食品中大肠菌群测定(一)课件

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食品中大肠菌群检测PPT课件

食品中大肠菌群检测PPT课件

食品卫生监督中的应用
餐饮业卫生监督
在餐饮业卫生监督中,大肠菌群 检测是重要的检测指标之一,用 于评估餐饮企业的卫生状况和食
品安全水平。
超市食品安全检测
超市食品安全检测中,大肠菌群 检测是必检项目之一,用于检测 食品是否符合国家食品安全标准。
食品进出口检验
在食品进出口检验中,大肠菌群 检测是重要的检测指标之一,用 于评估食品的卫生状况和安全性,
自动化检测技术
利用机器人和自动化设备进行样品处理和数据分析,提高检测效 率。
快速检测技术
开发新型培养基和试剂,缩短检测时间,提高检测速度。
基因检测技术
利用基因测序和生物信息学技术,提高检测准确性和特异性。
提高检测效率和准确性的方法
标准化操作流程
01
制定统一的大肠菌群检测标准,规范操作流程,减少误差。
05
大肠菌群检测的挑战和未来发展
当前面临的挑战
检测方法不统一
目前大肠菌群检测方法多样,缺乏统一的标准, 导致检测结果存在差异。
检测效率低下
传统检测方法过程繁琐,耗时长,无法满足快速、 大批量检测的需求。
检测准确性不高
由于操作复杂和干扰因素多,传统检测方法容易 出现假阳性或假阴性结果。
技术发展与未来趋势
检测步骤
采集样品、增菌培养、分 离培养、生化鉴定和计数。
培养法检测
传统培养法
将样品接种在选择性培养 基上,通过培养后观察菌 落形态、染色和生化反应 等特征进行鉴定。
自动化培养法
利用自动化仪器进行样品 接种、培养和检测,提高 检测效率和准确性。
培养法优缺点
培养法准确度高,但检测 周期较长,需要专业人员 操作。
确保食品的安全进出口。

样品中大肠菌群的测定完美版PPT

样品中大肠菌群的测定完美版PPT

3.分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置 36℃±1℃温箱内,培养18h~24h,然后取出,观察菌落形 态并做革兰氏染色和证实试验。
4.证实试验
在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1个~2个进行革 兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36℃±1℃的温箱内培 养24h±2h,观察产气情况。
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在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1个~2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36℃±1℃的温箱内培养24h±2h,观察产气
情况3。
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实验十五 样品中大肠菌群的测定
大肠菌群:一群能发酵乳糖、产酸产气、 需氧盒兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该 菌主要来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染 指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否 染肠道致病菌的可能。
样品中大肠菌群系以100mL(g)检样内 大肠菌群最可能数(MPN)表示。
设备和材料: 恒温培养箱(36℃±1℃ )、恒温水浴锅(46℃±1℃ ) 、
③另取1ml灭菌吸管,按上述操作依次作10倍递增稀释液。 ④根据食品卫生要求或对检验样品污染情况估计,选择三个稀 释度,每个稀释度,接种3管。
2. 乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量在1mL以 上者,用双料乳糖胆盐发酵管;1mL及1mL以下者,用单料 乳糖发酵管。每一个稀释度接种3管,置36℃±1℃温箱内, 培养24h±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为 大肠菌群阴性,如有产生者,则按下列程续进行。

