在较多的致病菌，对人体健康造成潜在威胁。

根据不同国家和地区，大肠菌群总数的参考值可能有所不同。

一般情况下，大肠菌群总数应该小于10^8 CFU/g粪便。

大肠菌群平板计数法的注意事项

大肠菌群是经常用来衡量食品卫生情况的重要指标，绝大部分食品都会要求检测的项目。

在食品微生物实验室里，大肠菌群和菌落总数的检测频次应该是最高的，但检测过程中总会有一些小问题困扰着大家，以下来讲解一下大肠菌群平板计数法的注意事项。

方法选择相比于MPN计数法，平板计数法更适用于大肠菌群含量较高的食品。

但大肠菌群多少算是含量较高呢国标里没有明确规定，但通常认为，产品大肠菌群以100CFU/g（mL）为界，超过这个含量一般认为是含量较高。

但具体什么时候选用平板计数法进行大肠菌群的检测，大部分情况还是要看你的产品执行的标准。

假如产品标准要求大肠菌群含量的单位为CFU/g（mL），那必须选用平板计数法。

若是/g(mL)或者MPN/100g(mL)，就应选择MPN计数法，MPN法具体选用哪版国标此处不再赘述。

因此，根据自己产品的情况选择适当的检测方法。

培养基的要求平板计数法使用的培养基为结晶紫中性胆盐琼脂培养基，简称VRBA。

无论是国标，还是培养基的使用说明中都明确表示，VRBA是不需要进行灭菌的，煮沸2min即可使用。

特地点出这一点是因为很多朋友都在问VRBA的灭菌条件，对不灭菌的培养基不信任，害怕出现检测异常，那是因为这些小伙伴们对其中的原理不清楚。

大肠菌群的定义是在一定培养条件下能够在发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，因此大肠菌群是不能形成芽孢的，在VRBA培养基煮沸的过程中，即使有大肠菌群存在也会被杀灭，所以从培养基带入污染的可能性是没有的。

当然盛装培养基的容器是需要进行灭菌的，以免容器引入污染。

另外，VRBA是一种选择性的培养基，含有的结晶紫对革兰氏阳性菌有比较强的抑制作用而对革兰氏阴性菌几乎没有作用，而且平板培养产生的菌落还需要进行复发酵的验证，因此VRBA培养基就不需要进行灭菌了。

但值得注意的是，VRBA需要现配现用，配制出的培养基应当在3h之内使用完毕。

稀释度的确定国标中要求选择2-3个适宜的连续稀释度。

大肠菌群平板计数法方法学验证报告

GB 4789.3-2016大肠菌群平板计数法方法学验证报告一、验证目的验证GB4789.3-2016《食品微生物学检验大肠菌群计数（大肠菌群平板计数法）》在本实验室的适用性。

二、验证方法本实验样品取不同不同类型产品进行实验，严格按照GB4789.3-2016进行，除上述实验程序外，为保证本次验证的科学性和准确性，本次实验添加阳性对照组，对照组由标准菌株大肠埃希氏菌（CICC10389）接种培养而成，与样品实验程序同时进行。

三、验证设备和试剂1.冰箱：BCD-212DG/A 海信（北京）电器2.生化培养箱：LRH-70 上海一恒科学仪器3.电位pH计：PHS-3C+（精确度0.01）成都世纪方舟科技有限公司4.无菌均质器：SCIENTZ-04 宁波新芝生物科技有限公司5.恒温振荡器：SHA-A 江苏金坛环宇科学仪器厂6.菌落计数仪：Scan-500 北京五洲东方科技发展有限公司7.天平:JE-502 上海浦春计量仪器有限公司8.超净工作台:SW-CJ-2FD 上海博迅实业9.显微镜：B203LED 重庆奥特光学仪器有限公司培养基和试剂：1.结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）北京陆桥技术股份有限公司2.煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤北京陆桥技术股份有限公司3.无菌生理盐水：同GB 4789.3项下制法。

