粪大肠菌群计数步骤--个人详细介绍
GBT 肥料中粪大肠菌群的测定
GB/ 肥料中粪大肠菌群的测定1 范围本标准规定了肥料中粪大肠菌群的测定方法。
2 定义粪大肠菌群 fecal coliforms系指一群在℃±℃条件能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
粪大肠菌群数为每克（毫升）肥料样品中粪大肠菌群的最可能数（MPN）。
3 设备和材料（内容略）4 培养基和试剂培养基：遵照附录A的规定。
革兰氏染色液：遵照附录B的规定（略）。
5 检验步骤样品稀释在无菌操作下称取样品g或吸取样品10mL，加入到带玻璃珠的90 mL无菌水中，置于摇床上200 r/min 充分振荡30min，即成10-1稀释液。
用无菌移液管吸取 mL上述稀释液加入到45 mL无菌水中，混匀成10-2稀释液。
这样依次稀释，分别得到10-3，10-4等浓度稀释液（每个稀释度须更换无菌移液管）。
乳糖发酵试验选取三个连续适宜稀释液，分别吸取不同稀释液mL加入到乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种3支发酵管，置℃±℃恒温水浴或隔水式培养箱内，培养24h±2h。
如果所有乳糖胆盐发酵管都不产酸不产气，则为粪大肠菌群阴性；如果有产酸产气或只产酸的发酵管，则按进行。
分离培养从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线，置36℃±1℃条件下培养18h～24h。
证实试验从分离平板上挑取可疑菌落，进行革兰氏染色。
染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性；如果为革兰氏阴性无芽胞杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中，置℃±℃条件下培养24h ±2h。
观察产气情况，不产气为粪大肠菌群阴性；产气为粪大肠菌群阳性。
结果证实实验为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN检索表，得出每克（毫升）肥料样品中的粪大肠菌群数。
附录 A（规范性附录）培养基乳糖胆盐发酵培养基蛋白胨g猪胆盐g乳糖g%溴甲酚紫水溶液m L蒸馏水1000m LpH值～制法：将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于蒸馏水中，校正pH，加入溴甲酚紫水溶液，然后分装试管，每管9mL，并放入一支倒置的小套管，高压灭菌115℃15min。
粪大肠菌群数测量方法-概念解析以及定义
粪大肠菌群数测量方法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分的内容可以描述该篇文章的研究背景以及粪大肠菌群数测量方法的重要性。
可以参考以下内容进行撰写：概述粪大肠菌群数（Fecal coliform count）是评估水体、食品和环境卫生安全的重要指标之一。
粪大肠菌群数测量方法的准确性和可靠性对于保障公众健康和环境质量至关重要。
随着生活水平的提高和环境污染问题的日益严重，对粪大肠菌群数测量方法的研究与探索变得尤为重要。
本文旨在详细介绍目前常用的三种粪大肠菌群数测量方法，即第一种测量方法、第二种测量方法和第三种测量方法。
通过比较这三种方法的原理、步骤以及各自的优缺点，可以帮助读者更全面地了解和选择合适的测量方法。
本文结构本文分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分对粪大肠菌群数测量方法的研究背景和意义进行了概述。
正文部分详细介绍了三种测量方法的原理、步骤以及优缺点。
结论部分对本文的主要观点进行总结，并对未来相关研究进行展望。
通过本文的阅读，读者可以对粪大肠菌群数测量方法有一个全面的了解，并对选择适合自己研究对象的测量方法具备一定的指导意义。
希望本文能够为相关领域的研究工作者提供有价值的信息和启示，推动粪大肠菌群数测量方法的改进和发展。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括对整篇文章的大致框架进行介绍，即各个章节及其内容的概览。
在文章结构部分中，可以简要介绍文章的组成和布局，以帮助读者更好地理解整篇文章的结构和内容安排。
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引言部分主要概述了本文的研究背景和目的，同时简要介绍了大纲中各个章节的内容安排。
正文部分详细介绍了三种粪大肠菌群数测量方法：第一种测量方法、第二种测量方法和第三种测量方法。