大肠菌群检验PPT课件

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四、应用茜素-β-D-半乳糖苷快速检验食品中的大肠菌群
1、检测步骤 0.1g×2 样品 0.01g × 2 0.001g × 2
Aliz-gal琼脂37 ℃ 24hr
计数紫色和红色菌落,乘以稀释倍数报告
大肠菌群β-D-半乳糖苷酶 茜素-β-D-半乳糖苷 茜素—Fe.NH4.Al.K(紫色和红色)
调调ph74ph741322试验情况简介试验情况简介alizalizgalgal检测食品中大肠菌群可在检测食品中大肠菌群可在18182424hh内显示出半内显示出半乳糖苷酶反应乳糖苷酶反应在同类性质的酶底物中在同类性质的酶底物中alizalizgalgal的的用量较低用量较低做倾注培养时在琼脂深层菌落特征较明做倾注培养时在琼脂深层菌落特征较明由于采用测定由于采用测定半乳糖苷半乳糖苷酶的方法易于检出迟缓发酶的方法易于检出迟缓发酵乳糖的大肠菌群和厌氧大肠杆菌酵乳糖的大肠菌群和厌氧大肠杆菌
样品
0.1g×2
0.01g × 2
0.001g × 2
结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)37 ℃ 24hr
计数紫红色菌落,乘以稀释倍数报告
3、ISO关于大肠菌群的定义(ISO9308-1:2000)
(ISO:INTERNATIONAL STARDIZATION ORGANIZATION国际标准化组织)
茜素-β-D-半乳糖苷琼脂 (Alig-gal琼脂): Aliz-gal 50mg 蛋白胨20g 无水磷酸氢二钾2.75g 无水磷酸二氢钾2.75g 氯化钠5g 月桂基硫酸钠0.1g 异丙基硫代半乳糖苷0.03g 硫酸铝钾0.5g 柠檬酸铁铵0.5g 琼脂15g 蒸馏水1000mL。 调Ph7.4
(1)最近拟数法(MPN)(GB4789.2-1994)

实验--食品中大肠菌群的测定-课件 (一)

实验--食品中大肠菌群的测定-课件 (一)