四、验证环境1.依据《消毒与灭菌效果的评价方法与标准GB15981-1995》定期对高压蒸汽灭菌锅的灭菌效果进行检测评价并记录；2.依据《无菌室消毒灭菌操作规程》定期对对无菌室、超净台进行清洁消毒灭菌并记录；3.依据《实验室质量控制规范食品微生物检测GB/T27405-2008》定期对对无菌室及超净台进行沉降菌检测并记录；4.无菌室检验：详见《xxxx》；五、验证步骤1.样品的稀释1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品放入盛有225 mL生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。

大肠菌群计数平板法检验原始记录

食品中大肠菌群平板计数检验原始记录表
样品名称
样品编号
检验项目
大肠菌群平板计数法
检验日期
检验地点
□BSL-2实验室
□洁实验净室
检验依据
判定依据
检验仪器
□生化培养箱□均质器□菌落计数仪
□生物安全柜□超净台□电子天平
□恒温振荡器□冰箱□冰箱
检验试剂
VRBA琼脂、BGLB肉汤、磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水等。
h
稀释度
空白
2
25g(mL)样品+225mL稀释液均质（或原液直接检验）；
平板A1
平板A2
3
10倍系列稀释；
结果
平板B1
4
选2-3个适宜稀释度样品匀液；每梯度接种VRBA平板2个；
平板B2
结果
5
36±1℃，18-24h培养，计数典型和可疑菌落；
平板C1
平板C2
6
挑10个可疑菌落接种于BGLB肉汤管36±1℃，24-48h；
结果
平板D1
7
若BGLB肉汤管产气则阳性；
平板D2
结果
8
按比例记录结果，报告。
平板E1
平板E2
温度（℃）
相对湿度（％RH）
结果
证实实验比例
结果
报告
检验员：审Βιβλιοθήκη 员：样品制备□固体和半固体样品：无菌称取25g，置于盛有225mL磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌灭菌袋内，进行均质处理。
□液体样品：吸取25mL于样品于225mL磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水中，混匀。
检验程序
大肠菌群计数[ CFU/g (mL ) ]
1
实验采集抽样方案来自GB4789.1；

大肠菌群计数

2
0
3
2
1
3
2
2
3
2
3
3
3
0
3
3
1
3
3
2
3
3
3
MPN
21 28 35 29 36 23 38 64 43 75 120 160 93 150 210 290 240 460 1100 >1100
95%置信区间
低
高
4.5
42
8.7
94
8.7
94
8.7
94
8.7
94
4.6
94
8.7 110
17
180
9
180
平板菌落数的选择
选择菌落数在30~150之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。
典型菌落为紫红色，菌落周围有胆盐与酸形成的沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。
证实试验
从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，进行证实试验。
BGLB肉汤管产气者，所对应的菌落即为大肠菌群阳性菌落。
36℃±1℃
18~24h
计数典型和可疑菌落
注：VRBA(结晶紫中性红胆盐琼脂)又称为： VRB或VRBL
BGLB肉汤证实试验
36℃±1℃
18~24h
报告结果
操作要点
样品稀释同第一法。
选取适宜的2~3个连续稀释度, 每个稀释度接种两个灭菌平皿, 每皿1mL。另取1mL生理盐水做个空白对照。将冷至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)约15mL倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL~4 mLVRBA覆盖平板表层。

大肠菌群平板计数法实验报告

大肠菌群平板计数法实验报告
一、实验目的
本实验旨在通过大肠菌群平板计数法，检测两种不同类型的样品，分
别研究其大肠菌群的数量。

二、实验原理
大肠菌群平板计数法是一种测定复合微生物群落中不同细菌种群数量
的方法，通过在培养基上培养细菌分离特定细菌和其他微生物，然后在培
养基表面形成菌落，把形成的菌落数目统计出来就可以测定某一种细菌的
数量。