每种测量方法都包括了原理、步骤和优缺点的详细介绍。
通过对这三种测量方法的讨论和比较，读者可以全面了解不同测量方法的特点和应用情况。
粪大肠菌群的测定步骤
粪大肠菌群的测定1、半个月前配好初、复发酵所需培养液2、采样时用500ml 广口玻璃瓶分开采样，牛皮纸封口3、操作（1） 培养液初发酵 单倍乳糖蛋白胨培养液：蛋白胨 10 g牛肉浸膏 3 g乳糖 5 g氯化钠 5 g蒸馏水 1000ml调节PH 为7.2—7.4（NaOH ）6%溴甲基紫乙醇溶液 1 ml 充分混匀后 10ml （三倍是5ml ）分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。
单月13个地表水（每个水样需10个单倍，5个三倍），2个创业（每个水样需15个单倍）。
共190个（1900ml ）单倍，65个三倍（325ml ）。
双月10个地表水，2个创业。
共130个（1600ml ）单倍，50个三倍（250ml ）。
创业的水一个月采两次水样复发酵 EC 培养液胰胨 20 g乳糖 5 g胆盐三号 1.5 g磷酸氢二钾 4 g磷酸二氢钾 1.5 g氯化钠 5 g蒸馏水 1000ml充分混匀后 10ml 分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。
三倍乳糖蛋白胨培养液： 蛋白胨 30 g 牛肉浸膏 9 g 乳糖 15 g 氯化钠 15 g 蒸馏水 1000ml 溴甲基紫乙醇溶液 3 ml（2）做样初发酵：地表水15根管为一个水样。
5根为一组。
第一排为5ml三倍培养液，加10ml水样；第二排为10ml单倍培养液，加1ml水样；第三排为10ml单倍培养液，取1ml水样稀释至10ml后再从中取1ml至装有培养液的试管。
（10、1、0.1的取样量）创业，每个水样15根单倍。
同上逐级稀释，取样量为0.1、0.01、0.001ml。
将初发酵管放入培养箱中培养，温度为37℃±0.5℃，时间为24h±2h。
观察：产酸产气为阳性，即变色且有气泡产生，可轻击试管查气泡。
复发酵：呈阳性的试管进行接种后，做复发酵。
粪大肠、总大肠、细菌总数的测定
一、微生物分析的总体要求（一）、采样瓶及玻璃器皿的清洗1、新购置的玻璃器皿，因含游离碱，2%的盐酸浸泡数小时，自来水冲洗，蒸馏水冲洗干净，沥干。
2、培养细菌后的玻璃器皿，应先经高压蒸汽灭菌，趁热倒出培养基，用洗涤剂刷洗干净，自来水冲洗，蒸馏水冲洗干净，沥干。
3、洗涤吸管时可高压蒸汽灭菌30min，用洗涤剂刷洗干净，自来水冲洗，蒸馏水冲洗干净，沥干。
用牛皮纸包好，可干热灭菌（于烘箱中160℃烘150min）和高压蒸汽灭菌（121℃灭菌20min）。
备用。
所有的吸管上端要用少量普通棉花填塞，注意松紧度，取液时使其准确快速的流出）4、洗涤采样瓶时，用刷子刷洗干净，自来水冲洗，蒸馏水冲洗干净，再烘箱烘干，用牛皮纸包好（鸡肠带捆好），可干热灭菌（于烘箱中160℃烘150min）和高压蒸汽灭菌（121℃灭菌20min）5、培养皿：洗净后，用烘箱烘干，用牛皮纸包好进行灭菌，待冷后放入冰箱中备用。
（二）、培养基的制备1、单倍乳糖蛋白胨培养液-液体培养基用量筒量取1000mlUP水，加23g营养物质，沿烧饼边沿搅拌，使其完全溶解。
用移液管移取9ml培养液分装于试管中，用针管将小导管从底部注满营养液，斜扣入试管中，用胶塞塞紧，用牛皮纸每十个进行包扎。
2、三倍乳糖蛋白胨培养液：营养物质加入69g，用移液管移取5ml培养液分装于试管中，用针管将小导管从底部注满营养液，斜扣入试管中，用胶塞塞紧，用牛皮纸每十个进行包扎。
3、EC培养液（配制过程同乳糖蛋白胨培养液）(称取37g)-液体培养基4、无菌水，吸取9ml新鲜UP水于试管中，其余包扎过程同乳糖蛋白胨培养液。
5、上述培养基及无菌水准备好后高压蒸汽灭菌（121℃灭菌20min）。
灭菌后等室温再放入冰箱。
6、伊红美蓝培养基（EMB培养基）(固体培养基-平板)①称取42g营养物质，加入到1000mlUP水中，加热溶解，用三角瓶分装，盖上绵塞，至于高压蒸汽灭菌锅内，121℃灭菌20min。
食品卫生微生物学检验 大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌计数
大肠菌群计数：第一法 6 操作步骤
6.2 初发酵实验 对每个样品，选择适宜的三个连续稀释度的样品匀液，液体 样品可以包括未经稀释的原液，每个稀释度接种三管月桂基硫酸 盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量需要超过1mL， 则用双料LST肉汤）。36℃±1℃培养24h±2h，检查倒管内是否有气 泡产生或轻摇试管时是否有密集连续的细小气泡从管底逸出，如 未产气则继续培养至48h±2h。记录在24h和48h内产气的LST肉汤管 数。未产气者为大肠菌群阴性；对产气者，则进行复发酵试验。