实验--食品中大肠菌群的测定-课件 (一)随着人们对食品安全的重视,食品中大肠菌群的测定越来越受到关注和重视。

在食品安全监测和生产中,常常需要进行大肠菌群的检验,以保证食品的卫生安全。

此次实验旨在学习并掌握食品中大肠菌群的测定方法。

实验一、菌落计数法1.准备样品:取适量的食品样品,如牛奶、肉制品等,加入适量的蒸馏水,充分摇匀后待用。

2.制备平板:准备好平板培养基,常用的有菌落总数计数培养基和大肠杆菌计数培养基等。

用已灭菌的棉签挖取少量培养基涂抹在培养皿上,使其均匀分布。

3.采样:用无菌的移液管取一定量的稀释后的样品,滴于培养皿表面。

4.培养:将培养皿倒置放入恒温箱中,在37℃温度下培养24-48小时。

5.计数:观察培养皿上的菌落数量,使用菌落计数器进行计数,按一定倍数(如1/10、1/100)还原为真实菌落数量。

实验二、MPN法1.制备移液器:准备好10个稀释液和10个带有3个具孔的板,每个孔中加入相应的稀释液。

2.取样:从食品样品中取一定量,用蒸馏水稀释后,分别分装到板中。

3.培养:将板放到37℃恒温培养箱中进行培养,观察是否有生长。

4.判断仪器读数:根据板中生长、未生长的情况计算菌落数,并用最可能数法计算出MPN结果。

总结通过两种方法的比较,可以看出,两种方法都有各自的优点和缺点,需要根据实际需求进行选择。

对于无法进行菌落计数的样品,可以选择MPN法,它具有精度高、结果稳定等特点。

而对于数量较少的样品,可以更为准确地使用菌落计数法。

本次实验学习了食品中大肠菌群的测定方法,虽然实验中用了人工计数,但实际工作中,常常会结合现代化设备进行自动化检测,从而提高检测效率和准确度。

对于保障食品卫生安全,这一方面的控制是很有必要的。

实验四--食品中大肠菌群的测定课件

实验四--食品中大肠菌群的测定课件
实验四 食品中大肠菌群的测定
一、实验目的
▪ 掌握大肠菌群的原理及其检验方法,以判 别食品的卫生质量
▪ 了解MPN测定法在食品卫生检验中的意义
二、实验原理
▪ 大肠菌群是指一群在一定培养条件下可发酵 乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴 性无芽孢杆菌。
▪ 该菌主要来源自人畜粪便,作为粪便污染指 标评价食品的卫生状况,推断食品中肠道致 病菌污染的可能。
NaCl 8.5g 水 1000mL 分装:
➢ 3个三角瓶(含玻珠)中,225mL/个 ➢ 9支试管,3支/组,9mL/支 灭菌: 121~126℃灭菌20min
2、月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤(LST)培养基:300mL
➢ 分装到27个已装有杜氏小管试管中,10mL/个
➢ 包扎(3支一捆),112~115℃灭菌30min
三、实验器材
(一)培养基 月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤(LST)培养基 煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)培养基
(二)实验材料 市售饮料
(三)其他 三角瓶,试管,培养皿,移液管
(四)仪器 超净工作台,电子天平,高压蒸汽灭菌锅
四、实验准备
(一)配制培养基和试剂(以中央台为单位) 1、配制生理盐水:1000mL
7、37℃培养48h 8、观察BGLB小倒管中是否有气泡,如有气泡,
则记为大肠阳性管(+);如无气泡,则记为 大肠阴性管(-)。
9、根据经确证后的对应浓度阳性管数查MPN表,报 告样品中大肠菌群MPN值。
五、实验结果与分析
▪ 经查MPN表,样品中大肠菌群数为 MPN/g(mL) 分析
六、思考题
胰蛋白胨 6g
NaCl
1.5g
乳糖 KH2PO4

1.5g 0.825g

2.大肠菌群.ppt

2.大肠菌群.ppt
? 4.2 煌绿乳糖胆盐(Brilliant Green Lactose Bile,BGLB) 肉汤:见附录A 中A.2。
? 4.3 结晶紫中性红胆盐琼脂(Violet Red Bile Agar, VRBA):见附录A 中A.3。
? 4.4 磷酸盐缓冲液:见附录A 中A.4。 ? 4.5 无菌生理盐水:见附录A 中A.5。 ? 4.6 无菌1 mol/L NaOH:见附录A 中A.6。 ? 4.7 无菌1 mol/L HCl:见附录A 中A.7。
食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数
? 1 范围 ? 本标准规定了食品中大肠菌群(Coliforms)计数的方法。 ? 本标准适用于食品中大肠菌群的计数。 ? 2 术语和定义 ? 2.1 大肠菌群coliforms ? 在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌
氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 ? 2.2 最可能数most probable number,MPN ? 基于泊松分布的一种间接计数方法。
食品中大肠菌群的测定
一 大肠菌群的概念及组成
? 大肠菌群的概念 大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧,在
37℃能分解乳糖产酸、产气的革兰氏阴性无 芽胞杆菌。 ? 大肠菌群的组成
大肠埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、产气克 雷伯氏菌属和阴沟肠杆菌。
二、大肠菌群的测定意义
1、粪便污染的指标菌: 大肠菌群或大肠杆菌 2、以大肠菌群作为粪便指标菌原因 (1)在粪便中数量最大; (2)在外环境中存活的时间与致病菌大体相同; (3)检测方法简便容易。
2010-03-26 发布2010-06-01 实施 中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发布
前言
? 本标准代替GB/T 4789.3-2008《食品卫生微生物学检验大 肠菌群计数》。