三、实验材料
1.无菌培养环：用于现场取样，主要成分是聚丙烯，尺寸为20
cm×40 cm；
2.筛选液：用于本实验的筛选液是根据微生物学原理，采用等量的乳
酸盐，氯化钠和磷酸盐等有机物质制备而成的液体，用于筛选出大肠菌群；
3.抗生素优势培养基：用于本实验，培养基由甘露醇、尿素、抗生素
等制备而成，用于培养出大肠菌群；
4.保存液：用于本实验的液体是根据微生物学原理，采用等量的乳酸盐、氯化钠和磷酸盐等有机物质制备而成，用于保存细菌；
5.透明细菌示踪液：用于本实验，示踪液由甘露醇、尿素、抗生素等
有机物质制备而成，用于追踪细菌的繁殖情况。

四、实验步骤
1.采样：用无菌环把样品和筛选液放在瓶中，搅拌均匀，然后加入适量。

大肠菌群检测中平板计数法主要操作要领

大肠菌裙检测是一项非常重要的微生物检测工作，它可以帮助我们了解环境和食品中是否存在大肠菌裙，从而保证人们的健康安全。

在大肠菌裙检测中，平板计数法是一种常用的检测方法。

下面将介绍大肠菌裙检测中平板计数法的主要操作要领。

1.准备工作在进行大肠菌裙检测之前，需要准备相应的实验器材和培养基。

实验器材包括平板计数仪、移液器、无菌培养皿等。

培养基一般选择大肠埃希氏菌（EC）培养基。

2.样品处理将待测样品取适量放入无菌容器中，进行适当的稀释。

这一步要确保样品的稀释倍数适中，以保证后续的计数结果准确。

3.接种和培养取一定量的处理过的样品，在无菌工作台上均匀涂抹于含有适量培养基的培养皿上，然后进行培养。

培养条件一般为37摄氏度，培养时间为24小时。

培养后会形成菌落，这些菌落代表了原始样品中的细菌数量。

4.计数和记录在培养后，利用平板计数仪对菌落进行计数。

计数的时候需要注意避免重复计数同一菌落，保证计数准确。

需要记录计数结果，包括菌落数量和相应的单位。

5.结果分析根据计数结果，可以对原始样品中的大肠菌裙数量进行估算。

可以通过对对照组和样品组的比较来判断样品中大肠菌裙的数量是否合格。

大肠菌裙检测中平板计数法的主要操作要领就是以上几点。

通过严格按照这些要领进行操作，可以确保检测结果的准确性和可靠性。

在进行操作过程中，还需要遵守无菌操作规范，确保实验过程中不受外界污染。

希望大家在进行大肠菌裙检测时能够严格按照操作要领进行，保证测试结果的准确性，从而更好地保障人们的健康安全。

大肠菌裙检测中的平板计数法是一种经典的微生物计数方法，它主要用于测定食品、饮用水、环境等样品中大肠菌裙的数量。

在这个过程中，我们需要注意几个关键的环节，来保证实验的准确性和结果的可靠性。

在准备工作环节，我们需要保证实验器材和培养基的质量。

实验器材一定要经过严格的消毒和清洁，以免外来细菌的污染影响实验结果。

培养基的选用也尤为重要，要选择与待测细菌的生长要求相适应的培养基，以保证细菌在培养基上的正常生长。

饮料—大肠菌群的测定—平板计数法

3.3 乳糖发酵管 3.3.1 成分
蛋白胨
20g
乳糖
10g
0.04％溴甲酚紫水溶液
25mL
蒸馏水 3.3.2 制法
1000mL
将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正 pH7.4,加入指示剂,分装 3mL,并放入一个小倒管,115℃高
压灭菌 15min。
3.4 EC 肉汤
3.4.1 成分
1
胰蛋白胨
20g
3 号胆盐(或混合胆盐)
匀稀释液。
5.2.2 用 1 mL 灭菌吸管吸取 1：10 稀释液 1 mL，注入含有 9 mL 灭菌生理盐水或其他稀释
液的试管内，振摇试管混匀，做成 1：100 的稀释液。
5.1.3 另取 1 mL 灭菌吸管，按上条操作依次做 10 倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用 1
支 1 mL 灭菌吸管。
5.1.4 根据饮料卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种 3 管。
FSPYL026 饮料大肠菌群的测定平板计数法
F_SP＿ YL＿026
饮料—大肠菌群的测定—平板计数法
1 范围本方法采用平板计数法测定饮料中的大肠菌群。
本方法适用于饮料中大肠菌群的测定，饮料中大肠菌群数系以１００ｍＬ（ｇ）检样内大肠
菌群最可能数（ＭＰＮ）表示。
2 原理
饮料检样经处理，在需氧及兼性厌氧、37℃条件下培养，通过计数报告检样中大肠菌群最可能数。大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
3.2.1 成分
蛋白胨
10g
乳糖
10g
磷酸氢二钾
2g
琼脂
17g
2%伊红 Y 溶液
20mL