食品卫生微生物学检验 大肠杆菌计数
Microbiological examination of food hygiene -Enumeration of Escherichia coli
大肠菌群计数
大肠菌群
定义：一群在36℃条件下培养24~48小时能发酵乳糖、产酸 产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 卫生学概念，包括埃希氏菌属，克雷伯氏菌属、肠杆菌属 和柠檬酸杆菌属等的细菌 检验比较简单，所以被广泛用做水源的卫生指标和食品加 工卫生状况的通用指标
Microbiological examination of food hygiene -Enumeration of Coliforms
食品卫生微生物学检验 粪大肠菌群计数
Microbiological examination of food hygiene -Enumeration of faecal coliforms
℃± 1 ℃ 36 36℃
验
24h~ 48h
报告结果
大肠菌群计数
大肠菌群计数
大肠菌群计数
第一法
MPN法
第二法 平板计数法 第三法 Petrifilm测试片法
废水粪大肠菌群数量计算公式
废水粪大肠菌群数量计算公式
废水中大肠菌群数量的计算公式可以根据不同的情况而有所不同。
一般来说，大肠菌群数量的计算公式可以根据水样的稀释倍数、培养基的选择和培养条件等因素来确定。
在微生物学中，大肠菌群
数量通常是通过将水样进行适当稀释后，接种在含有适当营养物质
的琼脂平板上，然后在合适的温度下培养一段时间，最后根据形成
的菌落数量来计算。
一般来说，大肠菌群数量的计算公式可以按照以下步骤进行：
1. 首先是水样的稀释。
根据实际情况，将水样进行适当的稀释，以便在琼脂平板上形成可数的菌落。
2. 接种培养。
将稀释后的水样接种在含有适当培养基的琼脂平
板上，然后在适当的温度下培养一定的时间，一般是24小时至48
小时。
3. 计数。
在培养适当的时间后，通过肉眼或者显微镜观察，在
琼脂平板上形成的菌落数量，然后根据稀释倍数进行计算，得出原
始水样中大肠菌群数量的估算值。
需要注意的是，不同的实验室和标准可能会有不同的具体计算公式和操作规程，因此在具体实验中应当参考相应的标准方法和操作规程进行操作。
同时，为了保证实验结果的准确性，应当严格控制实验条件，确保实验操作的准确性和可重复性。
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测方法粪大肠菌群检测是指对人体粪便中的大肠菌群进行检测分析，以了解肠道微生态的状况。
粪大肠菌群的平衡与人体健康密切相关，因此对其进行检测具有重要意义。
目前，有多种方法可用于粪大肠菌群检测，本文将对常见的几种方法进行介绍和比较。
首先，传统的培养法是一种常见的粪大肠菌群检测方法。
该方法通过在特定培养基上培养粪便样本中的细菌，然后根据形态、生理生化特性进行鉴定和计数。
这种方法简单易行，能够得到各种细菌的数量和种类，但是需要较长的培养周期，且无法培养一些难以培养的菌种，因此在一定程度上存在局限性。
其次，分子生物学方法在粪大肠菌群检测中得到了广泛应用。
其中，16SrRNA基因测序是一种常用的方法，通过对粪便样本中的细菌DNA进行测序，可以得到细菌的种类和数量信息。
这种方法具有高通量、高灵敏度的特点，能够检测到微生物群落的整体结构，但是需要较高的技术水平和设备支持。
另外，代谢组学方法也被应用于粪大肠菌群检测。
这种方法通过检测粪便样本中的代谢产物，了解肠道微生物的代谢活动情况，从而推断微生物群落的组成和功能。
代谢组学方法能够直观地反映微生物群落的代谢活动，但是受到代谢产物的多样性和复杂性的限制，需要较高的分析技术和数据处理能力。
此外，基于人工智能的分析方法也逐渐应用于粪大肠菌群检测。
这种方法通过建立粪便微生物组的数据库和模型，利用人工智能算法对样本数据进行分析和预测，从而实现对微生物群落的快速、准确的检测。
人工智能方法具有高效、自动化的特点，但是需要大量的数据支持和算法优化。
综上所述，粪大肠菌群检测方法多种多样，各有优缺点。
在实际应用中，可以根据具体需求和条件选择合适的方法进行检测。
随着科技的不断发展，相信粪大肠菌群检测方法会越来越完善，为人体健康提供更多的帮助。
过滤膜法测粪大肠菌群数-国标方法
滤膜法-粪大肠菌群的测定1、适用范围本标准适用于地表水、地下水、及水中粪大肠菌群的测定。
用于检验加氯消毒的水样时，在滤膜法之前，先做试验，证实它所得的数据资料与多管发酵试验所得的数据资料具有可比性。