食品中大肠菌群的测定(共59张PPT)可编辑全文

食品中大肠菌群的测定(共59张PPT)可编辑全文

应增加或减少。
➢酱油〔GB/T2717-2003〕
➢细菌菌落总数: ≤30000cfu/ml
➢大肠菌群:
≤30MPN/100ml
➢肠道致病菌: 不得检出
➢全脂奶粉、脱脂奶粉〔GB5410-1999〕
➢ 二级
特级
一级
➢细菌菌落总数:≤20000 ≤30000 ≤50000
➢〔cfu/ml〕
➢大肠菌群 ≤90
2、 初发酵试验
➢ 每个样品,选择3 个适宜的连续稀释度的样品匀液 〔液体样品可以选择原液〕,每个稀释度接种3 管月 桂基硫酸盐胰蛋白胨〔LST〕肉汤,每管接种1mL〔如 接种量超过1mL,那么用双料LST肉汤〕, 36℃±1℃ 培养24h±2h ,观察倒管内是否有气泡产生,如未产 气那么继续培养至48h±2h 。
➢ 〔2〕 液体样品
➢ 以无菌吸管吸取25mL样品,置盛有225mL磷酸盐缓冲液 或生理盐水的无菌锥形瓶〔瓶内预置适当数量的无菌 玻璃珠〕中,充分棍匀,制成1:10 的样品匀液。
➢ 〔3〕 样品匀液的pH 值应在6.5-7.5 之间,必要 时分别用1mol/L 氢氧化钠〔NaOH 〕或1 mol/L 盐 酸〔HCI 〕调节。
➢ 2 、别离培养 将产气的发酵管分别在伊红美兰琼脂
〔EMB琼脂〕平板上划线别离。然后置 36±1℃温箱内,培养18~24小时后取出, 观察菌落形态,并作革兰氏染色和证实 试验。
➢可疑菌落特点: ➢具有金属光泽的深紫黑色菌落; ➢不带或略带金属光泽的菌落; ➢中心色较深的淡紫黑色菌落。
➢3 、证实试验 在上述平板上挑取可疑大肠菌落1~2

3、接种量在1ml以上者,用双料乳糖胆
盐发酵管,1ml及1ml以下者,用单料乳糖胆

食品中大肠菌群的测定(MPN法)

食品中大肠菌群的测定(MPN法)

五、实验步骤
检样 稀释
大肠菌群检验程图 (新国标MPN法)
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)36±1℃,24~48±2h
不产气
产气 煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB) 36±1℃,24~48±2h
不产气
产气
大肠菌群阴性
大肠菌群阳性
报告
1、样品处理:
❖ 固体和半固体食品:以无菌操作取25g样品,放入装 有225 mL生理盐水的三角瓶中,充分振荡,制成 1:10样品匀液无菌均质杯或无菌均质袋内,于8000 r/min均质1min~2min,制成1:10样品匀液。
四、实验器材
1、培养基:月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤、煌绿乳糖 胆盐(BGLB)肉汤
2、仪器或其他用具:电子天平(感量0.1g)、无菌不锈钢 勺、无菌称量纸、无菌吸管(1 mL和25 mL)、试管、 三角瓶、无菌生理盐水(9mL/管,225mL/三角瓶内含 适量玻璃珠)、无菌1 mol/L NaOH、无菌1 mol/L HCl、 75%酒精棉球、广口瓶、灭菌剪刀、灭菌镊子、酒精灯、 精密pH 试纸、恒温培养箱、高压灭菌锅、均质器、振荡 器、接种环等。
1、样品处理:
❖ 液 体 食 品 : 以 无 菌 吸 管 吸 取 样 品 25mL 放 入 装 有 225mL生理盐水的无菌玻璃瓶(瓶内预置适当数量 的玻璃珠)中,以30cm幅度、于7s内振摇25次(或 以机械振荡器振摇),制成1:10的样品匀液。
2、样品稀释:
1ml
1ml 1ml
生理 盐水
1:10
25g/m
1:100 1:1000 1:10000
l样品
注意:吸管尖端不要触及稀释液面,每递增稀释1
次,用1 支1mL无菌吸管。从制备样品匀液至
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➢ (5)根据对样品污染状况的估计,按上述操作,
依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀 释1 次,换用1 支1mL无菌吸管或吸头。从制备 样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过15 min 。
2、 初发酵试验 文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。
一、目的 文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。
1、 了解大肠菌群的定义及食品中大肠菌 群测定在食品卫生检验中的意义。
2、练习并掌握大肠菌群的检验方法 。
二、原理 文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。
➢1、大肠菌群
➢大肠菌群系指一群在37℃、24小时能发酵乳 糖产酸产气,需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性 无芽孢杆菌。
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➢(2) 液体样品
✓ 以无菌吸管吸取25mL样品,置盛有225mL磷酸盐缓冲 液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无 菌玻璃珠)中,充分棍匀,制成1:10 的样品匀液。
✓ (3) 样品匀液的pH 值应在6.5-7.5 之间,必要时分 别用1mol/L 氢氧化钠(NaOH )或1 mol/L 盐酸 (HCI )调节。
M
产气
不产气
P
BGLB肉汤
大肠菌群阴性NFra bibliotek(36±1)℃48h±2h
检 不产气
产气
验 大肠菌群阴性 流
大肠菌群阳性