大肠菌群平板计数法方法学验证报告

大肠菌群平板计数法方法学验证报告实验步骤如下：1.准备培养基：将大肠杆菌选择培养基加入培养基瓶中，并用自来水洗净外面的杂质，随后用蒸馏水冲洗内表面。

将瓶口用无菌布覆盖，用锡箔纸包好，然后高温高压灭菌，储存在无菌环境中备用。

2.取少量待检样品：将待检食品样品（例如牛奶、蔬菜、饮用水等）取一适量，在无菌的条件下进行操作。

先将样品摇匀使其均匀分布，然后用无菌吸管取1毫升待检样品。

3.稀释样品：用无菌吸管将1毫升待检样品转移至无菌试管中，再向试管分别加入9毫升无菌生理盐水，摇匀使其均匀混合。

此时的样品为10倍稀释样品，将试管中的液体倒入下一个试管中，再加入9毫升无菌生理盐水，以此类推，制备出一系列浓度递减的稀释样品。

4.接种培养基：将每个稀释样品分别倒入标记好的平板培养基上，倒入后轻轻晃动，使其均匀分布在培养基上，然后在无菌工作台上用无菌铂丝铲取纱球大小的韧带状菌液涂抹在固体培养基表面，使细菌均匀生长。

5.培养和计数：将培养基板反面朝上，放入37°C恒温培养箱中进行培养，培养的时间一般为24小时。

待培养结束后，观察培养基表面是否出现典型的大肠菌群菌落。

使用菌落计数器对每个平板上的菌落进行计数。

根据以上实验步骤进行大肠菌群平板计数法的实验后，得出以下结论：1.适用性验证：通过本实验，我们可以验证大肠菌群平板计数法的适用性。

在我们的实验中，使用该方法对不同类型的食品样品进行了检测，并得出了相应的菌落计数。

这表明该方法适用于不同类型的样品，可以准确地测定大肠菌群数量。

2.优点：大肠菌群平板计数法具有以下优点：简单易行，操作方便；可定量测定大肠菌群数量，结果可靠；适用于不同类型的食品样品。

3.缺点：大肠菌群平板计数法也存在一些局限性：菌落计数需要较长时间，一般需要24小时才能观察到菌落；该方法只能测定培养基中能够生长的细菌，无法对其他微生物进行定量测定。