2、原理滤膜是一种微孔性薄膜。
将水样注入已灭菌的放有滤膜（孔径0.45微米）的滤器中，经过抽滤，细菌即被截留在膜上，然后将滤膜贴于M-FC培养基上，44.5℃温度下进行培养，计数滤膜上生长的此特性的菌落数，计算出每1L水样中含有粪大肠菌群数。
3仪器：滤膜（孔径0.45微米）、滤器、接液瓶、垫圈、无菌镊子夹3、培养基和试剂本标准所用试剂除另有注明外，均为符合国家标准的分析纯化学试剂，实验室用水为新制备的去离子水。
M-FC培养基：胰胨 10g蛋白胨 5g酵母浸膏 3.0g氯化钠 5.0g乳糖 12.5g胆盐三号 1.5g1%苯胺蓝水溶10ml1%玫瑰色酸溶液（溶于0.2mol/L氢氧化钠液中）10ml蒸馏水 1000ml制法：将上述培养基中的成分（除苯胺蓝和玫瑰色酸外），置于蒸馏水中加热溶解，调节PH为7.4，分装于小烧瓶内，每瓶100ml，于115℃灭菌20min。
储存于冰箱中备用，临用前，按上述配比，用灭菌吸管分别加入已煮沸灭菌的1%苯胺蓝溶液1ml及新配制的1%玫瑰色酸溶液（溶于氢氧化钠溶液）1ml，混合均匀。
加热溶解前，加入 1.2%～1.5%琼脂制成固体培养基。
如培养物中杂菌不多，则培养基中不加玫瑰色酸亦可。
4、步骤水样的选择：水样量的选择根据细菌受检验的特征和水样中预测的细菌密度而定。
理想的水样体积是一片滤膜上生长20～60个粪大肠群菌落，总菌落数不超过200个。
滤膜及滤膜灭菌：将滤膜放入高压蒸汽灭菌锅里在121℃灭菌10min，滤器、接液瓶、垫圈分别用纸包好，在使用前经121℃灭菌20min，滤器也可用点燃的酒精棉球火焰灭菌。
过滤：用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，稳妥的固定好滤器。
废水粪大肠菌群数量计算公式
废水粪大肠菌群数量计算公式废水粪大肠菌群数量计算公式是指通过一定的数学模型和实验数据，来计算废水或粪便中大肠菌群的数量的方法。
废水和粪便中的大肠菌群数量是评价水质和卫生状况的重要指标，因此对其进行准确的计算和监测具有重要意义。
下面将介绍废水粪大肠菌群数量计算公式的相关知识。
首先，大肠菌群是一类生活在大肠内的细菌，包括大肠杆菌等。
在废水和粪便中，大肠菌群数量的多少可以反映出其中的细菌污染程度。
因此，通过计算大肠菌群数量可以评估废水和粪便的卫生状况。
废水粪大肠菌群数量的计算公式通常包括以下几个步骤：1. 采样：首先需要在废水或粪便样品中进行采样，获取一定量的样品用于后续的实验分析。
2. 稀释：由于废水和粪便中细菌数量可能非常庞大，为了进行后续的实验分析，通常需要对样品进行适当的稀释，以便得到合适的实验数据。
3. 培养：将稀释后的样品在适当的培养基上进行培养，利用培养基中的营养物质来促进细菌的生长。
4. 计数：通过显微镜观察培养后的样品，使用显微镜计数室等设备对细菌数量进行统计和计数。
在实际操作中，为了更加准确地计算废水粪大肠菌群数量，通常会采用MPN法（Most Probable Number method）或者膜过滤法等方法进行细菌数量的测定。
这些方法可以更加准确地反映出样品中大肠菌群的数量。
废水粪大肠菌群数量计算公式可以用数学模型来表示，一般来说可以采用以下公式进行计算：N = (C/V) × D其中，N表示大肠菌群数量，C表示样品中细菌的平均计数值，V表示稀释倍数，D表示稀释后的样品总体积。
通过这个公式，我们可以根据实验数据和实际情况来计算废水粪大肠菌群的数量。
在实际应用中，需要根据具体情况对公式中的参数进行合理的选择和调整，以确保计算结果的准确性和可靠性。
总之，废水粪大肠菌群数量计算公式是一种重要的水质和卫生监测方法，通过合理的实验设计和数学模型，可以准确地评估废水和粪便中大肠菌群的数量，为环境保护和卫生管理提供重要参考依据。
粪大肠菌群操作步骤及准备工作
粪大肠菌群操作步骤及准备工作一、准备工作：玻璃器皿灭菌：1、在热水中加入洗涤液刷洗试管及塞子，至少准备60支试管。
2、清洗10ML、1ML、0.1ML刻度吸管各2支。
3、500ML或250ML细口采样瓶2个,盖上瓶塞并用报纸包住瓶口。
把以上三种玻璃器皿放置烘箱调至温度达160-170℃，烘2小时，关机后待温度降至50℃方可拿出物品，防止遇冷空气爆裂。
注：1、2项需预先用报纸包住，再放置烘箱灭菌。
灭菌前需在采样瓶中加入0.3ML10%硫代硫酸钠溶液,以去除氯。
试剂配配制：1、配250ML单倍乳糖胆盐蛋白胨培养液。
（按说明配制，试剂瓶上有）2、配250ML三倍乳糖胆盐蛋白胨培养液。
（按说明配制，试剂瓶上有）3、配250ML EC肉汤培养液。
以上试剂配制完毕后分装于定量加液器中，试剂1移至10ML的定量加液器中，把加液器刻度调至10ML；试剂2移至5ML的加液器中，把加液器刻度调至5ML；试剂3移至10ML的定量加液器中，把加液器刻度调至10ML。