查MPN表
报告
第一法 大肠菌群MPN计数法 文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。
➢ 1、样品的稀释
✓(1) 固体和半固体样品
称取25g 样品,放入盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理 盐水的无菌均质杯内,8 000r/min-10000r/min 均质1 min-2 min ,或放入盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理 盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1 min-2 min ,制成1:10 的样品匀液。
➢ 每个样品,选择3 个适宜的连续稀释度的样品匀 液(液体样品可以选择原液),每个稀释度接种3 管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤,每管接 种1mL(如接种量超过1mL,则用双料LST肉 汤), 36℃±1℃ 培养24h±2h ,观察倒管内是否 有气泡产生,如未产气则继续培养至48h±2h 。
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➢ 光滑、呈灰色,在生理盐水 中易分散;
➢ 2)粗糙型:菌落扁平、干涩、 边缘不整齐,易
➢ 在生理盐水中自凝; ➢ 3)黏液型:常为含有荚膜的
菌株。
三 、材料 文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。
➢1、食品样品
✓乳制品
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➢3、 仪器设备
➢ 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他 设备和材料如下: ✓恒温培养箱、恒温水浴箱、 振荡器、无菌 吸管或微量移液器及吸头、无菌锥形瓶、 无菌培养皿、菌落计数器等。
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4、 培养基和试剂
➢ 月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST )肉汤、 煌绿乳 糖胆盐(BGLB )肉汤、结晶紫中性红胆盐琼脂 (VRBA ) 、无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液、 1mol/L氢氧化钠(NaOH ) 、 1mol/L 盐酸(HCI )。
✓ 它反映了食品是否被粪便污染,同时间接地指出食品 是否有肠道致病菌污染的可能性。
✓ 食品中大肠菌群数系以每1g(或mL)检样内大肠菌群 近似可能数MPN(the most probable number-简称 MPN)表示
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➢主要由肠杆菌科中埃希氏菌属、肠杆菌 属、克雷伯氏菌属的一部分及沙门氏属 的Ⅲ亚属细菌组成。
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2、测定的意义
➢ 该菌主要来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染 指标来评价食品的卫生质量,具有广泛的卫生学 意义。
四、 检验方法 文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。
➢第一法 大肠菌群MPN计数法。 ➢第二法 大肠菌群平板计数法。
大 肠 菌 群
文档仅供参考,不能作2为5科g学依检据样,请-勿2模2仿5;m如有L不稀当之释处,液请联系网站或本人删除。 10倍系列稀释
选择合适稀释度接种LST 肉汤管 36℃±1℃.48h±2h
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➢ (4) 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1mL,沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓 冲液或生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸 头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1 支1mL无菌吸管反复吹打,使其混合均匀,制 成1:100 的样品匀液。
3、大肠杆菌的生物学特性
基本形态
此菌为两端钝圆的短小杆菌,一般约0.50.8μm*1.0-3.0 μm,多单独存在或成双,但 不呈长链排列。约50%的菌株有周生鞭毛, 但多数只有1-4根,一般不超过10根,故菌体 动力弱。多数菌株有菌毛,有的有荚膜或微 荚膜,不形成芽孢,对普通碱性染料着色良 好,革兰氏染色阴性。
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培养特性: 大肠杆菌合成代谢能力强,在含无机盐、铵盐、葡萄 糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37℃, 在42-44 ℃条件下仍能生长,生长温度范围15-46 ℃。
➢ 在普通营养琼脂上有3中菌落形 态:
➢ 1)光滑型:菌落边缘整齐, 表面有光泽、湿润、
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