综上所述，大肠菌群平板计数法是一种能够准确测定大肠菌群数量的方法。

大肠菌群测定—食品中大肠菌群的测定方法

培养特性：大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37℃，在42-44 ℃条件下仍能生长，生长温度范围15-46 ℃。
➢ 在普通营养琼脂上有3中菌落形态：
➢ 1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、
➢ 光滑、呈灰色，在生理盐水中易分散；
计，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。
•
接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1ml及1ml
以下者，用单料乳糖胆盐发酵管，同时用大肠埃希氏菌和产气肠
杆菌混合菌种混合接种于1支作单料乳糖胆盐发酵管对照。
• 置36±1℃温箱培养24±2小时，如所有发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则与对照的混合菌种一起按下列程序进行。
4、大肠菌群最可能数（MPN ）的报告
➢ 根据大肠菌群阳性管数，检索MPN 表（见附录
B ) ，报告每克（或毫升）样品中大肠菌群的 MPN 值。 ✓注意：当检样的量与表中的量有增加或减少时，
表内的数也应相应减少或增加。
大肠杆菌 0157显色培养基上的菌落
在伊红美兰乳糖琼脂（EMB）上
大肠菌群在去氧胆酸钠琼脂上的典型特征
设备和材料
食品中大肠菌群测定
参考 GB4789．3-2010
➢主要由肠杆菌科中埃希氏菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属的一部分及沙门氏属的Ⅲ亚属细菌组成。
3、大肠杆菌的生物学特性
基本形态
此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约0.50.8μm*1.0-3.0 μm，多单独存在或成双，但不呈长链排列。约50%的菌株有周生鞭毛，但多数只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱。多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微荚膜，不形成芽孢，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。

大肠菌群计数

4. 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入装有9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
5. 根据对样品污染情况的估计,按上述操作，依次制成系列十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过15min。
1.本表采用三个稀释度【0.1g(ml),0.01g(ml),0.001g(ml),】每个稀释度接种三管。
2.表内所列检样量如改用 1g (ml),0. 10 1 3 0 16 4.5 1g(ml),0.01g(ml), 42 3 2 表内数字相应降低 1 150 37 倍；420
2 0 1 14 3.6 42 3 2 3 290 90 1,000
2 0.01g(ml),0.001g(ml),0.0001g(ml) 0 0 9.2 1.4 38 时，则表内数字应相应增高 3 2 2 210 10倍，其余类推。 40 430 如改用
稀释度的选择
将待检样品选取适宜的2~3个连续稀释度, 每个稀释度接种两对照。及时将15mL~ 20mL冷至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂
0.001 0 1 0
1 0 0 0 1 2 0 1 0 1
高 9.5 9.6 11
18 18 38 18 18 38 20 38 42 42
0.01 2 2 2
3 3 0 0 0 1 1 1 1 2
0.001 0 1 2
0 1 0 1 2 0 1 2 3 0
MPN
95%置信区间低 4.5 8.7 8.7

大肠菌群平板计数法标准号

大肠菌群平板计数法标准号大肠菌群平板计数法是指在实验室条件下，通过将待检样品分散在含有特定培养基的平板上，利用培养基对大肠菌群产生的特异性反应，以及对大肠菌群可生长的特定条件进行培养和计数，从而评估样品中大肠菌群的数量。