水样分析步骤：1、于20支试管中分别加入10ML试剂1，于10支试管中分别加入5ML试剂2，于15支试管中分别加入10ML试剂3，塞好塞子再用报纸把试管包好放在烧杯中置于灭菌器灭菌15-20分钟，自然冷却后取出，暂没用的试剂放置冰箱中保存。
2、于各装有5ML三倍乳糖胆蛋白胨培养液的5支试管中（内有倒管），分别加入10ML水样，于各装有10ML单倍乳糖胆蛋白胨培养液的5支试管中（内有倒管），分别加入1ML水样，于各装有10ML单倍乳糖胆蛋白胨培养液的5支试管中（内有倒管），分别加入0.1ML水样，共计15管,三个稀释度,将各管充分摇匀后,置于37℃培养箱中培养培养24小时。
3、经初发酵后观察现象，如水样呈黄色且有气泡，即产酸产气，需进行复发酵，若呈紫红色则显阴性，不需进行复发酵。
选出产酸产气的管，按稀释倍数排列好，再用经过酒精灯灼烧的接种环插入显阳性的管中搅动一下水样，然后放入已装有EC肉汤的培养液中再搅动一下，即可把菌种转移到复发酵的培养液中，每接种一次样均需灼烧一下接种环，依上操作把所有显阳性的水样均接种到培养液中，盖好瓶塞，置于44.5℃的培养箱中培养24小时后观察现象。
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测是一种常用的微生物检测方法，用于评估肠道内大肠埃希杆菌等菌群的数量和组成。
以下介绍几种常见的粪大肠菌群检测方法：
1. 传统培养法：该方法通过将粪便样本接种在含有特定培养基的培养皿中，利用培养皿中的营养物质、温度等条件，使大肠菌群等菌种在培养基上生长。
然后通过观察培养皿中的菌落形态、颜色等特征，或进行进一步的生化试验，来鉴定和计数菌群。
这种方法操作简便，但需要较长时间（通常需要2-3天）。
2. PCR法：PCR（聚合酶链反应）是一种快速、高效的核酸扩增技术，可用于检测微生物的DNA或RNA。
在粪大肠菌群检测中，可以选择一种或多种特异引物，通过PCR扩增粪便样
本中的大肠菌群DNA片段。
扩增后的产物可以进行电泳分析，根据特定的条带模式来鉴定和计数菌群。
相比传统培养法，PCR法的优势在于快速、高灵敏度和特异性。
3. 16S rRNA测序法：16S rRNA是细菌基因组中高保守的区域，其序列具有物种特异性。
基于16S rRNA序列的差异，可以通
过测序技术快速准确地鉴定粪大肠菌群的组成。
该方法可通过提取粪便样本中的总DNA，进行PCR扩增和纯化后，进行高
通量测序。
测序结果可以使用相应的数据库比对，识别和计数样本中的各种大肠菌群。
总结来说，传统培养法、PCR法和16S rRNA测序法是常见的
粪大肠菌群检测方法。
其中，PCR法和16S rRNA测序法更加
快速、准确，逐渐成为主流的检测方法。
这些方法的应用有助于揭示肠道微生物群落的组成和功能，为相关疾病的诊断和治疗提供依据。
粪大肠菌群操作细则
粪大肠菌群多管发酵法1、培养基、试剂与仪器本标准所用试剂除另有注明外,均为符合国家标准的分析纯化学试剂；实验用水为新制备的去离子水。
单倍乳糖蛋白胨培养液：称取23.0g乳糖蛋白胨营养液于1L蒸馏水中,加热煮沸至完全,分装于含有倒置的小玻璃管的试管中,每试管约8ml〔先用移液管吸取7ml至试管中,再用滴管吸取营养液放至小玻璃管中,直至营养液溢出。
注意小玻璃管中不能有气泡,若出现气泡,应将气泡排出后再注入营养液。
,于高压蒸汽灭菌器中,在115℃灭菌20min,贮存于暗处备用。
EC 培养液：称取37.0gEC肉汤于1L蒸馏水中,加热煮沸至完全,分装于含有倒置的小玻璃管的试管中,每管8ml〔操作方法同单倍乳糖蛋白胨营养液,于高压蒸汽灭菌器中,在115℃灭菌20min,贮存于暗处备用。
培养基的存放在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于30℃的暗处,存放时应避免阳光直接照射,并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。
当培养液颜色变化,或体积变化明显时废弃不用。
验所需仪器超净工作台、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、冰箱、酒精灯、天平、电炉、500ml广口瓶、烧杯、玻璃棒、玻璃发酵管、试管架、移液管、移液枪、接种环2步骤前期准备器皿灭菌〔高压蒸汽灭菌：所用采集水样的广口瓶、玻璃试管、移液管、玻璃棒、接种环、移液枪枪头等器皿均需放入高压锅灭菌。
广口瓶：将清洗干净的采样瓶盖好瓶盖,用牛皮纸、报纸等防潮纸将瓶盖、瓶顶和瓶颈处包裹好,用绳子绑好,置于121℃的高压蒸汽灭菌器灭菌15分钟。
玻璃试管〔已经装好营养液、移液管、玻璃棒、接种环、移液枪枪头：用牛皮纸、报纸等防潮纸将其包裹好,置于121℃的高压蒸汽灭菌器灭菌15分钟。
采样：采取水样时,可握住瓶子下部直接将已灭菌的带盖采样瓶插入水中,约距水面10~15cm处,拔瓶盖,瓶口朝水流方向,使水样灌入瓶内然后盖上瓶盖,将采样瓶从水中取出。
如果没有水流,可握住瓶子水平前推,直到充满水样为止。
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测方法粪大肠菌群检测是一项非常重要的检测方法，它可以帮助我们了解肠道内的微生物组成情况，对于肠道健康的评估和疾病的诊断具有重要意义。
在进行粪大肠菌群检测时，我们可以采用多种方法来获取准确的检测结果。
下面将介绍几种常见的粪大肠菌群检测方法。
首先，传统的培养法是一种常用的粪大肠菌群检测方法。
通过将粪便样品接种到含有特定培养基的培养皿中，然后进行培养和计数，可以得到不同菌群的数量和种类。
这种方法操作简单，成本较低，但需要一定的培养时间，并且只能检测到能够在特定培养条件下生长的菌群，对于一些无法在常规培养条件下生长的菌群无法检测到。
其次，分子生物学方法也是常用的粪大肠菌群检测方法之一。
包括PCR、实时荧光定量PCR、16S rRNA基因测序等技术，可以对粪便中的微生物DNA进行扩增和测序，进而对菌群进行鉴定和数量分析。
这种方法可以检测到更多种类的微生物，具有更高的灵敏度和特异性，但相对来说操作复杂，成本较高。
另外，近年来，基于高通量测序技术的宏基因组学方法也逐渐应用于粪大肠菌群检测。
通过对粪便样品进行高通量测序，可以获得更全面、更深入的微生物组成信息，包括细菌、真菌、病毒等。
这种方法可以帮助我们更好地了解肠道微生物的多样性和功能，但需要较高的测序深度和数据分析能力。
除了上述方法外，还有一些新兴的粪大肠菌群检测方法，如代谢组学、蛋白质组学等，可以通过检测粪便中的代谢产物和蛋白质组成来评估肠道微生物的活动和功能。
这些方法在研究肠道微生物与宿主健康的关系方面具有重要意义。
综上所述，粪大肠菌群检测方法有多种选择，每种方法都有其特点和适用范围。
在进行粪大肠菌群检测时，应根据具体的研究目的和实际情况选择合适的方法，以获得准确、全面的检测结果。
希望通过不断的技术进步和方法改进，粪大肠菌群检测能够更好地为肠道健康的评估和疾病的诊断提供帮助。
大肠菌群计数检验指导
例： 10-4样品稀释液1mL ，在VRBA平板上有100个典 型和可疑菌落 ，挑取其中10个接种BGLB肉汤管 ，证 实有6个阳性管 ，则该样品的大肠菌群数为：
100×6/10×104/g（ mL）=6.0×105CFU/g（ mL）。
· 胆盐可以抑制其它细菌生长繁殖。 · 分解乳糖产酸产气的大肠菌群 ，看小倒管中的气体。
杜氏发酵管产气情况
1 产气
2
不产气
第四天： 大肠菌群计数报告
第一法： 确证大肠菌群LST阳性管数 ， 检索
MPN表（见附录） ，报告每g（mL）样 品中大肠菌群的MPN值。
第二法： 经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以结晶
· 从10-2取样1ML+9 ML生理盐水=1：1000，从10-3取 样1ML ，接种到3管LST中。
第二法： 检样稀释与平板计数
检样稀释： 同上。 平板计数： 1 、每个稀释度接种2个无菌平皿 ，每皿1mL稀
释样品 ， 另外一个平皿加1mL生理盐水作空 白对照。 2 、及时将15—20mLVRBA（结晶紫中性红胆 盐琼脂） 倾注每个平皿中。 3 、待琼脂凝固后 ，再加3—4mLVRBA覆盖表 层 。翻转平板培养。
· MPN： 表示食品中大肠菌群数是以每100ML或克检样内大肠菌 群最大可能数 。一般采用9管法.
· 一般样品25ML（克）+225ML生理盐水=1： 10，从 10-1取样1ML ，接种到3管LST（月桂基硫酸盐胰蛋白 胨肉汤） 中。
· 从10- 1取样1ML+9 ML生理盐水=1：100，从10-2取样 1ML ，接种到3管LST中。
粪大肠菌群计数
主要修订内容
操作步骤减少，培养基由乳糖胆盐改为ST。原方法 乳糖胆盐发酵管 EC肉汤 EMB 证实试验 报 告 现方法 LST EC肉汤 报 告
粪大肠菌群检验程序
检样25g(ml)+225ml稀释液，均质
10倍稀释 选择3个连续稀释度样品匀液接种LST
36℃±1℃
不产气
48±2h
产气 EC肉汤 45℃±0.2℃ 不产气 24±2h 产气 粪大肠菌群阳性管
EC肉汤
EC肉汤主要成分：乳糖、胆盐、胰蛋白胨。 粪大肠菌群因分解乳糖而产气，使小导管
中可见气泡。
结果报告
证实为粪大肠菌群的阳性管数,
查 (MPN) 表, 报告每g（mL）样品中粪大肠菌群 MPN值。
谢谢!