该方法已被广泛应用于食品、环境和医疗卫生等领域的微生物检测。

大肠菌群平板计数法标准号是《食品微生物学通则》GB 4789.3-2016。

该标准是由中国国家标准化管理委员会于2016年发布的，是用于食品微生物检测的基本规范。

根据该标准，大肠菌群平板计数法的操作流程主要包括样品制备、平板培养、菌落计数和结果表达。

下面将对每个步骤进行详细介绍。

首先，样品制备是指将待检样品进行预处理，以提高大肠菌群的检测效果。

根据不同样品的特点，可以采取不同的处理方法，如加入适量的缓冲液进行搅拌均匀、加热杀菌和稀释等。

此外，还需要注意样品制备过程中的卫生要求，以防止交叉污染。

然后，将样品均匀地分散在含有选择性培养基的平板上。

选择性培养基可以抑制非大肠菌群的生长，从而增加大肠菌群在平板上的菌落形成，方便后续的计数。

常用的选择性培养基有MacConkey琼脂、立兰肠杆菌培养基等。

接下来，将含有样品的平板置于适宜的温度和湿度条件下进行培养。

大肠菌群在一定的温度范围内可迅速繁殖，通常将培养温度控制在37摄氏度。

此外，还需要为培养提供适当的湿度，可以通过在培养箱内放置含水的培养皿或湿度控制器来实现。

菌落计数是大肠菌群平板计数法的核心步骤。

通常，在培养一定时间后，将平板上的菌落进行计数。

菌落计数可以手工进行，也可以使用计数仪来实现。

在进行计数时，需要注意区分出不同的菌落，并排除其他非大肠菌群的菌落。

最后，根据菌落计数的结果，可根据标准对样品中大肠菌群的数量进行评估。

通常，大肠菌群的计数结果以CFU/g（或CFU/mL）表示，即每克（或每毫升）样品中大肠菌群的菌落数。

需要注意的是，大肠菌群平板计数法在应用中存在一定的局限性。

大肠菌群检验原始记录-平板计数法5样

10-1
24 26 10
10-2
3
2
0
10-3
0
0
0
BGLB 阳性管数
6
稀释度
第一稀释度第二稀释度第三稀释度
样
品 VRBA 疑似大肠菌群菌落数
5
接种 BGLB 管数
10-1
20 22 10
10-2
1
2
0
10-3
0
0
0
BGLB 阳性管数
7
VRBA 空白（仅 VRBA）
-
-
空白
稀释液空白（稀释液+VRBA）
样品名称
xxxx
样品批次
2022xxxx
仪器设备及耗材：天平：( xxxx) 培养箱: ( xxxx)
洁净工作台: (xxxx)
培养基及试剂：结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（VRBA）： xxxx 煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）： xxxx 磷酸盐缓冲液：xxxx 0.1mol/L 氢氧化钠：
配制日期 2022/xx/xx 配制日期 2022/xx/xx 配制日期 2022/xx/xx 配制日期：2022/xx/xx
实验过程： 1.样品处理和稀释： 1.1 如需要，使用 0.1mol/L 氢氧化钠或 0.1mol/L 盐酸将样品调整 pH 在 6.5~7.5 之间。 1.2 制备样品稀释液
根据样品状态，无菌操作，称取/吸管吸取 25g（mL）样品，加入到 225mL 无菌磷酸盐缓冲液中均质（混匀），制成 1:10 样品匀液。根据对样品污染情况的估计，按上述操作将样品稀释至所需浓度。 2.接种 VRBA
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BGLB 空白（仅 BGLB）
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大肠菌群平板计数法计算公式

大肠菌群平板计数法计算公式
构建类肠杆菌群计数技术是衡量卫生水中大肠杆菌群的一个重要手段。

大肠杆菌群平板计数法是大肠杆菌群计数法中一种比较常见的技术，主要是利用培养基的抗血清特异性效能吸附技术，将水样中大肠杆菌群从环境介质中捕获、纯净、总数计算。

其计数法主要有以下几步：
（1）采样：从相应环境或样品中采集所需细菌样本；
（2）分离：用特定培养基培养，在合适的条件下，将沾染大肠杆菌群的样本分离出来；
（3）分析：采用抗血清特异性吸附技术，将纯化的大肠杆菌群模拟出来；
（4）计数：合理设置计数条件，将模拟出来的大肠杆菌群数目计算出来，得出大肠杆菌群数量。

大肠杆菌群平板计数法可以用于解决卫生水建筑中节水管道、游泳池和地下水渠等设备的安装的卫生检查问题，因为这类设备的渗漏可能会引起重要的公共卫生及环境污染问题。

由此可见，大肠杆菌群平板计数法也给建筑的正常使用 and 经营提供了较为准确的分析依据。

大肠杆菌群平板计数法是测定建筑环境中大肠杆菌群的一种有效手段，它为建筑安装和使用提供了较高精度的细菌数量测定结果，可以有效预防建筑环境传染疾病的发生。

这种技术可以广泛用于水处理厂、公共卫生毒理实验室、游泳池、室内健身中心、精湛的安装建筑市场以及大型建筑工程布置。

大肠菌群平板计数法检测结果不确定度的评定

152 食品安全导刊 2017年8月Tlogy科技科技文苑大肠菌群是一组存在于肠道中的与粪便污染有关的细菌，通常用来作为评价食品卫生状况的指示菌。

食品中大肠菌群数量的高低与受粪便污染的程度相关，大肠菌群也可以预示食品中存在肠道致病菌的可能性。

由测量所得的测得值只是被测量的估计值，测量过程中的随机效应及系统效应会导致测量不确定度[1]。

对大肠菌群检测结果的测量不确定度进行评定，能以充分完整的信息表示检测结果，提高大肠菌群检测结果的可信度。

1　不确定度评定方法采用《GB 4789.3-2016 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》[2]中第二法平板法进行检测，主要检测步骤如下：样品制备—10倍梯度稀释—选取2～3个合适稀释度的样品匀液接种—倾注VRBA 平板—计数典型和可疑菌落数—接种BGLB 肉汤—报告结果。