粪大肠菌群计数
严纪文
定义
一群在44.5℃培养24h~48h能发酵乳糖、产
酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽 胞杆菌。 卫生学概念，又称为耐热大肠菌群，主要 是大肠杆菌，但也包括克雷伯氏菌属等。
卫生学意义
与大肠菌群相比，粪大肠菌群在人和动物粪便 中所占的比例较大，而且在自然界容易死亡。 因此，粪大肠菌群的存在表明食品近期内可能 直接或间接的受到了粪便的污染 。 作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断 食品中肠道致病菌污染的可能性。 常用做贝类和贝类养殖用水的卫生指标 。
查MPN表，报告结果
初发酵
选择适宜的三个连续稀释度的样品匀液。
每个稀释度接种三管月桂基磺酸盐胰蛋白 胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量 需要超过1mL，则用双料LST肉汤）。 36℃±1℃培养24h±2h，检查倒管内是否 有气泡产生或轻摇试管时是否有密集连续 的细小气泡从管底逸出，如未产气则继续 培养至48h±2h。记录在24h和48h内产气的 LST肉汤管数。未产气者为粪大肠菌群阴性； 对产气者，则进行复发酵试验。
粪大肠菌群计数步骤--个人详细介绍
/asphtml/GB071.htm/粪大肠菌群计数步骤GB/T 4789.39-2008一、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃ 。
2 冰箱：2℃~ 5 ℃ ．3 恒温水浴箱：44.5 ℃±0.2 ℃ 。
4 天平：感量0.1g 。
5 均质器。
6 振荡器。
7 无菌吸管：1 mL （具0.01 mL 刻度）、10 mL （具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。
8 无菌锥形瓶：容量500 mL 。
9 无菌培养皿：直径90 mm 。
10 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。
二、培养基及试剂1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（lauryl sulfate tryptose , LST ）肉汤2 EC 肉汤（E.coli broth )3 无菌生理盐水：称取8.5g 氯化钠溶于1 000 mL 蒸馏水中，121 ℃ 高压灭菌15 min。
4 4mol/L 氢氧化钠（NaOH ) ：称取40g 氢氧化钠溶于1 000 mL 蒸馏水中5 1 mol/L 盐酸（HCl ）：移取浓盐酸90 mL ，用蒸馏水稀释至1 000 mL操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25g 样品，置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min ~10000r/min 均质1 min ~2 min ，制成1：10 样品匀液，或置225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍打式均质器拍打1 min ~2 min ，制成1 : 10 的样品匀液。
6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取样品25 mL 置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1 : 10 的样品匀液。
6.1.3 样品匀液的pH 值应在6.5 ~7.5 之间，必要时分别用1 mol/L 氢氧化钠（NaOH ）或1 mol/L 盐酸（HCI ）调节。
大肠菌群测定步骤
食品大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测步骤一、培养基制备1、生理盐水氯化钠 8.5g蒸馏水 1000.0ml将氯化钠溶于蒸馏水中，搅拌均匀后用量筒量取225ml分装到各个广口瓶中，1210C高压灭菌15min，备用。
2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤称取37克放入烧杯，将各成分溶解于1000ml蒸馏水中，放电炉子上加热并搅拌均匀，分装于装有倒立发酵管的试管中，每管10ml，装完盖帽，1210C高压灭菌15min，双料培养基除蒸馏水不变外，其余成分加倍。
3、样品制备（在无菌室中进行）（1）固体或半固体样品无菌操作称取样品25g置于装有225ml生理盐水的广口瓶中，充分振摇、混匀，制成1：10的样品稀释液备用。
（2）液体样品以无菌吸管吸取样品25g置于装有225ml生理盐水的广口瓶中，充分混匀，制成1：10的样品稀释液备用。
4、样品稀释用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1ml,沿管壁缓慢注于盛有9ml 生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管混匀，制成1：100的样品匀液。
按照该操作程序，可制备1：1000，1：10000。
等10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释一次，换用1次1ml无菌吸管或吸头。
根据对样品污染状况的估计，选择2-3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1ml样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
同时分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
二、大肠菌群的测定（MPN法）1、选取适宜的三个连续稀释度的样品匀液，每个稀释度均接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1ml。
360C+10C培养24h-48h后，观察倒管内是否有气泡产生，并记录24h和48h内产气的LST肉汤管数。
对未产气的试管，可以轻敲试管壁的方式观察是否有较细小的气泡从管底逸出，如果所有LST肉汤管均未产气，可按。
报告结果；如果LST管有产气，则按下面步骤作证实试验。
gbt19524.1-24 肥料中粪大肠菌群的测定
GB/T19524.1-2004 肥料中粪大肠菌群的测定1 范围本标准规定了肥料中粪大肠菌群的测定方法。
2 定义粪大肠菌群 fecal coliforms系指一群在44.5 ℃±0.5 ℃条件能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
粪大肠菌群数为每克（毫升）肥料样品中粪大肠菌群的最可能数（MPN ）。
3 设备和材料（内容略）4 培养基和试剂4.1 培养基：遵照附录A的规定。
4.2 革兰氏染色液：遵照附录B的规定（略）。
5 检验步骤5.1 样品稀释在无菌操作下称取样品10.0 g 或吸取样品10 mL ，加入到带玻璃珠的90 mL 无菌水中，置于摇床上200 r/min 充分振荡30 min ，即成10 -1 稀释液。
用无菌移液管吸取5.0 mL 上述稀释液加入到45 mL 无菌水中，混匀成10 -2 稀释液。
这样依次稀释，分别得到10 -3 ，10 -4 等浓度稀释液（每个稀释度须更换无菌移液管）。
5.2 乳糖发酵试验选取三个连续适宜稀释液，分别吸取不同稀释液1.0 mL 加入到乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种3 支发酵管，置44.5 ℃±0.5 ℃恒温水浴或隔水式培养箱内，培养24 h ±2 h 。
如果所有乳糖胆盐发酵管都不产酸不产气，则为粪大肠菌群阴性；如果有产酸产气或只产酸的发酵管，则按5.3 进行。
5.3 分离培养从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线，置36 ℃±1 ℃条件下培养18 h ～24 h 。
5.4 证实试验从5.3分离平板上挑取可疑菌落，进行革兰氏染色。
染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性；如果为革兰氏阴性无芽胞杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中，置44.5 ℃±0.5 ℃条件下培养24 h ±2 h 。
观察产气情况，不产气为粪大肠菌群阴性；产气为粪大肠菌群阳性。
5.5 结果证实实验为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN 检索表，得出每克（毫升）肥料样品中的粪大肠菌群数。
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粪大肠菌群计数步骤GB/T 4789.39-2008
一、设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃ 。
2 冰箱：2℃~ 5 ℃ ．
3 恒温水浴箱：44.5 ℃±0.2 ℃ 。
4 天平：感量0.1g 。
5 均质器。
6 振荡器。
7 无菌吸管：1 mL （具0.01 mL 刻度）、10 mL （具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。
8 无菌锥形瓶：容量500 mL 。
9 无菌培养皿：直径90 mm 。
10 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。
二、培养基及试剂
1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（lauryl sulfate tryptose , LST ）肉汤
2 EC 肉汤（E.coli broth )
3 无菌生理盐水：称取8.5g 氯化钠溶于1 000 mL 蒸馏水中，121 ℃ 高压灭菌15 min。
4 4mol/L 氢氧化钠（NaOH ) ：称取40g 氢氧化钠溶于1 000 mL 蒸馏水中
5 1 mol/L 盐酸（HCl ）：移取浓盐酸90 mL ，用蒸馏水稀释至1 000 mL
操作步骤
6.1 样品的稀释
6.1.1 固体和半固体样品：称取25g 样品，置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min ~10000r/min 均质1 min ~2 min ，制成1：10 样品匀液，或置225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍打式均质器拍打1 min ~2 min ，制成1 : 10 的样品匀液。
6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取样品25 mL 置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1 : 10 的样品匀液。
6.1.3 样品匀液的pH 值应在6.5 ~
7.5 之间，必要时分别用1 mol/L 氢氧化钠（NaOH ）或1 mol/L 盐酸（HCI ）调节。
6.1.4 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1：10 样品匀液1 mL ，沿管壁缓缓注人盛有9 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支1 mL 无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1：100 的样品匀液。
6.1.5 根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10 倍递增系列稀释样品匀液。
每递增稀释1 次，换用1 支1 mL 无菌吸管或吸头。
从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过巧min 。
6.2 初发酵试验
每个样品，选择3 个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3 管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤，每管接种1 mL （如接种量需要超过1 mL ，则用双料LST 肉汤）,
36 ℃±1 ℃ 培养24h±2h ，观察倒管内是否有气泡产生，如未产气则继续培养至48h±2h 。
记录在24h 和48h 内产气的LST 肉汤管数。
未产气者为粪大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。
6.3 复发酵试验
用接种环从所有48h±2h 内发酵产气的LST 肉汤管中分别取培养物1 环，移种于45 ℃ EC肉汤管中。
将所有接种的EC 肉汤管放人带盖的44.5 ℃±0.2 ℃ 恒温水浴箱内，水浴的水面应高于肉汤培养基液面，培养24h±2h ，记录EC 肉汤管的产气情况。
产气管为粪大肠菌群阳性，不产气为粪大肠菌群阴性。
6.4 粪大肠菌群MPN 计数的报告
根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查粪大肠菌群最可能数（MPN ）检索表（见附录B ) ，报告每克（或毫升）粪大肠菌群的MPN 值。
GB/T 4789.39-2008 粪大肠菌群计数培养基
一、培养基明细：
名称规格价格（元）
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST） 250g 90
EC 肉汤 250g 90
磷酸盐缓冲液(PH7.2) （PBS） 250g 80
无菌生理盐水 * *
1mol/l的NaOH * *
1mol/l的HCL * *
二、备注：
1、粪大肠菌群
一群在44.5℃培养24—48h能发酵乳酸、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。
该菌群来自人和温血动物的粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性。
2、无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。
3、1mol/l的NaOH：称取40gNaOH溶于1000ml的蒸馏水中
4、1mol/l的HCL：移取浓盐酸90ml，用蒸馏水稀释到1000ml
配方一各种动物需用的生理盐水
哺乳类需用生理盐水浓度是0.9%。
称取0.9克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫升。
鸟类需用的生理盐水浓度是0.75%。
称取0.75克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。
两栖类需用的生理盐水浓度是0.65%。
称取0.65克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。