本文对奶粉样品进行大肠菌群人工污染后进行10次重复测定，以此结果为依据，分析不确定度各分量的来源和大小，并参照JJF1059.1-2012《测量结果不确定度的评定与表示》做不确定度评定。

2　各不确定度分量的评定2.1　样品制备过程中引入的不确定度样品制备过程中，可能引入不确定度的因素有样品称量、量筒量取稀释液、均质器均质等。

用均质器进行拍击均质，拍击时间和拍击速度是固定的，可以忽略由此产生的不确定度。

电子天平精度0.1 g，样品称样量25.0 g，检定证书规定的最大允许误差为±0.5 g。

则天平称量的标准不确定度μ（ｍ样）为：用250 mL 量出式量筒量取225 mL 稀释液，制成1︰10的样品匀液。

量筒按JJG196-2006常用玻璃量器的容量允差为±2.0 mL [3]，则量筒量取的标准不确定度μ（ｖ样）为：因此，电子天平和量筒的相对标准不确定度U rel （m 样）和U rel （v 样）分别为：则样品制备过程中产生的相对标准不确定度为：大肠菌群平板计数法检测结果不确定度的评定□ 徐武俊　吕腾飞　李仕祥　刘伟平　江西出入境检验检疫局综合技术中心摘　要：通过对《GB 4789.3-2016 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》第二法平板法中不确定度来源进行分析和计算，得出检测结果的不确定度为U=0.057 54，k=2.26，主要影响因素是样品制备、样品稀释、加样和重复检测，其中重复检测对检测结果不确定度的贡献最大。

大肠菌群第二法计算题

大肠菌群第二法计算题（实用版）目录1.大肠菌群的定义和来源2.大肠菌群第二法（平板计数法）的原理和操作步骤3.大肠菌群第二法与菌落总数测定的对照4.大肠菌群检测在水质检测中的应用5.结论正文大肠菌群是指具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，它们直接或间接地来自人和温血动物的粪便。

大肠菌群第二法，也称平板计数法，是一种常用的微生物检测方法。

该方法通过将样品试剂混合液分配到独立的孔中，在培养基平板上形成菌落，从而计算每克或每毫升样品中的大肠菌群数量。

大肠菌群第二法的操作步骤如下：首先，将样品与试剂混合，然后通过智能程控定量封口机将混合液分配到 97 孔定量盘中。

接着，将定量盘放入培养箱中，在适当的温度和时间下进行培养。

最后，通过观察和计数形成的菌落数量，计算出每克或每毫升样品中的大肠菌群数量。

大肠菌群第二法与菌落总数测定是两种不同的微生物检测方法。

菌落总数测定是通过统计平板上的菌落数量，推测出每克或每毫升样品中的总细菌数。

而大肠菌群第二法只针对粪便污染相关的大肠菌群进行检测。

因此，这两种方法在实际应用中有各自的优缺点和适用范围。

在水质检测中，大肠菌群检测是一项重要的指标。

大肠菌群的存在表明水样受到粪便污染，可能存在肠道病原菌。

因此，通过大肠菌群检测可以评估水体的卫生状况和潜在的公共卫生风险。

大肠菌群第二法作为一种快速、准确和简单的检测方法，在水质检测领域得到了广泛的应用。

总之，大肠菌群第二法是一种常用的微生物检测方法，适用于测定样品中的大肠菌群数量。

与菌落总数测定相比，它更具针对性，能够反映水样受到粪便污染的程度。